Способ дифференциальной диагностики ревматоидного артрита и системной красной волчанки

 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и ревматологии. Цель - повышение специфичности и чувствительности дифференциальной диагностики ревматоидного артрита w системной красной волчанки. Сущность - определяет уровень иммуноглобулинов, связанных с лимфой дными клетками, путем обработки клеток антисывороткой к иммуноглобулинам человека, меченой флюоресцеинизотиоцианатом, далее регистрируют уровень флюоресценции и рассчитывают коэффициент по формуле: / 1 Хю0усл.ед, I контроль/ где к - коэффициент антиген (румалон) зависимого синтеза иммуноглобулинов, Гопыт показатель уровня иммуноглобулинов в присутствии румалона, Гконтроль - показатель исходного уровня иммуноглобулинов без румалона, и при положительном значении коэффициента (4 усл.ед. и более) диагностируют ревматоидный артрит, а при отрицательном значении коэффициента (менее 4 усл. ед.) диагностируют системную, красную волчанку. 3 табл. ел

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 6 01 Й 33/533

ГОСУДАРСТВЕН4ОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4905352/14 (22) 24.01.91 (46) 30.04.93. Бюл. hh 16 (71) Филиал Пермского государственного медицинского института в r. Кирове (72) Е.В.Бененсон, А.Т.Мамасаидов и

Е.Г.Цай (56) Т.Пяй Л. Основы клинической ревматологии; 1987, 54, 164, 222-223. (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ РЕВМАТОИДНОГО АРТРИТА

M CMCTEMHOA KPACH0A BOJl fAHKN (57) Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и ревматологии.

Цель — повышение специфичности и чувствительности дифференциальной диагностики ревматоидного артрита и системной красной волчвйки, Сущность — определяет уровень иммуноглобулинов, связанных с лим Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и ревматологии.

Известны способы дифференциальной диагностики ревматоидного артрита (PA) и системной красной волчанки (СКВ), заключающиеся в обнаружении в сыворотке крови ревматоидного фактора(РФ) и антинуклеарных факторов (АНФ).

Целью предлагаемого способа является повышение специфичности и чувствительности дифференциальной диагностики PA и CKB. Для осуществления цели проводят определение реакции периферической крови к антигену хряща — лекарственному препарату румвлон, представляющему собой хорошо стандартизированную смесь протеогликанов хряща, для чего производят

„„5LJ„„1812500 А1 фоидными клетками, путем обработки клеток антисывороткой к иммуноглобулинам человека, меченой флюоресцеинизотиоцианатом, далее регистрируют уровень флюоресценции и рассчитывают коэффициент по форыулв:у,- ("" 1) х100усл.вд, у опыт

Гконтроль где К вЂ” коэффициент антиген (румалон) зависимого синтеза иммуноглобулинов, Гопыт— показатель уровня иммуноглобулинов в присутствии румалона, Г онуроль — показатель исходного уровня иммуноглобулинов без румалона, и при положительном значении коэффициента (4 усл.ед. и более) диагностируют ревматоидный артрит, а при отрицательном значении коэффициента (менее 4 усл. ед.) диагностируют системную красную волчанку. 3 табл. выделение лимфоцитов периферической крови, их инкубацию с румалоном (опыт) и

-без него (контроль), фиксацию клеток на предметном стекле и последующее определение уровня глобулинов (Г) в монослое, сравнение уровня глобулинов в пробах с выведением коэффициента по формуле: лх (1 ) х 100 условных вдиГопыт

Гконтроль ниц (усл.ед.), где à — показатель уровня глобулинов, à Kr— коэффициент (показатель) антиген (руМалон) зависимого синтеза глобулинов, и при коэффициенте больше 4 условных единиц реакцию считают положительной, а при ко1812500 эффициенте меньше 4 — реакцию считают отрицательной.

