Способ ингибирования активности фермента аскорбатоксидазы в проростках ячменя

 

Использование: физиология растений, биохимия растений. Сущность изобретения: в качестве ингибитора аскорбатоксидазы используют водный раствор салицилальдоксима в концентрации М, а введение ингибитора осуществляют путем погружения среза листа в раствор ингибитора. 4 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 С 12 Q 1/26

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ. ".:БОЮЗНМ - " -:- :: - техно,=;Г!", 6

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЪСТВУ (21) 4865450/13 (22) 25,07,90 (46) 07,01.93. Бюл. N. 1 (71) Калининградский государственный университет (72) Г,Н.Чупахина. С,В.Воробьева и Т.А.Николаева (56) Гавриленко B,Ô„Ëàäûãèíà M.Е., Хандобина Л.М, Большой практикум по физиологии растений. М.:Изд-во, Высшая школа, 1975, с.

254.

Изобретение относится к области физиологии растения, в частности к регуляции обмена веществ.

Существует способ регуляции активности ферментов с использованием ингибиторов. B частности, для регуляции активности аскорбатоксидазы широко применяется диэтилдитиокарбамат, Однако данный способ имеет следующие недостатки; а) для введения ингибитора в ткань листа используется метод вакууминфильтрации, требующий специального оборудования для создания вакуума; б) ингибитор готовится на буферном растворе, что требует дополнительных реактивов для приготовления буфера и усложняет процедуру приготовления ингибитора.

Целью предложенного способа является регуляция активности аскорбатоксидазы путем введения в растения ингибитора фермента, салицилальдоксима, при этом упрощена процедура введения ингибитора в ткань листа и сокращено время приготовления ингибитора., Ы,, 1786070 А1 (54) СПОСОБ ИНГИБИРОВАНИЯ АКТИВНОСТИ Ф Е P М Е НТА АСКО P БАТО КСИДА-.

ЗЫ В ПРОРОСТКАХ ЯЧМЕНЯ (57) Использование, физиология растений, биохимия растений. Сущность изобретения: в качестве ингибитора аскорбатоксидазы используют водный раствор салицилальдоксима в концентрации 5х10 М, а введение ингибитора осуществляют путем погружения среза листа в раствор ингибитора. 4 табл.

Поставленная цель достигается тем, что срезанные листья проростков ячменя помещаются срезом в раствор салицилальдоксима (С7НТИО2) в концентрации 5-10 4 М.

Данная концентрация обладает максимальным ингибирующим эффектом по сравнению с другими исследованными — 5 10 и

5 10 М. При всасывании листьями раствора вместе с водой в лист поступает салицилальдоксим, который вызывает ф) ингибирование активности аскорбатоксида- О» зы, Заявляемый способ соответствует критерию изобретения "новизна", так как впервые для ингибирования активности фермента достигается не аа счет введения ингибитора в ткань листа методом вакууминфилвтрацииу а путем помещения сре- в занных листьев в раствор салицилальдоксима срезанной частью. Это позволяет заключить, что заявляемый способ соответствует критерию "существенные отличия".

Ингибирование активности аскорбатоксидазы в 7-дневных проростках ячменя

5 10 M раствором салицилальдоксима в

1786070

Таблица 1

Влияние салицилальдоксима на активность аскорбатоксидазы проростков ячменя, находящихся в темноте темноте и на свету демонстрируют данные опытов (табл,1 и 2).

Опыт 1. Срезанные листья проростков ячменя помещались на 1 ч или на 24 ч в раствор салицилальдоксима в темноту (табл.1). В присутствии ингибитора через 1 ч произошло снижение активности аскорбатоксидазы, и этот эффект сохранялся и при суточной экспозиции.

Опыт 2. Срезанные листья проростков ячменя помещались на 1 ч или на 24 ч в раствор салицилальдоксима на свет (табл.2). В присутствии ингибитора активность аскорбатоксидазы снизилась на 527; и при часовой и при суточной экспозиции.

Следует отметить, что величина ингибирования активности аскорбатоксидазы салицилальдоксима была выше на свету, чем в темноте.

В табл.3 приведены данные сравнительной эффективности ингибиторного действия càëèöèëàëьдоксима и диэтилкарбомата натрия, в концентрации

0,005 М, которая обычно употребляется.

Укаэанная концентрация дизтилдитиокарбомата натрия оказала меньшее ингибирующее действие на активность аскорбатоксидазы, чем салицилальдоксим (5 10 M).

Следует отметить, что салицилальдоксим (5 10 M) в отдельных опытах проявлял большое ингибирующее действие, доходящее до полного блокирования фермента (табл.4). Из представленных данных видно, что салицилальдоксим в концентрации510 М на 100% ингибировал аскорбатоксидазу зеленых и этиолированных проростков и только у альбиносов, отличающихся высокой активностью фермента, ингибирование бы ло не полным, но максимальным из исследованных концентраций.

Таким образом, диэтилдитиокарбомат натрия для ингибирования аскорбатоксида5 зы рекомендуется вводить в ткань листа методом вакууминфильтрации, требующим создания вакуума, в то время как ингибирующее действие салицилальдоксима проявляется и при погружении срезанных листьев

10 в раствор, т.е, используется более простая и менее длительная процедура.

Диэтилдитиокарбамат натрия готовится на буферном растворе, салицилальдоксим— на воде. Предварительное приготовление

15 буферного раствора также требует дополнительной затраты времени. Следовательно, на приготовление и использование ингибитора по способу-прототипу затрачивается значительно большее количество времени, 20 чем по предложенному способу.

Сравнительные данные об эффективности ингибиторного действия салицилальдоксима и диэтилдитиокарбамата натрия, говорящие о большей активности салици25 лальдоксима в ингибировании фермента ас- . корбатоксидазы.

Формула изобретения

Способ ингибирования активности фер30 мента аскорбатоксидазы в проростках ячменя путем введения водного .раствора ингибитора в ткань проростка, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью упрощения и повышения эффективности способа, в каче35 стве ингибитора используют водный раствоо салицилальдоксима в концентрации 5

«10 М, а введение ингибитора осуществляют путем погружения среза листа в раствор ингибитора.

Таблица 2

Влияние салицилальдоксима на активность аскорбатоксидазы проростков ячменя, находящихся на свету. Интенсивность света

30 тыс,эрг, см с 1 с

Таблица 3

Влияние салицилальдоксима и диэтилдитокарбомата натрия на активность аскоррбатоксидазы проростков ячменя, находящихся на свету.

Экспозиция 1 час, Интенсивность света 30тыс, эрг, см с1, Т а б л и ц а 4 . Влияние салицилальдоксима на активность листьев ячменя, различающихся по содержанию пигментов