Способ количественного определения витамина а

 

Изобретение относится к пищевой, фармацевтической, химической и сельскохозяйственной промышленности и может быть испогьзовано для определения витамина Д в различных пищевых продуктах , биологьческом материале, в масляных концентратах, витаминных премиксах и т.д. Цель - повышение точности определения. 1з отобранной пробы анализируемого материала извлекают витамин А экстракцией органическим растворителем , осуществляют взаимодействие витамина с комплексообразователем, в качестве которого используют эфират трифторида бора, с конечной концентрацией 16-20%. Количество витамина А определяют по изменению интенсивности окраски при 61 Q нм образующегося цвег- s ного комплекса. 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл. SS а

СОЮЗ СОВЕт СКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН (5!)g G О1 !! 33/02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 472 8 8/13 (22) 14.08.89 (46) 15.10.)1. Бюл. !! 35 (71) Украинский научно-исследовательский институт птицеводства (72) П,Р. Сурай, И.А. Ионов и А.Д. Роыаль (53) 577.161(088.6) (56) <ОСТ /047- г. Витамины А, С, д

В » РР (отбор проб, методы определения витаминов и испытания качества вита>линных препаратов) . t1., 1981, с. $-13, б(4) СПОСОБ 1;ОЛ11ЧЕСТВЕНИОГО ОПРЕДЕЛEНИЛ Витаин!А A (57) Изобретение относится к пищевой, фармацевтической, химической и сельИзоЬретение относится;.к, пищевой, фармацевтической > хи>лической и сельскохозяйственной промышленности и может Ьыть использовано для определения витамина А в различных пищевых продуктах, биологическом материале, в масляных концентратах, витаминных премиксах и т.д., а также при контроле производства витамина А, Целью изобретения является повышение точности определения.

Для осуцествления данного способа иэ отобранной пробы анализируемого материала извлекают витамин А экстракцией органическим растворителем> проводят цветную реакцию витамина А с эфиратом трифторида бора при конечной концентрации последнего 16-204, а ко„„SU„„1684661 А 1

2 скохозяйственной промышленности и Мо жет быть использовано для определения витамина А н различных пицевых продукiýõ, биологическом материале, в масляных концентратах, витаминных премиксах и т,д. Цель — повышение точности определения. Из отобранной пробы анализируемого материала извлекают витамин А экстракцией органическим растворителем, осуцествляют взаимодейств«е витамина с комплексообразователем, в качестве которого используют эфират трифтор«да бора, с конечной концентрацией 16-20, . оличество витамина А определяют по изменению интенсивности окраски при 61Р нм образующегося цвет- а

>О ного комплекса. 1 э.п. ф-лы, 1 илб>

3 табл. личество витамина А рассчитывают по величине изменения интенсивности окФ» раски цветного комплекса при 610 нм.

При извлечении витамина А из материалов, содержащих липиды, перед экстрак- М цией органическим растворителем про- Ь эодят целочное омыление. С

Для повышения селективности метода 1 : в качестве комплексообраэователя ис- м4 пользуют эфират трифторида бора, который образует окрашенный комплекс только с вита>лино>л А. При этом этот комплексооЬразователь взаимодействует со всеми фор>лами витамина А в отличие от других ко>лплексообрээователей, например, трихлорида сурьмы, который дает окраску только лишь при взаимодействии со спиртовой формой витамина A. Эфират

1684661 трифТорида бора менее токсичен, чем трихлорид сурьмы. Окрашенный комплекс витамина А и эфирата трифторида бора образуется во всех неполярных органических растворителях (гексан, бензол, хлороформ, дихлорэтан и т,д.). Скорость распара комплекса для разных" растворителей не одинакова, например, в гексане данная реакция протекает очень быстро, что затрудняет анализ, Наилучшие результаты получены при использовании хлороформа, Для уменьшения ошибки измерения при однократном измерении оптической плот->5 ности, свяэа> ной с распадом окрашенного комплекса, количественно определение витамина А производят в данном способе по изменению интенсивности окраски цветногU комплекса при 20.

Способ иллюстрируется чертежом.

На чертеже графически отражена ки>ÿòèêà реакции распада цветногo KQH плекса после добавления к раствору, 25 содержацего витамин А, эфирата трифто.. да бора в количестве 1 мл. Показа:в асть спектра этого комплекса в

- тервале jp0 - 630 нм. Цифра 1 соответствует величине оптической плотнос, 30 ти раствора через 30 с после добавления эфирата трифторида бора, Все последуацие измерения (цифры 2 - 9) про" водились через каждые 60 с. Образовавцаяся син,-.я окраска цветного комплек- !5 са витамина Я и эФирата триФторида ! бора со временем постепенно ослабева" ет и теряет своа интенсивность. Наибольшая скорость изменения окраски наблюдается в первую минуту течения 40 реакции (интервал между цифрами 2 и

1 - наибольший) . В дальнейшем скорость распада комплекса постепенно замедляется, что отражено в уменьше" нии интервала между все>ли последуюци" 45 ми цифра >ли .