Способ осуществляется следующим образом. Лимфоциты выделяют из крови центрифугированием над смесью фиколгипак

1,078 г/см, однократно отмывают, ресусз пендируют в 0,5 мл физиологического раствора (физ. р-ра), По 0,1 мл суспензии вносят в две центрифужные пробирки, в одну добавляют 0,02 мл разведенного в 20 раз румалона, в другую — 0,02 мл физ. р-ра. Пробы инкубируют 18 часов при 37 С во влажной камере, после инкубации во все пробы вносят 0,02 мл, люминесцентной сыворотки против глобулинов человека (ФИТЦ вЂ” производства ИИИЭМ им. Гамалея) в удвоенном рабочем титре, пробы встряхивают, инкубируют f ч при комнатной температуре, затем центрифугируют 5 минут при 2000 об. (мин, надосадочную жидкость отбрасывают и осадок ресуспендируют в 1 капле фиэ. р"ра, каплю суспензии из опыта и контроля переносят на предметное стекло, подсушивают и определяют показатели специфической флюоресценции лимфоидных клеток путем количественной цитофлюориметрии (КЦФ). КЦФ проводили оригинальным методом на базе микроскопа

ЛЮМАМ-ИЗ, используя фотометрическую приставку ФМЭЛ-1А, Цитофлюориметрию лимфоидных клеток осуществляли следующим образом: на произвольный участок препарата при невозбуждающем освещении фокусировали обьектив фотометра, в котором был предварительно убран один из микрозондов с целью обеспечить измерения со всей площадки объектива. Измерения проводили в области 530 нм., выделяя ее соответствующим интерференционным фильтром. После фокусирования невозбуждающее освещение заменяли на возбуждающее и производили измерения суммарной флюоресценции (Ф). Затем сразу в том же участке препарата измеряли интенсивность . светорассеивания клеток (С), используя для этого комбинацию невозбуждающих светофильтров МС-1.и HC-10. Суммарное светорассеивание (С) зависит от клеточной плотности на площади препарата и отражает количество анализируемых клеток. Таким образом, зная суммарную флюоресценцию клеток и их число, можно получить среднюю величину флюоресценции на одну клетку в виде отношения: Ф/С х Т., где Ф вЂ” суммарная флюоресценция, С вЂ” суммарное светорассеивание, Т вЂ” флюоресценция эталона (урановое стекло 2. 3 мм). Данное соотношение отражает среднее количество глобулинов, связанных с лимфоидными клетками, т.е. это есть показатель уровня глобулинов (Г), синтезированных лимфоцитами периферической крови, т.к. лифоидные клетки крови обладают способностью синтезировать иммуноглобулииы. Сравнивая уровни глобулинов в опыте и контроле, рассчитываем коэффициент антиген (румалон) специфически зависимого синтеза глобулинов (Kr) по формуле:

Кг= „ "" 1 х 100усл.ед.

Гконтроль

Для доказательства специфичности определения глобулинов ставили модельные

15 опыты, в которых к одинаковым пробам лимфоцитов добавляли возрастающие количества аутологической сыворотки.

Результаты представлены на чертеже, где показан график зависимости показателя

20 специфической флюоресценции (ПСФ) от концентрации сывороточных глобулинов (Гл). На графике видно, что при возрастании концентрации сывороточных глобулинов до

25 / (т.е, до разведения 1:4) возрастает и

25 показатель специфической флюоресценции (ПСФ), в то же время при дальнейшем возрастании концентрации сывороточных гло-. булинов.ПСФ прогрессивно падает, что и должно иметь место при переходе реакции

30. антиген-антитело в зону избытка антигена.

Таким образом, ПСФ отражает уровень глобулинов в суспензии лимфоцитов, и может быть использован для количественных исследований.

Основные сравнительные исследования проводили в группах больных достоверным РА(24 человека) и достоверным СКВ (1 6 человек). Дифференциально-диагностическую специфичность и чувствительность

40 способов при РА и СКВ определяли по наличию РФ в сыворотке крови методом латекстеста (ЛТ), по наличию АНФ в сыворотке крови методом иммунофлюоресценции на криостатных срезах печени крыс(ИФМ) и по

45 значению Кг в реакции глобулинпродукции лимфоцитов (РГПЛ). Результаты представлены в табл. 1, Как видно иэ табл. 1, группа больных PA достоверно отличается от группы больных

50 CKB по всем изучаемым показателям, Однако, если для PA(ЛТ вЂ” способ) и АНФ (ИФМспособ) эти различия в группах больных PA и CKB носили однонаправленный характер (для РФ существенное повышение, для

55 ИФМ вЂ” существенное понижение), то в этих группах больных средние значения показателя глобулинпродукции лимфоцитов в присутствии антигена хряща имели разную направленность: у игольных PA — в сторону

1812500 повышения от 0 (+ 24,7 усл.ед,), а у больных

СК — в сторону снижения от 0 (— 12,9 усл.ед.).

