Способ противоишемической защиты почек

 

Изобретение относится к области трансплантблогии и оперативной нефрологии, а именно к защите почек от ишемического повреждения. Цель - защита почек от повреждения при тепловой и холодовой ишемии при фармакологическом воздействии на почку после начала ишемии. Масляный раствор а -токоферола растворяют в диметилсульфоксиде в отношении 1:5 и полученный раствор впрыскивают в 2-3 кратных объема физиологического раствора. При этом образуется стабильная мелкодисперсная эмульсия, которую вводят внутривенно 2-3 мл/кг (из расчета 25-37,5 мг а -токоферола на 1 кг массы тела) за 10-20 мин до прекращения ишемии. Способ обладает более высокой эффективностью в отношении защиты как от тепловой, так и холодовой ишемии и может быть использован практически во всех ситуациях, связанных с ишемией почки, При-этом более высокий эффект достигается при использовании меньших доз препарата. 4 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 А 61 К 31/355 ,ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) 1 въ .

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ «г." .,,,,,„,„. .- м с

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ вЂ” -ф (21) 4817954/14 (22) 24.04.90 (46) 28.02.93. Бюл. М 8 (71) Н аучно-исследо ва тел ьск ий институт .урологии (72) В,И. Кирпатовский, Ю.В. Кудрявцев, О.Н.Надточий и С,Г,Емашов (56) Шумаков В,И., Онищенко Н.А., Кирпатовский В.И.. Фармакологическая защита трансплантата. М.: Медицина, 1983. . (54) СПОСОБ ПРОТИВОИШЕМИЧЕСКОЙ

ЗАЩИТЫ ПОЧЕК (57) Изобретение относится к области трансплантологии и оперативной нефрологии, а именно к защите почек от ишемического повреждения, Цель — защита почек от повреждения при тепловой и холодовой ишемии при фармакологическом воздействии

Изобретение относится к области медицины, а именно к трансплантологии и оперативной нефрологии, Целью изобретения является зашита почек от повреждения после развития ишемии.

Способ осуществляется следующим образом.

Необходимое количество 30 масляного раствора а-токоферола ацетата (иэ расчета 25 мг/кг веса тела) смещивают с

5-кратным объемом диметилсульфоксида и тщательно перемешивают, после, чего впрыскивают шприцам через тонкую иглу во флакон с физиологическим раствором в соотношении 1 объем препарата на 3 объема физиологического раствора. Полученную эмуЛьсию вводят внутривенно капельно за

10-20 минут до прекращения ишемии поч„„ЯЦ„„1797912 А1 на почку после начала ишемии. Масляный раствор Q -токоферола растворяют в диметилсульфоксиде в отношении 1:5 и полученный раствор впрыскивают в 2 — 3 кратных объема физиологического раствора. При этом образуется стабильная мелкодисперсная эмульсия, которую вводят внутривенно

2-3 мл/кг (из расчета 25-37,5 мг а-токоферола на 1 кг массы тела) за 10-20 мин до прекращения ишемии, Способ обладает более высокой эффективностью в отношении защиты как от тепловой. так и холодовой ишемии и может быть использован практически во всех ситуациях. связанных с ишемией почки, При.этом более высокий эффект достигается при использовании меньших доз препарата. 4 табл, ки и восстановления кровотока в органе. Доза готовой эмульсии составляет 2-3 мл/кг массы тела.

Пример 1. Доказательство эффективности заявляемого способа при тепловой ишемии почки.

У 12 крыс массой 250 — 280 г под тиопенталовым наркозом вскрывали брюшную полость,выделяли левую почку и ее сосудистую ножку пережимали на 90 минут, вызывая тепловую ишемию. В опытной серии (1-я серия 6 крыс) за 10 минут до окончания, срока ишемии в бедренную вену шприцом вводили 0,8 мл эмульсии а-токоферола ацетата (2 мл/кг). В контрольной серии (2-я серия, 6 крыс) вводили такое же количество физиологического раствора. Правую (неишемиэированную) почку удаляли. После 90 минут ишемии зажим с почечных сосудов

1797912 снимали, восстанавливая кровообращение в органе. В 1-й серии почка приобретала нормальный розовый цвет по всей поверхности в течение 5 — 7 минут, а во 2-й серии во всех случаях отмечалось неравномерное восстановление кровотока в различных отделах ишемизированного органа. Даже через 20 минут у всех 6 крыс оставались синюшные. участки поверхности почек, соответствующие зонам нарушенного кровообращения, Брюшную полость ушивали и зэ животными наблюдали в течение 7 дней. В течение этого срока выжили все 6 крыс 1-й серии опытов и 5 из 6 крыс 2-й серии. Уровень креатинина крови и величина клубочковой фильтрации через 2 и 7 дней после ишемии представлены в табл,1,.

