Способ диагностики вазоспастической стенокардии

 

Использование: изобретение может быть использовано в кардиологии как в стационарных , так и амбулаторных условиях для выявления вазоспастического компонента у больных стенокардией на фоне ишемической болезни сердца. Цель: устранение побочных реакций теста на организм пациента и расширение дйагйостических возможностей способа. Сущность изобретения: из крови пациента выделяют тромбоциты и вносят в среду хлортетрациклин. Измеряют флуоресценцию. В момент прекращения прироста флуоресценции воздействуют поочередно ЭГТА и эргоновипом. Отсутствие изменений флуоресценции на введение препаратов свидетельствует о наличии вазоспастической стенокардии. Положительный эффект: способ полностью избавляет больного от опасных тестирующих воздействий, провоцирующих тяжелый приступ стенокардии и расширяет область его использования.

COI03 СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (s1)s G 01 N 33/49, 33/533

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО "СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОЛИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ

00 (Д

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4839646/14 (22) 14.06.90 (46) 23,12.92. Бюл. М 47 (71) Институт физиологии им. И.П.Павлова (72) С,K.×óðèíà, T.Ñ.ßøóøêåíå и Е.П.Николаева (56) Гасилин В.С„Сидоренко B.À. Стенокардия, M.; Медицина, 1987, с. 106-108. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ВАЗОСПАСТИЧЕСКОЙ СТЕНОКАРДИИ (57) Использование: изобретение может быть использовано в кардиологии как в стационарных, так и амбулаторных условиях для выявления" вазоспастического компонента у больных стенокардией на фоне ишемической болезни сердца. Цель:

Изобретение относится к медицине, MQжет быть использовано в кардиологии как в стационарных, так и амбулаторных условиях для выявлечия вазоспастического компонента у больных стенокардией на. фоне ишемической болезни сердца, Прототипом предложенного способа является способ диагностики стейокардии, заключающийся во внутривенном введении этоновина и одновременной регистрации

ЭКГ, При соответствующих изменениях ЭКГ в виде и одъе ма и л и снижейия сегмента ST на фойе появления спровоцированных эргоновином загрудинных болей (или без них) регистрируеТСя положительная реакция на эргоновин"Ii соответственно — вазоспастический xàðà)(òåð стенокардии. Прототип предложенного способа диагностики вазоспастической стенокардии описан в книге

В.С.Гасилиным и др, "Стенокардия" (М.: Меустранение побочных реакций теста на организм пациента и расширение диагйостических возможностей способа. Сущность изобретения: из крови пациента выделяют тромбоциты и вносят в среду хлортетрациклин. Измеряют флуоресценцию. В момент прекращения прироста флуоресценции воздействуют поочередно ЭГТА и эргоновином. Отсутствие изменений флуоресценции на введение препаратов свидетельствует о наличии вазоспастической стенокардии.

Положительный эффект: способ полностью избавляет больного от опасных тестирующих воздействий, провоцирующих тяжелый приступ стенокардии и расширяет область его использования. дицина, 1987, с, 106-108). Описанный способ не исключает опасных тестирующих воздействий эргоновина на организм больного.

Цель предложения — исключить опасные тестирующие воздействия на организм, избавить больных от небезразличного ((ля их здоровья (иногда жизни) провокационного теста и диагностировать характер стенокардии In чего.

Сущность предлагаемого способа диагностики вазоспастической стенокардии, включающего обычное клиническое обследование и воздействие на кровь больного эргоновином, но в пробе крови с помощью хлортетрациклинового флюоресцентного зонда (в концентрации 50 мкмоль/л), при прекращении прироста флуоресценции в пробу поочередно вводят ЭГТА (2 мМ) и эргоновин (в количестве 10, 1,5-4,0 мкг/кг

1783433 массы больного), и при отсутствии флуоресценции в ответ на введение как одного, так и другого диагностируют ваэоспастическую стенокардию, Выбор тромбоцита. крови в качестве объекта исследования не случаен, Тромбоцит, интегрируя многие процессы, происходящие в сосудистом русле, активно участвует в гуморальном контроле сосудистого тонуса, а по своему внутриклеточному биохимическому гомеостазу имеет много общих черт с гладкомышечной сосудистой клеткой (ГМК) и даже используется многими авторами как модель ГМК. В тромбоцитарных мембранах располагаются альфа- и бета-адренорецепторы (как в ГМК), а также рецепторы к большому количеству агонистов: катехоламинам, серотонину, ангиотензину-!1, АДФ, тромбоксану, коллагену, тромбину. Как и в ГМК в зависимости от типа рецептора стимуляция его приводит к изменению концентрации цАМФ, аденилатциклазы, образованию продуктов гидролиза мембранных инозитолсодержащих фосфолипидов, Результатом этих рецепторэависимых процессов является повышение концентрации свободного цитозольного кальция.

