Способ получения авермектина в
Область использования: микробиологическая промышленность, производство антибиотиков. Сущность изобретения: авермектииы В получают при культивировании штамма Streptomyus avermltills АТСС № 53692 в питательной среде в присутствии кэрбоновой кислоты. Используемый штамм является двойным мутантом с отсутствием разветвленно-2-оксокислотнбдегидрогеназной и В-авермектин-0-метилтрансферазной активностей. Полученные авермектины В обладают противопаразитарной активностью широкого спектра действия , 1 з.п,ф-лы.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
ГОСУДАРСТВЕННОЕ flATEHTHOE
ВЕДОМСТВО СССР (ГОспАтент сссР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
R)
CH ок, (21) 4355079/13 (22) 22.01.88 (46) 30.03,93, Бюл, М 12 (31) 006512 (32) 23,01.87 (33) US (71) Пфайзер Инк (US) (72) Эдмунд Вилльям Хэфнер (US) Келвин
Скотт Холдом (GB) и Шин-Джен Эдвард Ли (US) (56) Патент США М 4310519, кл. А 61 К 31/71, 1982.
Патент Великобритании N 4429042, кл. А 61 К 31/71, 1983.
Патент СССР hh 1560059, кл. С 12 P 17/08, 1986, Изобретение относится к биотехнологии и касается производства антибиотика авермектина, обладающего противопаразитарной активностью.
Известны способы получения производных авермектина путем культивирования штаммов-и родуцентов Streptomyces
avermltills АТСС,М 31267 или 31271, или
31272 в жидкой питательной среде в присутствии карбоновых кислот в аэробных условиях. После культивирования продуцента производят выделение целевых продуктов.
Известные штаммы S,àvårmltllis АТСС
31267, АТСС 31271, АТСС 31272 продуцируют натуральные авермектины — соединения формулы (I), Ä.,ß2„„18Î6198 АЗ
y»s С 12 P 17/08//(С 12 Р 17/08. С 12
R 1:465) (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АВЕРМЕКТИНА В, (57) Область использования: микробиологическая промышленность, производство антибиотиков. Сущность изобретения: авермектины В получают при культивировании штамма Streptomyus avermltills
АТСС N 53692 в питательной среде в присутствии карбоновой кислоты. Используемый штамм является двойным мутантом с отсутствием разветвленно-2-оксокислотнодегидрогеназной и В-авермектин-О-метилтрансферазной активностей, Полученные авермектины В обладают противопаразитарной активностью широкого спектра действия, 1 з.п,ф-лы, где пунктирная линия представляет возможную двойную связь;
R< — гидрокси, присутствует только тогда, когда отсутствует двойная связь, R2 — 4-(альфа-L-олеандрозил)-альфа-)олеандрозилокси формулы (Il) 1806198
HÎ О
Вз — водород или метил, R — иэопропил или (S) — втор,бутил.
Продуцируемый класс веществ включает восемь различных, но блиэкородственных соединений, обозначенных как С-076
Ala,, Alb, А2А, А2Ь, BIA, Bib, В2а и В2Ь.
Серия "а" соединений относится к натуральным авермектинам, в которых 25 замещающая группа — (S) — втор,бутил, и серия "в"— к тем, в которых 25 замещающая группа— изопропил. Обозначения "а" и "в" относятся к авермектинам, в которых 5 — замещающая группа — метокси или гидрокси, соответственно.
В известных способах натуральные авермектины производятся в виде сложной смеси из восьми разных, но родственных соединений формулы (I), где R — изопропил и (S) — втор.бутил, поэтому выделение этих соединений в чистой форме — процесс трудоемкий.
Наиболее близким техническим решением к заявляемому является способ получения ненатуральных авермектинов, имеющих эамещающую группу в положении
25, отличную от изопропила или втор,бутила, предусматривающий культивирование штамма Str .avermltllls NCi8 12121 в питательной среде в присутствии карбоновой кислоты или ее натриевой соли. Штамм получен на основе культуры 51г. ачегmltllls
ATCC ¹ 31271. Он обеспечивает выход новых С-25-эамещенных авермектинов, при его культивировании в полуопределенной среде.