Из этого следует, что проводить ре;-истрациа из>ленения скорости распада цветного комплекса следует в первую минуту, так как в этот момент измерения будут более точными и чувствительны>ли .

На необходимость проведения измере1>лий в первую минуту течения реакции

55 ,указывает также и то, что по мере ее хода начинает появляться и регистрироваться дополнительный пик (пик Б), вызванный образованием посторонних продуктов распада комплекса, мешающих определению витамина А. По мере течения реакции основной пик, где согласно предлагаемому способу

«еобходимо проводить измерения, постепенно уменьшается, уменьшается соответственно и разность между двумя измерениями. Одновре>ленно растет допслнительный пик, что вызывает завышение полученных результатов и снижение тсчности анализа. !

1змерения скорости распада цветно" го комплекса проводят в начальный момент хода реакции: согласно данному способу это делается через 30 с после смешения реагентов, П р и >л е р 1. Определение витамина А в печени кур (вариант с омылением).

Навеску гомогенизированной куриной печени (200 мг) заливают 30 мл этанола, добавляют 1 r гранулированной гидроокиси натрия, 100 мг пирогаллола о и нагревают в течение 30 мин при 90 С на водяной бане. Затем гидролизат охлаждают, переносят в делительную воронку, витамин А экстра гируют трижды из 30 мл гексана . Обьединенный гексанэвый экстракт выпаривают досуха на роторном испарителе, сухой остаток растворяют в 1у мл хлороформа, Для анализа берут р мл хлороформного раствора, добавляют 1 мл эфирата трифторида бора по стенкам пробирки, с>лешивают и включают секундомер. Через 30 с после смешания делают первое измерение оптической плотности раствора на длине волны 610 нм. Затем.через 1 мин после первого измерения проводят второе измерение. По разнице ме>кду вторым и первым измерениями рассчитывают изменение оптической плотности раствора и по величине этого изменения, используя калибровочный график, рассчитывают содержание вита1

>.ина А в анализируемом образце, Согласно данному примеру в печени гроводится измерение витамина А в вир,е его спиртовой формы - ретинола, П р .и м е р 2. Определение витамина А в печени кур (вариант беэ омыления), Навеску гомогенизированной куриной печени (200 мг) вносят в фарфоровую ступку, насыпают туда 5 r безводного сульфата натрия и тщательно перетирают до получения однородной массы.

При этом происходит иэмельчение пече1Ы4бб i ни и одновременное ее обе a - ожи ва ние, мто необходимо для следующего этапа экстракции витамина А, Затем в ступку наливают 10 мл хлороформа, хорошо перемешивают пестиком и содержимое фильтруют в пробирку через бумажный фильтр. Потом дважды по j мл ополаскивают ступку хлороформом, переносят его на тот же фильтр и содержимое пробир- I0 ки доводят до 15 мп хлороформом. Все дальнейшие процедуры выполняют также, как описано в примере 1, Таким образом, в данном варианте определения витамина А исключаютсп та- 5 кие длительные процедуры как омыление, отмывка экстракта и его выпаривание. Это значительно сокрацает время анализа и повышает его точность за счет сокращения ряда операций.

Согласно данному примеру в печени определяется витамин А в нативной форме, в которой он присутствует в тканях, а именно в виде ретинилпальмитата, т.е. эфирной форме, поскольку эфи- 5 рат трифторида бора позволяет определять все формы витамина А.

Пример 3. Определение витамина А в масляном концентрате, Все производимые масляные препара- 3о ты как для витаминизации продуктов питания человека, так и для обогацения комбикормов животных представляют соей эфирные формы витамина А в масленапример, ретинилпальмитат или ретинилацетат, 1 мл масляного препарата витамина

А (активностью, например, 100 TblQ. интернациональных единиц в мл) растворяют в 10 мл гексана или хлороформа в 40 мерной колбе. Затем 1 мл полученного раствора переносят в другую мерную колбу на 100 мл с хлороформом и хорошо перемешивают, Таким образом, первоначальный масляный препарат разбави- 45 ли в 10000 раз. 1 мл разбавленного таким способом раствора витамина А вносят в химическую пробирку, доливают

