Способ определения гидрозида изоникотиновой кислоты

 

Сущность изобретения: раствор анализируемой пробы под расщеплением реагентов - роданида аммония и хлорамина Б в кислой среде образует производное глютаконового альдегида, последний конденсируется со спирто-водным раствором димедона в нейтральной среде рН 6,8 с образованием окрашенных продуктов, которые фотометрируют при 525 нм. 2 табл.

союз советских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)ю G 01 N 21/78

ГОСУДАРСТВЕННОЕ IlATEHTHOE

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) )й3,;; : t!.,к»,;».

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4907990/25 (22) 20.11.90 (46) 07.05,93. Бюл. N. 17 (71) Алма-Атинский государственный медицинский институт им. С.Д. Асфендиарова (72) А,С. Бейсенбеков, P.М. Кенбаева, А.В. Пак и А,А. Кесикова (56) Авторское свидетельство СССР

N. 974228, кл. G 01 N 21/78, 1982. °

Авторское свидетельство СССР

М 941890, кл. G 01 N 21/78, 1982.

Изобретение относится к аналитической химии, а именно, к способам количественного определения гидразида изоникотиновой кислоты, применяемого в качестве химиотерапевтического противотуберкулезного средства (тубазид, изониазид, ГИНК).

Цель изобретения — повышение чувствительности и точности определения, Поставленная цель достигается тем, что в способе определения гидразида изоникотиновой кислоты анализируемую пробу обрабатывают вначале растворами роданида аммония и хлорамина Б ведут в кислой среде, создаваемой 0,1 н. раствором хлороводородной кислоты, а в качестве органического соединения, содержащего метиленовую группу, используют 2 спиртовый раствор димедона в присутствии универсального буферного раствора рН 6,8 — 7,2 с последующим фотометрированием окрашенного раствора при

525 нм.

„„. ЖÄÄ 1814056 Al к (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГИДРАЗИДА

ИЗОНИКОТИНОВОЙ КИСЛОТЫ (57) Сущность изобретения; раствор анализируемой пробы под расщеплением реагентов — роданида аммония и хлорамина Б в кислой среде образует производное глютаконового альдегида, последний конденсируется со спирто-водным раствором димедона в нейтральной среде рН 6,8 с образованием окрашенных продуктов, которые фотометрируют при 525 нм, 2 табл.

Ри

Способ осуществляют следующим образом, Анализируемую пробу препарата последовательно обрабатывают 1% раствором роданида аммония, 2% раствором хлорамина Б и 0,1 н. раствором хлороводородной кислоты; через 10 — 15 мин прибавляют 2 спиртовый раствор димедо- QQ на, универсальный буферный раствор рН, в

6,8 — 7,2 и фотометрируют при 525 нм. Подчи- ф„ нение закону Бера соблюдается в пределах р от 0,20до 2,00мг препарата в 25 мл раство- . ц1 ра. Чувствительность реакции 0,5 мкг препарата в 1 мл раствора.

Пример 1, Качественное определение тидразида изоникотиновой кислоты. Около )юв

3 — 5 мг препарата растворяют в 0,5 мл воды, а прибавляют 0,5 мл 1 % раствора роданида аммония, 2 мл 2 раствора хлорамина Б, 0,5 мл 0,1 н. раствора хлороводородной кислоты и оставляют на 10 — 12 мин, Полученный раствор нейтрализуют, прибавляя по каплям 0,5 н, раствор гидроксида натрия, и добавляют 0 5 мл 2% спиртового раствора

1814056

Ф

4 димедона, Через 3 — 5 мин появляется розово-фиолетовое окрэшивание. Предел обнаружения 5 мкг препарата.

Пример 2. Определение содержания гидразида изоникотиновой кислоты в фармакопейном препарате.

8 одну пробирку вносят 1 мл раствора стандартного образца, 1 мл которого содержит 0,5 мг гидразида иэоникотиновой кислоты, а, в другую — 1 мл испытуемого раствора препарата (0,05-100). В обе пробирки последовательно вносят по 0,5 мл 1% раствора роданида аммония, 2 мл 2% раствора хлорамина Б, 0,5 мл 0,1 н. раствора хлороводородной кислоты и оставляют на

15 мин; доводят реакцию среды до нейтральной добавлением по каплям 0 5 н, раствора гидроксида натрия;. и прибавляют

0,5 мл 2% спиртового раствора димедона.