Однако из-за присутствия разветвленно2-оксо-кислотной дегидрагеназы и аминокислот 1-валина и I-изолейцина в культуре
Str.avermltllis NC l B 12121, одновременно с ненатуральными авермектинами, в разных количествах продуцируются натуральные авермектины, что затрудняет выделение авермектинов В, проявляющих наибольшую противогельмитную активность, Целью изобретения является повышение выхода авермектина В.
Для осуществления способа используют штамм Str.avermitilis 7881, депонированный по условиям Будапештского договора в
American Type Culture Collection, Роквилл, Мэриленд, и имеющий регистрационный номер АТСС № 53692, Морфологические и культуральные характеристики штамма ATCC № 53692 совпадают с характеристиками родительского штамма ATCC ¹ 31272 и штамма АТСС
¹ 53567, Отличительной характеристикой штамма согласно изобретению является наличие мутации в 2х генах, что приводит к отсутствию раэветвленно-2-оксокислотнодегидрогенаэиой активности и В-авермектин-О-метилтрансфераэной активности, Отсутствие раэветвленно-2-оксокислото-дегидрогеназной активности в штамме
АТСС ¹ 53692 приводит к предотвращению синтеза раэветвленно-жирноацильного СоА в результате разложения 1 -изолейцина. L15 лейцина и -валина и тем самым синтеза натуральных авермектииов, за исключением того случая, когда к ферментациоиной среде добавляют кислоту R-COQH (в которой R-(8)-втор. бутил или иэопропил), или ее предшественник.
Отсутствие раэветвленно-2-оксокислото-дегидрогеназной активности приводит к тому, что мутанты не могут метиллировать
С-5-кислород агликонового фрагмента авермектиное и производит только авермектины В.
Мутанты являются высокоценными для получения ненатуральных авермектинов, в особенности для получения авермектинов, в которых С-25-заместителем является С4-Свциклоалкил или циклоалкенил, не обязательно замещенный Cl-C4-алкияьной группой; 1-метилтиозтил или 5-или 6-.членная гетероциклическая группа с атомами кислорода или серы, в особенности 3-теонил или З-фурил.
Получение двойных мутантов проводится в соответствии с известными методиками с использованием ряда мутагенных агентов, 40 включая ультрафиолетовое облучение. рентгеновское. облучение, М-метил-N-нитро-Nнитрозогуанидин, этилетансульфонат, азотистую кислоту и азотные горчицы, например, N-метилбис (2-хлорэтил)амин, или подобные обработки. Мутагенеэ можно проводить на спорах или на растительной культуре Str,avermitllls, способного продуцировать натуральные авермектины, например, Str.avermltilis АТСС 31272, Способ согласно изобретению проводят путем аэробного культивирования штамма Str. avermltilis ATCC ¹ 53692 в водной питательной среде, включающей ассимилируемый источник азота, углерода. неорганических солей и соединение формулы RCOOH. или соединение превращающееся в упомянутое соединение (предшественник) в процессе ферментации.
Кислоту или соединение, превращающееся в нее, добавляют в ферментационную среду
1806198 либо во время инокуляции, либо через некоторые промежутки времени во время ферментации. Продуцирование авермектиновых продуктов можно контролировать путем отбора проб из ферментационной среды, проводя экстрагирование органическим растворителем с последующим определением продукта методом хроматографии, например, используя жидкостную хроматографию высокого давления, Инкубацию проводятдо тех пор, пока выход продукта не будет максимальным, в общем в течение 4-15 дней.
Предпочтительное количество затравочных соединений в каждом случае добавления (карбоновая кислота или соединение, превращающееся в нее) составляет 0,053,0 r на 1 л, Затравочное соединение можно добавлять в ферментационную среду непрерывно, через некоторые промежутки времени или однократно, Кислоту (RCOOH) добавляют как таковую или в виде соли кислоты, такой как соль натриевая, литиевая или аммониевая, или как соединение, превращающееся в кислоту. Кислоту, если она существует в виде твердых частиц, по предпочтительному варианту растворяют в подходящем растворителе, таком как вода или (С1-C4) спирты.
Среды, которые используют для ферментации, могут представлять собой, в особенности когда С-25 заместителем является изопропил или (S)-втор,бутил, общепринятые среды, содержащие усваиваемые источники углерода, азота и следы элементов.