4 мл хлороформа и перемешивают. Затем в пробирку приливают 1 мл эфира три- 50 фторида бора и все измерения проводят также как описано в примере 1, П р и и е р 4, Определение оптимальных количеств эфирата трифтррида бора для проведения реакции с витами- у ном А, В табл. 1 представлены данные по определению витамина А при добавлении к анализируемому образцу различных к. „.1честв эфирата трифторида bnp . Для испытаний был взят стандарт-ный раст-вор зитамина А с известной концентрацией и в каждый образец вно.— сили по . мкг ретинола. Из данных таблицы следует, что прн добавлении к хлороформенному рас1 вору О, 1-О, 7 мл реагента анализ искомого компонента

1 е представляется возможным, гак как в этих соотношениях получается мутный раствор, который невозможно фотометрировать. Раствор становится прозрачным только при добавлении 1;;лее J 8 мп эфирата трифторида бора (найример, J,5 мл цветосеагента и

4,2 ил хлородорменного раствора вита ина А; 1,0 мл цветорезгент". и

4 мл раствора и так далее).

Увеличение концентрации эфиратэ грифторида бора более i б-20 ;; (что соот нет с г вуот доба еле ни ю О, 8-1, 0 гл реагента к хлорофарменному раствору обцим объемом j мл) нецелесообразно, так I

0,8-1,0 мл, т,е. 16-20<,.

П р и и е р 5. В табл. 2 и 3 представлены результатьг сравнительных испытаний данного способа, который про водился так как описано в примере

3 и прототипа. Из таблицы видно, что предлагаемый способ определения витамина А превосходит известный как по точности определений, так и по селективности определений, 1(роме того, спо. соб значительно упрощается, так как нет неоЬходимости проводить целочное опыление масляного препарата витамина А, тогда как в известном способе эта процедура оЬязательна.

Использование в качестве цветореагента эфирата трифторида бора позволяет определять витамин А в любой его шорме (спиртовой, эфирной и т.д,), значительно сокращает время анализа материалов, не содержащих липиды,, так как позволяет оЬойтись без целого ряда таких операций как омыление, отмывка экстракта и. выпаривание растворителя. Данный способ позволяет проводить опредение витамина А во многокомпонентных смесях, содержащих самые различные вецества, так как эф рат трифторида бора является специфическим реактивом по отношению к ретинолу.

7 1684661 В

Использование менее токсичного комствляют путем экстракции органическим плексообразователя улучшает условия работы аналитиков, растворителем, в качестве комплексообразователя используют раствор эфираф о р м у л а и э о б р е т е н и я 5 та трифторида бора с конической концентрацией 16-20Ф, а измерение эначе"

1. Способ количественного определе- ния оптической плотности осуществляют ния витамина А, включающий отбор. Ilpo- путе л фиксации изменения интенсивносбы анализируемого материала, иэвлече- ти окраски при 610 нм. ние из него витамина А, взаимодейст". вие последнего с ко лплексообразователем и измерение значения оптической плотности образующегося окрашенного соединения, соответствующее количест,ву витамина А, о т л и ч а ю щ и й15 ,с я тем, что, с целью повышения точ2. Способпоп. l, отличаюшийся тем, что при извлечении витамина A из материалов, содержащих липиды, перед экстракцией органическим растворителем проводят щелочное опыление.

Таблица1

Добавлено зфирата трифторида бора, мл ,2 0,4 О,б 0,7 0,8 0,9 1,0 1,2

Показатель

Определено вчтамина А, мкг

Выход анализир."ñ.ìîãî вещестСр ва, 4,92 4,95 4,95 4,94 4,94

Раствор мутный

98,4 99,1 99,1 98,9 99,2

Таблица 2

Найдено витами на, А, 4

Средняя продолжи" тельность анализа, мин

Кол-во витамина А в 1 мл препарата, мкг

Доба влено внутреннего стандар" та, мкг

Способ

Кол † оп— ределений

il ðåäëà га е лый

Известный

96,8

84,2

45,8+0,25

38,1+2,47

90-100

5,0

5,0

Табли ца3

Кол-во вита лина А в

1 мл препарата, мкг

Найдено витамина, А, л

Добавлено в раствор, мкг

Способ

Кол-во определений витами- витами- витами- сантона Д на Е íà F хина

Предлагаемый

Известный

10 4503+028 50 50 50

10 38,1012,47 5,0 5,0 5,0

5,0

95,9

109,8

5,0

Определение витамина А согласно известному способу в данном случае дает завышенный результат, так как треххлористая сурьма не является специфичным реактивом для витамина А и дает окрашивание с другими веществами, присутствующими а растворе, 1684 и61

Составитель И. Пинуев

Техред Л. Сердюков а Корректор. А. Обручар

Редактор 3. Трубченко

Заказ 3502 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина, 101