Способ определения устойчивости вируса к обезвоживанию

 

Использование: медицина, вирусология Подготовленные исследуемые и контрольные образцы вирусных нативных суспензий размещают в емкости с крышками. В емкость с исследуемыми образцами помещают сорбент для бесконтактного удаления влаги. Исследуемые и контрольные образцы выдерживают при температуре, не вызывающей термоинактивацию вируса в течение времени проведения эксперимента При этом определяют относительные массы исследуемых образцов и биоактивность вирусов в контрольных и исследуемых образцах в разные моменты времени стандартными методами с последующим нахождением скоростей изменения относительной массы исследуемых образцов и биоактивности вирусов в этих образцах. Устойчивость вирусов к обезвоживанию определяют по отношению скорости изменения биоактивности к скорости изменения относительной массы исследуемых образцов. В процессе осуществления способа соблюдается равенство биологической активности вируса в контрольных образцах и исходной вирусной суспензии. 2 ил., 2 табл. Ё

(! 9) (!! ) СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (si)s С 12 N 1/00, С 12 0 1/70

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

1: (I

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1, ..., .. 2 (21) 4811995/13 .. -: ..:.: ..: . влаги. Исследуемые и контрольные образцы (22) 09.04,90 .:, .::: выдерживают при температуре, не вызыва(46) 30.08,92. Бюл, N. 32 -:: ющей термоинактивацию вируса в течение (71) Всесоюзный научйо-исследовательский . времени проведения эксперимента, При институт молекулярной биологии Научно-. этом определяют относительные массы исспроизводственного объединения "Вектор":.ледуемых образцов и биоактивность виру(72) В.Н. -Зеленков; В.В. Солодкий и С.И,: сов в контрольных и исследуемых образцах

: . Золотых . ::: s разные моменты времени стандартными

:. (56) Бекер М.Е. Обезвоживание микробной методами с последующим нахождением биомассы, Зинанте, Рига, 1967, с. 81; . скоростей изменения относительной массы

Авторское свидетельство СССР исследуемых образцов и биоактивности виМ 1317026, кл. С 12 Q 1/00. 1985. русое в этих образцах. Устойчивость виру-. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УСТОЙЧИ- сов:к обезвоживанию определяют по

ВОСТИ ВИРУСА К ОБЕЗВОЖИВАНИЮ отйошению скорости изменения биоактив(57) Использование: медицина, вирусология. ности к скорости йзменения относительной, Подготовленные исследуемые и контроль- массы исследуемых образцов. В процессе ные образцы вирусных нативных суспензий осуществления способа соблюдается равенразмещают в емкости с крышками. В ем- ство биологической активности вируса в кость с исследуемыми образцами помеща- : койтрольных образцах и исходной вирусной ют сорбент для бесконтактного удаления суспенэии:2 ил.,2табл.

Изобретение относится к медицинской промышленности и может быть использова - но в вирусологической практике для опреде- : ления устойчйвости вирусов в составе. . нативных суспензий при обезвоживании.

Известны контактные способы опреде.. ления влзгоустойчивости микроорганизмов, .: при KGYopblx заданная конечная влажность биомассы принимается равной влажности смеси адсорбент — биомасса, а также учитывается удельная массоемкость пробы био-. массы и здсорбента и рассчитывается колйчество адсорбента, необходимое для смешивания в зависймости от начальной и заданной конечной влажности биомассы, начальной влажности адсорбента и установ1 ленйой удельной массоемкости биомассы и здсорбента.

Недостатком указанных способов является невозможность использования их для определения устойчивости вирусов к обезвоживанйю в связи с возможной адсорбцией вирионов нз поверхности адсорбента и инактивации вируса вследствие выделения тепла при связывании воды с адсорбентом. Указанные причины влияют на результат определения бйозктивности вируса, определяемой стандартными методами титрования для ресуспендированной в водной среде смеси биомасса — адсорбент.

