Способ культивирования хлореллы

 

Использование: микробиологическая промышленность, способы культивирования хлореллы. Сущность изобретения: способ культивирования состоит в засеве маточной культурой сосудов с рабочим объемом в 1 л для питательной среды, получающейся из жидких отходов после варки картофеля, выращивание проводят при освещении в оптимальных условиях, после достижения хлореллой концентрации 40-50 млн.кл/мл в каждом из параллельно работающих сосудов сливают вместе полученные культуральные жидкости из 5-6 таких сосудов в один более объемный и продолжают выращивание в тех же условиях до достижения концентрации 210-250 мян.кл/мл. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (21) 4934044/13 . (22) 06.05.91 (46) 30.03,93. Бюл. Nã 12 (71) Ленинградский технологический институт им. Ленсовета (75) А.А. Егоров (73) А.А,Егоров (56) Авторское свидетельство СССР

% 1373728, кл. С 12 N 1/12, А 01 Н 13/00, 1986, (54) СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ХЛОРЕЛЛЫ (57) Использование; микробиологическая промышленность, способы культивироваИзобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способам культивирования одноклеточных организмов, к каким относится хлорелла, Целью изобретения является повышение выхода биомассы хлореллы, Это достигается тем, что известный способ культивирования хлореллы на питательной среде известного состава в сосудах с рабочим объемом для питательной среды в

1 л. при оптимальных условиях перемешивания воздухом, освещения и температуры, дополняется тем, что по достижении хлореллой плотности популяции (40-50) млн.кл/мл в каждом из параллельно работающих сосудов сливают вместе выращенные суспенэии из 5 — 6 таких сосудов в один более объемный и продолжают культивирование в том же режиме до достижения плотности популяции 210-250 млн.кл/мл, Выход биомассы при этом составляет до 5,4 г/л, что по биомассе на 15% выше, 5U,, 1806185 А3 (я)э С 12 N 1/12, А 01 Н 13/00 ния хлореллы. Сущность изобретения: способ культивирования состоит в засеве маточной культурой сосудов с рабочим объемом в 1 л для питательной среды, получающейся из жидких отходов после варки картофеля. выращивание проводят при освещении в . оптимальных условиях, после достижения хлореллой концентрации 40 — 50 млн,кл/мл в каждом из параллельно работающих сосудов сливают вместе полученные культуральные жидкости иэ 5 — 6 таких сосудов в один более объемный и продолжают выращиваHIne в тех же условиях до достижения концентрации 210 — 250 млн.кл/мл. 1 табл. чем при известной технологии выращивания хлореллы.

Сущность изобретения состоит в следующем. Известный способ культивирования хлореллы в нескольких сосудах с рабочим объемом в 1 л для питательной среды, содержащей минеральные соли и фильтрат жид- ОО ких отходов, образующихся при варке и С) бланшировке картофеля на картофелепере- О рабатывающих предприятиях, включающий засев маточной культурой Chlorella Vulgaris с исходной концентрацией засева не менее, чем 8-10 млн.кл./мл. выращивание О при температуре 23 -1 С, освещенности

4500+500 лк, 12-часовои чередовании све- дрв тового и темнового периодов, при переме- СА) шивании воздухом в течение светового периода, дополняется тем. что по достижении плотности популяции (40 — 50) NIllH,KR./ìë в каждом из параллельно работающих сосудов сливают вместе выращенные суспензии из 5 — 6 таких сосудов в один более объемный

1806185 и продолжают культивирование в том же режиме до достижения плотности популяции 210 — 250 млн.кл/мл, Существенным отличием предлагаемого изобретения является то, что популяция хлореллы не проходит в своем развитии

"стрессовой" фазы, и это гарантируется, вопервых, временной синхронизацией указанных действий по соединению параллельных в количестве 5- популяций хлореллы с достижением ими указанных плотностей в (40 — 50) млн.кл/мл (при выращивании в сосудах с рабочим объемом в 1 л для питательной среды), во-вторых, временной синхронизацией момента прекращения культивирования с достижением плотности объединенной популяции (210-250) млн.кл/мл; и такая последовательность операций из литературы неизвестна.

Пример 1, Для приготовления фильтрата жидкие отходы, образующиеся при варке и бланшировке картофеля, направляют в емкости, где они отстаиваются в течение 30 мин, после чего надосадочную жидкость сливают и пропускают. через фильтр для получения фильтрата с концентрацией сухих веществ 1,5 g,. В 100 мл полученного фильтрата жидких отходов вносят

0,3 г азотно-кислого калия, 0,08 r однозамещенного фосфорно-кислого калия, перемешивают и доливают указанный фильтрат до общего объема 1 л, после этого подвергают дробной стерилизации 3 раза через сутки при 0,02 Mna e течение 30 мин.

Приготовленную таким образом среду заливают в параллельные сосуды в количестве по 1 л в каждый и засевают маточной культурой СЫогеИа Vulgarls с исходной концентрацией засева не менее, чем 8 — 10 мл н.кл./мл. Культивирование микроводоросли ведут при температуре 23+ I C, освещенности 4500=>500 лк и чередовании светового и темнового периодов 12:12. В течение светового периода культуру перемешивают воздухом. По достижении хлореллой плотности популяции (40 — 50) млн.кл,/мл в каждом иэ параллельно работающих сосудов сливают вместе выращенные суспензии иэ 4 таких сосудов в один более объемный и продолжают культивирование в том же режиме. Один или несколько однолитровых сосуда оставляют для контроля.

Выход биомассы при этом составляет для контрольного варианта (прототип) 4,52 г/л при плотности популяции 217 млн.кл./мл, Для сосуда, в котором происходит доращивание объединенной культуры, выход биомассы составляет 4,96 г/л при плотности популяции 278 млн,кл./мл.