В состоянии покоя, в неактивированных тромбоцитах, концентрация цитозольного кальция поддерживается в пределах

10 моль (про ив 10 снаружи клетки). Такой низкий уровень цитозольного кальция определяется равновесием и согласованным функционированием множества кальций-зависимых систем плазматической мембраны, мембран ЭПР и митохондрий, а также системы, вызывающие выход Са2+ из внутриклеточных r,oìïàðòìåíòoâ, где Са2+ секквестирован, т,е. для ответа клетки 4 (тромбоцита, ГМК) на внешний сигнал необходимо изменение внутриклеточного кальция, выход его из мембранных клеточных компартментов. Са — чувствительный зонд хлортетрациклин широко используется в 4 биологических системах для мониторирования активного транспорта Са2 . Увеличение флуоресценции происходит лишь при связывании Са-ХТЦ комплексов с мембранами (в водной среде Са-ХТЦ комплексы не флу- 5 оресцируют).

На основании анализа кинетических кривых связывания ХТЦ c Ca + гидрофобный домен мембран тромбоцйтов исследовался мембран носвяза нный Са 5 тромбоцитов. Пул Са связанного с гидрофобными доменами наружной плазматической мембраны определялся пбсле воздействия 2 мМ ЭГТА, Это вещество, являясь хелатирующим агентом, селективно связывается с кальцием, локализованным в плазматической мембране. При этом происходит "тушение" флуоресценции Са -ХТЦ комплексов в данной мембране.

5 Такой методический подход позволяет определить степень участия. любого иэ нейрогуморальных (или фармакологических) факторов, в частности эргоновина, являющихся агонистами или антагонистами к рас10 положенным в мембранах рецепторам.

Вклад каждого из укаэанных агентов определяется в конечном счете изменением ком-: партментализации мемб ранносвязанного

Са и соответственйо — .флуоресцентного

15 сигнала.

Порядок реализации предлагаемого способа диагностики вазоспастической сте нокардии заКлючается в том, что у больных после общеклинического обследования

20 (анамнез, ЭКГ в покое и нагрузке, иногда регистрация ЭКГ в течение суток и коронарография) исследуют пробы крови, 1. Кровь-из локтевой вены (4 мл) собирают в пластиковую пробирку, содержа25 щую 4 мл мембранстабилиэирующего буфера (NaCI 0,9%, глюкоза 8 мМ, гепарин

20 ед/мл).

2. Кровь центрифугируют при 164 g в течение 10 минут.

30, 3, Отделяют супернатант.

4. Повторно центрифугируют при 1645 g.

5. Осадок тромбоцитов суспендируют в

4,5 мл инкубационной среды (NaCI 140 mM.

KCI 3 mM, МцС!2 0,5 mM, глюкоза 10 мМ, 35 йаНСОз12 mM, СаС!22mM), 6. В среду с тромбоцитами добавляют

50 мкМ хлортетрациклина (0,05 мл).

7, Измеряют флюоресценцию на спектрофлюориметре в прямоугольных кварце0 вых кюветах.

8. Длины волн возбуждения и флуоресценции соответственно 380 и 510 нм. Ширина щелей 16 мм, Анализируют уровень флюоресценции по отношению к фону в те- .

5 чение 20 мин. В момент прекращения прироста флуоресценции в оэ действуют поочередно 2 мМ ЭГТА в количестве 0,05 мл и эргоновином в количестве 10 М (1,54,0 мкгlмассы больного) и контролируют .

0 уровень флуоресценции после каждого из них. Если уровень флуоресценции остается постоянным, то диагностируют ваэоспастическую стенокардию, если уровень флуоресценцйи снижается, то имеет место

5 стенокардия напряжения.

Пример 1. Больной Ч., 49 лет, стра-— дает ИБС, стенокардией П функционального класса. Госпитализирован в связи с появившимися в течение месяца до госпитализации ночными (под утро, около 5 часов) 1783433 приступами ангиноэных (в течение 15-20 отмечается отчетливое снижение толерантмин) болей, трудно копируемых нитроглице- ности к нагрузке (50 Вт). В момент прове ерином. Учащение приступов" стенокардии в ния пробы воспроизведена развернутая течение дня, снижение толерайтности к на- картина ангиозного приступа. На 2-1 мин груэке. Диагноз: стенокардия напряжения, 5 25 Вт появились боли и онемение левой прогрессирующая стенокардия, Ваэоспа- нижней конечности, а на 3-й мин 25 Вт— стическая стенокардия. побеление кистей по типу "перчаток". На 2-й