Когда С-25-заместитель-ненатуральная группа, т.е. она не является изопропилом или ($)-втор, бутилом, то ферментационная среда является такой, в которой выбранные ингредиенты не содержат или содержат только минимальные количества затравочных соединений, в которых R-изопропил или (S)-втор. бутил.
После ферментации в течение нескольких дней при температуре предпочтительно в интервале 24-33 С ферментационный бульон центрифугируют или фильтруют, и мицелиевый осадок экстрагируют, предпочтительно ацетоном или метанолом. Экстракт в растворитель концентрируют, в целевой продукт затем экстрагируют в не смешивающийся с водой органический растворитель, такой как хлористый метилен, этилацетат, хлороформ, бутенол или метилизобулкетон. Экстракт в растворителе концентрируют, и сырой продукт далее очищают до необходимой степени хроматографией, например, используя препаративную хроматографию. с обращенной фазой, жидкостную хроматографию высокого давления.
Продукт обычно получают в виде смеси соединений формулы (!), где В2-4-(альфа-1олеандрозил)-альфа-L-олеандрозилокси, RtOH, и двойная связь отсутствует, или
5 отсутствует В1, а двойная связь присутствует, и где Вз-Н. Соединения, в которых Вэ-СНз, по-существу, отсутствуют. Однако пропорции каждого соединения могут соединяться в зависимости от использованного конкрет10 ного мутанта и затравочного соединения, а также условий проведения.
Источники группы R, т.е, то, происходит ли она непосредственно от R-OOH, или ее получают из одного из упомянутых пред15 шественников, или из любого предшественника, не является существенным для получения авермектинов, Существенным требованием для процесса согласно изобретению для их получения является то, что20 бы нужная группа R была доступна штаммам Str.avermitllis согласно изобретению в процессе ферментации.
Подходящими являются следующие соединения .
25 2,3 — диметилмасляная кислота;
2 — метилгексановая кислота;
2 — метилпент-4-еноевая кислота;
2 — циклопропилпропионовая кислота; литиевая соль 4,4-дифторциклогексан30 карбоновой кислоты;
4 — метиленциклогексанкарбоновая кислота;
3 — метилциклогексанкарбоновая кислота (цис/транс);
35 1 — циклопентенкарбоновая кислота;
1 — циклогексенкарбоновая кислота; тетрагидропиран — 4-карбоновая кислота; тиофен — 2-карбоновая кислота;
40 3 — фурокислота;
2 — хлортиофен-4-карбоновая кислота; циклобутанкарбоновая кислота; циклопентанкарбоновая кислота; .циклогексанкарбоновая кислота;
45 циклогептанкарбоновая кислота;
2 — метилциклопропанкарбоновая кис. лота;
3 — циклогексен-1-карбоновая кислота;
2 — метилтиопропионовая кислота;
2 — метил-4-метоксимасляная кислота; тиофен — 3- карбоновая кислота; гидроксиметилциклопентан;
3-тиофенкарбоксальдегид;
3-циклогексилпропионовая кислота;
55 3-циклопентилпропионовая кислота; гидроксиметилциклобутан; тетрагидротиофен-3-карбонавая кислота;
3-циклопентил-1-пропанол; литиевая соль 3-метилциклобутанкарбоновой кислоты;
1806198
40
55
3-фторциклобутанкарбоновая кислота; литиевая соль 3-метилленциклобутанкарбоновой кислоты;
2-метил-4-метилтиомасляная кислота; тетрагидротиопиран-4-карбоновая кислота; циклобутилметиламин; этилциклобутанкарбоксилат;
4-гидроксиметилциклопентен; этиловый эфир 2-(3-тиофенкарбонил) пропиойовой кислоты;
S-2-; В- метилпентановая кислота, Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Получениедвойного мутанта
St.avermltIIls 7881 (АТСС 53692) с недостающими разветвленно-2-оксокислотодегидрогеназой и В-авермектин-0-метилтрансферазой.
Стадия 1. Исходный штамм Str.
avermitIlIs АТСС 53567 выращивают в виде сливного слоя на агаре "New Patch. Agar" в течение 12 дней при 30 С;
Споры собирают с трех таких чашек и суспендируют в 20 мл 0,05М трис-малеинокислотном буфере, рН 9.
