Способ стерилизующей фильтрации вируссодержащего материала для получения культуральной антирабической вакцины

 

Использование: медицина, производство вирусных препаратов. Сущность изобретения: для получения стерильной культуральной антирабической вакцины путем культивирования вируса на первичной культуре клеток, получения вируссодержащей жидкости, ее последовательного фильтрования через каскад мембран с диаметром пор 1,2, 0,65, 0,45, 0,22 мкм с предварительной обработкой двух последних пластин 2%-ным раствором желатозы, инактивацией и лиофильным высушиванием целевого продукта.

Изобретение относится к медицине, в частности к производству вирусных препаратов. Серийный выпуск культуральной антирабической вакцины осуществляется стационарным методом в 1,5-литровых матрасах, что связано с большим риском бактериального загрязнения. Отходы производства по нестерильности полуфабриката, имеющего выраженную специфическую активность, составляют 10% Однако ввиду высокой лабильности вируса бешенства, вопрос о его стерилизации не стоял на повестке дня до появления стерилизующих методов фильтрации. Ввиду того, что вирус разрушается уже при комнатной температуре, для стерилизации полуфабриката нельзя использовать термические методы обработки. Применение химических методов стерилизации невозможно из-за внесения в препарат дополнительных загрязнений, которые ведут к снижению его иммуногенной активности. Облучение УФ-лучами допустимо только для инактивации вируса, так как большие их дозы не только инактивируют вирус, но изменяют ряд его свойств, что связано с повреждением различных частей вириона. Получить стерильный препарат с сохранением специфической активности можно облучением -лучами, однако трудности возникающие в процессе облучения, наличие специального оборудования, повышенные требования к безопасному ведению работ, делают способ облучения -лучами недоступным для внедрения в производство культуральной антирабической вакцины. В последнее время для получения стерильных растворов все шире используется стерилизующая фильтрация с помощью мембранных методов разделения. Этот способ стерилизации отличается от других своей простотой, эффективностью, возможностью проведения процесса в щадящих условиях, что так необходимо для лабильного вируса. Мы попытались осуществить процесс стерилизации фильтрованием, используя метод микрофильтрации. Целью изобретения является увеличение выхода целевого продукта путем стерилизующей фильтрации вируссодержащей взвеси с подозрением на пророст и дальнейшее ее использование для получения культуральной антирабической вакцины. С этой целью очищенную от клеток взвесь, подвергают последовательной фильтрации через каскад мембран фирмы "Миллипор": 1,2; 0,65; 0,45; 0,22 мкм. Для уменьшения сорбции вируса пластины с диаметром пор 0,45 и 0,22 мкм обрабатывают раствором желатозы. Предложенная последовательная фильтрация через каскад мембран с размером пор 1,2 и 0,65 мкм дает возможность постепенно освободить вирус от сопутствующих балластных компонентов (клеточный детрит), а обработка мембран раствором желатозы снизить сорбцию вируса. Это позволило применить в дальнейшем мембраны с размером пор 0,22 мкм для стерилизации полуфабриката культуральной антирабической вакцины. При прохождении через каскад мембран происходит частичное разрушение вируса с выделением в раствор растворимых антигенов, обладающих специфической активностью, что также облегчает фильтрацию через поры диаметром 0,22 мкм. Таким образом, обработка полуфабриката предложенным способом позволяет получить стерильную вируссодержащую взвесь с сохранением инфекционной и иммуногенной активности, которая может быть использована для приготовления культуральной актирабической вакцины. Для получения культуральной антирабической вакцины используют вируссодержащую взвесь (с подозрением на пророст) культурального вируса бешенства штамм Внуково-32, 32-40 пассажа, выращенного на первичной культуре клеток почек сирийских хомяков. Клетки выращивают в среде, содержащей 0,5% гидролизата лактальбумина на растворе Эрла с 5% аминопептидом или гидролизином. Отбракованные первичные сборы объединяют в серию объемом 15 л и освобождают от клеток, пропуская через фильтр Кулагина и префильтр фирмы "Миллипор". Отделенную от клеток вируссодержащую взвесь фильтруют через каскад мембран с порами: 1,2; 0,65 мкм, затем последовательно ее подают на пластины с диаметром пор 0,45 и 0,22 мкм. Процесс фильтрации проводят в стерильных условиях под давлением воздуха 2 кгс/см2 со средней скоростью 20 л/ч. Для уменьшения сорбции вируса пластины с диаметром пор 0,45 и 0,22 мкм перед подачей вирусной жидкости обрабатывают 2% -ным раствором желатозы из расчета 400-500 мл на каждую. Совокупность данных приемов позволила снизить сорбцию вируса до минимума и получить стерильный препарат. В табл. 1 приведены данные, подтверждающие положительный эффект заявляемого способа. Все серии нестерильной взвеси, профильтрованной через выбранный каскад мембран, были стерильны. Потери вируса при этом колебались от 0,1 до 0,7 lg ЛД50/мл и в среднем составляли 4,4% Однако титры вируса в вируссодержащей культуральной жидкости после фильтрации соответствовали необходимым для приготовления вакцины (минимально допустимый титр по регламенту 4,5 lg ЛД50/мл и составили 4,5-6,5 lg ЛД50/мл. Потерями по объему можно пренебречь, так как они получаются меньше 1% потому что на одном каскаде фильтруются сразу друг за другом несколько серий вакцины общим объемом до 100-150 л. Очищенная вируссодержащая взвесь была стерильна, не контаминирована микоплазмами. Микроскопия препарата до фильтрации показала наличие в нем положительных кокков и палочек и отсутствие их в очищенном фильтрате. Отсюда можно сделать вывод, что данный способ фильтрации обеспечивает 100% выход полуфабриката из отходов производства, а полученная продукция по качеству отвечает прототипу. За прототип был взят производственный регламент, потому, что, во-первых, в литературе нет данных по стерилизации каким-либо способом культурального вируса бешенства, во-вторых, полученный продукт для использования с целью приготовления вакцины необходимо сравнить с данными регламента. Для приготовления культуральной антирабической вакцины очищенную фильтрацией вируссодержащую взвесь отбирали по 13-14 литров, инактивировали в аппарате-иррадиаторе УФ-лучей, добавляли сахарозожелатиновый стабилизатор и сублимационно высушивали. Вакцина, полученная описанным способом, была стерильна, не контаминирована микоплазмами, безвредна и нетоксична при проверке на мышах и морских свинках. Индексы иммуногенности (таблица 2) колебались от 0,56 до 2,88 против 30,6-500 ЛД50 фиксированного вируса бешенства CVS, то есть она удовлетворяла требованиям ТУ-42-14-86-76 на культуральную антирабическую вакцину. Таким образом, предлагаемый способ позволяет производство культуральной антирабической вакцины сделать безотходным по стерильности т. е. увеличить выпуск культуральной антирабической вакцины за счет возврата в производство полуфабриката, не прошедшего по стерильности.

