Штамм бактерий rнizовiuм sp. (оnовryснis) для производства удобрения под эспарцет

 

Использование: микробиологическая промышленность, производство средств повышения урожайности бобовых растений , в частности производство удобрения под эспарцет. Сущность изобретения. штамм бактерий Rhlzobium sp.fOnobrychis) выделен из клубеньков эспарцета. Депонирован в коллекции ВНИИСХМ под №2921. Штамм выращивают на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, при аэрации и температуре 28-30°С в течение 36-48 ч. Получают культуральную жидкость с титром 4-5 млрд /мл, затем инокулируютторф, герметично запаянный в полиэтиленовые пакеты и подращивают культуру в течение 3-5 сут. при температуре 15-20°С. Получают ризоторфин с титром бактерий 5-10 млрд./г торфа. Полученный ризоторфин повышает урожай эспарцета на 8,6-26,6%. 2 табл. сл

СОЮЭ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (si>s С 05 F 11/08, С 12 N 1/20

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4901436/13 (22) 09.01.91 (46) 30.12.92. Бюл. № 48 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробйоnorw (72) Н. 3, Толкачев, А.В. Хотянович и В.Ф.

Паты ка

- (56) Авторское свидетельство СССР

N-; 881094, кл. С 05 F 11/08, 1981. (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ В IIZOBIUM

SP.(ONOBRYCHlS) ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА

УДОБРЕНИЯ ПОД ЭСПАРЦЕТ (57) Использование: микробиологическая промышленность, производство средств повышения урожайности бобовых растеИзобретение относится к микробиологическим средствам повышения урожайности бобовых растений, Известен штамм Rhlzoblum sp. (Onobrychis) 820, который используется для инокуляции эспарцета. Однако его азотфиксирующая активность и технологичность недостаточно высоки и стабильны, Кроме того, прибавки урожая, особенно в ю>кной стейной части СССР незначительны, Целью изобретения является создание штамма клубеньковых бактерий эспарцета, отвечающего требованиям производства ризоторфина, обладающего более высокой активностью азотфиксации и повышающего и улучшающего качество урожая эспарцета.

В качестве такого штамма предлагается штамм 2921, . >>Ы 1784б18 А1 ний, в частности производство удобрения под эспарцет, Сущность изобретения: штамм бактерий Rhizobium sp.(Onobrychis) выделен из клубеньков эспарцета, Депонирован в коллекции ВНИИСХМ под ¹ 2921.

Штамм выращивают на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, при аэрации и температуре 28-30 С в течение 36 — 48 ч. Получают культуральную жидкость с титром 4 — 5 млрд,/мл, затем инокулируют торф, герметично запаянный в полиэтиленовые пакеты и подращивают культуру в течение 3-5 сут. при температуре

15 — 20 С. Получают ризоторфин с титром бактерий 5-10 млрд./г торфа. Полученный ризоторфин повышает урожай эспарцета на

8,6 — 26,6% 2 табл. Клубеньковые бактерии шт.2921 выделены из клубеньков эспарцета в 1985 году.

Штамм определен по определителю

Берги, Штамм Rhlzoblum sp.(Onobrychis) 2921 депонироаан в коллекции ВНИИ сельскохозяйственной микробиологии под номером

2921.

Штамм 2921 растет на питательных средах следующего состава;

1.Гороховый агар,. г/л; горох — 100,0; сахароза — 20,0; агар — 20,0, рН 7,0-7,2.

2.Жидкая среда Норриса, г/л: К НР04—

0,5; Mg SO4.7Í20 — 0,8; РеС!з — 0,01; маннит — 10,0; дрожжевой экстракт — 100 мл, рН,7,1.

Морфолого-культурал ьные свойства.

Вегетативные клетки, 1784618

На гороховом агаре с рН 7,1 — 7,2 при 28- Молоко с лакмусом не пептонизирует, 30 С в шестисуточной культуре имеют фор- подщелачивает, образуя слизистую зону на му палочек размером 1-2,8 0,6-0,7 мкм - поверхности, грамотрицательные, тип жгутования- пе-, Содержание Г+ Цв ДНК62,3%. ритрихи. В молодых культурах подвижны, 5, Штамм не патогенен, Штамм 2921 хрэгомогенны, при старении г6могенность" нйтся на гороховом агэре указанного выше сменяется зернистостью с одновременной " состава.при 2-4 С в течение 6 месяцев, заутратой йоДвижности. При старении тем йересевается; кул(трефы:.образуют бактероиды, пред- .: Пример 1. Технология приготовления став ляющие ®бой крупные колбообраз- 10 препарата на основе штамма:2921. ныеЪлетки., . "„,. :. -:,.::--,. -:. ":: .. ПосевйуЮ культуру".выращивают на каХарактеристика роста на плотной сре- чалке в колбах или пятилитровых бутылях де.. .: . .: .: .: .:," . в течение 4 суто к на среде следующего

Гороховый агар, Т 28-30 С, рН 7,0-7,2 состава. мас;%: гороховый отвар — 10,0; саКолонии появляются на шестые сутки, 15 хар (пищевой) — 1,0; (NH<)zS04 — 0,05;. слизистые, полупрозрачные-. выпуклые, . KHzP04 — 0,05: К2НР04"ЗНгΠ— 0,05; круглые, иногда неправильной формы, до: MgS04 7Н20 0,02; СаСОЗ вЂ” 0,1; вода вод опр оводная -до 100,0. рН после стер и2 мм в диаметре