Объемы доводят до 10 мл универсальным буферным раствором рН 6,8 и через 2025 мин измеряют оптическую плотность на

СФ вЂ” 26 в кюветах с толщиной слоя до 10 мм при 525 нм; в качестве контроля используют воду, Содержание гидразида изоникотиновой кислоты в граммах рассчитывают по формуле;

Dx Co 100

D, р где Dx — оптическая плотность испытуемого раствора;

Do — оптическая плотность раствора стандартного образца;

Co — содержание препарата в 1 мл раствора стандартного образца, г; р — точная масса препарата, взятая на определение, r.

Результаты количественного определения гидразидэ изоникотиновой кислоты в фармакопейном препарэте сведены в табл. 1.

Пример 3. Определение содержания изониаэидэ в таблетках, Точную массу порошка растертых таблеток изониазида (0,025 r) обрабатывают 20 мл воды в мерной колбе вместимостью 50 мл, интенсивно перемешивая в течение 5 мин; доводят объем водой до метки и фильтруют, отбрасывая первые и последние 5-8 мл фильтрата испытуемый раствор. В одну пробирку вносят 1 мл раствора стандартного образца гидразида изоникотиновой кислоты (0,05-100), а в другую — 1 мл испытуемого раствора; далее определение проводят по методике (см. пример 2).

Содержание иэониэзида в граммах, считая на среднюю массу одной таблетки. рассчитывают по формуле:

Dx Co b 50

СхОо p 1 (2) Способ определения гидрэзидэ изони.котиновой кислоты путем обработки аналигде Dx — оптическая плотность испытуемого раствора;

Оо — оптическая плотность раствора стандартного образца;

Co — содержание препарата в 1 мл раствора стандартного образца, г: р — точная масса порошка растертых

"5 таблеток изониазида, г;

Ь вЂ” средняя масса одной таблетки изониазида, г.

Результаты определения изониазида в таблетках сведены в табл,1.

Пример 4. Определение содержания суммы метаболитов изониазида в крови.

Для осаждения белков 2,5 мл сыворотки крови смешивают с 2,5 мл 10% раствора

25 трихлоруксусной кислоты и центрифугиру5 ют при 3000 об/мин в течение 10-15 мин.

Далее, к 3,6 мл полученного центрифугата прибавляют 0,4 мл 0,005% раствора стандартного образца гидраэида изоникотиновой кислоты, в 1 мл которого содержится

30. 0,02 мг препарата. Определение проводят по калибровочной кривой.

Построение калибровочной кривой.

В ряд пробирок вносят соответственно

0,02; 0,04; 0,06; 0,08; 0,1; 0,16; 0,2 мл стан35 дэртного раствора ивониазида, прибавляют по 0,5 мл 1% раствора роданида аммония, 2 мл 2 раствора хлораминэ Б и оставляют на

10 — 15 мин. Нейтрализуют полученный раствор вначале 10, а, затем, 0,5 н, растворами гидроксида натрия, прибавляют по 0,5 мл

2,(, спиртового раствора димедона и доводят до 10 мл универсальным буферным раствором рН 6,8.

Через 15 мин измеряют оптическую плотность на СФ вЂ” 26 в кюветах с толщиной слоя до 10 мм при 525 нм, В качестве контроля используют воду,.

Предлагаемый спектрофотометрический метод в 200 раз более чувствителен по

50 сравнению с известным (прототип). Точность количественных определений выше в 2-4 раза; способ применим для определения суммы метаболитов гидрэзида изоникотиновой кислоты в крови (см. таблицу 2).

Формула изобретения

1814056 г, Таблица 1.%

Определение содержания гидраэида изоникотиновой кислоты в фармакопейном препарате и в таблетках (иэ 5 определений).

Таблица 2

Результаты количественного определения суммы метаболитов изониаэида в крови (из 4 определений). зируемой пробы растворами роданида ам- . мония и хлорамина Б в кислой среде, а затем органическим соединением, содержащим метиленовую группу, измерения оптической плотности окрашенного рас- 5 творе, по которой рассчитывают концентрацию определяемого вещества, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью повышения чувствительности и точности определения, обработку анализируемой пробы рас- 10 творами роданида аммония и хлорамина

Б ведут в кислой среде, создаваемой

0,1 н, раствором хлороводородной кислоты, а в качестве органического соединения, содержащего метиленовую группу, используют 2 -ный спиртовой раствор димедона в присутствии универсального буферного раствора рН 6,8-7,2 с последующим фотометрированием окрашенного раствора при 525 нм.