Способ получения гликопептидов

 

Изобретение касается гликопептидов. в частности получения соединений общей флы: СН,ОН «v. НО NHAc UNHAc CHjCH-СЮЬШ Изобретение относится к синтезу гликопептидов , которые могут найти применение в медицине, иммунологии и ветеринарии в качестве иммуномодуляторов. Цель изобретения - повышение выхода и упрощение процесса. На чертеже представлена диаграмма, поясняющая способ. Пример 1. Получение М-ацетилглюкозаминил- 1 -4)-м -ацетилмурамил-(/9 1-4)-М-ацетилглюкозаминил- (ft где л 1 или 2; NHR - остаток аминокислоты или пептида ф-лы L-Ala-Dei-Glu;L-Ala-Del-Gln или L-Ala, применяемых в иммунологии и ветеринарии в качестве иммуномодуляторов . Цель - повышение выхода целевого продукта и упрощение процесса. Его ведут реакцией N-ацетилсахара (или его соли с органическим основанием) с защищенной аминокислотой или пептидом в присутствии конденсирующего агента - акпентафторфенилкарбоната или ди(4-хлор-2,3.5,6-тетрахлорфенил)карбоната при их молярном соотношении (М,3):(1-1.2):1 при 0-20°С с последующим отщеплением защитных групп и хроматографической очисткой целевого продукта. Конденсацию ведут в присутствии основания в среде растворителя (циметилформамида). Эти условия позволяют использовать более доступные вещества , обеспечивают лучшую экологию процесса, повышают выход целевого продукта на 10-25%, снижают продолжительность процесса с 28 до 5-10 ч и сокращают число хроматографических очисток. 1 табл., 1 ил. 1-4)-м -ацетилмурамил-1-аланил-0-изоглутаминовой кислоты (IV). 9,74 г (10 мМ) тетрасахарида II. () растворяют в 25,0 мл перегнанного диметилформамида, добавляют 4 мл М-метилморфолина, перемешивают 10-15 мин и выливают раствор в 200 мл этилацетата. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают 4x50 мл этилацетата, 2x50 мл гексана, высушивают и получают 11,65 г (99%) М-метилморфолиниеаой соли тетрасахарида (V). ч| О СП W о СА

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

1705303 А1 (! 9) (Н) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Сн ОН.

СН (.H-60)-NHR „ (21) 4301922/04 (22) 01.09.87 (46) 15.01.92. Бюл. N. 2 (71) Научно-производственное объединение

"биолар" и Институт биоорганической химии им. М.М.Шемякина (72) Н.H.Ïîäãîðíîâà, Е.Д.Ермолаев, P.À.Ëóäðèêà, А.В.Быстриченко, В.Т.Иванов, T.Ì.Àíäðîíî8à, М.B.Áåçðóêîå, В.Ф.Заболотских, В.H.Ìåäâåäêèí и В.М.Титов (53) 547.964.4.07 (088,8) (56) Биоорганическая химия. 1981, ТЭ, hk 12, с. 1813-1858. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЛИКОПЕПТИДОВ (57) Изобретение касается гликопептидов, в частности получения соединений общей флы:

Изобретение относится к синтезу гликопептидов, которые могут найти применение в медицине. иммунологии и ветеринарии в качестве иммуномодуляторов.

Цель изобретения — повышение выхода и упрощение процесса.

На чертеже представлена диаграмма, поясняющая способ.

Пример 1, Получение Й-ацетилглюкозаминил-Р 1-4)-й -ацетилмураI мил-ф 1-4)-N-ацетилглюкозаминил- (P (5I)s С 07 К 9/00, 1/08, А 61 К 37/02 где n = 1 или 2; NHR — остаток аминокислоты или пептида ф-лы 1-А!а-ОеЮО;б-Ala-Del-Gln или L-А!а, применяемых в иммунологии и ветеринарии в качестве иммуномодуляторов, Цель — повышение выхода целевого продукта и упрощение процесса, Его ведут реакцией Й-ацетилсахара (или его соли с органическим основанием) с защищенной аминокислотой или пептидом в присутствии конденсирующего агента — ъ.пентафторфенилкарбоната или ди(4-хлор-2,3,5,6-тетрахлорфенил)карбоната при их молярном соотношении (1-1,3):(1-1,2):1 при 0-20 С с последующим отщеплением защитных групп и хроматографической очисткой целевого продукта. Кочденсацию ведут в присутствии основания в среде растворителя (диметилформамида). Эти условия позволяют использовать более доступные вещества, обеспечивают лучшую экологию процесса. повышают выход целевого продукта на 10-25, снижают продолжительность процесса с 28 до 5-10 ч и сокращают число хроматографических очисток. 1 табл., 1 ил.

1-4)-N -ацетилмурамил-L-аланил-D-изо1 глутаминовой кислоты (IV).

