Среда для оценки степени высвобождения ферментов из лекарственных форм

 

Использование изобретения: может быть использована в биофармации, к способам оценки биодоступности лекарственных веществ. Сущность заключается в том, что для оценки степени высвобождения ферментов из лекарственной формы используют состав, включающий специфический для каждого фермента субстрат в количестве 0,01-1 мас.%; агар 1,2 мас.% и воду -- остальное , Разработанная среда позволяет оценить степень высвобождения ферментов из лекарственных форм. 3 ил., 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК.

ГОсудАРстВеннОе. пАтеНтнОе

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 .. (21) 4844869/14 (22) 23.05,90 (46) 28.02.93. Бюл, Nò 8 (71) Казанский государственный медицинский институт им, С.В, Курашова (72) Л,А. Поцелуева, Э.Г, Куприянов-Ашин и

А.А, Баранова (56) В патентной литературе предложенная среда не описана, (54) СРЕДА ДЛЯ ОЦЕНКИ СТЕПЕНИ ВЫСВОБОЖДЕНИЯ ФЕРМЕНТОВ ИЗ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ

Изобретение относится к биоформации, а именно, к способам оценки биодоступности лекарственных веществ из лекарственных форм по интенсивности высвобождения активного вещества из лекарственной формы в модельную среду, . имитирующую ткани организма.

Целью изобретения является разработка состава среды для оценки степени высвобождения ферментов из лекарственных форм.

Пример 1. Состав среды для оценки степени высвобождения РНКазы бактериальной из лекарственных форм, В качестве вводимого в модельную среду субстрата использована высокополимерная дрожжевая рибонуклеиновая кислота (PНК) производства НПО "Вектор", имеющая степень неферментативного гидролиза не более 5%.

Готовят модельную среду. для чего агар после его набухания растворяют в воде при кратковременном кипячении. Точную навеску РНК растворяют в дистиллированной

„„5U ÄÄ 1798686 А1 (51)5 G 01 N 33/15, А 61 К 37/48 (57) Использование изобретения; может быть использована в биофармации, к способам оценки биодоступности лекарственных веществ, Сущность заключается в том, что для оценки степени высвобождения ферментов из лекарственной формы используют состав, включающий специфический для каждого фермента субстрат в количестве

0,01 — 1 мэс,%; агар 1,2 мас.% и воду — остальное, Разработанная среда позволяет оценить степень высвобождения ферментов из лекарственных форм. 3 ил„1 табл, воде, раствор смешивают с 2 ч. охлажденного до 37 — 40 С агарового геля. Жидкую смесь разливают в чашки Петри с диаметром 38 мм (ТУ 64-2-19-78). В каждой чашке в центре застывшего геля делают по одной стандартной лунке, куда помещают 22,5 мкл 0,5%ного водного раствора бактериальной 0} рибонуклеазы. Количество образцов опре- Q(j деляется количеством составов модельных 0 сред и количеством оцениваемых временных интервалов инкубации, Пробы термостатируют при 37 + 2 С, в течение различных интервалов времени, По окончании инкубации на поверхность геля наносят на 5 мин по 0,5 мл охлажденного до + 5 С а

0,75% раствора урэнилацетата в 25% хлорной кислоте, который осаждает высокополимерные фрагменты РНК. В результате вокруглунок с лекарственной формой РНКазы (водный раствор фермента) образуются прозрачные зоны, свидетельствующие о диффузии РНКаэы в гель и отражающие область образования продуктов гидролизэ

РНК.

1798686

На фиг.1 представлены результаты, характеризующие интенсивности протекания процесса диффузии фермента иэ раствора в гель во времени в зависимости от состава модельных сред, различающихся только по процентному содержанию специфического для данного фермента субстрата. Следует отметить, что использование в составе среды PHK в концентрациях 0,1 и 1,0% обусловливает образование четко выраженных прозрачных зон при всех временных интервалах, причем увеличение времени инкубации сопровождается увеличением величины прозрачных эон, что подтверждает факт . протекания диффузии фермента в гель во времени. Интерес вызывают результаты сопоставительной оценки диаметра эон диффузии РНКаэы при использовании РНК в концентрациях 0,1, 0,2 и 1,0%, более значимые в первых двух случаях. Причем для кон- 20 центрации субстрата 0,2% характерна более четкая, чем для концентрации 0,1 %, граница раздела прозрачной зоны и зоны преципитации при всех временных интервалах, что имеет большое значение для количественной оценки степени высвобо>кдения фермента в гель, При использовании

РНК в концентрации 0,02% и ниже не наблюдается четко выра>кенной прозрачной, видимой невоору>кенным глазом, зоны диф- З0 фузии, имеются лишь очень слабо выраженные ее контуры к 4-му часу исследования, Таким образом. визуальная оценка полученных результатов позволила выделить для дальнейшего анализа составы сред, содержащие PHK в концентрациях 0,1 и 0,2%, обеспечивающие воэмо>кность адекватной количественной оценки эффекта, Сделанное заключение подтверждается расчетным способом, результаты которого представле- 40 ны в таблице и отражают интенсивность высвобождения фермента в гель во времени в зависимости от концентрации в ием субстрата, причем как видно из таблицы, для всех временных интервалов величина диф- 45 фузии фермента в гель, содержащий 0,1% субстрата, несколько выше, чем при его содержании 0,2%, Однако несмотря на статистическую достоверность различий оии очень малы и составляют от 1,07 до 1,12 50 раза. 8 то же время, возвращаясь к фиг,1, следует подчеркнуть уже упоминавшийся ранее факт наличия более четкой границы между прозрачной зоной и зоной преципитации при использовании геля, содержаще- 55 го 0,2% РНК.