Рост на углеводных средах обы )но . лизации (1,0 ати, ЗО мин.) — 6,8-7;О; Титр сопровождается образованием обиль-" 20 клеток 3-4 млрд/мл. Посевную культуру ной внеклеточной полисэхаридной Сли--"" . используют .для приготовления жидкой рази. -" :. : - . . :. -:;... ",: бочей культуры. Ее rîòîâÿT в пятилитроФизиолого-биохимическйесвойства,". .- : вйх бутылях или фермейтерах на среде Симбионт. - " -. . следуюЩего состава, мас.% кукурузйый

Макросимбионт — бобовое растеййе эс- 25 экстракт" - 1,0;" меласса - "2,0; (NH<)2SO< -, парцет.. " . :: " .:. - - .: .:..- 0,1; КНгР04-0,025; К !-.IP04 ЗН О-0,025;

Отношение к. ; - - "--- " :.: MgS04 7НгС-О;02; СаСОз-0,1; вода водоа) кислороду — аэроб: -::::: -":.::::- "::: ". -- проводная до 100,0. рН после"стерйлйзации б) Т максимальная 40 С: " :: 6,8-.7,0. минимальная 10 С - . :: 30: Бутыли и ферментеры засеватот йосев-. оптимальная 27- 29 С ной культурой клубеньковых бактерий в ков) рН максима льный 7;5 ; . личестве 5%. 6 y òû ëè "в с т ряхив"а ют на минимальный 6,0 "":: : " качалке втечение80-96 часов, В ферментеоптимальный; 7,0-7;2 рах бактерий выращивают 36-48 часов при

35 аэрации 0,7-1,5 об/мин под избыточным

Источники углерода.:: давлением 0,3-0,5 ати при температуре

g . e 28 30 С, Титр 4-5 млрд/мд. После микро-

Глюкоза Ащ . (-) .. биологического контроля .культуральную

Лактоза Ащ (-):.. . ": жидкость из бутылей или ферментеров—

Мальтоза Ащ (-) 40 инокулюм — используют для смешивания:с

Ксилоза Ащ . (-) ., торфом ; Под готовка торф а.

Сахароза Ащ . (-): . . Размолотый низййный "торф, нейтрали Рамнозэ Ащ (-): зованный мелом до pl-l 6;8-7;О с влажностью

Маннит . Ащ (-) 30-40% в полиэтиленовьи пакетах по 200 -" . Сорбит Ащ (-) 45 400 г стерйлизуют гамма -облучением" при

Клетчатка — .. дозе 2,5 Мрад. Стерильный торф в"пакеКрахмал" : - " тах инокулируют инъекцией:cìåñé куль:Жидкая среда Норриса, Т26 — 28 С:: туральной жйдкости c ìåë àññoé (6%) из

Источники азота расчета йсходното титра бактерий в торфе

Ж 50 0,3 — 0,5 млрд/г торфа и влажности 45 — 60%::

МаМОз + . Затем пак еты за гружают в с пециал ьные (ИН4)г304 + смесители. при вращении которых переметирозин

+ шивается их содержимое. Культуру а торМПА фе подрэщивают, выдерживая пакеты

Азот фиксирует в симбиозе с зспарце- 55 3-5 суток:при температуре 15-20 С. Ри- том. зоторфин хранят.при температуре 3-8 С

Другие характерные физиологические в темном сухом помещении отдельно от особенности. ядохимикатов. Характеристика готового

Желатину не разжижает. продукта.

1784618

Формула изобретения

Таблица 1

Эффективность инокуляции семян эспарцета ризоторфином, изготовленным на основе штаммов 820 и 2921

Риэоторфин на предлагаемом штамме представляет собой по внешнему виду увлажненную сыпучую массу темного цвета, без запаха, нерастворимую в воде. Влажность готового препарата 50 — 55%. Ризотор- 5 фин содержит 5-10 мл рд клубе н ько в ых бактерий в 1 r торфа. Срок годности препарата 6 месяцев со дня изготовления, Расход препарата 200 г на гектарную нор-" му семян. 10

Пример 2. Сравнительное изучение штаммов Rhlzoblum sp.(ОпоЬгусЫз) 820 и

2921 была проведено в вегетационных -и деляночных опытах с эспарцетом сорта

1Ожноукраинский. В вегетационных опы- 15 . тах использовали темно-каштановую почну, содержащую легкогидролизуемого азота

2 7 мг на 100 г почвы. Навеска почвы в сосудах 6 кг, Повторность десятикратная.

Деляночные опыты проводили на лугово- 20 черноземовидной почве с содержанием легкогидролизуемого азота 5,1 мг на 100 r почвы. Размер учетной делянки 2 м, повторность четырехкратная.

Результаты опытов приведены в 25 табл.1, - Как видно из табл.1, прибавка урожая зеленой массы от инокуляции семян эспарцета штаммом 2921 составила 60,0 ц/га (15,4%) по сравнению с неинокулированным вариантом. Штамм 820 оказался менее эффективным.

Пример 3. Те же штаммы испытывались в производственных условиях на эспарцете сорта Южноукраинский на черноземе южном суглинистом с содержанием легкогидролизуемого азота 6,1/100 r почвы.

Размер учетной делянки 50 м, повторность четырехкратная..

Результаты приведены в табл.2, Как видно из табл.2, штамм 2921 более эффективен Do сравнению со штаммом -прототипом 820 и в полевых условиях, : Предлагаемый штамм, кроме того, повышает содер>кание белка в зеленой массе эспарцета на 1,8%, что повышает его кормовую ценность, а также высокотехнологичен — набирает титр до 10 млрд клеток в

1 г ризоторфина.

Штамм бактерий Rhizobium

sp.(OnobrycЫэ) ВНИИСХМ N 2921 для производства удобрения под эспарцет.

1784618

Таблица 2

Составитель М, Бронштейн

Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор М. Ткач .

Редактор Т. Егорова

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 4347 Тираж . Подписное

BHVIVltlN Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5