Способ получения твердофазного носителя с тритильными группами

 

Изобретение относится к получению твердофазных носителей, которые могут быть использованы для иммобилизации биологически активных веществ, в частности иммобилизации рестриктаз. Способ получения твердофазного носителя включает обработку твердой фазы трифенилхлорметаном в среде диметилформамида. Согласно изобретению в качестве твердой фазы используют сополимеры общей формулы сн2-снсн ,-снсн2-сн--СН-СН- , / где n, m и k составляют соответственно 27,3-57,5; 8,2-25,5; 64,5-17.0 мол.%, или --СН2-СНСН2-СНОН n -CH-CHj m где n, m и k составляют соответственно 38,2-58,0; 17,4-29,5; 44,4-12,5 мол.%, или силохромы формулы (Л С о 0-Si-(CH,VO-CH,-CH |4 Ос |-. о I сн, о 0-Sj-iCH2)3-NH2. о 00 ел 3S 0 Это позволяет повысить суммарную активность связанных носителем рестриктаз (с 750 до 3521 ед/г), повысить их стабильность , а также повысить бактериальную устойчивость и улучшить механические свойства носителя. 5 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

СН -СН

-сн-сн

СН -CH

NH

1

Si0. 0-SI-(CH ) -0- СН; СН

23

0 сн

1

Si0 1-Si-(CH) -NH„. гз

Г (.

ХН (21) 4651262/05 (22) 16.01.89 (46) 23.10.91. Бюл. М 39 (71) Московский химико-технологический институт им. Д.И.Менделеева и Научно-исследовательский институт медицинской знзимологии AMH СССР (72) Т.А.Черкасова, В.E.Âoíñêèé, Ю.А.Лейкин, Н.А,Коваленко, H.Н.Соколов и В.А.Пехте рева (53) 678.766.22-139 (088,8) (56) Frechet l,M,G.Tetrehld«n letters, 1975, р, 305.

Frechet l,М,G. et а1..). Chem., 1976, ч, 54, р. 931.

Р Саз п1оп et а1, Diotechnolody and

Dloenglneerlng, ХХИ, 1982, р. 403-423. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТВЕРДОФАЗНОГО НОСИТЕЛЯ С ТРИТИЛЬНЫМИ

ГРУППАМИ (57) Изобретение относится к получению твердофазных носителей, которые могут быть использованы для иммобилизации би-. ологически активных веществ, в частности иммобилизации рестриктаз, Способ получения твердофазного носителя включает о6работку твердой фазы трифенилхлорметаном в среде диметилформамида. Согласно изобретению в качестве твердой фазы используют сополимеры общей формулы (s1) s С 07 F 7/08, С 08 Е 212/36//(С 08

F 212/36, 212:08, 212;14) С 12 N 11/08 где n, m u k составляют соответственно

27,3 — 57,5; 8,2 — 25,5; 64,5-17,0 мол.7ь, или где n, m u k составляют соответственно З

38,2-58,0; 17,4-29,5; 44,4-12,5 мол.g, или силохромы формулы

Это позволяет повысить суммарную активность связанных носителем рестриктаз (с

750 до 3521 ед/г), повысить их стабильность, а также повысить бактериальную устойчивость и улучшить механические свойства носителя. 5 табл.

Изобретение относится к получению твердофазных носителей, которые могут быть использованы для иммобилизации биологически активных веществ, в частности иммобилизации рестриктаз.

Цель изобретения — увеличение суммарной активности связанных рестриктаз, повышение их стабильности, а также r168bl" шение бактериальной устойчивости и улучшение механических свойств носителя.

Пример 1, В реакционную колбу загружают 5 r аминопропилового силохрома, содержащего 150 мМ/г аминогрупп, вводят 50 мл диметилформамида, 2 - трифенилхлорметана, смесь перемешивают и выдерживают при 20 С в течение 48 ч. По окончании процесса на фильтре отделяют твердую фазу, промывают абсолютным этанолом (до отсутствия желтого окрашивания после смешивания равных объемов элюата и 70;4 HCIO4), после чего твердую фазу сушат. Содержание тритильных групп 300 мМ! г.

Пример 2. Fl реакционную колбу загружают 5 r силохрома, содержащего 150 мМ/г эпоксидных групп, вводят 50 мл диметилформамида, 2 г трифенилхлорметана.

Реакционную смесь перемешивают и нагревают до 40 С, выдерживая при этой температуре 48 ч, далее проводя обработку, как описано в примере 1. Содержание тритильных групп 140 мМ/г.

Остальные примеры приведены в табл.

1. Сравнительные данные для сополимеров различного состава приведены в табл. 2, На синтезированных по предлагаемому способу носителях с тритильными группами проведена иммобилизация рестриктаэы

Есс RI. Результаты иммобилизации приведены в табл, 3 в сравнении с известным способом и опробована иммобилиэация новых видов рестриктаз Рае1, а также Lp! (табл. 4). Иммобилизованные LpII u Peel опробованы в многократном "цикле работы, потери активности не наблюдается, Данные о суммарной активности рестриктазы приведены в табл. 5, Как видно из табл, 1-5, наиболее эффективно иммобилизация рес-.риктаэ проходит

СН;CH — Л Ф

Н;СН

NH

СН. СН2 Щ

2 d

35 где и, гл и k — соответственно 27,3-57,5;

8,2-25,5 и 64,5 — 17,0 мол., или

СН -CH- CH— г 2

0Н где и, е и к — соответственно 38,2 — 58,0;

17,4 — 29,5 и 44,4 — 12,5 мол. $, или силохромы формулы О

1 Si0 lO-SI-(СН,) -О-СН;CH

К 1=О

О Нг

L0 О-Si-(СН ) -ХН .