Пример 2. Состав среды для оценки степени высвобождения панкреатической

РНКазы из лекарственных форм.

Методика проведения эксперимента и вид использованного субстрата (дрожжевая

PHK) идентичны методике и субстрату, приведенным в примере 1, Нэ фиг,2 иллюстрируют результаты диффузии панкреатической РНКазы из 0,5% водного раствора в модельную среду с различным содержанием субстрата. Они свидетельствуют о том, что, как и в случае изучения бактериальной

РНКазы, наиболее приемлемым для биофармацевтической оценки лекарственных форм пэнкреатической РН Казы является состав модельной среды, содержащей 0,2% субстрата (РНК), обеспечивающий образование наиболее четкой границы двух зон. В то же время данные таблицы свидетельствуют о близости расчетных значений величин зон диффузии в среды, содержащие PHK в концентрациях 0,1 и 0,2%, Пример 3, Состав среды для оценки степени высвобождения панкреатической

ДНКазы из лекарственных форм, Методика проведения эксперимента аналогична методике, описанной в примере

1, Однако в качестве субстрата для ДНКазы, вводимого в модельную среду, использована натриевая сол ь дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК натриевая соль) иэ зритроцитов цыплят. На фиг.З иллюстрируют результаты диффузии панкреатической ДН Казы из водного раствора в модельную среду с различным содержанием субстрата (ДНК натриевая соль). Они свидетельствуют как и в первых двух примерах, о некотором преимуществе модельной среды, содержащей субстрат в концентрации 0 2%, Данные, представленные в таблице, отражают интенсивность высвобождения фермента в гель во времени в зависимости от концентрации в нем субстрата.

Таким образом, содержание РНК или

ДНК в модельных средах при оценке степени диффузии в них ферментов (РНКаз и

ДНКаз) вследствие высвобождения последних иэ лекарственных форм должно находиться в интервале концентраций

0,02 — 1,0%, Оптимальное содержание РНК или ДНК в модельной среде соответствующей концентрации 0,2%, что обеспечивает образование наиболее четкой границы между прозрачной зоной и зоной преципитации. В,качестве заявляемого объекта предлагается следующий состав модельной среды для оценки степени высвобождения ферментов из лекарственных форм; 0,01—

1,0% специфического для фермента (группы ферментов) субстрата, 1,2% агара и до 100% воды.

Результаты визуальной и математической оценки высвобождения ферментов из .

1798686 лекарственных форм в модельную среду данного состава, проиллюстрированные фиг.1 — 3 и таблицей, могут быть использованы для характеристики биодоступности ферментов в опытах in vitro, Формула изобретения

Среда для оценки степени высвобождения ферментов из лекарственных форм, включающая специфический для каждого фермента субстрат, агар и воду в следующем соотношении указанных компонентов, мас.%:

5 Специфический субстрат

Агар

Вода

0,02-1

1,2

До 100

Показатели диффузии нуклеаз из 0,5 -ных водных растворов в модельные среды с различным содержанием субстрата ски достоверно при всех временнь;х интервалах е. Различие (P < 0,05).

0,002 0,0I О,О2 0,I 0,2 I,О 2,0

Фий. 5 римечни

IlP" n,nZZNT < ЛЬН ) CTb

3K0rI93NIJNN

WGC, КРЕЦ(ИТ;Зй—

Ц1 R C$607-"" Эй ГЖ В MOJfÂËÜÈÎÈ

СРЕ,лбэ fîo

О,I 0,Р

0,02

Пр"1должительн 1сть экспозиции час. Риг. я

17986 86

Концентрация субстрата з мэделъней среде, 7.

1798686 б

0,2

0,I

%uz, Л

Редактор

Заказ 768. Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород. ул,Гагарина, 101

Кбнц6Йтда- О, О"= ция субстрата з ма ,IIIJIbHQN

СЯВД6, g

Прпдалжительнесть эксп®Зиции, час

Составитель Л;Поцелуева

Техред M.Mîðãåíòàë Корректор С.Юско

Среда для оценки степени высвобождения ферментов из лекарственных форм Среда для оценки степени высвобождения ферментов из лекарственных форм Среда для оценки степени высвобождения ферментов из лекарственных форм Среда для оценки степени высвобождения ферментов из лекарственных форм Среда для оценки степени высвобождения ферментов из лекарственных форм 

 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области экспериментальной медицины, в частности нейрофармакологии

Изобретение относится к медицине и касается диагностического средства для обнаружения лейкоцитов в моче

Изобретение относится к медицине конкретно к способу определения чувстви тельности вируса гриппа к ремантадину Цель изобретения - ускорение анализа и упрощение способа В двухкамерную электрохимическую ячейку, разделенную бислойной липидной мембраной добавляют в одну камеру раствор белка исследуемого вируса гриппа, измеряют потенциал и при увеличении потенциала после добавления реманта дина вирус считают чувствительным к действию ремантадина

Изобретение относится к клинической фармакокинетике и может быть использовано в экспериментальной фармакологии и практической медицине для определения содержания нестероидных противовоспалительных препаратов в биологической жидкости

Изобретение относится к экспериментальной фармакологии и может быть использовано для отбора препаратов, улучшающих кислородное снабжение мозга при его циркуляторной гипоксии Цель изобретения - снижение трудоемкости

Изобретение относится к мэдмцине, а именно к фармакологии

Изобретение относится к области кардиологии и электрофизиологии, в частности используется для оценки индивидуальной эффективности различных антиаритмических препаратов

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной хирургии

Изобретение относится к медицине, в Частности к хирургии и интенсивной терапии

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в качестве лекарственного препарата для лечения поражений , вызываемых вирусом герпеса простого

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, и может быть использовано для лечения бронхиальной астмы
Наверх