5 1

Интенсивность флуоресценции через 2, мин 50 Вт появились загрудинные боли, соО, 15, 20 мин составляет соответственно провождающиеся дрожью, повышением ча9, 12, 12, 12, 12, усл. ед., после добавления 10 стоты сердечных сокращенийдо 120 в 1 мин, О, мл2мМЭГТАснижениеуровняфлуорес- снижение сегмента $Т в О, а с суммарным ценции не наблюдается (12 ед., 12 ед.), эр- смещением ST 3 мм. Через 3 мин приступ гоновина — также не наблюдается (12, 12 прекратился (проба прекращена), через 7 ед.). Диагноз: ваэоспастическая стенокар- мин — нормализация ЭКГ. дия на фоне ИБС,: 15 Во время проведения коронарографии

На ЭКГ, снятой в стационаре во время левой коронарной артерии развился тяжеприступа, и при ЭКГ-мониторировании в те- лый ангинозный приступ, сопровождаючение суток обнаруживается преходящая . щийся на ЭКГ подъемом сегмента $Т в 1, 2, депрессия сегмента $Т.. 3 стандартных отведенйях, AVF и наличием

При проведении коронарной ангиогра- 20 спазма в средней трети левой коронарной фии выявлено спонтанное появление сйаз- артерии, купированный внутривенным ввема коронарной артерии на протяжении 4 см, дением промедола. На ангиограмме имеетсопровождающегося подъемом сегмейта $Т ся умеренное стенозирование (менее 50 ) в III u IV u AVF отведениях ЭКГ и его исчез- левой коронарной артерии и правой коронрвение после внутривенного введения 25 нарнойартерии вверхнейисреднейтретях. нитроглицерина, В средней третилевой ко- При холтеровском мониторировании на ронарной артерии имеются 2 стеноза -50 g протяжении 24 час зарегистрированы отчети 25 просвета артерии. Диагноз вазоспа- ливые проявления коронарной недостаточстическая стенокардия, поставленный по- ности с резкой депрессией сегмента $Т сле исследования уровня флуоресценции в 30 (вход и выход из ишемии осуществляется пробе, подтвердился.. через экстрасистолу йз а- в соединения). ДиПример 2. Больной С., 47 лет, раба- агноз, установленный по исследованию кичий, в течение 12 лет работал на отбойном нетической кривой связывания ХТЦФЗ в молотке, В течение года страдает ночнйми ответ На ЭГТА и эргоновин, подтвердился. приступами загрудинных.болей, не прохо- 35. Пример 3. Больной М„45 лет. B дящих от приема нитроглицерина; кальцие- течение трех лет страдает приступами завых блокаторов, других антиангинальных грудинных болей на фоне физической напрепаратов, Последние 2 мес. появились грузки, при выходе на улицу, особенно в загрудинные боли при ходьбе, резко сни- мороз, при ходьбе (через 300-500 м). Боли зилась толерантность к нагрузке. При на- 40 исчезают в покое или при приеме нитрогликлонах туловища, наложении жгута на церийа. Принимает нитраты, кальциевые предплечье для измерения АД отмечается блокаторы. Диагноз: стенокардия напряжерезкое побледнение конечности. На ЭКГ в ния III функционального класса. На кривой покое имеются признаки распространен- связывания ХТЦФЗ с мембранами тромбоной субэндокардиальной ишемии, а на по- 45 цитовпоказателифлуоресценциичерез2,5, вторных ЭКГ, снятых во время приступа; 10, 15, 20 мин соответственно 10, 14, 14, 14, отмечается также подъем сегмента ST в 1,2 14 усл.ед., nocne воздействия ЭГТА — 10, а и левых грудных отведениях, Диагноз: ва- после эргоновина — 8 усл.ед. зоспастическая стенокардия. ВибрационФ

При проведении пробы с дозированной ная болезнь? Кинетические кривые 50 физической нагрузкой на велоэргометре отсвязывания ХТЦФЗ с мембранами тромба- мечается снижение объема выполненной цитов, полученные многократно прй по- работы (50 Вт 3 мин), проба прекращена вторных исследованиях, свидетельствуют из-эа выраженного ангинозного приступа. об отсутствии какого бы то ни было сниже- На высоте нагрузки на ЭКГ отмечаются выния флуоресценции как на ЭГТА, так и на 55 раженные признаки коронарной недостаэргоновин. точности (суммарное смещение сегмента ST

Диагноз: вазоспастическая стенокар- в D, А, J — 4 мм). .дия, При провецении селективной коронарПри проведении пробы с дозированной ной ангиографии левая коронарная артерия динамической нагрузкой на велозргометре без стенотических изменений. Правая коро-\

1783433

Составитель С,Чурина

Техред М.Моргентал Корректор Л.Ливринц

Редактор Т.Козлова

Заказ 4512 Тираж . Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5, Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101 нарная артерия с множественнымй стенозами на ее протяжении от 20 до 50 диаметра.