Пример 2. Приготовление фильтрата из жидких отходов, засев маточной культурой Chlorella Vulgaris, а также температура, яркость и режим освещенности остаются такими же, как это описано в примере 1.

По достижении хлореллой плотности популяции (40-50) млн.кл./мл в каждом из параллельно работающих сосудов сливают вместе выращенные суспензии из 5 таких сосудов в один более объемный и продолжают культивирование в том же режиме. Вы-, ход биомассы составляет 5,31 г/л при плотности популяции 252 млн.кл,/мл.

Пример 3. Приготовление фильтрата из жидких отходов, засев маточной культурой СЫогеИа Vulgar!a, а также температура, яркость и режим освещенности остаются такими же, как это описано в примере 1.

По достижении хлореллой плотности популяции (40-50) млн.кл./мл в каждом из параллельно работающих сосудов сливают вместе выращенные суспенэии из 6 таких сосудов в один более объемный и продолжают культивирование в том же режиме, Выход биомассы составляет 5,44 г/л при плотности популяции 212 млн.кл,/мл.

Пример 4. Приготовление фильтрата из жидких отходов, засев маточной культурой Chlorella Чо!9аг!з, а также температура, яркость и режим освещенности остаются такими же, как это описано в примере 1.

По достижении хлореллой плотности популяции (40 — 50) млн.кл,/мл в каждом из параллельно работающих сосудов сливаю1 вместе выращенные суспенэии из 7 таких сосудов в один более объемный и продолжают культивирование в том же режиме.

Выход биомассы составляет 5,02 г/л при плотности популяции 192 млн.кл./мл.

Пример 5, Приготовление фильтрата иэ жидких отходов, засев маточной культурой Chlorella Vulgaris, а также температура, яркость и режим освещенности остаются такие же, как это описано в примере 1, По достижении хлореллой плотности популяции (30 3) млн.кл,/мл в каждом иэ параллельно работающих сосудов сливают вместе выращенные суспензии из 5 таких сосудов в один более объемный и продолжают культивирование в том же режиме, Выход биомассы составляет 4,33 г/л при плотности популяции 176 млн.кл,/мл, Пример 6. Приготовление фильтрата из жидких отходов, засев маточной культурой СЫогеИа Vulgarls, а также температура, яркость и режим освещенности остаются такими же, как это описано в примере 1, По достижении хлореллой плотности популяции (30+3) млн.кл./мл в каждом иэ

1806185

Выход биомассы через двое суток, г/л

Число сливаемых сосудов

Плотность популяции в момент соединения, млн.кл,/мл

Плотность популяции через двое суток, млн. кл,/мл (KOHTPOflbHblA прототип)

5

7

6

217

4,52

40 — 50*)

40 — 50

40-50

40-50

30» 3

30+3

60+5

60+5

278

192

176

184

210

4,96

5,31

5.44

5,02

4,33

4,48

5,12

5,08

Числа в третьей графе таблицы указывают интервал, который перекрывает как разброс плотностей параллельных популяций к моменту слива, так и точность их определения.

Составитель А, Егоров

Техред M,Ìîðãåíòàë Корректор Н. Милюкова

Редактор

Заказ 965 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101 параллельно работающих сосудов сливают вместе выращенные суспенэии иэ 6 таких сосудов в один более объемный и продолжают культивирование в том же режиме, Выход биомассы составляет 4,48 г/л при 5 плотности популяции 184 млн,кл,/мл.

Пример 7. Приготовление фильтрата из жидких отходов, завес маточной культурой СЫогеИа Vvlgarls, a также температура, яркость и режим освещенности остаются 10 такими же, как это описано в примере 1.

При достижении хлореллой плотности популяции (60+5) млн,кл./мл в каждом из параллельно работающих сосудов сливают вместе выращенные суспензии из 5 таких 15 сосудов в один более объемный и продолжают культивирование в том же режиме, Выход биомассы составляет 5,12 г/л при плотности популяции 245 млн.кл,/мл.

Пример 8, Приготовление фильтрата 20 из жидких отходов, засев маточной культурой Chlorella Vulgaris, а также температура, яркость и режим освещенности остаются такими же, как это описано в примере 1, По достижении хлореллой плотности 25 популяции (60+5) млн,кл./мл в каждом из параллельно работающих сосудов сливают вместе выращенные суспензии иэ 6 таких сосудов в один более объемный и продолжают культивирование в том же режиме. 30

Выход биомассы составляет 5,08 г/л при плотности популяции 210 млн.кл,/мл.

Результаты эксперимента приведены в таблице.

Результаты опыта по выращиванию культуры Chlorells Vulgaris на субстрате. содержащем 0,3 г/л азотнокислого калия, 0,08 г/л однозамещенного фосфорно-кислого калия, 1,5 мас, сухих веществ, Из таблицы видно, что во втором и третьем опытах получены наибольшие выходы биомассы.

Таким образом, предлагаемый способ культивирования хлореллы позволяет повысить выход биомассы примерно на 15, Формула изобретения

Способ культивирования хлореллы, включающий выращивание ее на питательной среде при освещении в оптимальных условиях до максимального накопления биомассы, отл ича ю щи йс я тем, что, с целью повышения выхода биомассы хлореллы, выращивание проводят в 5 — 6 параллельно работающих сосудах до достижения концентрации 40 — 50 млн. кл./мл в каждом сосуде. затем полученные культуральные жидкости сливают в один более объемный сосуд и продолжают культивирование в тех же условиях до достижения концентрации

210 — 250 млн.кл./мл.