Из данных табл. 2 следует, что чувствительность (точность) диагностики ЛТ-способа составляет для РА 57,5 (62,5 -5 ) и для СК — 7,5 . Отсюда, при РА и СКВ дифференциально-диагностическая чувствительность (точность) ЛТ=способа составляет 507. соответственно ИФМ-способа—

62,5 и РГПЛ-способа — 81,5 . Значит, максимальная дифференциально-диагностическая чувствительность (точность) обнаруживается РГПЛ-способом и составляет

81,5 случаев, что на 19 превышает

ИФМ-способом и на 31,5 — ЛТ-способом.

Также иэ данных табл, 2 видно, что наибольшей специфичностью обладает РГПЛспособ, т.к. обнаруживается у 87,5 больных РА, в то время как ЛТ-способ—

62,57 больных РА, и ИФМ-способ — 75 больных CKB. т,е. при проведении дифференциального диагноза между PA и СКВ дифференциально-диагностическая специфичность РГПЛ-способа выше на 12,5

ИФМ способа и на 25 ЛТ-способа.

Как видно из табл. 3, придифференциальном диагнозе между CKB u PA с висцеритами, максимальная дифференциально-диагностическая чувствительность обнаруживается

РГПЛ-способом и составляет 94, что на

637; превышает ИФМ-способом и на 28,5%

ЛТ-способом. Также из данных таблицы 3 следует, что диагностическая специфичность РГПЛ-способа составляет 100, что выше на 25 ИФМ-способа и на 22 ЛТспособа.

П р им е р 1. Больная к 26 г поступила в клинику для уточнения диагноза. Жаловалась на боли в суставах, припухлость лучезапястных, правого голеностопного, левого локтевого суставов и проксимального межфалангового сустава Ш палЬца правой кисти, утреннюю скованность в течение 30-40 минут, лихорадку до 37-37,50С, эритему в области локтевых суставов, выпадение волос; похудение, Больна в течение 6 месяцев.

В анализах крови: анемия, увеличение СОЭ.

На основании клинико-лабораторных данных проводился дифференциальный диаг- 5 ноз между СКВ и PA. Рентгенограмма суставов . остеопороз, сужение суставной щели. РФ (ЛТ-способ) — отрицательный.

АНФ (ИФМ-способ) — отрицательный. К (РГПЛ-способ) положительный +19 усл.ед. 5

Наличие отрицательных значений РФ и

АНФ в сыворотке крови не позволяет отличить PA от СКВ, т.е. эти показатели в данном случае не имеют дифференциально-диагностического значения, а наличие положительного значения Кг позволило выставить диагноз: Реаматоидный артрит I-II стадия, Пст.акт. При дальнейшем наблюдении, через 8 месяцев у больной

5 выявлены стойкие симметрические экссудатив но-и ролифе рати вн ые изменения в проксимальных межфалангоаых, пястнофалангоаых, лучезапястных и голеностопных суставах, ревматоидные узелки в

10 области локтевых суставов, амиотрофия межкостных мышц на тыле костей со стороны внутренних органов без патологии, в анализе крови — РФ положительный в разведении 1:320, рентгенологически — эрозии

15 хряща, что клинически лабораторно и рентгенологически подтверждает диагноз ревматоидного артрита, Пример 2. Больная M 21 года находилась в стационаре с жалобами на боли и

20 припухлость в голеностопном, правом лучеэапястном, пястно-фаланговых и проксимальных межфаланговых суставах, лихорадку до 37,5 С вЂ” 38,6 С в течение 4 месяцев, боли в области сердца, эритема25 тозные высыпания на передней поверхно- сти шеи. Больна а течение 5 месяцев. В анализах крови:анемия,лейкопения, увеличение С03, Рентгенологически:остеопороз, сужение суставной щели. Учитывая клиниче30 ские, лабораторные и рентгенологические данные, проводили дифференциальный диагноз между РА и СКВ. РФ (ЛТ-способ)— отрицательный, АНФ (ИФМ=способ) — отрицательный, Кг (РГПЛ-способ) — отрицатель35 ный (22 усл.ед.). Как видно, значения в данном случае РФ и АНФ не имеют дифференциально-диагностического значения, а отрицательное значение коэффициента позволило выставить диагноз: СКВ, подострое

40 течение, с поражением суставов, кожи, сердца. Через 2 недели припухлость суставов исчезла. В дальнейшем, через 6 месяцев при повторном поступлении у больной М, выявлена эритема в области лица по типу

45 "бабочки", алопеция, потеря в весе до 8 кг. эа 3 месяца, боди в суставах без выявлений дефигурации и деформации, одышка при ходьбе, в анализах крови - АНФ положительный в разведении 1;128, волчаночные

0 клетки, в анализах мочи- протеинурия до 1,0 г в сутки, на ЭКà — диффузные изменения в миокарде левого желудочка, что клинически и лабораторно подтверждает диагноз системной красной волчанки.