Среда "New Patch. Agar" имеет следующий состав„
V — сок")
200 мл
СаСОз Зг
Агар 15 г
НгО, до 1000 мл
Питательный бульон 1,0 г/л
Ацетат натрия ЗН20 1,4 г/Л
Изовалериа новая кислота 50 мгlл
Изомасляная кислота 50 мг/л
Метилмасляная кислота 56 мг/л
Изолейцин 250 мг/л
Лейцин 250 мг/л
Валин 250 мг/л
Раствор микроэлементов 1 мл/л
*) Смесь.из 8 растительных соков (помидоры, морковь, сельдерей, свекла, петрушка, латук, горчица и шпинат) плюс соль, аскорбиновая и лимонная кислота и натуральные вкусовые добавки.
* Состав раствора микроэлементов:
FeCb 6НгО 2,7г
MnS04 Н20 4,2
CuS04 5Н20 0 5
СаО 11,0
Н2РОз 0,62
CaClz 6НгО . 0,24
ZnCI2 0,62
NazMo04 . 0,24
Вышеупомянутое растворяют в 1 л
0,1 HCI.
Стадия 2. 10 мл споровой суспензии добавляют в ампулу, содержащую 10 мг N-метил-N -нитро-N- нитрозогуанидина (НТГ).
Ампулу инкубируют на шейкере при 28 С
60 мин, затем тщательно промывают раствором 1% NaCI;
Стадия 3. Промытые споры суспендируют в 1% растворе NaCI и смешивают с равным обьемом 80 этиленгликоля..
Суспензию хранят при -20 С и используют в качестве источника клеток для скрининга мутантов.
Эту споровую концентрированную массу распределяют по чашке УРД (дрожжевой пептидно-декстрозный агар) для получения около 100 колоний на чашку. Колонии
20 мутагенизированой популяции (обработанной нитрозогуанидином) исходного Str.
avermltllls АТСС 535567 собирают и наносят в виде мазков на агаровую среду, полученную следующим образом (граммы на литр):
25 разбавленный крахмал 80,I9HP04 1, MgS04 7НзО 1, ардамин рН 5, СаСОз 5, P2000 1 мл, FeS04 7Н О 0,01; MnCb 4Н20 .
0,001, ZnS04.7Í Î 0,001; бактоагар 17, дистиллированная вода до 980 мл, рН среды
30 добавляют до 7, добавляя NaOH перед автоклавированием при 121 С в течение 20 мин.
После автоклавирования добавляют 20 мл
5 концентрированного раствора(-)-2-метилмасляной кислоты, pk 7.
35 Агаровые культуры инкубируют в течеwe 8-12 дней при 28 С. Клетки (мицелий) удаляют с поверхности агара, помещают в
250 млк ацетона. 25 мкл ацетоновых экстрактов затем наносят точками на хроматографические пластины "Analtech $1Иса Gel
GF"
Храмотограмму снимают в течение 3040 мин этилацетатом в качестве растворителя, затем сушат, затем обрабатывают 5% аанилином в этаноле. Пластины помещают в печь при 100 С на 1-3 мин, затем обрабатывают З серной кислотой в этаноле и вновь помещают в печь при 100 С на 10-15 мин. Мутанты, лишенные В-авермектин-Ометилтрансферазы, идентифицируют no . изменению на хроматограмме: по присутствию пятна, соответствующего В-авермектиновым компонентам (Rf 0,54; 0,42 для
Â1 и В2 соответственно) и отсутствию пятна, соответствующего А-авермектиновым компонентам (Rf — 0,69; 0,58 для А1 и А2 соответственно), Общие методики высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).
1806198
Натуральный авермектин
Время удерживания/ Время удерживания (олигомицин А) В2в
В2а
А2в
А2А
В1в
В1А
А1в
А1а
0,84
0,90
1,09
1,40
1,83
1,83
2,42
Ненатуральные авермектины
Время удерживания/ Время удерживания (олигомицин А) Подвижная фаза: 150 мл воды, 70 мл ацетонитрила, добавляли метанол до получения объема 1 л.
Колонка; типа "Ultra Sphere" ОД$25 см (Beckman Instrum. Фуллертон, СА 92634- 5
3100).