Формула изобретения

СПОСОБ СТЕРИЛИЗУЮЩЕЙ ФИЛЬТРАЦИИ ВИРУССОДЕРЖАЩЕГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ АНТИРАБИЧЕСКОЙ ВАКЦИНЫ, включающий получение вируссодержащей взвеси на первичной культуре клеток с последующей инактивацией и лиофильным высушиванием, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода целевого продукта, вируссодержащую взвесь последовательно фильтруют через каскад мембран с диаметром пор 1,2, 0,65, 0,45, 0,22 мкм с предварительной обработкой двух последних пластин 2%-ным раствором желатозы.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Номер и год публикации бюллетеня: 10-2002

Извещение опубликовано: 10.04.2002        




 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биологическим средствам защиты растений от грибных болезней (микозов)

Изобретение относится к способам культивирования фотосинтезирующих микроорганизмов и может быть использовано в сельском хозяйстве и микробиологической промышленности

Изобретение относится к культивированию микроводорослей в качестве добавки в корм птицам, рыбам и пр

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способам выделения Shlorella sp

Изобретение относится к селекции микроводорослей и может быть использовано в биотехнологии фотоавтотрофных биосинтезов, в частности к получению углеводов

Изобретение относится к эфиромасличной промышленности, а именно к способам переработки микроводорослей, Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта при сокращении продолжительности процесса

Изобретение относится к марикультуре и может быть использовано при выращивании в системе инженерного типа с регулируемыми параметрами

Изобретение относится к микробиологической, пищевой и медицинской промышленности
Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для получения пищевых добавок, обладающих биологической активностью
Изобретение относится к микробиологии и касается способа получения селенсодержащей спирулины с содержанием органического (биодоступного) селена 6,15-6,5 г/кг

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для выделения аксенических культур микроводорослей при проведении физиолого-биохимического, цитологического и генетического изучения микроскопических водорослей

Изобретение относится к биофизике и ядерной технике и предназначено для производства биологического сырья для синтеза искусственного органического топлива, кормов и гумуса

Изобретение относится к микробиологической промышленности

Изобретение относится к области защиты технических смазок от повреждения мицелиальными грибами
Изобретение относится к области экологии и может быть использовано при очистке морской среды от нефтеорганического и минерального загрязнения
Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для получения пищевых добавок, обладающих биологической активностью
Наверх