Способ дифференциации иерсиний серовара 09 от бруцелл

 

Способ дифференциальной диагностики иерсиниоза 09 и бруцеллеза относится к способам лабораторной диагностики иерсиниоза и бруцеллеза путем выявления в сыворотке крови специфических антител к антигенам возбудителя. Цель изобретения повышение точности и упрощение способа. Для этого проводят целенаправленный поиск антител к антигенам, специфичным для иерсиний, содержащих плазмиду вирулентности с мол. м. 40-50 МД. В качестве антигена используют клетки иерсиний серовара 03, не имеющие перекрестно реагирующих антигенов с бруцеллами, но содержащих, как и возбудитель иерсиниоза 09, плазмиду и соответствующие идентичные антигены. Ставят реакцию агглютинации на стекле с разведенной 1:15-1:25 перекрестно реагирующей сывороткой и клетками иерсиний серовара 03, содержащими и несодержащими плазмиду вирулентности 40-50 МД, выращенными при 36-38°С. Если в течение 2 мин наступает агглютинация только плазмидосодержащих клеток, диагносцируют иерсиниоз; при отсутствии агглютинации обеих культур диагносцируют бруцеллез. ел

СОВХОЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

:) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4759127/13 (22) 01 11.89 (46) 07.01,92. Бюл. Ь 1

Р1) Рязанский медицинский институт им.

И.П.Павлова (72) И.В,Смирнов (53) 576.8.077(088.8) (56) Журнал микробиологии, эпидвмиологии

- и иммунобиологии. 1983, Н. 1, с..42-45.

Журнал микробиологии, эпидемиологии,иммунобиологии, 1985,М 5,с. 49 — 52. (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ИЕРСИНИЙ СЕРОВАРА 09 ОТ БРУЦЕЛЛ (57) Способ дифференциальной диагностики иерсиниоза 09 и бруцеллеза относится к способам лабораторной диагностики иерсияиоза и бруцеллеза путем выявления в сыворотке крови специфических антител к айтигенам возбудителя. Цель изобретения—

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, в частности к методам лабора торной диагностики бруцеллеза и иерсиниоза, а именно к методам дифференциации иерсиниоза 09 и бруцеллеза путем выявления специфических антител в сыворотке крови.

Выраженная антигенная общность возбудителя иерсиниоза сеоовара 09 с бруцеллами обуславливает появление в крови у больных перекрестно реагирующих антител, которые в высоких титрах обнаруживаются в общепринятых серологических реакциях(реакции пассивной(РПГА), Райта, Хердлсона и др.) как с иерсиниозным 04, так и с бруцеллезным коммерческими диагно«, Ы« 1703119 Al (я)5 А 61 К 39/10, А 61 В 10/00, G 01 N 33/554

2 повышение точности и упрощение способа.

Для этого проводят целенаправленный поиск антител к антигенам, специфичным для иерсиний, содержащих плазмиду вирулентности с мол. м. 40-50 МД, В качестве антигена используют клетки иерсиний серовара

03; не имеющие перекрестно реагирующих антигенов с бруцеллами, но содер>кащих, как и возбудитель иерсиниоза 09, плазмиду и соответствующие идентичные антигены.

Ставят реакцию аггл1отинации на стекле с разведенной 1:15- 1:25 перекрестно реагирующей сывороткой и клетками иерсиний серовара 03, содержащими и несодержащими плазмиду вирулентности 40 — 50 МД, выращенными при 36 — 38 С. Если в течение 2 мин наступает агглютинация только плазмидосодержащих клеток, диагносцируют иерсиниоз; при отсутствии агглютинации обеих культур диагносцируют бруцеллез. стикумами, что затрудняет дифференциальную диагностику этих зоонозных заболеваний. Общность симптоматики ряда клинических форм, источников инфекции и факторов передачи при иерсиниозе и бруцеллезе создают дополнительные трудности в эпидемиологической оценке отдельных случаев и вспышек заболеваний, особенно в благополучных по бруцеллезу районах. Это, в свою очередь, может привести к гипердиагностике бруцеллеза и повлечь за собой необоснованные клинико-зпидемиологические мероприятия.

Известен способ серологической дифференциальной диагностики иерсиниоза и бруцеллбэа в реакции агглют1п1ации с ucv

1703119

4 пользованием 0«-«-а««т««ге««а иерсиний серо- разме ом 0 "-0 8 1 0подвижен, спор и капсул не образует. Физи««д««ако да«!Ный способ весьма т o

