Способ отбора питательных сред для биосинтеза низина
Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к усовершенствованию технологии производства низина, используемого в пищевой промышленности . Целью изобретения является упрощение и ускорение отбора питательных сред. Способ отбора питательных сред для биосинтеза низина включает культивирование Streptomyces lactis на испытуемых питательных средах при 28-30°С с последующим определением низинсобразования по зонам задержки роста тест-культу ры Bacillus coayulans. При этом культивирование осуществляют в течение 14-16 ч с последующим внесением агаризованной питательной среды, содержащей клетки Bacillus coagulans, и выдержкой при 37-40°С в течение 14-16 ч, а определение низинообразования проводят по большей величине зоны. 3 табл. |сп ,С
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (51)5 С 12 Р 21/04
ГОСУДАРСТВЕН(ЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБ РЕТЕНИЯ
K ABTOPCKOMY СВИДЕТЕЛЬСТВ (21) 4692594/13 (22) 17.05.89 (46) 23.01 92. Бюл. йв 3 (71, Всесоюзный научно-исследовательский институт биотехнологии (72)Д.М,Исакова, М.Н,Литвинова, Г.А Попова. Г.И.Буленков и M.Ì.B03ièícêèé (53) 615.779,9(088,8) (56) Микробиологическая промышленность, 1971, М 6.
Вестник МГУ, 1972. N 5. с.57-60. (54) СПОСОБ ОТБОРА ПИТАТЕЛЬНЫХ
СРЕД ДЛЯ БИОСИНТЕЗА НИЗИНА (57) Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к усовершенствованию технологии производстИзобретение относится к микробиологической промышленности, а именно усовершенствованию технологии производства низина, используемого в пищевой промышленности.
Известны способы отбора питательных сред для биосинтеэа низина путем периодического или непрерывного выращивания продуцента на исследуемых жидких питательных средах в ферментерах или колбах с последующим определением накопления антибиотика в культуральной жидкости (1).
Однако данные способы отбора питательных сред для производства низина достаточно трудоемки, предполагают использование специального оборудования, большого количества питательных сред и лабораторной посуды и занимают значительный промежуток времени.
БА3 „,. 1707079 А1 ва низина, используемого в пищевой п имышленности. Целью изобретения является упрощение и ускорение отбора питательных сред. Способ отбора питательных сред для биосичтеэа низина включает культивирование Streptomyces lactis на испытуемых питател ь н ы х средах и ри 28 — 30 С с последующим определением ниэи:.собразования по зонам задержки роста тест-культуры Bacill s оаэи!апв. При этом культивирование осуществляют в тe",åíèå
14-16 ч с последующим внесением агариэованной питательной среды, содержэщеи клетки Bacillus coagulans, и выдержкой при
37-40 C в течение 14-16 ч, а определение ниэинообраэования проводят по большей величине эоны. 3 табл.
Наиболее близким к предлагаемому является способ оптимизации посевной среды для Str.lactis — продуцента низина с a",ðåäåлением антибиотической активност;. "i",îf:ñгическим методом диффузии в агар при использовании в качестве тест-хуль..уры
Bacillus coagulans. Он включает три этапа: выращивание посевного материала. периэдическое культивирование продуцента на исследуемых сг,адах от 18-20 ч до нескольцих суток, определение накопления низина в культуральной жидкости биологическим методом в течение 20-24 ч (2).
Однако известный способ продолжи елен по времени, так как эксперименты занимают, как минимум, трое суток. Кроме того, способ требует значительных затрат материалов и специального оборудования, по3
7<; !0 )(скольку включав- процесс ((рме тэ(»и продуцента на жидких питательных средах.
Целью изобретения является упрощение и ускорение отбора питательных сред
Способ осуществляют след>(«>(ц,>м o, . 5 разом.
Набор испытуемых вариантов питательных сред, приготовленных с 2% агара, ра.ливают в чашки Петри по 10 м, и подсушивают в термостате при 37"С в течеНИЕ 1 ч, На ПОВЕрХНОС(.b ГарИЗОВВ«(НОй Срвды В каждую чашку вносят ПО Г>,1 мл разведенной в физиологическом р. -.Т(-.-,ре суспензии клеток низинообразую(.(его 1Г) штамма Str. lactis. содержащей 1д и,Э
2 3 клеток в 1 мл. Шпателем равномерно распределяют суспе(зию flo поверхности среды. Чашки ставят в термостат на 30" С вверх
° рышкой. Через 2 ч чашки переворачиваю(20 вниз крышкой и термостатируют еще 14-16 ч.