Поток: 0,75 мл/мин.
Детектирование: УФ на 24, нм.
Ослабление: около 6.
Разбавитель образца (О): 35 мл ацето- 10 нитрила плюс 390 мл метанола.
Стандарты 0,5 мг авермектина А2А в колбу емкостью 10 мл и довести метанолом до нужного объема, навесить 0,5 мг испыту- 15 емого продукта в колбу емкостью 10 мл и довести до полного объема метанол.
Они представляют собой стандартные концентрированные растворы: для стандар- 20 тного раствора: взять l00 мкл и l00 мкл в ампулу и добавить 800 мкл подвижной фазы.
Пробы: отобрать 1 мл хорошо перемешанного бульона: удалить возможно боль- 25 ше надосадочной жидкости, не затративая осадок; добавить 100 мкл воды после высокоэффективной хроматографии к осажденному слою и провести вихревое смешивание для диспергирования; добавить 2 мл разбави- 30 теля и тщательно перемешать; профильтровать и подвергнуть высокоэффективной жидкостной хроматографии, Натуральные и ненатуральные авермектины по изобретению подвергают высоко- 35 эффективной жидкостной хроматографии и время удерживания для пиков отдельных авермектинов делят на время удерживания для наблюдаемого присутствующего олигомицина-А, служащего в качестве внутренне- 40, ro стандарта для данного определения методом БЗЖХ. Олигомицин-А почти всегда наблюдают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии в виде побочного продукта ферментации Str.avermltilis и 45 он является единственным продуктом, наблюдаемым с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, который продуцируется описываемыми мутантами, когда их культивируют в среде, свободной 50 от кислот RCOOH, где R имеет определенное значение. Обычно олигомицин-А имеет время удерживания 12,5-14 мин. Отношение удерживания (НУ) является более значимой основой длл идентификационного 55 сопоставления и сравнения выходов авермектиновых продуктов, Общий порядок появления авермектиновых продуктов при высокоэффективной тонкослойной хроматографии — В2, А2, В1 и А1, циклопентил В2 0,94 циклопентил А2 1,23 циклопентил B1 . 1,99 циклопентил А1 2,62
Время удерживания колеблется в пределах 1-2 мин в разные дни, причем время удерживания олигомицина А, по-видимому, составляет 12,5-15 мин, В следующих примерах авермектины определяют с помощью описанной процедуры высокоэффективной жидкостной хроматографии, за исключением случаев, которые оговорены особо.
Составы использованных сред в следующих примерах представлены ниже, Среда А 7 гlл
Разбавленный крахмал 20
"Ардамин рН" в 05
"Фармамедиа" с 15
СаСОз 2, а приготовленный гидролизом крахмала альфаамилазной из Bacillus lldenlformis (продукт фирмы) "Novo Enrym", Уилтон, КТ, поставляется под товарным знаком "Тегп аауГ до декстрозного эквивалента 40% и 5%, аот Yeas + Products, Jnc., Клифтон, Н,Дж
07012 сот Traders Protein, Мемфис, Теннеси 38108
Добавляли NaOH, рН доводили до 7,2
Среда AP — 5 г/л разбавленный крахмал 80
"Ардамин рН" 5
К НРОд 1
М9$04 7Н20 1
NaCi 1
СаСОз 7
FeSO4 7Н20 0,01
MnCI4 7Hg0 0,001
1806198
5
12,9 27,9
14,85 32,26
12,43 26,23 вой кислоты, через 312 ч отбирают пробы 25
50 ния авермектина мин
В2 . В1.
3-Тиеновая кислота
3-Фуранкарбоновая кислота
2-Тиеновая кислота
2-Метилпент-4-еновая кислота
55 где прерывистая линия в положении 22-23
13,79
6,95
11,0
7,81 14,13
7,32 14,7 фа-1:олеандрозил)-альфа-1=олеандрозилок—
22,2 си формулы
ZnSO4 7Н20 0,001
Р-2000 (противовспениватель) 1 мл/л производство "The Dow Chemical Со", Мидланд, Мичиган 48640 добавляли 257ь
Na0H, доводили рН до 6,9.
Пример 2. Получение циклогексилавермектинов.
