Способ нефелометрического определения количественного содержания белков в ячмене
ОПИСАН И Е ISI843
ИЗОБРЕТЕНИЯ
СОюз Сееетсиих
Сециалиетичесиих
Реепублин
Зависимое от авт, свидетельства ¹ 144039
Заявлено 01.111.1965 (¹ 945042/28-13) Кл, 42h, 17/06
42l, 9!01 с присоединением заявки №
Комитет по делам
МПК б 01j
G 01п
УДК 663.421:543.436 (088.8) Приоритет
Опубликовано 21.1V.1966. Бюллетень № 10
Дата опубликования описания 15.VI.1966
02O0PGTGHH3 B 0TKPblTNA при 0ееетз Ыиииетрев (pп
Авторы изобретения
Ю. А. Кечек и О. Г. Севрук
Заявитель
СПОСОБ НЕФЕЛОМЕТРИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ
КОЛИЧЕСТВЕННОГО СОДЕРЖАНИЯ БЕЛКОВ В ЯЧМЕНЕ
Известен нефелометрический способ определения количественного содержания белков в ячмене по авт. св. № 144039 на имя тех же заявителей.
Сущность предлагаемого способа состоит в том, что, с целью определения качественного состава белковых веществ по их растворимости в различных растворителях, количественное определение белков каждой фракции производят после экстрагирования ее соответст- 10 вующим растворителем.
Способ осуществляют следующим образом.
Определгпот расчетный коэффициент белковых фракций по способу, описанному в авт. св. № 144039. 15
С этой целью производят щелочную экстракци1о нескольких (2 — 3) образцов ячменя с известной концентрацией белка, ранее определенной по методу Кьельдаля.
Из приготовленного экстракта исследуемо- 20 го образца отбирают микропипеткой 0,2 лтл и замутняют заранее приготовленный 2,5%-ный раствор сульфосалициловой кислоты, взятый в объеме 5 л1л.
Получе1шый мутный раствор наливают в 25 нефелометрический стаканчик, сравнивают в нефелометре со «стойким эталоном мутности»; заранее приготовленным и прокалиброванным по стандартному способу, и определяют высоту столба мутного раствора. ЗО
Для нахождения коэффициента среднюю высоту столба мутного раствора умножают на концентрацию белка в нем. Расчетный коэффициент для определения общего количества белка является средним арифметическим из нескольких полученных таким хке образом коэффициентов из взятых двух-трех образцов ячменя.
Расчетный коэффициент белковых фракций вычисляют путем деления полученного коэффициента общего белка на эмпирическое число 2,8, выведенное путем разведения экстрактов общего белка с учетом увеличения объема экстракта при замутнении.
Далее приступают к экстрагированию белковых фракций в ячмене соответствующими растворителями.
Вначале извлекают солерастворимую белков ю фракци10. Для этого навеску тонкоизмельченного материала растирают в фарфоровой ступке с небольшим количеством (2,5 л1л) 5%-ного раствора сернокислого калия. Затем к смеси доливают 2,5 л1л раствора той же соли и после перемешивания оставляют на 30 л1ин для экстракции. После экстракции смесь снова растирают, переносят в пробирку и цептрнфугируют в течение 5 л1ан.
Полученный солевой экстракт сливают в обычную пробирку, градуированную на 10 л1л, а к осадку добавляют 5 л1л раствора серно181843
Предмет изобретения
Составитель В. Нижегороднева
Редактор Р. С. Чистова Техред Л. К. Ткаченко Корректоры: T. H. Костикова и В. В. Крылова
Заказ 1606/6 Тираж 1800 Формат бу м. 60 Х 90 /8 Объем 0,16 изд. л. Подписное
ЦНИИПИ Комитега по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Москва, Центр, пр. Серова, д. 4
Типография, пр. Сапунова, 2 кислого калия и после перемешивания смеси оставляют на 15 лтн на вторую экстракцию.
После этого смесь центрифугируют и полученный экстракт приливают к первому экстракту, перемешивают и затем, в случае надобности, доливают до метки раствором этой же соли.
Для экстракции спирторастворимой фракции белка к оставшемуся после солевой экстр акции осадку добавляют 5 мл 70 "/о -ного спирта, взбалтывают и оставляют на 30 лик для экстракции. После экстракции спирторастворимой фракции смесь центрифугируют и сливают экстракт в градуированную на 10 лл пробирку.
Далее проводят вторую спиртовую экстракцию.
К, оставшемуся осадку после спиртовой экстракции добавляют 5 л1л 0,05 и. раствора едкого патра и производят две щелочные экстракции.
Из исследуемых экстрактов отбирают микропипеткой по 0,6 мл и замутняют ими заранее приготовленный 2,5 -ный раствор сульфосалицило вой кислоты, взятой в объеме
5 жл, и энергично перемешивают до получения однородной мутной взвеси.
Полученные мутные растворы сравнивают в пефелометре с прокалиброванным «стойким эталоном мутности», измеряя при этом высоту каждого столба мутного раствора.
Замутнение каждого исследуемого раствора производят в 2 — 3 раза, и для расчета берут среднее значение полученных высот стол10 бо".
Для вычисления количества белка в каждой фракции находят отношение ранее найденного коэффициента белковых фракций к среднему значению полученной высоты столба.
Способ нефелометрического определения
20 количественного содержания белков в ячмене по авт. св. № 144039, отличающийся тем, что, с целью определения качественного состава белковых веществ по их растворимости в различных растворителях, количественное опре25 деление белков каждой фракции производят после экстрагнрования ее соответствующим растворителем.