Затем вынимают чашки из термос. гата и распола:3)o. в один слой на ровной noaepx)<ости.
Водную успензию те "т-куль(;ры 25
Вв(((в со3:1(.lan), содержащую 10 кле 3 в 1 мл, ечо(ят (расплав,.енну<о и ох ажденную дс 55 С пи гательную openly, co .;(>лщую из мясо ептонного бульона и фос4>атиого буфера в соотношении 1:1 (КН2РО() (",3 Д. 30
)ГВН РО,> 0,007%, рН 5,0), 2% глюкозь,. 0,5%
1»аС» и 2% агара. Полученной агаризоганой суспензией, охга;.(денной до 40"C. (> ко(. ичестве 10 мл залива>от чашки с низи,."образуюшей культурой и через 2 ч (время, 3"= необходимое sr «f диффузии антибиотикг1 переносят чашки В термастат и выдер.кивают при 37-40" С 14-16 ч, после чего пооводят
),">ат РЕЗУлвт3 ОВ ЗКГПЕРИМЕНт3. ) ISMei "Ä!Ot диаме(рь зон задержки роста тес(-культрь. и обрабатывают полученные даннь;"с:т3тистически. !
1 р v:м е р 1. В эксперименте испытывают одновременно шесть вариантов литатг ?ьных сред, различающихся между собой 45 источниками азотно"o и углеродного питания, приготовленных описанным способом.
Стандартную куль>уру низинообразующего штамма Str.Lactis выращивают на чашках Петри с испытуемыми вариантами 50 питательных сред в т чение 16 ч при 30"С, после чего чашки с выросшими колониями низ". ((образующего штамма залив3ют аг3ризованной суспензией тест-:ультурь
Bacillus coagulaf>s, через 2 ч ставя> (> термо- 55 стат и выращивают l4 ч при 37 С. При учете результатов проводят измерение диаметров зон задержки роста тест-культуры, образующихся Вокруг колоний низинообразющего штамма. На каждом из ш .",Ти Варио(Г><:,, . »» . . (= !л. ь f> о; f10 100
3С< а > (> 3«tt((!e результа (.эь>(.Г» »<, )» г :> "1< It! l а rPГ л 1 Г» ° р " " ».и.1енте;1ОГ(ыть(ва .от og?IOBpef-te о . ... (. (>Вризнтов питаТс lüHûx сред, различаю(öè2 я».;с>((ду собой
i сточниками азотного и углеродного чита».»ия.
Стандарт»»,?> культуру ?(изино(>с<>разую,,:=,Го штамма St;.i acti s выращивают на чаш (>х Петри с испь("уемыми вари3нтами
):>Г(атель«(ых сред а течение 14 ч при 28 С, ;, Г»к,1 с вь(рос»»>(1(ми колониями низинообразу ошего !IJT3MM3 заливают агаризованно;. суси:.((зией тест куль:pl) Вас.
