Способ определения количества каротиноидов в яичном желтке

 

Изобретение относится к птицеводству и может быть использовано на различных сельскохозяйственных предприятиях, а тности на птицефабриках, инкубаторных. станциях и опытных станциях по птицеводству дпя оперативного контроля инкубационного качества яиц по содержанию в них каротиноидов. Цель изобретения - повышение точности и сокращение длительности анализа. Пробу обрабатывают солью минеральной кислоты, в качестве которой используют фосфаты щелочных металлов при соотношении проба: фосфат от 1,33:10 до- 3,04:10, осуществляют последующее экстрагирование обработанной пробы органическим растворителем, в качестве которого используют смесь ацетона с этилацетатом в объемном соотношении от 7;3 до 9:1. Фотометрируют полученный экстракт при длине волны 450 нм. Определение количества каротиноидов в яичном желтке осуществляют по калибровочному графику. 4 табл. у ё

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (39) (11) (ss)s 6 01 N 30/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4786320/13 (22) 23.01.90 (46) 23 .03.92. Бюп. М 11 (71) Украинский научно-исследовательский институт птицеводства (72) П.Ф.Сурай, И.А.Ионов и А.Д.Рошаль (53) 678.567 (088.8) (56) Паенок С.M., Гусак Я.С. Юрчук Е.Ф. и др.

Определение витаминов в биологических материалах и кормах. Методические рекомендации. — Львов, 1978, с. 12 — 13. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА КАРОТИНОИДОВ В ЯИЧНОМ

ЖЕЛТКЕ (57) Изобретение относится к птицеводству и мождт быть использовано на различных сельскохозяйственных предприятиях, в честности на птицефабриках, инкубаторных

Изобретение относится к птицеводству и может быть использовано на различных сельскохозяйственных предприятиях, в частности на птицефабриках, инкубаторных станциях и опытных станциях по птицеводству для оперативного контроля инкубационного качества яиц по содержанию в них каротиноидов.

Цель изобретения — повышение точности и сокращение длительности анализа.

Для определения содержания, каротиноидов в яичном желтке отбирают про= бу, которую помещают в фарфоровую ступку и растирают с фосфатами щелочных.металлов (йаазР04, йазР04 12Н20, N34P207, N84P207, 10Н20, Na2HP04 и др.) при соотношении проба: фосфат от станциях и опытных станциях по птицеводству для о(1еративыого контроля инкубационного качества яиц по содержанию в них каротиноидов. Цель изобретения — повышение точности и сокращение длительности анализа. Пробу обрабатывают солью минеральной кислоты. в качестве которой используют фосфаты щелочных металлов при соотношении проба: фосфат от 1,33:10 до.

3,04: t0, осуществляют последующее экстрагирование обработанной пробы органическим растворителем, в качестве которого используют смесь ацетона с этилацетатом в объемном соотношении от 7;3 до 9:1. Фотометрируют полученный экстракт при длине. волны 450 нм. Определение количества каротиноидов в яичном желтке осуществляют по калибровочному графику. 4 табл, . M

1,33:10 до 3;04:10. Полученную смесь экстрагируют органическим растворителем, в ка- (Я честве которого использует смесь ацетона (; с этилацетатом в объемном соотношении от (Я

7:3 до 9:1, и экстракт отфильтровывают через обеззоленный. бумажный фильтр в мерную пробирку, Содержимое ступки промывают небольшими порциями смеси ацетона с этилацетатом и переносят на тот же фильтр. Эту операцию повторяют до тех пор, пока экстракт не будет окрашиваться, Затем замеряют объем экстракта, переносят полученный раствор в кювету и фотометрируют его при длине волны 450 нм. По измеряемому значению оптической плотности раствора рассчитывают содержание каротиноидов в пробе желтка с использова1721505 нием калибровочного графика, построенного по чистому Р-каротину, азобензолу или бихромату калия с учетом объема экстракта по формуле

С=

М где С вЂ” концентрация каротиноидов в пробе, мкг/г;

Š— концентрация каротиноидов в экстракте, найденная по калибровочному.графику, мкг/мл;

У вЂ”. объем экстракта, мл; . M — йавеска пробы желтка, r.

Пример, Объемное соотношение ацетона и этилацетата (10:0)-(4:6), навеска пробы образца желтка! 500 мг, пробу перетирают с 5 г Na4Pz07, экстрагирование осуществляют 10 мл смеси ацетона с этилацетатом в течение 1-2 мин, а промывание пробы — порциями смеси, указанных растворителей по 10 мл. Определение оптимальных соотношений компонентов смеси ацетон — этилацетат при экстракции каротиноидов из курйного желтка приведено в табл. 1.

43 данных табл. 1 видно, что оптимальным является объемное соотношение ацетона и этилацетата от 7:3 до 9;1, поскольку при этих соотношениях для полного выделения каротиноидов из пробы достаточно проведения двукратного экстрагирования, что сокращает время проведения анализа, при этом повышается точность анализа (коэффициент вариации между параллельными определениями не превышает 2,15 ) за счет того, что предлагаемая смесь органических растворителей, смешиваясь с влагой, содержащейся в пробе, не образует помутнения.

Результаты определения оптимальных соотношений проба:фосфаты щелочных металлов приведены в табл. 2.

Из данных табл. 2 видно, что с учетом совокупности всех предлагаемых для использования фосфатов щелочных металлов оптимальным является соотношение проба:фосфат (1,33:10)-(3,04:10). При этом полное выделение каротиноидов из пробы достигается в результате двукратного экс5 трагирования, Кроме того, использование в качестве соли минеральной кислоты фосфатов щелочных металлов позволяет примерно в 3 раза сократить время экстрагирования каротиноидов за счет сокраще10 ния времени коагуляции белков солями с более высокой ионной силой,,ем в известном способе.