Наиболее близким к изобретению является способ определения влагоустойчиво1758074

10 образцов);

30

40

55 сти микроорганизмов, при котором устанавливают конечное значение влажности путем измерения текущего значения влажности и устанавливают соответствующее ему время выдержки, Обезвоживание биомассы осуществляют бесконтактным массообменом при 1-4ОС, а определение влагоустойчивости микроорганизмов ведут по графику зависимости выживаемости микроорганизмов от конечного значения . .ю,.". ° влажности.

Недостатком прЬтотипа является длительность цикла определения устойчивости микроорганизмов к обезвоживанию (до 18 ч) вследствие длительности проведения процесса обезвоживания при 1 — 4 С и длительности определения остаточной влажности образцов при обезвоживании с использова: нием их высушиванйя до постоянного веса в сушильном шкафу при 105 С, Причем при применении указанного способа для определения влагоустойчивости вирусов длительность цикла увеличивается еще в несколько раэ. Это связано с тем, что вирусные суспензии имеют сухой остаток в 3-4 раза меньший по сравнению с бактериальной биомассой, что ведет к увеличению объемов анализируемой суспензии вируса (для обеспечения достаточной точности определения,влажности биомассы) и, как следствие, увеличивается время определения устойчивости вирусов к обезвоживанию, Цель изобретения — ускорение способа определения устойчивости вирусов к обезвоживанию и сокращению расхода вирусной суспензии, Цель достигается тем, что способ определения устойчивости вирусов к обезвоживанию включает приготовление вирусной суспензии и размещение ее в емкости с сорбентом для бесконтактного удаления влаги. Далее определяют отдельные массы инкубируемой суспензии, а также репродукционную активность вирусов в исследуемой

- суспензии. Рассчитывают скорости измене ния относительной массы и репродуктивной активности вируса. Оценку устойчивости вируса к обезвоживанию проводят по отношению скорости изменения репродуктивной активности к скоростй изменения относительной массы.

В данном способе не требуется проводить измерение влажности исследуемых образцов, что сокращает расход вирусной суспейэии и ускоряет способ.

На фиг, 2 представлен график зависимости 1007; =f(t), mo mr где mr — масса исследуемого образца с чашкой в момент t;

mo — масса образца с чашкой до обезвоживания;

mr — масса чашки описывающей изменение относительной массы исследуемых образцов вирусной суспензии ВСЭЛ (штамм ТС-83) во времени (t); на фиг. 2 — график Ti = f(t) зависимости изменения биоактивности (биотитра) исследуемых образцов вирусной суспенэии ВЭЛ (штамм ТС-83), выраженного в Ig БОЕ/ мл, за время их обезвоживания (точки К соответствуют значения"биотитров контрольных

Способ поясняется конкретным примером его реализации при определении устойчивости к обезвоживанию вируса венесуэльского энцефаломиелита лошадей (ВЭЛ, штамм ТС-83), Суспензию вируса

ВЭЛ наливают в йредварительно простерилизованные и взвешенные на весах чашки с массой (гл,) по 0,3 мл в каждую. Чашки с исследуемыми образцами взвешивают, onределяя массу (mo), и устанавливают в герметичные емкости с сорбентом. В качестве сорбента используют ионообменную смолу

Na форму катионита КБ 4П2, влагоемкость которого составляет 150 г/100 г. Чашки с контрольными образцами объемом 0,3 мл устанавливают в пустую герметичную емкость. Емкости с исследуемыми и контрольными образцами устанавливают в суховоздушный термбстат с температурой

37 С, не вызывающей термоийактивацию вируса ВЭЛ в течение времени проведения обезвоживания сорбентом исследуемых образцов до момента прекращения изменения их веса. Через определенные промежутки времени извлекают из емкости с сорбентом по 3 исследуемых образца и определяют текущие значения их массы (mt).

Далее вычисляют относительные массы исследуемых образцов .. 100%. Данmt п1г, о

mo ные сведены в табл, 1.