ОГ>3»1(>!апз, через :. 4 ста:,л.;.. терм(стат и
Бь(с" 4» ци(>3 ют 1 6:... t: С . Г(Г. и учете резул»,:atop. " Од: 1 3,, .» ),!1c . диаметров зо -..>д-.Г -,. (. >. 3 ., т куль, г>?,». Образу«-. цих:.if (. зкг „кол(-..ии « I;. è»t;>co6«>33)>»foùåГО,.Г . „",-. и с(3 1».тичег. ук> nhpat)отку р(>cy»<»> f.>» (ан-..so(,1-1)13 пример) 1. ,:.()»(11 е,.\ дс Гаi.ëeíf. à jaбл.2. и )Введенных в
11(р»)мГ; .-. », л» .3; »., I.г, (II >3 альных сред ,;(: j. <,, <, "-. lI(». б(I: » <<<»(> 3»(тибиоти;Кq 1 .; . »13)(,),1ЬЬ )",.1l()1СЕ >;>33 >»Ю(ЦЕГО .uj<>;- (- : 1(с. i "-<3» чты 1 i 6 .о -.- е --ab« .I:(исследованиях
НИ?l,<((>» ;. да< «(И»1 ?%> ll(333lftlbf>(ааРИан тах;.;., .; "
:;>ер)- .,I ", i,æ,, . (.; .Он.,«» 1>ерментере (г)о,. fl» (:Г:f,Itoi. -.. -:3 >,»1>, —.;. в..:р(анте сре,-, . 1 >
Ф"" (.»Г .3.»((".»,»раlfl < > Iи< I:инск ;патэ 20 — 22 4, )>»>Г»ия (сг>», и (-.-:,,» 1?> Рпр 1е((ение ангиби; » 4 -ГI : —.:-. (Г,;3-.-., а .у(>ьтуральной ж;;око"-,",;Г,, ;: ч» ..-Годо(.1 диффузии в 3 Зр -. t cj "., l; урой Васс(1(>з оаОЫапз, 3 >и. ?.3K)(ц, 1 < II,»I, 4 Г Езупьт;((Ы ОПЫТОВ, - >I I>t -ge)" I: а табл..), саид(.tenbc!Ру)от 0
» 3(.го(»„ I .и накоплени(" антиГ иотика на
В3ОИВI-I 3 tt,» »i1:атe(Ьb»>< (», Д, 4TO ПОДт ;ерж.(Г>К>; Г(3 (НЬ Е, Г Гь(У4:H?Itle .Р»."длагаЕ».1Ы(И . Г>0<.ООГ>М.
Т,>ким o(;pasoM. Предла аем).»(способ.
IIe треГуя с ад(»и ферментзции, позволяет ис(>ь»тыва гь одновременно bort luoe количе(;TI>D fit ldT(ль:,(х (-.peä, опрсделить оптиf j3» btIble Г>О . I(>I>fletfil?J НИЗИНд ВЗРИанты В более ко„->- Гний сp()((28-32 ч) и с меньшими
33 рз-.ами ((»оудования и ма-.ериалов, чем (->се» гнь(й сooc«:f менее 3 сут), а также .;; ?; сч.)т«н ..)pent (лнмые варианты сред п(.,1 дальнейших. более детальных, исследования;: Г 11o(. »I < еза низина, G> o p f . q л "3 изобретения
I.I ..co5 о. ()(>3 п<113teëüt ых сред для био(и;.(-3 -,....1«»3, вкл((3)с»(ц.;и культивирование б
Табл
P: íHûå «эр: ан-:э питэтелнь ;о->Т
Г т
1 (! г., 5
4,1 .- 0,27 I b.7 + 0 3 с.1 0. l: 21,0 " 0.?7 (! ! !
9,1 -«- 0,13 20,: ! I
Таблица аннь:c BH иантэ питательных с ед т г, Т l
0,15 9,1 -0,22 2С." и. 7
t р
2; 3 4
+ 0 ", 8, -- ".,", т 20,3 =
1 -025 г 5 !
Данные ва ианта питательных с е
80 95
130 j 94 13!:
Составитель H,Àôàíàñüåâ
Техред M.Моргентал Корректор Н.f îðîftü
Редактор И,Дербак
Заказ 242 Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ Сi," ".Р
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", r, Ужгород, ул.Гагарина, 101
Streptomyces !асл! на испытуемых и ".т»тельных средах при 28-30ОC r; последуюв,им определением низинообразования по зонам задержки роста тест-культуры Вас!!!а, coaguIans, отличающийся тем, .то, с целью ускорения и упрощения отбора, культивирование осуществляют на плотной питательной среде, состоящей из испытуемьi читатель. t4х омГ онентов t ага . i г, чc-l, ..
14-16 - л затем вно". т аггризова тельного с!еду, содержащу о клет..; . . IL
cëàg !àëь, инк бируюг .",ри 37- ",0" в, 5 ние < 18 ч и для биосинтеза отби!.эю. с; . ду, на которой обрэзуетс! макси..-,.)-,ь г, sаде жкэ роста тест-ку. ьту0bl.