5 Окончательный диагноз: СКВ, подострое течение,!И ст. активности, с поражением кожи, сердца, почек, суставов, с общеатрофическими изменениями.

Пример 3, Больная Ж, 36 лет находилась в клинике с жалобами на боли и при1812500 пухлость в лучезапястных, пястно-фаланговых и проксимальных межфаланговых суставах, утреннюю скованность в течение 1 ч, лихорадку до 38 С, боли в области сердца, одышку при ходьбе, похудание на 5 кг в течение 2 месяцев, эритематозные высыпания нэ теле. Из анамнеза болеет в течение 9, месяцев. В анализах крови: анемия, резкое увеличение СОЭ. В анализах мочи: протеинурия до 1,0 r в сутки. Рентгенологически: остеопороз, сужение суставной щели.

Проводили дифференциальный диагноз между СКВ и PA с висцеритами. РФ (ЛТспособ) — положительный 1:160 АНФ (ИФМ-способ) — положительный 1:32. Kr (РГПЛ-способ) — положительный+48 усл.ед.

В данном случае положительные значения

РФ и АНФ у одного и того же больного не позволяют провести дифференциацию между СКВ и РА с висцеритами, а наличие положительного значения коэффициента Kr позволило выставить диагноз РА с висцеритами, что в дальнейшем подтвердилось клинически, лабораторно и рентгенологически обнаружением у больной Ж. при повторном поступлении в клинику через 5 месяцев: клийически — полиартрита мелких суставов, локтевых, голеностопных и коленйых суставов, симметричного характера, деформацией проксимальных суставов, "ульнарной девиацией", атрофией межкостных мышц на тыле кистей; лабораторно: РФ

+ 1:640, АНФ 1:32; рентгенологически: множественных эрозий хряща, подвывихов пястно-фаланговых суставов.

Таким образом, предлагаемый способ отличается от аналога (ЛТ-способа) тем, что: а} Дифференциальная диагностика между PA и СКВ основывается на определении уровня гиперактивэции В-иммунного ответа по отношению к антигену хряща" (румалону), а не по уровню антител к гаммаглобулину. Поскольку использование в качестве атигена румалона органоспецифического стимула, который по логике формирования иммунного ответа при РА, имея отношение к спецйфической сущности ревматоидного артрита - эрозивному артриту, характеризует специфичность В-иммунного ответа именно при РА, а аггрегированный гамма-глобулин (реакция на него определяется в аналоге) — глобулин, представленный при любом иммунологическом процессе, включая пересадку органов, то отсюда становится ясно, что предложенный метод является более специфичным при РА, следовательно повышается дифференциально-диагностическая специфичность при дифференциации PA и СКВ. б) Гиперактивация В-иммунного ответа определяется на клеточном уровне, а не на гуморальном уровне целого организма, что повышает

5 чувствительность дифференциального диагноза между болезнями. в) Дифференциально-диагностическая специфичность выше на 25, a чувствительность выше на

31,57. Предложенный способ отличается

10 от прототипа (ИФМ-способа} тем, что: а)

Дифференциальный диагноз проводится путем определения уровня румалон-зависимого синтеза глобулинов В-лимфоцитами, что характеризует специфичность

15 гиперактивации В-иммунного ответа при

РА, а не по уровню сывороточных антител к компонентам ядер клеток (реакция на которых определяется в прототипе}, которые обнаруживаются при других (кроме

20 СКВ и PA) заболеваниях с аутоиммунным патогенезом (системная склеродермия, люпоидный гепатит и др). Отсюда, при применении предложенного способа повышается специфичность дифференциального диаг25 ноза между СКВ и РА. б) Дифференциация

РА и СКВ проводится по значению коэффициента антиген зависимого уровня глобулинов, определяемого на клеточном уровне, э не по уровню антинуклеарных факторов, 30 определяемых на гуморальном уровне целого организма; что повышает чувствительность диагностики болезней, следовательно повышается дифференциально-диагностическая чувствительность. в)

35 Дифференциально-диагностическая специфичность выше на 12,5 „э чувствительность выше на 19,57.