9,74 г (10 мМ) тетрасахарида II, (n-2) растворяют в 25,0 мл перегнанного диметилформамида. добавляют 4 мл N-метилморфолина, перемешивают 10-15 мин и выливак)т раствор в 200 мл этилацетата. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают 4х50 мл этилацетата, 2х50 мл гексана, высушивают и получают 11,65 г (99 ) N-Метилморфолиниевой соли тетрасахарида (V).

1705303

11,65 г (10 мМ) соединение Ч растворяют в 100 мл диметилформамида, добавляют

4,0 г (10 мМ) дипентафторфенилкарбоната (Illa) и перемешивают при 18-20 С в течение

1 ч, Затем к реакционной массе приливают раствор 5,2 г (10 мМ) трифторацетата L-алзнил-О-изоглутаминовой кислоты дибензилового эфира (И) и 2 г (20 мМ) тризтиламина в 15 мл диметилформамида. Перемешивают в течение 5 ч, растворитель упаривают, к оставшемуся маслу приливают 200 мл диминерализованной воды, раствор экстрагируют 2х50 мл гексана, к водному слою добавляют 5 г палладиевой черни, 4 мл муравьиной кислоты и пропускают в течение

1,5 ч ток газообразного водорода. После отделения катализатора фильтрат упаривают до половины обьема и наносят на колонку обьемом 1 л, содержзщую анионит сефздекс А-25 в ацетзтной форме. Колонку промывают 2,5 л деминералиэовзнной воды, затем злюируют гликопептид градиентом вода — 0,15М уксусная кислота. После упаривания фракций, содержащих гликопептид

IV, и лиофилиэации остатка получают 7,5 г

IV (61,3 (,, считая на тетрасахарид II (n-2).

Пример 2. Получение N-ацетилглюкоззминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-01 изоглутамина. (ГМДП) (Vll).

5 г (10,0 мМ) дисзхарида И (n 1) растворяют в 100 мл перегнанного диметилформамидэ, добавляют 4,4 г (11,0 ОмМ) соединения III а и 1,2 мл (1 t,Î мМ) й-метилморфолинэ. Перемешивают при 18-20 30 мин и приливают раствор 4,6 г (1t,0 мМ) трифторацетата 1=элэнил-О-изоглутамина у -бен зилового эфира (ФИ) и 2,4 мл (22,0 мМ)

N-метилморфолина в 20мл i диметилформамида. Через 4,5 v растворитель упаривают.

Обработку далее проводят, как описано в примере 1. После упаривания фракций, содержащих ГМДП, и лиофилизации остатка получают 4,27 г (57,0 (,) ГМДП ЧИ с содержанием основного вещества 99,5 (no данным

В ЭЖХ).

fl р и м е р 3. Получение соединения ЧН.

1,5 г (3,0 мм) соединения Н (n-1) растворяют в 30 мл перегнанного диметилформамида. добавляют 1,3 г (3,0 мМ) ди-14-хлор-2,3,5,6-тетрафторфенил)-кэрбонэта (И!б) и 0,45 мл (3,0 мМ) тризтиламинэ, Через 2 ч приливают раствор 1.3 г (3 мМ) соединения Vill и 0,9 мл (6 мМ) триэтиламина и 5 мл диметилформамида, Перемешивают Ь ч, растворитель упаривэют и дальнейшую обработку проводят, как описано ° примере 1, Получают 1,4 r (62,2 ф,)

ГМДП с содержанием основного вещества

99,1)ь (no ВЭЖХ).

Пример 4. Получение соединения ЧН, 1,2 г (20 MM) N-метилморфолиниевой соли дисахарида II (п-1) растворяют в 250 мл диметилформамида. добавляют 8,0 r (20 мМ) соединения Illa и перемешивают в течение

30 мин. К реакционной массе добавляют раствор 8,5 г (20 мМ) соединения Vill и 4 мл (40 мМ) N-метилморфолина в 20 мл диметилформамидз, Через 5 ч растворитель упаривзют, Дальнейшую обработку проводят, как описано в примере 1. Получают 9,7 г (64,77ь)

ГМДП с содержанием основного вещества

98,9ф (по ВЭЖХ).

Пример 5. Получение соединения Vll.

60 г (0,1M) N-метилморфолиниевой соли

It (n-1) загружают в реактор емкостью 15 л с рубашкой и механической мешалкой и растворяют при перемешивании в 10 л смеси растворителей диметилформзмид-ацетонитрил 1:4. Реакционную массу охлаждают до 5-10 С и при перемешивании из мерникэ добавляют раствор 48 r (0.12М) соединения Illa в 0,2 л диметилформамида в течение 30 мин.