О11 . -!!". : .а;... р д - ологические приз««аки; растет на агаре сл«о«., т:. к как;;;«г«получс««.";;, СИ-а««тиге««а Хоттингера. На срезе Эндо и и 26 C че ез иерси««ий «тасс«".ру!От в полуж««дкол1 пита- 5 24 ч ov аз е, 1" " -.;. . 1,; . -,з . ч образует колонии дламетром 0,1-02 ! Э тет пол= агар .,;:. ".3 С -,,: д. «, мм, имеет вид росинок, через 48 ч приобрезатем сут — в бульоне (для накопления тает розовый оттенок, диаметр 1,0-1 5 мм подв««жных форм) и дополн«1твльно 2 с,/т и при 37 С через 24 ч образует округлые колоо рабать«ва«ОТ формалином с последующей нии и 0,05-0,, р диаметром 0,05-0,1. мм, через 48 ч — стандартизацией микробной Mace«û и поста- 10 0,3-0,5 ., у р е пол п

i-« мм, выпуклые розовые пол п ,;;и с прогреванием при 56 С в течение обла а пол:ca. j.- .:, .,;1, ол д ет культуральными признаками у .,1, рол содержания плазмиды вирулентности: отдельных снязaftt! Ix с вирулентностью ан- температурозависимость«о рос, р,, . енезе исрсинлоза, 15 ций-дефицитных средах, оггмотиноб та на кальСогласно 1«ниболее близко« к и е лакому к предла- ностью (flpM культивировании в среде

Гас "IOM) способу CI>IBoj3OTK, а!Оц «О у, д . «у поло- кларка). Характерные физиологические осожительну«о псa:uèfo аггл«отина« ии к; ..... к, и ..: «с бенности: о ксидазоотрицателен, . обладает

«1ерсиниозныл« и бруцелезным диагностику- нитротрадуктазой ги й, гидролизует мочевину, о р иру«от лиофилизированным 20 сбраживает глюкоз р-, фе «««ь««ои фракции из штамма мальтозу, маннит т юкозу, сахарозу, сорбит, бруцелл и понт ннит, трегальзу с образовани- . ру,. вторно ставят реакци«О аггл«о- ем кислоты, fte сб ажива т ., ди гнсстикумами. При зу, рафинозу, инозит, салицин, каллезу, не диагональном снижении титров в отноше- дезоминир ф нии руцеллезного.диагностиллна исследу- 25 инзол и серово о ф О мую сыворотку счита«от иерсиниозной, в Устойчив к стрептомицин, канами ин

ЛСЗ««Ой. тикумов — руцел- чувствителен.к тетрациклину, гентамицину, левомицетину, рифамицину.

Иедостаткол« известного способа янля- Содержит неконь о а ьюгативную плазмиду

Ь Loën ется необходимость фракциониронaíèft 30 ма к 45- 7 МД, скои — «Д, относящуюся к группе руцслл, а также многозтапность диагно- несовместимости Г-1, Г

Ости - . ены плазмиды кОнтн 1 нснием абсороции а««тите«т и ролируют патогенные свойства штамма. постаноькой разве и -ой еак ии нации. а .. рнутой реакции агглюти- Штамм 188 обладает признаками пато патогенности при тестировании путем заражения

Цель«о изобретения является повыше- 35 культуры ткани Не -2 (т р- (знтерально), морсМх свинок (коньюнктивально). воиства, штамма «колЦель достигается тем, что для выявле- Биологические с, ( ния антител к специфическим антиге нам ви- лекция ГИСК им. Л.А.Та а им... арасевича); штамм и .рсинии исследуему«о 189 янляется бесплазмлдным мутантом сыворотку, дающу«о D диагностически зна- 40 штамма N -188,утратившим плазл«изу45 — 47 б «. елл чи«лых титрах положительные реакции с МД, и все связанные с ней е с неи признаки; кальруцеллезным и иерсиниозным коммерче- ций-зависимость ро, б ть роста, способность к аутоски I-, диагнос;икумами, в азве ении 1:20 р д l и 1:20 агглютинации, температурозависимую . используfoT для реакций аггл«отинации на морфологию колоний, способность синтезистекле с микрооной с спензи

-" .е, р " . у 1ей кишечных !5 ровать плазмизоспецифичные антигены выиеос.«ний сеова "а 0".

c „....„0 ° с плазмидой 40- 0 зывать коньюнктивит у морских свинок, Г мегадальтон (штамма Yersinja с«1тrocojjtjca колонизаци«о кишечника мышей вы ь, ч «ого при С П q и его фскциозность в отношении клеток культу ы бесплазмидныл; мута««том штамм ii. " 189 тур ы

; мут т „., . 189, гы- ткани. Остальные свойства идентичны исходраще «ным в тех же услоьиях (П . При появ- 50 ному штамму Yersjnja entcrocojjtica М 188. лей«1««в течение? мнн агглютинац«1и только П р и л«е 1. Убольного В. с и плазми,вoco»å 1««ав",х к .,.1,, „ржа«цих клеток диагносциру- на обострение хронического бруцеллеза сыво«01 ИЕPCI«!I!!03; П И OTC Т Т 11!

:, н; г. Отсутств««и агглют««на- ротка крони испытана в серологических еакции обеих культ 1 — б . еллсз.