Полученные результаты достоверно показывают, что 90-минутная тепловая ишемия вызывает глубокие нарушения функции почек крысы, которые не восстанавливаются к 7-у дню. Введение эмульсии а-токоферола ацетата за 10 минут до прекращения ишемйи и восстановления кровотока существенно улучшает функциональное состояние ишемизированной почки и способствует нормализации клубочковой фильтра-. ции через 7 дней после ишемии.

П р и M е р 2. Доказательство эффективности заявляемого способа при холодовой ишемии почек.

У 2 кроликов массой 3 кг под тиопенталовым наркозом вскрыли брюшную полость, выделили левую почку и пережали ее сосуды зажимом на 1 час, При этом почку обложили со всех сторон салфетками с мелко наколотым льдом, так что через 3 — 4 минуты температура поверхности почки снизилась до

5 — 7 C; Эту температуру поддерживали в течение всех 60 минут ишемии, при необходимости докладывая новые порции льда, Одному кролику (опытному) за 10 минут до окончания срока ишемии внутривенно ввели 6 мл эмульсии а -токоферола ацетата (2 мл/кг), а другому (контрольному) ввели та= кое же количество физиологического раствора, Через 60 минут зажим с почечных сосудов сйяли, восстановив в почках кровообращение, а салфетки со льдом удалили, Мочеточники правой (неишемизировэнной) и левой (ишемизированной) почек у обоих кроликов катетеризировали и собирали мочу в течение 1 часа для определения величины клубочковой фильтрации и реабсорбции Па раздельно в каждой почке.

Результаты представлены в табл.2.

Из представленных в таблице данных видно, что 1-часовая холодовая ишемия вызывает выраженные нарушения функционального состояния почки, проявляющиеся в резком снижении диуреза, снижении клубочковой фильтрации и угнетении реабсорбции натрия, Введение эмульсии

5 а-токоферола ацетата (заявляемый способ защиты) за 10 минут до восстановления кровотока в почке существенно улучшает все функциональные показатели.

Пример 3. Сравнение эффективности

"0 способа-прототипа и заявляемого способа при тепловой иШемии почки.

Шести крысам массой 250 — 280 г за 24 часа до эксперимента внутрибрюшинно ввели 0,15 мл 30 jo масляного раствора то-. каферола ацетата (200 мл/кг) (1-я группа, способ-прототип). Во 2-й группе из 6 крыс животным предварительно ничего не вводили. У всех крыс вызывали ишемию левой почки, как описано в примере 1, а правую почку удаляли. В 1-й группе через 90 минут ишемии зажим с почечной ножки снимали и восстанавливали почечное кровообращение. Во 2-й группе за 10 минут до снятия зажима внутривенно вводили 0,8 мл эмульсии а- токаферола ацетата (заявляемый способ). После 90 минут ишемии зажим с сосудов также снимали. За животными наблюдали 7 дней; определяя креатинин крови и клубочковую фильтрацию, Результаты представлены в табл,3.

Из представленных в таблиц данных видно, что заявляемый способ обеспечивает лучшее сохранение функционального состояния почек, подвергнутых действию.

35 тепловой ишемии по сравнению со способом-прототипом, что проявляется в более быстром восстановлении нарушенной клу:бочковой фильтрации.

Пример 4, Сравнение эффективности

40 способа-прототипа и заявляемого способа при холодовой ишемии почки.

Пяти кроликам за 24 часа до опыта внутримышечно вводили 2 мл 30 масляного раствора и -токоферола ацетата (200 мг/кг).

45 Затем у.них вызывали ишемию левой почки сроком на 1 час в условиях наружного охлаждения органа до +5 — +7 С, как описано .в примере 2. (способ-прототип). У других 5 кроликов колодовую ишемию вызывали беэ предварительного введения препарата. 3а

10 минут до окончания срока ишемии им вводили внутривенно по 6 мл эмульсии атокоферола ацетата (заявляемый способ).

У всех животных в течение 1 часа после

55 ишемии собирали мочу из ишемизированной почки и определяли ее функциональные показатели, которые представлены в таблице 4.

Из данных, представленных в таблице видно, что при защите почек по способу1797912 прототипу сохраняются выраженные нарушения функции ишемизированной почки, проявляющиеся в снижении диуреза, клубочковой фильтрации и угнетении реабсорбции натрия. При защите почек по заявляемому способу функциональные показатели ишемизированных органов значительно улучшаются, приближаясь к норме, Было проведено исследование безопасности внутривенного введения эмульсии атокоферола ацетата, а также подбор оптимальных доз и сроков введения.