23 2

Q на носителях, полученных по предлагаемому способу.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет повысить суммарную активность

5 связанных носителем рестриктаз (до 3521 ед. акт. на 1 ч. носителя), повысить их стабильность, а также повысить бактериальную устойчивость и улучшить механические свойства носителя.

10 Формула изобретения

Способ получения твердофазного носителя с тритильными группами, включающий обработку твердой фазы трифенилхлорметаном в среде диметилформамида, о т л и15 ч а ю шийся тем, что, с целью увеличения суммарной активности связанных им рестриктаз, повышения их стабильности, а также повышения бактериальной устойчивости и улучшения механических свойств

20 носителя, в качестве твердой фазы используют сополимеры стирола и дивинилбензола общей формулы

1685942

Таблица 1 вость к микзмам

300

30

140

30

То хе

80

301

30

Анино пропнловь>й cH>loxpo>>

25 С, 1О ч, ДКФ, ТФЖ

То хе

80

63 и-Оксифеннльный носитель

20 С> 48 ч, ДМФ, ТФХМ и

295

Анионит АСД-9-20т, 20 t 48 ч, ДМФ, ТФЛМ

260

80-!00 40

Таблица 2

220

164 ч5

90

50

295

212

120

48

Аминопропиловый снлохром, 20 С,.48 ч, ДМФ>

ТФХМ

Эпоксипропиловый снлохром, 40 С, 48 ч, ДМФ

ТФЖ

Аминопропиловый силохром, 10 С, 48 ч, ДМФ, ТФ:СМ

Эпоксипропиловый снлохром, 20 С, 72 ч, ДМФ, ТФИ1

Агароза, сефароэа, 28-30 С, 4 6 сут, этанол, пиридин, ТФХМ> триэтип-..— амин

П р и м е ч а н и е. ДМФ вЂ” диметнлформамид; Ф1Щ - трифенилхлорметан.

0,273 моль аминостирольных звеньев, 0,082 моль дпвинилбензольных.. 0,645 моль стироль.ных

0,575 ноль аминостирольных звеньев, 0,255 моль дивинилбензо>сьных, О, 170 моль стирольньпс 260

0,260 моль аминостирольных звень» ев, 0,025 моль дининилбензольных, О, 715 моль стирольных.0,615 моль аминостирольных звеньев, 0,325 моль дивинилбенэольных звеньев, 0,060 моль стирольных

0,382 моль оксистирольнык звеньев, 0,174 моль дивинил бензольных, 0>444 моль аминостирольных

0,580 моль оксистирольных звеньев, 0,295 моль дивиннлбенэольньпс 0,125 моль аминостирольных

0,220 моль оксистирольных звеньев, 0,045 ноль дивинилбен.».эольнык, 0,735 моль аминостирольных

0,735 моль аминостирольньпс звеньев, 0,50 моль оксистирольных, 0,40 моль дининилбензольньпс, О> 10 моль аминостирольных

Устойчин., не изменяет своих физнкохи>сических свойств

Устойчив, не изменяет своих физикохимических свойств

Подверхен воздействнсо микроорганизмов

1685942

Таблица3

Носнь признаки

Иьеьобнлиэована Еса Р1 относительная актььвность твердоь! фазе

63-707.; потери активности в твердой hase не цаблюдаетсл в течение месяца; высокап механическая прочность 80-937; высокая устойчивость к сжатию до 50 атм; уст ььчивость к воздействию ьаькроорганиэмов

200 300

Силохром пминопропилоный нли эььоксидирован» ный

Предлагаемый

80-100 и-Ок сифе нкпьный носитель

Анионнт А @3 20т

Известный Сефароза, атврозаИммобилизована Есо Р1 относительная. активность по твердой hase 807.; в течение нескольких часов активность заметно падает; нцзкал механическая прочность; низкая устойчивость к сжатию (около

2 атм); черезвычайно подвержены воздействию микроорганизмов

Т а б л и ц а 4

Иммобнлизовано рестриктазы оситель

Ранl

637 отн. акт

632 отн. акт.

Предлага емый

Аминопропиповый силохром

Эпокснпропнльный силохром

702 отн.

702 отн. акт акт.

Анионит АСД-9-20 т

50_#_ отн. акт.

508 отн,акт. и-Оксифенильный носитель

Таблица 5 тель

Пнлохром (исходный аминопрогьиловый силохром) 3430 3 ь30 341 7

3403

300

Снлохром (исходный эпоксипропиловый силохром) 300

3497

3521

3504

Полимерный (исходный п-оксифенильный) 295

2714

205

2/21

2725

2707

418

Сфера (прототип) 80

750

Составитель И.Стояченко

Техред ММоргентал Корректор Q.Крав1 ова

Редактор Н.Яцола

Заказ 3574 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям г1ри ГКНТ СССР

113035, Москве, Ж 35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент". r. Ужгород, ул,Гагарина. 1О1