«х у уг — бруцеллез. циях со следующимл результатами: реакция

Биологические свойства штамма 55 аггл«отинац««и(Райта)сесиным б ц егн -ü,,а е«1«:сгссА««са И. 188, Штамм hb 188 д««аг««остикул«ом положительна в титре 1:800, отн . : ится K ибиан n 03 се-отип .

:, у, . серотипу. РП1А с бруцулсз««ыл« зритроцитлрным диагноЙорфолог«1 «с-.кис «1риз««аки; ««а мясо- стикумом полож««тель««а в титре 1;"00, кетоfn!oì бульоне при 26 С образуст палоч- РИГА с.кииечно-иерси .Оз .«ни нь«м диаге«OKot1!1»IILto грал«отри««ателы«««с клетк««стикумом 09 положитсль««а

«ая в титре

17031 i9

Таким образом. показано отсутствие в крови экспериментально вакцинированного бруцеллами животного антител к характерным для плаэмидосодержащих иерсиний антигенам.

Таким образом, предложенный способ упрощает серологическую дифференциацию бруцеллеза от иерсиниаза. Использование для реакции в качестве антигена микробных клеток изогенной пары иерсиний, отличающихся только по контролируемым ппаэмидой антигенам, позволяет повысить ее специфичность.

Составитель А, Федоров

Техред М.Моргентап Корректор Л. Бескид

Редактор Г. Гербер

Заказ 12 Тираж .Подписное ..

ОНИИПИ Грсударственнаго комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

1;640. Сыворотка крови больного разведена в физиологическом растворе до 1: l 5 и в виде двух капель нанесена на предметное стекло рядом с двумя небольшими каплями ФР.

Выращенные на скошенном агаре Хоттингера (сутки при 36 С и сутки при комнатной температуре) культуры иерсиний серовара

03, содержащих (Й ) и несодержащих {П ) плаэмиду 45-47 МД (штамма 188 и 189 соответственно), с помощью петли суспенэированы в капле физиологическао раствора и смецены: каждая с испытуемой сывороткой и с физиологическим раствором. В течение

2 мин при покачивании стекла агглютинация не отмечена ни в одной из четырех капель. Диагноз хронического бруцеллеза подтвержден, иерсиниоза исключен.

- Пример 2. В сыворотке крови коровы из совхоза К. при профилактическом обследовании обнаружены антитела к бруцеллам: реакция Райта положительна в титре 1:100—

1:200, РПГА с кишечно-иерсиниозным диагностикумом 09 положительная в титре

: 1:640. С целью дифференциальной сероло.гическай диагностики, сыворотка разведена в физиологическом растваредо125ив виде двух капель нанесена на стекло рядом : с двумя каплями заведомо отрицательной (на иерсиниозные антитела) сывороткой в том же разведении. После суспензиравания в физиологическом растворе выращенных на питательном агаре при 38 С и комнатной температуре культур иерсиний серовара 03

= (П и П) каждую из них смешивают с конт.. рольной и испытуемой сывороткой. В течение 40-60 с появляется агглютинация культуры 03 П в испытуемой сыворотке, в других каплях в течение 2 мин остается равномерное помутнение. В сыворотке выявлены антитела к плаэмидоспецифичным антигенам иерсиний, подтвержден диагноз . иерсиниоза 09.

П р и и е р 3. После иммунизации «ролика вакциной из штаммов Вг. аЬогтоз и Вг.

meiltensis на девятый день у него взяли кровь и отделили сыворотку, в которой выявлены антитела к бруцеллам (РПГА с бруцеллезным диагностикумом положительна в титре 1:25600) и иерсиниям 09 (РПГА,с

5 кишечно-иерсиниоэным диагностикумом 09 положительна в титре 1;5120). В реакции . агглютинации на стекле установлено, что испытуемая сыворотка в разведении 1:20 не агглютиниоует в течение 2 мин клетки иер10 синий серовара 03 (штаммы 188 и 189), выращенных на агаре Хотгингера сутки при

37 С и сутки при комнатной температуре.

Формула изобретения

Способ дифференциации иерсиний серовара 09 от бруцелл, включающий смеши30 вание исследуемой сыворотки параллельно с двумя корпускулярными антигенами и дифференциацию иерсиниоза по наличию агглютинации, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и упрощения

35 способа, исследуемую сыворотку разводят

1:15 — 1:25, в качестве корпускулярных антигенов используют . штамм Yerslnla

entегоcolltlca ГИСК N 188, содержащий плазмиду вирулентности с мол. м, 40 — 50

40 МД, и штамм УегзЫа entегоcoiltlca ГИСК

N- 189, не содержащий плаэмиды вирулентности, выращенные. при 36-38 С, дифференциацию иерсиниоза проводят по наличию агглютинации со штаммом Yersinia

45 entrocolitlca ГИСК М 188.