Формула изобретения

40 Способ дифференциальной диагностики ревматоидного артрита и системной красной волчанки путем иммунологического исследования крови, о т л и ч а ю щ и йС я тем, что, с целью повышения точности

45 способа, из исследуемой крови выделяют лимфоциты, инкубируют их с глюкозаминглюкан-пептидным комплексом (Румалон

P) и вносят люминесцентную сыворотку против гамма-глобулина человека, далее

50 регистрируют уровень флюоресценции, рассчит ывают коэффициент румалонзависимого синтеза иммуноглобулинов и при положительном значении коэффициента равным 4 усл.ед. и более диагностируют

55 ревматоидный артрит, а при отрицательном значении коэффициента менее 4 усл.ед, диагностируют системную красную волчанку.

1812500

Таблица1

Показатели ЛА, ИФМ, РГПЛ в обследованных группах

Таблица2

Частота положительных результатов ЛТ, ИФМ и РГПЛ в обследованных группах

Та бли цаЗ,.

Частота положительных результатов ЛТ, ИФМ и РГПЛ в группах больных СКВ и РА с висцеритом

П р и м е ч а н и е: значение положительных результатов JIT и ИМФ-способов соответствует тем стандартам, которые приняты в клинической практике в нашей стране, а РГПЛ вЂ” способа определяли в группе здоровых лиц, для чего находили максимальное значение. доверительного интервала по формуле: d«« - М + 2 o, (где M — - среднее значение показателя

РГПЛ, а сг — среднее квадратичное отклоненйе) и которое равнялось 2,1 усл.ед, Отсюда, положительным результатом считали показатель, превышающий (еще в 2 раза — для большей точности) зти значения у здоровых, т.е. 4 усл.ед., а отрицательным — при коэффициенте меньше 4, 1812500

Составитель Е. Бененсон

Техред М. Моргентал Корректор Я. Пилипенко.

Редактор

Производственно-издательский комйинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 1573 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Способ дифференциальной диагностики ревматоидного артрита и системной красной волчанки Способ дифференциальной диагностики ревматоидного артрита и системной красной волчанки Способ дифференциальной диагностики ревматоидного артрита и системной красной волчанки Способ дифференциальной диагностики ревматоидного артрита и системной красной волчанки Способ дифференциальной диагностики ревматоидного артрита и системной красной волчанки Способ дифференциальной диагностики ревматоидного артрита и системной красной волчанки 

 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии и аллергологии, и может быть использовано при контроле эффективности терапии при различных иммунных нарушениях

Изобретение относится к медицине, а именно к вирусологии, и может быть использовано при диагностических исследованиях для определения вирусов или антител к ним

Изобретение относится к области микробиологии и может бить использовано в медицине для диагностики коклюша

Изобретение относится к медицине

Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии, и может быть использовано для выявления причинно-значимых аллергенов у больных с аллергическими заболеваниями

Изобретение относится к методам проведения иммуноанализа и может быть использовано в медицине, сельском хозяйстве , промышленности для определения биологически активных соединений

Изобретение относится к оптико-электронной промышленности и может быть использовано для комплексного исследования параметров взвеси частиц микронных и субмикронных размеров (10-8 - 10-4 м): распределения частиц по группам с определенными размерами, химического состава частиц, скоростей изменения этих характеристик

Изобретение относится к области медицины и касается способа обнаружения антитела в пробе с использованием хемилюминесцентного соединения в качестве метки

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике инфекционных заболеваний
Изобретение относится к медицине, а именно, аллергологии и может быть использовано для выявления пищевой аллергии у взрослых и детей

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может использоваться в клинической и лабораторной практике

Изобретение относится к медицине, в частности к микробиологии, и касается получения антитоксоплазменных иммуноглобулинов для обнаружения токсоплазм в патологическом материале прямым методом флуоресцирующих антител (МФА)

Изобретение относится к иммунологическим методам анализа и может быть использовано для массового скрининга врожденных аномалий у новорожденных, контроля иммунного и гормонального статуса, некоторых инфекционных заболеваний и репродуктивной функции женщин

Изобретение относится к иммунодиагностике, в частности к способам обнаружения низкой концентрации аналита в пробе за счет улучшения отношения сигнал/фон
Изобретение относится к медицине, более конкретно к спектрально-флюоресцентным способам диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований
Наверх