Способ отбора жизнеспособных клеток или протопластов растений

Авторы патента:

C12N13 - Обработка микроорганизмов и(или) ферментов с помощью электрической и(или) волновой энергии, например магнетизма, звуковых колебаний

Использование: биология и биотехнология , в частности клеточная инженерия. Сущность изобретения: клетки или протопласты растений суспендируют в 0.4-0,6 М растворе сорбита, содержащем 6 мм хлорида кальция , суспензию выдерживают до полной неионогенности и помещают в проточную камеру в электрическое поле напряженностью 2000-20000 В/м т частотой 1-2 мГц, при этом жизнеспособные клетки или протопласты отбирают из камеры, а мертвые удаляют с током суспензии.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (н)з С 12 N 13/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ удаляют с током суспензии.

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4807322/13 (22) 27.03.90 (46) 07.06.92. Бюл, М 21 (71) Институт молекулярной биологии и биохимии им. М. А. Айтхожина . (72) М. К. Карабаев и В, А. Забелин (53) 57.086.83(088.8) (56) Galbralth О. W. and Gaibraith J.Å.Ñ. Z.

Pflanzenphyslol, 1979, 93, 149. .Биотехнология растений: культура клеток. ВО Агропромиздат, 1989, (54) СПОСОБ ОТБОЮ жиЗНЕСПОСОБHblX КЛЕТОК ИЛИ ПРОТОПЛАСТОВ РАСТЕНИЙ

Изобретение относится к биологии, а именно к клеточной инженерии, и может быть использовано в других областях, связанных с исследованиями на клеточном и тканевом уровнях.

Известен способ определения жизнеспособности клеток или протопластов, включающий обработку культуры каким-ли. бо флуоресцирующим красителем (например, флуоресцеиндиацетатом ФДА) и индивидуальный механический отбор живых клеток или протопластов растений под микроскопом.

Однако известный способ трудоемок (требует поштучного отбора каждой визуально различимой клетки) и малопродуктивен (позволяет отобрать всего около 50 действительно жизнеспособных клеток или протопластов).

Целью изобретения является повышение эффективности отбора жизнеспособных клеток или протопластов растений..

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу отбора жизнеспособных клеток или протопластов растений культуру Ы,, 1738855 А1 (57) Использование: биология и биотехнология, в частности клеточная инженерия. Сущность изобретения: клетки или протопласты растений суспендируют в 0,4-0,6 M растворе сорбита, содержащем 6 мм хлорида кальция, суспенэию выдерживают до полной неионогенности и помещают в проточную камеру в электрическое поле напряженностью 2000-20000 В/м т частотой 1-2 мГц, при этом жизнеспособные клетки или протопласты отбирают из камеры, а мертвые суспендируют в 0,4-0,6 М растворе сорбита, содержащем 6 Мм хлорида кальция, полученную суспензию выдерживают до полной неионогенноети; и затем жизнеспособные клетки или протопласты отделяют от мертвых в.проточной камере в электрическом поле напряженностью 200020000 В/м и частотой 1-2 мГц, при этом жизнеспособные клетки или протопласты (или целевой продукт) отбирают из камеры, а мертвые удаляют с током суспензии. Эффективность отбора составляет порядка

90%.

П р и.м е р 1. Клетки или протопласты пшеницы суспендируют в 0,5 M растворе сорбита, содержащем 6 мМ CaClz, с плотностью (1,2 вЂ” 1,6)х10 /мл, добиваясь неионогенности суспензионной среды; При концентрациях сорбита менее 0,4 M и более

0,6 М происходит разрушение протопластов. Затем берут 0.2-2,0 мл суспенэионной культуры и помещают в проточную камеру, между электродами которой, подключая высокочастотный генератор. создают электрическое поле напряженностью 2000-20000

1738855

Формула изобретения

Способ отбора жизнеспособных клето.. или протопластов растений, о т л и ч а о шийся тем, что, с целью повышения е;г эффективности, клетки или протопласты растений суспендируют в 0,4-0,6 М растворе сорбита, содержащем 6 мМ хлорида кальция, полученную суспензию выдерживают до полной неионогенности и затем жизнеспособные клетки или протоплэсты отделяют от мертвых в проточной камере в электрическом поле нагряженность с 200020000 В/и и частотой 1 вЂ”.2 мГц, при этом жизнеспособные клегки или протопласты отбирают из камеры, а мертвые удаляют с током суспензии.

Составитель В. Демкин

Редактор В..Петраш., Техред М.Моргентал Корректор О. Кравцова

Заказ 1978 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101

В/м, частотой 1 мГц. В поле генератора живые протопласты, поляризуясь, ориентированно прилипают к электродам,.мертвые остаются в суспензии во взвешенном состоянии. Через 1 вЂ” 2 мин, не снимая напряжения 5 . с электродов, включают ток суспензии, который выносит мертвые клетки или протопласты из камеры. Затем отключают генератор и извлекают суспензию с живым материалом из камеры. 10

Пример 2. Клетки или протопласты табака суспендируют в 0,5 M растворе сорбита, содержащем 6 мМ СаС!г, с плотностью (1,2-1,6)х10 /мл, добиваясь неионогенно- 15 сти суспензионной среды. При концентрации сорбита менее 0,4 М и более 0,6 M происходит разрушение протопластов. Затем берут 0,2-2,0 мл суспензион ной культуры и помещают в проточную камеру, между 20 электродами которой, подключая высокочастотный генератор, создают электрическое поле напряженностью 2000 вЂ” 20000 В/м, частотой 1 мГц. В поле генератора живые протопласты, поляриэуясь, ориентированно 25 прилипают к электродам, мертвые остаются в суспензии во взвешенном состоянии, Через 1 вЂ” 2 мин, не снимая напряжения с электродов, включают ток суспензии, который вы:".осит мертвые клетки или протопласты 30 из камеры. Затем отключают генератор и извлекают суспензию с живым материалом из камеры.