В табл. 3 и 4 приведены сравнительные

15 данные по длительности и точности анализа по предлагаемому и известному способам.

Из данных табл. 3 и 4 видно, что время проведения анализа сокращается с 60 до 20 мин за счет исключения операций

20 обезвоживания и фильтрации от йа2$04, точность анализа возрастает с 8 — 10 до 1,5—

2,0 У.

Таким образом, предлагаемый способ определения каротиноидов в яичном желтке

25 позволяет в 4 — 5 раз повысить точность и в 3 раза сократить время проведения анализа, Формула изобретения

Способ определения количества каротиноидов в яичном желтке, предусматрива30 ющий отбор пробы, обработку пробы солью минеральной кислоты, экстрагирование обработанной пробы органическим растворителем, фотометрирование экстракта при длине волны 450 нм с последующим on35 ределением количества каротиноидов в исследуемой пробе с использованием калибровочного графика, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и сокращения длительности анализа, в каче40 стае соли минеральной кислоты используют фосфаты щелочных металлов в соотношении проба: фосфат 1,33:10-.3,04:10, а в качестве органического растворителя используют смесь ацетона с этилацетатом в

45 объемном соотношении 7:3 — 9:1.

3721505

Та б л и

9 а 1

5,0 4,0.6,0

10:0

8:г

Соотношение ацетон: этилацетат

0,21

0,14

0,19

0,14

0 16 0,20 . 0,22

0,15

0,15

0,26

97,5 96,0 95,2

95,6

96,4

97,8

98,1

98,1

98,2

93.4

Количество эхстракций, необходиное для полного извлечения каротиноидов

2 3 3 4

2 2

Коэффициент вариации между параллельными определениями, ь

1,98

2,15 2,88 3,15

3 ° 62

3,72

2,33

2,01

2,13

1,97

П р и н е ч а н и е.

Кь «., где А, - оптическая плотность первого экстракта;

Ае

А " оптическая плотность второю экстракта. 2

Таблица 2

Соотношение Ивебоя. желток

10:О, 0,34

0,28 0,25 0,22

0,23 0 ° 26

0,29

0,31 0,35

85,3

85 ° 3

88,9 85,3

80,1 70,3

90,0

90,3

91,1

Интервал оптимального соотношения обеэвожиеаещего вещества с желткон

10,0:0,7-10,0:1,3

Соотношение

ИаьРеот.желток

10;0,7

0,24

0,16

97,5

0,16 0,16

К

Му 2 и

0,20

90,0

0,30

0,15

97,8

0,19

96 ° 4

91,1

93.9

97,5 97,5

2 2

Интервал

10:1,2-10:3,3

Соотношение НааРз Отх т108зО:желток 10 0,70 IO 0,90 10 1 ° 21 10:1,57 10:1,70 10 3,04 IO 523

0,27 0,25 0,16

0,15 0,15

97,7 97,7

2 2

Кз

0,16

97,5

0,20

92,2 93,9

4 4

95.9

97,5

10:1,21-10:3,04

Интервал

Соотношение

НатРОт . желток

0,29

91 ° 6

Кэ

Из, 2

0,28

0,26

0,21

0,15

97,8

95,6

92,2

93,3

Интервал

Соотношение КвзРОтт т12НЕО:желток

10:3,69

0 ° 27

92 ° 2

10:0,49

0,24

93.9.

10:2,96

0,15

97,8

10:3 ° 30

0,18

97,2

10:1127

0,14

g8 2

Ка

И„2

Интервал

Соотношение

И» НРОЬ.желток

0,24 О,!7 0,15

О, l7

0,27

Кэ

)0:1,0l-i0:3,69

93,9 97,3 97,8 97,3 92,2

3 2 2 2 4

Интервал

Коэффициент экстракции, К

Количество каротиноидов, извлеченное за две экстракции, Коэффициент экстракции, Кэ

Извлечение вещества эа две зкстракции, 2

Количество экстракцнй, необходиных для полного извлечения каротиноидов, л

10:0,9 10;1,2 10:1,5 10.1,8 10:3,3 10:5,2 10:8,4

10:0,55 10:0,98 10:1,33 Io:2, 43 10;3,56 10:6,57 10:8,53

0,15 0,18

97,8 97,2

2 2

10:1,33-10:3т56

10:1 ° 81 10:2,23

0,11 0,12

98,8 98,5

10:1,27-10:3,30

10:0,62 IO:1,01 10:2,05 10:3,69 10:5,20

1721505

Таблица .. .. 3

Длительность операции, мин

Операции

Известный способ

Предлагаемый способ

Взвешивание и растирание в ступке

Экстракция кароти ноидов 10

3-5

Фильтрация

Высушивание с Na>SO< 30

Фильтрация 5

Фотометрирование 5

Таблица 4

Использованный при проведении анализа фэсфат

Способ

Количество определений 1 4 202 ° 10Н 0

10

10 лауро+

Предла гаемый

Na POg 12Н О

10

"аг НР04

Составитель 10. Скарбов

Редактор И. Шмакова Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор Т. Малец

Заказ 949 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Предла гаемый

Известный

Предлагаемый

Известный

Известный

Предлагаемый

Известный

Содержание каротиноидов в 1;г желтка, мкг

24, 6 + 0,41

23,2 + 1,61

23,9+ 0,26

20,4 + 2;96

24,2+ 0,34

20,1 + 2,21

24,1 + 0,46

1,7 + 2,04