Субокклюзия ее в средней трети. Диагноз: ишемическая болезнь сердца,- стенокардия напряжения подтвержден кинетической кривой связывания ХТЦФЗ и дайныйи коронарографии и велоэргометрий.

Пример 4. Больной Е„41 год; жаЛуется на ангинозные загрудинные прйступы, возникающие в покое, чаще по ночам, без провокации эмоциональными или физическими нагрузками. Во время ходьбы боли не возникают. Продолжительность болевых эпизодов от 1 мин до 5-10 мин. За неделю до госпитализации боли без видимых причин участились, повторяются по несколько раз в день. Диагноз: вазоспастическая (спонтантная, вариантная) стенокардия.

При анализе кинетической кривой связывания ХТЦФЗ с мембранами тромбоцитов(12, 12.5, 13, 13, 13 усл.ед. через 2, 5, 10, 15, 20 мин соответственно) отмечается отсутствие снижения флуоресценции после воздействия 2 мМ ЭГТА после эргоновина, Сутбчное мониторирование ЭКГ свидетельствует о наличии пяти безболевых эпизодов"npdxîдящего характера со смещением сегмента

ST на ЭКГ, При проведении эргоновиновой пробы с внутривенным введением эргометрина малеата уже после введения 0,05 и 0,1 мг препарата возник приступ стенокардии с подъемом сегмента ST на ЭКГ, сопровождающийся появлением единичных желудочковых экстрасистол. Проба прекращена.

Диагноз: вазоспастическая (вариантная) стенокардия, поставленный на основании анализа кинетической кривой связывания

ХТЦФЗ с отсутствием изменения флуоресценции на ЭГТА и эргоновин, подтвержден внутривенной пробой с эргоновином.

Исследуют интенсивности флуоресценции у здоровых, больных со стенокардией и больных с эссенциальной гипертензией, ре- гистрируемой в течение 30 мин. После

8 быстрого выхода на плато уже к 10, 15 и 20-й минутам (у больных с эссенциальной гипертензией) ход кривых несколько изменяетсл, Интенсивность флуоресценции падает мед5 ленно (до 45 мин), оставаясь все же выше у тех больных, у кого она была выше в первые

20 мин, что согласуется с литературными данными, оставалсь все же выше у тех больных, у кого она бйла выше в первые 20 мин.

10 Поэтому она была выбрана нами как оптимальная, ибо как раз в этот момент вклад в регистрирующую флуоресценцию мембранного Са2+ Э П Р, митохондрий, плазматической мембраны был максимальным (Это t5 было предметом наших специальных исследований).

Способ апробирован на 71 больном со стенокардией, с вазоспастической стенокардией оказалось 7 человек. Данный спо20 соб полностью избавляет больного от опасных тестирующих воздействий, провоцирующих тяжелый приступ стенокардии вследствие введения в вену сильнодействующего вазосйастического агента, не зани25 мает времени у больного, Способ позволяет назначить дифференцированную терапи о без траты времени на поиски индивидуальных препаратов.

30. Формула изобретения

Способ диагностики вазоспастической стенокардии с помощью эргоновина, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью устранения побочных реакций теста на организм паци35 ента и расширения диагностических возможностей способа, предварительно из крови больного выделяют тромбоциты, вносят в среду с тромбоцитами хлортетрациклин, измеряют флуоресценцию, и при

40 прекращении ее прироста в среду вносят поочередно ЭГТА и зргоновин и по неизменности значения флуоресценции после введения препаратов судят о наличии вазоспастической стенокардии,

Способ диагностики вазоспастической стенокардии Способ диагностики вазоспастической стенокардии Способ диагностики вазоспастической стенокардии Способ диагностики вазоспастической стенокардии 

 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области микробиологии и может бить использовано в медицине для диагностики коклюша

Изобретение относится к медицине

Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии, и может быть использовано для выявления причинно-значимых аллергенов у больных с аллергическими заболеваниями

Изобретение относится к методам проведения иммуноанализа и может быть использовано в медицине, сельском хозяйстве , промышленности для определения биологически активных соединений

Изобретение относится к области иммунохимии и иммунологии и к исследованиям биологического материала путем азтсм8- тического анализа его взаимодействия с флуоресцентной меткой и может быть использовано в иммунологии и иммунохимии при проведении научных исследований

Изобретение относится к медицине, в -частности к аллергологии, Цель изобретения - повышение точности, ускорение и упрощение способа

Изобретение относится к биотехнологии , а именно к способам проведения иммуноанализа , и может быть использовано в медицине, сельском хозяйстве, промышленности для определения биологически активных соединений Целью изобретения является повышение чувствительности лантанидного флуоресцентного иммуноанализа

Изобретение относится к области медицины, а именно клинической иммунологии

Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии, и может быть использовано для оптимизации лечебного процесса, выявления ранних рецидивов опухолей
Наверх