После операций взвешивания каждый раз содержимое трех чашек с исследуемыми образцами объединяют и определяют репродукционную активность суспенэии вируса

ВЭЛ по стандартной методике титрованием на монослое культуры ФЭК(фибробласты куриных эмбрионов). Репродукционную активность выражают в Ig БОЕ/мл. Параллельно определяют репродукционную активность суспензии вируса ВЭЛ в контрольных образцах для исключения возможных ошибок вследствие термоинактивации вируса эа время экспозиции образцов.

1758074. 1pp% () пч пз, „, ®

Таблица 1

Результаты сведены в табл. 2:

После этого, используя табл. 1, строят график линейной убыли массы исследуемых образцов во времени: который представлен на фиг, 1, и график линейной убыли репродукционной активности во времени Т1 = f(t), используя табл. 2, Кроме того, на последнем графике наносят точки К, которые показывают репродукционную активйость вируса ВЭЛ в контрольных образцах. В процессе проведения эксперимента соблюдалось равенство репродукционной активности вируса ВЭЛ в контрольных образцах и исходной вирусной суспензии, которая равнялась 9,0 Ig БОЕ/мл, что подтверждает достоверность данных по определению устойчивости вирусов к обезвоживанию.

По графику на фиг. 1 определяют скорость изменения относительной массы исследуемых образцов ВЭЛ. которая соответствует тангенсу угла Q наклона линейного участка функции и равна tg а= -0,4%/ìèí, По графику на фиг. 2 определяют скорость изменения репродукциойной активности исследуемых образцов ВЭЛ, которая соответствует тангенсу угла (/3) наклона линейного участка функции Tr = f(t) и равна

tgP=-5,8 10 ig БОЕ/мин мл

Устойчивость вируса ВЭЛ к обезвоживанию определяют по отношению скорости изменения репродукциойной активности (tg /3) к скорости (tg а) изменения относительной массы исследуемых образцов, т. е.

Я

tg < — 0,4 %/мин

= 1,5 10 Ig БОЕ/ мл,%

tg — 5,8 10 Ig БОЕ/мин мл. Величина 1,5 10 Ig EOE/ мл. характеризует устойчивость вируса ВЭЛ (штамм ТС83) к обезвоживанию, а именно изменение массы образца за счет удаления воды на

100%, что ведет к изменению репродукционной активности вируса на 1,5 Ig БОЕ/мл, "0 т, е, в 32 раза. Использование контрольных образцов для подтверждения соответствия их биотитров репродукционной активности исходной суспенэии вируса показывает кор ректность определения устойчивости вируса к обезвоживанию.

Технико-экономические преимущества предлагаемого способа по сравнению с прототипом состоят в ускорении способа определения устойчивости вируса к обезвоживанию с 18 ч до 4 ч за счет проведения процесса обезвоживания при 37 С, а не при

1-40С, как в прототипе, Кроме того, отпадает необходимость определения остаточной влажности исследуемых образцов, что позволяет уменьшить расход исследуемой вирусной суспензии в 3 — 4 раза.

Формула изобретения

Способ определения устойчивости вируса к обезвоживанию, включающий приготовление вирусных суспензий и размещение их в емкости с сорбентом для бесконтактного удаления влаги с последующей оценкой, отличающийся тем, что, с целью сокращения расхода вирусной суспензии и ускорения способа, определяют во времени отдельные массы инкубируемых суспензий, а также репродукционную активность виру- . сов в исследуемых суспензиях, рассчитывают скорости изменения относительной массы и репродуктивной активности вирусов, а оценку проводят по отношению скорб сти изменения репродукционной активности к скорости изменения относительной массы..

1758074

Таблица 2.

40 И IIII 10d f70 М а еп щ ж ж ящ gag глад

ФУ8 1

7,0 ж < o N. zuu М z zan

Фиг, Ё

Составйтель Ю. Мистк)рин

Редактор М. Келемеш Техред M,Mîðãåíòàë Корректор Л. Лукач

Заказ 2972 . .. Тираж . Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035; Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101