Замороженную ампулу с культурой Str.
avermltills АТСС 53692 инокулируют в
100 мл среды AS-7 в колбе на 500 мл с тремя перегородками. Колбу инкубируют на вращающемся вибраторе со скоростью вращения 200 об/мин при 2830ОС. Через 28 ч инкубации 5 мл цельного бульона инокулируют в 100 мл среды AS-7 или колбу с тремя перегородками емкостью 500 мл. Колбу снова инкубируют на вращающемся вибраторе со скоростью вращения 200 об/мин при 2830 С. Через 24 ч инкубации 21 мл бульона инокулируют в колбу емкостью 300 мл, со» держащую 40 мл среды AP-5, Колбы инкубируют при 28-30 С и 200 аб/мин. Через 24 ч добавляют 400 ррм циклогексанкарбонопо 2 мл и подвергают их высокоэффективной жидкостной хроматографии, как описано в примере 1. В этих условиях единственными авермектиновыми компонентами, обнаруженными в ферментационной среде, были элюированные при 14,84 (54,9 мг/л) и
31,46 (32,1 мг/л) мин, что соответствует циклогексилу В2 и В1 соответственно.
Пример 3. Получение втор.бутилвермектинов, Воспроизводят усилия примера 2, но используют 400 ррмlй2 метилмасляной кислоты вместо циклогексанкарбоновой кислоты, все остальные условия были такими же как и те, которые описаны в примере
2. Только втор. бутилавермектин В2 (11, 60, 12, 40 мин, 63,5 и 42,4 мгlл), и втор. бутилавермектин В1 (23,1 мин, 105,5 мгlл) были обнаружены в ферментационной среде.
Пример 4. Воспроизводят условия примера 2, но с использованием 400 ррм каждого из указанных соединений. Время удерживания полученных авермектинов указано ниже.
Соединение Время удержива
Метилтиомолочна я кислота 7,9 13,53
4-Тетрагидропиранкарбоновая кислота 7,45 14,72
4-Метокси-2-метил масляная кислота 8,72 17.,39
3-Циклогексенкарбоновая кислота
4-Тетрагидротиопиранкарбоновая кис- . лота 11,0 22,76
3-Тетрагидротиофенкарбоновая кислота 8,97 17,96
4.4-дифторциклогексанкарбоновая кислота
2-Циклопентенкарбоновая кислота 12,43 26,23
1-Циклопентенкарбоновая кислота
1-Циклогексенкарбоновая кислота 15,24 33,23
4-Экзометиленциклогексанкарбоновая кислота 15,3 34,1
2-Фуранкарбоновая кислота 7,82 15,31
2-Тетрагидрофуранкарбоновая кислота 6,16 11,62
Соединения согласно изобретению являются высокоэффективными противопаразитными агентами, которые используют как противоглистные средства, зктопаразитициды, инсектициды и акарициды, Формула изобретения
1, Способ получения авермектина В формулы представляет возможную двойную связь, R>-гидрокси и присутствует только тогда, когда отсутствует двойная связь, В -4-(аль1806198
СН О CH g
Составитель В. Романова
Техред М.Моргентал Корректор Л. Филь
Редактор 3. Ходакова
Заказ 966 Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 где R-альфа-разветвленный Сз-Св-алкил, алкенил, алкинил, алкоксиалкил или алкилтиоалкильная группа, в которой алкильная группа представляет собой альфа-разветв-. ленную Сэ-Св-алкильную группу, Сз-Са-циклоалкильную или Cs-Св-циклоалкетильную группу, любая из которых может быть необязательно замещена метиленовой одной или более С1-С4-алкильными группами или атомами галогена путем культивирования в азробных условиях продуцента вида
Streptomyces avermitills в водной среде, содержащей усваиваемый источник азота, углерода и неорганических солей в присут5 ствии карбоновой кислоты RCOOH. где R имеет указанные значения, и выделения целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, в качестве продуцента использу10 ют штамм Str.avermitllls АТСС 53692. а культивирование проводят при 28-30 С.
2, Способ поп,1, отл ича ю щи йс я тем, что R 3-6-членное кислород- или серусодержащее гетероциклическое кольцо, 15 которое может быть насыщенным или полностью или частично ненасыщенным.