Охлаждение снимают, перемешивание продолжают 1 ч, затем к реакционной смеси иэ мерника медленно приливают в течение

30 мин раствор 51 г(0,12 М) трифторацетатэ

Vill в 0,2 л ацетонитрилэ, содержащий 26 мл (0,24 M) N-метилморфолина. Перемешивэнив продолжают 5 ч, рзстворитель упаривают, смолообразный остаток растворяют в 1 л дименерализованной воды и экстрагируют зтилацетатом 2х400 мл. Далее обработку проводят, как описано в примере 1, учитывая масштабирование синтеза. Получают

48.7 г (627,) гликопептида Vll.

Пример 6. Получение N-ацетилглюкозаминил-N -ацетилмурамил-L-аланина

l (IX), Аналогично опыту, описанному в примере 3, из 0,5 г (1 мМ) дисзхарида И (n-1), 0,43 г (1 м М) соединения Н)б, 0,45 мл (3 мМ) тризтиламина и 0,35 г (1 мМ) и-толуолсульфоната бензилового эфира L-аланина (X) пол уча ют 0,31 г (55 $) N-зцетил-глюкозаминил-N -ацетилмурамил-1 -аланина (1Х), Пример. 77. Получение соединения Vll.

Аналогично опыту. описанному в примере 2, из 5 r (10 мМ) соединения II (n 1), 5,2 г (1,3 MM) соединения Illa, 1,4 мл (13 мМ) N-метилморфолина и 4,2 г (10 мМ) соединения

Vill c 2,2 мл (20 мМ) N-метилмормолина получают 3,8 г (50,6$) ГМДП.

Пример 8. Получение соединения ЧН.

Аналогично опыту, описанному в примере 2, из 5 г (10 мМ) соединения Н (n-1), 5,2 г (13 мМ) соединения Illa, 1,4 мл (13 мМ) N-метилморфолина, 5,5 г (13 мМ) соединения Vill

1705303

OII

--Н снрн-сеяна с 2,8 мл (26 MM) N-метилморфолинв получают 3,4 г(45,3 ) ГМДП, П риме р 9, Получение соединения Yll.

Аналогично опыту, описанному в примере 2, из 1,0 г(2 мМ) соединения II (n-1), 0,72 г (1,8 мМ) соединения Illa, 0,2 мл (1,8 мМ) N-метилморфолинв и 0,76 г (1,8 мМ) соединения Vill с 0,4 мл (3,6 мМ) N-метилморфолина получают 0,7 г(46,6$, считая нв

II; 52$, считая нв ЧИ)ГМДП.

Соотношения реагентов и выход целевых продуктов в примерах 1-9 приведены в таблице.

8се образцы гликопептидов анализировались ВЭЖХ (содержание основного вещества 2 99, GM. чертеж). Температуры плавления, удельное вращение и хромвтографическвя подвижность в тонком слое соответствуют константам для веществ полученных по способу-прототипу.

Таким образом, рвзрвботан новый способ синтеза гликопептидов формулы I, отличающийся от способа-прототипа использованием в качестве конденсирующего агента более доступных симметричных карбонатов пентагалогенфенолов формулы И. обеспечивающий охрану окружающей среды благодаря простому отделению конденсирующего реагента от продукта реакции зкстракцией из водного раствора органическим растворителем.

Осуществление предлагаемого способа позволяет повысить выход гликопептидов на 10-25$ и упростить процесс их получения за счет уменьшения его продолжительности с 28 ч по способу-прототипу до 5-10 ч и сокращения числа хромвтографических очис гок.

Ф о р мул а изобретения

Способ получения гликопептидов общей формулы Iспрн- сн, где и-1;

NHR — остаток аминокислоты или пептидв формулы

LAle-Dig lu, lAla-Dlgln или tAla, 5 взаимодействием N-ацетилвминосахарв общей формулы II

Л, „

NHAc О МНЛс

I снснсоон

15 где и-1 или 2, с защищенной аминокислотой или пептидом в органическом растворителе в присут20 ствии конденсирующего агента и органического основания при 0-20 С с отщеплением защитных групп и хроматографической очисткой целевого продукта, о тл и ч а ю шийся тем. что. с целью повыше25 ния выхода и упрощения процесса, в квчестае конденсирующего агента используют симметричные карбонаты пентэгалогенфенолов формулы III

35 где а)х F; б)х О, а в качестве N-вцетиламиносахара — wbc40 редственно N-ацетиламиносвхвр или его соль с органическим основанием и при молярном соотношении й-вцетиламиносахвр или его соли: симметричный карбонэт пентвгалогенфенола: защищенная аминокис45 лота или пептид равном 1:(1-1,2);(1-1,2), при этом отщепление защитных групп ведут непосредственно после взаимодействия.

1705303 Соединение 11 предварительно переводили в соль с Я-метилморфолином.

И Х 46 5D 60 Ю N Ю ЩммФ У Ющю

Составитель В. Волкова

Редактор Л. Веселовская Техред M,Ìîðãåíòàë Корректор М. Максимишинец

Заказ 168 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва. Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101