Штамм гриба rнizорus сонnii berl ef de toni - продуцент липазы с каталазной активностью

 

Изобретение представляет собой новый штамм (Ш) микроскопического гриба Rhizopus cohnii Berl et de Toni ВКПМ F-408 - продуцент термостабильной липазы с каталазной активностью - и позволяет расширить ассортимент продуцентов липазы. Выделен Ш из образцов темно-каштановой почвы целинной типчаково-полынной степи (Аскания Нова) на глубине 3-5 см. Гриб атоксичен, мало спороносит, не пылит, не подвержен лизису, устойчив к антибактериальным веществам. Ш не продуцирует протеазу, чем выгодно отличается от микромицетов - продуцентов липаз, образующих наряду с липазой протеазу, что снижает со временем липолитическую активность. Как термофиллон характеризуется повышенной биохимической активностью , высокой скоростью роста по сравнению с мезофилами, обусловливая интенсификацию получения конечного продукта . Препарат внеклеточной липазы из Rhizopus cohnii, полученный осаждением ацетоном, характеризуется термостабильностью . Липаза из штамма Rhizopus cohnii стабильна при 30, 40, 50, 60 и 65°С(ЮО% относительной активностиJB течение 60 мин, а при 80°С активность достигает нулевого значения в течение 30 мин. Липолитическая активность образцов препарата из Rhizopus cohnii составляет 50000-100000 ед/г. Препарат обладает каталазной активностью , которая составляет 200000-250000 ед/г, что обеспечивает применение его в бытовой химии в качестве биодобавки в составе синтетических моющих средств. 3 ил. Ьс сл с и b S3 с сл

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

COLlMAll VICTNVECKVIX

РЕСПУБЛИК

I (19) (t t) (51)5 С 12 N 9/20, 1/14

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4836674/13 (22) 11.06.90 (46) 15.04.92. Бюл. N. 14 (71) Институт микробиологии и вирусологии им. Д.К.Заболотного (72) Т.И.Билай, B.Ë.Àéçåíáåðr, B.À.Çàõàðченко, А.П.Капичон, B.À.Âüþíèöêàÿ, М.Э.Церетели, Д.А.Долидзе, Г,И,Квеситадзе, А.Е.Мысак, Л,Н.Шинкаренко, Г.Е.Зингер, В.А.Ющенко, Л.И.Бовика и Л.Л.Корчун (53) 663.18(088.8) (56) EP М 0117553, кл, С 12 N 9/20, опублик.

1984.

Авторское свидетельство СССР

N. 446677993322, кл. С 12 N9/20,,1973, (54) ШТАММ ГРИБА RH!ZOPUS COHNII

ВERL ET.DE TQNI — ПРОДУЦЕНТ ЛИПАЗЫ

С КАТАЛАЗНОЙ АКТИВНОСТЬЮ (57) Изобретение представляет собой новый штамм (Ш) микроскопического гриба

Rhizopus cohnii Berl et de Toni ВКПМ F-408 — продуцент термостабильной липазы с каталазной активностью — и позволяет расширить ассортимент продуцентов липаэы.

Выделен Ш из образцов темно-каштановой почвы целинной типчаково-полынной степи (Аскания Нова) на глубине 3 — 5 см. Гриб

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения нового штамма гриба для использования в бытовой химии при производстве синтетических мою их средств.

Целью изобретения является получение нового штамма гриба Rhizopus cohnii Berl et

de Toni — продуцента липазы с каталазной активностью.

Штамм депонирован во Всесоюзный коллекции промышленных микроорганизатоксичен, мало спороносит, не пылит, не подвержен лизису, устойчив к антибактериальным веществам. Ш не продуцирует протеазу, чем вы годно отличается от микромицетов — продуцентов липаэ, образующих наряду с липазой протеазу, что снижает со временем ли политическую активность. Как термофиллон характеризуется повышенной биохимической активно. стью, высокой скоростью роста по сравнению с мезофилами, обусловливая интенсификацию получения конечного продукта. Препарат внеклеточной липазы из

Rhizopus cohnil, полученный осаждением ацетоном, характеризуется термостабильностью. Липаэа из штамма Rhizopus cohnii стабильна при 30, 40, 50, 60 и 650C(100% относительной активности)в течение 60 мин, а при 80 С активность достигает нулевого значения в течение 30 мин. Липолитическая активность образцов препарата из

Rhizopus cohnii составляет 50000-100000 ед/г. Препарат обладает каталазной активностью, которая составляет 200000-250000 ед/г, что обеспечивает применение его в бытовой химии в качестве биодобавки в составе синтетических моющих средств. 3 ил. мов Института "ВНИИгенетика" под номером ВКПМ Г вЂ” 408.

Штамм Rhizopus cohnii выделен из образцов темно-каштановой почвы.