Эмульсию вводили 10 крысам в бедренную вену в количестве 0,8 мл и 5 кроликам в ушную вену в количестве 6 мл (2 мл/кг) и наблюдали эа животными в течение месяца, Все животные нормально перенесли введение препарата, никаких отклонений от их поведения не было отмечено. Через 1 месяц все животные были живы, патологических признаков не было. . Для определения оптимальной дозы эмульсии а-токоферола ацетата ее вводили кроликам в дозах: 1,2,3 и 4 мл на.1 кг массы тела (12, 5, 25, 27, 5 и 50 мг!кг а -токоферола . ацетата соответственно), У кроликов вызывали холодовую ишемию, как описано в примере 2, и определяли величину клубочковой фильтрации через 1 час после ишемии. При введейии эмульсии из расчета 4 мл/кг отмечено бурое окрашивание мочи в постишеми- ческом периоде, что было расценено, как проявление токсического действия диметилсульфоксида, вводимого вместе с эмульсией. Поэтому эта доза была определена, как неприемлемо высокая. B опытах с введением эмульсии из расчета 1 мл/кг величина клубочковой фильтрации после. ишемии достоверно не отличалась от контрольных опытов, проводимых без введения эмульсии . (0,8 0,1 мл/мин в контроле и 1,1+.0,1 при введении эмульсии 1 мл/кг). При введении эмульсии 2 и 3 мл/кг клубочковая фильтрация ишемизированной почки достоверно увеличилась до 2,1+0,2 и 2,0+0,2 мл/мин соответственно. В связи с этим доза 1 мл/кг была признана как неэффективная, а 2 и 3 мл/кг — оптимальными.

Для определения оптимального времени введения исследовали эффективность противоишемической защиты при введении эмульсии из расчета 2 мл/кг за 5, 10, 20 и 30 мин до тепловой ишемии почки крысы и за

10 — 15 минут до начала ишемии, У крыс вызывали тепловую ишемию на 90 минут, как в примере 1, и определяли клубочковую фильтрацию на следующие сутки после ишемии. Значения этого показателя составили соответственно; 0,070 0,008, 0,223 +0,026;

0,152 +0,019, 0,084 +.0,016 и 0,038 0,004. От значений контрольной группы (беэ защиты), 10 которые составили 0,041 +.0,007 мл/мин, достоверно отличались показатели, полу-ченные при введении эмульсии за 10 и 20 минут до окончания. Именно эти сроки введения и были признаны оптимальными.

Таким образом, результаты убедительно демонстрируют, что способ противоишемической защиты почек от повреждения развивающегося при тепловой и холодовой ишемии, обладает более высокой эффективностью чем известный способ предвари20 тельной фармакологической защиты а-токоферолом. П редлагаемый способ имеет преимущество также в том, что его можно использовать в экстренных ситуациях, 25 когда метод предварительного введения масляного раствора а -токоферола ацетата неприменим (препарат необходимо

Использование предлагаемого способа позволит улучшить послеоперационное состояние почек. подвергнутых действию ишемии, облегчит течение раннего послеоперационного периода, flозволит умаHь35 шить вероятность развития осложнений и сократит сроки лечения больных, Формула изобретения

40 Способ противоишемической защиты почек, включающий введение в организм . раствора а-токоферола ацетата, о т л и ч аю шийся тем, что с целью защиты после развития ишемии, а -токоферола ацетат

45 вводят в сосудистое русло в виде эмульсии за 10 — 20 мин до восстановления кровотока, для чего предварительно растворяют

25 — 27 мг/кг массы тела препарат в диметилсульфоксиде в соотношении 1:5 и затем смешивают с 2 — 3-кратным обьемом физиологического раствора до образования эмульсии. вводить за 18 — 24 часа до ишемии) и в значительно меньших дозах (25-37,5 мг/кг вместо

30 200 мг/кг).

1797912

Таблица 1

Таблица 2

Таблица 3

Группа опытов

7-е с тки после ишемии

2-е с ки после ишемии

Креатинин крови, ммоль/л

Креатинин крови, ммоль/л

Клубочковая фильтрация, мл/мин

Клубочковая фильтрация, млlмин

Введение а - токоферола ацетата в/бр за 24 ч опыта (прототи и)

Введение Эмульсии а -токоферола ацетата в/в за 10 мин до окончания ишемии (за я вл яемый способ

0,63+0,08

0,58+0,01

0,171 +0,03

0,148+ 0,03

0,078 +0,024

0,253 «+0,086

0,494 +0,05

0,662 4-0,04

<0,05

<0,05

П р и м е ч а н и е. Нормальные значения для крыс креатинина крови составляют

0,.10+0,01 ммоль/л, à s клубочковой фильтрации — 0,65+0,03 мл/мин

1797912

Таблица 4

Составитель Ю. Есилевский

Техред М.Моргентал Корректор H.ÃÓíüêî

Редактор

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 .

Заказ 729 Тираж Подписное

8НИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.; 4/5