Пример 3. Клетки или протопласты кукурузы суспендируют в 0,5 M растворе 35 сорбита, содержа цем 6 мМ CBCI2, с плотностью (1,2-1,6)х10"/мл, добиваясь неионогенности суспензионной среды., затем берут

0,2-2,0 мл суспензионной культуры и поме40 щают в проточную камеру, между электродами которой, подключая высокочастотный генератор, создают электрическое поле напряженностью 2000-20000 В/м, частотой 1 м Гц. В поле генератора живые протопласты, поляризуясь, ориентированно прилипают к электродам, мертвые остаются в суспензии во взвешенном состоянии. Через 1-2 мин, не снимая напряжения с электродов, включают ток суспензии, который выносит мертвые клетки или протопласты из камеры.

Затем отключают генератор и извлекают суспензию с живым материалом из камеры.

Использование предлагаемого способа отбора жизнеспособных клеток или протопластов обеспечивает по сравнению с известными ускорение процесса отбора живых клеток или протопластов и оценку их жизнеспособности, а также значительное повышение эффективности -сгбофа и точности оценки живых клеток илй протопластов.

Способ отбора жизнеспособных клеток или протопластов растений

Способ культивирования молочнокислых бактерий sтrертососсus lастis // 1721086

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в пищевой промышленности и сельском хозяйстве

Способ выращивания микроводоросли хлорелла // 1711734

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для получения биомассы микроводорослей

Способ выращивания микроорганизмов // 1708842

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способу выращивания Микроорганизмов при обработке кулыуральной жидкости магнитным полем

Установка обработки белка // 1684340

Изобретение относится к сельскому хозяйству , в частности к кормопроизводству Цель изобретения - повышение производительности и качества обработки белка Установка включает корпус 1 в котором вращается гибкая коническая перфорированная перегородка 11 На перегородку 11 подают жидкость, содержащую белок Белок отделяется на перегородке 11 стекает по ней и выводится по патрубку 4 Осветленная жидкость проходит через отверстия перегородки 11 и пересекает гибкие тяговые элементы 16 которые вибрируют передавая вибрацию перегородке 11 и ускоряя процесс отделения белка 11ериодически перегородку выворачивают поднимают вверх тяговыми элементами 16 перекинутыми через расположенные на концах крестовины 14 блоки 15 Поднятую перегородку очищают промывной жидкостью поступающей из перфорированного стакана 13 Это позволяет очищать перегородку без прекращения работы установки 1 ил ФАКСИМИЛЬНОЕ ИЗОБРАЖЕНИЕБиблиография:Страница 1Реферат:Страница 1Формула:Страница 2Описание:Страница 2 PA4A/PA4F - Прекращение действия авторского свидетельства СССР на изобретение на территории Российской Федерации и выдача патента Российской Федерации на изобретение на оставшийся срок Номер и год публикации бюллетеня: 36-1997 (73) Патентообладатель: ТУМЧЕНОК В.И

Способ стерилизации питательных сред // 1643609

Способ приготовления мелассосодержащих питательных сред для выращивания продуцентов l - лизина // 1597403

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается приготовления питательных сред, содержащих мелассу, для выращивания бактерий-продуцентов L-лизина, который может быть использован в животноводстве для балансирования кормов

Способ получения микроорганизмов-продуцентов экзополисахаридов // 1593229

Способ выращивания дрожжей // 1564189

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано в дрожжевой, спиртовой, пивоваренной, гидролизной и других отраслях

Способ активации хлебопекарных дрожжей при производстве теста // 1564188

Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано в хлебопекарном и кондитерском производстве

Способ коррекции функционального состояния биологического объекта и устройство для его осуществления // 2107425

Изобретение относится к биологии и физиологии, а именно к методам и средствам физического воздействия на биологические структуры любого типа

Биотропная магнитная структура // 2123527

Способ исследования механохимических переходов олигомерных ферментов с помощью акустического резонанса // 2137836

Изобретение относится к области биофизической химии

Способ получения туберкулина // 2139089

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к ветеринарии, и может быть использовано в технологии получения биологических препаратов для специфической диагностики инфекционных заболеваний животных

Способ получения туберкулезного анатоксина // 2139090

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к ветеринарии, и может быть использовано в технологии получения биологических препаратов для специфической профилактики инфекционных заболеваний животных

Способ получения стафилококковой анатоксин-вакцины // 2139091

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к ветеринарии, и может быть использовано для профилактики и лечения маститов, ускорения заживления ран, иммуностимуляции и неспецифической профилактики ринотрахеита и парагриппа-3 крупного рогатого скота

Способ определения динамики изменчивости микроорганизмов // 2141532

Изобретение относится к области микробиологии и может быть использовано при изучении L-тpaнсфopмировaнных вариантов бактериальных клеток

Способ воздействия на жидкую биологическую среду магнитным полем // 2142012

Изобретение относится к области физических воздействий на биообъекты

Способ замедления биохимических и других процессов, идущих за счет электромагнитного взаимодействия // 2144563

Изобретение относится к способам замедления биохимических, химических и других процессов, идущих за счет электромагнитного взаимодействия

Способ биологической очистки сточных вод // 2146231