Культурально-морфологические свойства штамма. Штамм Rhizopus cohnii Berl et de

Toni быстрорастущий, образует хорошее спороношение при выращивании на агаризованных средах, например на сусловом агаре (фиг,1). На картофельно-дрожжевом агаре при 37 С образует колонии рыхловой1726513 лочные до 1 см высотой, вначале светлосерые, затем пепельно-серые. Ризоиды простые или слабо разветвленные, светло-коричневатые, Спорангиеносцы простые, прямые или слабо изогнутые, 5 отходят по 1 — 3 от шейки ризоида или столоновидных гиф, 82 — 520 х 5 — 13 мкм. Спорангии 45 — 90 мкм в диаметре, Спорангиоспоры неправильно шаровидные, шаровидные, 4 — 6 (7) мкм в диаметре, 10 гладкие, в массе бледно-голубоватые, Хламидоспоры многочисленные, цилиндрические, шаровидные, 15,6 — 21,3 х 10,1-15,4 мкм.

Физиолого-биохимические свойства. 15

Аэроб, гетеротроф, растет в широких пределах рН. 2 — 9. Гриб термотолерантный, температурные границы его роста, от 17 — 19 до

51 — 52 С, оптимальная температура роста

42 — 45, спороношения 37 — 40 С. 20

В качестве источников углерода усваивает сахарозу, глюкозу, галактозу, мальтозу, лактозу, фруктозу, декстрозу, крахмал, инулин, сорбит, маннит и др., этанол и метанол слабо. Усваивает нитратный, нитритный, 25 аммонийный азот, из органических источников азота ассимилирует аминокислоты, мочевину, пептон, кукурузный экстракт.

Признаки штамма устойчивы. Штамм атоксичный, не подвержен лизису, устойчив 30 к антибактериальным веществам; не продуцирует протеазу. Штамм является продуцентом липазы, обладает каталазной активностью, Липазу получают глубинным культиви- 35 рованием продуцента на среде описанного ниже состава.

Пример 1, Культивирование продуцента Rhizopus cohnii проводят на качалках с 220 об./мин при 40 на среде состава, : 40 соевая мука 1,5; KzHP04 0,2; KCI 0,05; СаСОз

0,05; MgS04 0,05; ИН4МОз 0,3; масло подсолнечное 1,0 (величина рН до стерилизации 7,0+0,1; после стерилизации 6,5-0,1) по

150 мл в колбах емкостью 750 мл. Посев 5%> 45 односуточного инокулюма, полученного на среде состава, : вытяжка из пшеничных отрубей 10,0; сахароза 1,0; К2НРО4 0,2; КС l

0,05; СаСОз 0,05; MgSO4 — 0,05; КН4КОз—

0,3. Длительность ферментации 72 ч, Актив- 50 ность липазы 600 — 700 ед/мл, каталазы 1012 ед/мл, Пример 2. Культивирование осуществляется в ферментере при 40, аэрации питательной среды 1 м /м /мин при работе 55 з з мешалки 280 об./мин, величина рН в пределах значений 5,8 — 6,2, Пенообразование снижают уменьшением степени аэрирования до 0,8 м /м /мин длительность процесз з са биосинтеза липазы 60 — 62 ч.

Липолитическая активностью 1000-1100 ед./мл, каталазы 12 — 15 ед/мл.

Препарат внеклеточной липазы выделяют из культуральной жидкости /к.ж./

Rhizopus cohnii осаждением тремя объемами ацетона к одному объему к.ж. с последующим высушиванием, Активность образцов препарата липазы из Rhizopus

cohnii составляет 50000 — 100000 ед/г, каталазы — 200000 — 250000 ед/г. Температурный оптимум действия препарата внеклеточной липазы из Rhizopus cohnii 45О, рН-оптимум действия — в пределах рН 6 — 7.

В то время как липаза из Rhizopus

microspurus УзЛТ-1 (прототип) при 50 С утрачивает активность на 50% з 120 мин. при 60 на 50% за 40 мин, а при 70 фермент инактивируется полностью за 20 мин, липаза из Rhizopus cohnii стабильна при 30, 40, 50, 60 и 65 (100 относительной активности) в течение 60 мин, а при 80 активность достигает нулевого значения в течение 30 мин (фиг.2).

Липаза из Rhizopus cohnii проявляет стабильность (100 относительной активности) при значениях рН 7,8,9 в течение 60 мин; при рН 10 теряется 60/ активности за

60 мин; при рН 11 теряется до 80% активности за 30 мин (фиг.3).

Rhizopus cohnii не продуцирует протеазу, что отличается от значительного числа микроорганизмов, в том числе микромицетов — продуцентов липаз, накапливающих в к,ж. наряду с липазой протеазу, которая снижает со временем липолитическую активность.

Полученный из штамма гриба Rhizopus

cohnii липолитический ферментный препарат, содержащий каталазу, участвующую в расщеплении перекиси водорода и удалении ее остатков, перспективен для применения в составе отбеливающих моющих средств, содержащих неорганические перекиси.

Использование культуры Rhizopus

cohnii Berl et de Toni — продуцента липазы с каталазной активностью — обеспечивает получение ферментного препарата для применения в качестве.биодобавки в составе синтетических моющих средств.

Формула изобретения

Штамм Rhizopus cohnii Berl et de Toni

ВКПМ F-408 — продуцентлипазы с каталазной активностью, 1726513

1726513

45 60

В ля(тй ) 35

45

Редактор Н.Горват

Заказ 1249 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по i.зобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101

gg

И Î

Составитель Т.Билай

Техред М.Моргентал Корректор И,Муска