Способ получения s(+) анантиомера 2-арилалкановой кислоты

 

Использование: биотехнология, область синтеза биологически активных соединений . Сущность изобретения: рацемический 2-(4-хлорфенил)-3-метилбутирамид подвергают стереоспецифическому гидролизу амидаэой, продуцируемой Brevlbacterlum P 312 (CBS 713.73) в 2-(4-хлорфенил)-3-метилбутановую кислоту. Способ предусматривает получение смеси указанных веществ. После разделения водных и органических фаз путем декантации и подкисления водной фазы , 2-(4-хлорфенил)-3-метилбутановую кислоту экстрагируют хлороформом. Анантиомерный избыток изомера S () составляет 97,5%.После отделения кислоты с Р(+) а - метиябензиламином анантиомерный избыток превышает 90%.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕНЮЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (21) 4613356! 13 (22) 26,01.89 (31) 8800924 (32) 27.01.88 (33) FR (46) 15.05.93.Бюл.N 18 (71) Рон-Пуленк Санте (FR) (72) Эдит Сербело и Доминик Петре (FR) (56) Европейский патент М А-0227078, кл. С 12 P 7/40, опубл. 1987, (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ S /+/ АНАНТИОМЕРА 2-АРИЛАЛКАНОВОЙ КИСЛОТЫ (57) Использование: биотехнология, область синтеза биологически активных соединеИзобретение относится к биотехнологии и касается способа получения S/+/ активных 2-арилалкановых кислот общей формулы:

At -Сн-СООН (! ) путем анантиоселективного гидролиза соответствующих рацемических амидов.

В общей формуле (1) Ar означает фенил, возможно замещенный атом галона, а и означает атил, пропил или изопропил-радикал.

Цель изобретения — повышение оптической чистоты целевого продукта и выхода анантиомера.

Сущность изобретения заключается в том, что рацемический 2-(4-хлорфенил)-3метилбутирамид/гидролизуют

Brevlbacterium P312/СВ$713.73/, продуцирующей нестереоспецифическую амидазу.

„„5U,„, 181628? АЗ (я)з С 12 P 7/40 41/00// С 12 Р 7/40, С 12 R 1 !13 «-» ний. Сущность изобретения: рацемический

2-(4-хлорфенил)-3-метилбутирамид подвергают стереоспецифическому гидролизу амидазой, продуцируемой Brevlbacterlum P 312

{CBS 713.73) в 2-(4-хлорфенил)-3-метилбутановую кислоту. Способ предусматривает получение смеси указанных веществ. После разделения водных и органических фаз путем декэнтэции и подкисления водной фазы, 2-(4-хлорфенил).-3-метилбутановую кислоту экстрэгируют хлороформом. Анантиомерный избыток изомера S Щ составля- . ет 97,5$. После отделения кислоты с Р(+) а — метилбензиламином анантиомерный избыток превышает 907.

Селекцию микроорганизмов, позволя ющих осуществлять анэнтиоселективн ый гидролиэ, осуществляют в зависимости от их способности к селективному гидролизу ра- в . цемического 2-(4-хлорфенил/-3-метилбу- р тирамид в а -метилбутановую кислоту в ! соответствующей среде до преобразования

20 продукта с последующим измерением анантиомерного избытка и отбирают микро- М организмы с аиантиомерным выходом. пре- © вышающим 65 . «4

Согласно настоящему изобретению, способ обычно осуществляется в водной или однородной или неоднородной водно-; ф органической среде в определенных услови-. (Д . ях температуры и рН в зависимости от вида микроорганизма путем перемешивания сус. пенэии клеток или клеточных экстрактов микроорганизма и амида рацемической 2эрилалкановой кислоты.

Способ приводит к получению смеси 2эрилалкэиовой кислоты S и амида 2-арилалИ16287

Составитель И. Привалова

Техред М.Моргентал Корректор M. Самборская

Редактор С. Кулакова

Заказ 1649 " Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.. 4/5

Праизвадственна-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101 канавой кислоты Й, причем последний может рацемизироваться по известной технологии в амид рацемическай

2-арилалкановой кислоты, который может снова гидролизоваться в 2-арилалкановую кислоту $ в вышеприведенных условиях.

Например, рацемизацию осуществляют путем нагрева с гидратом окиси аммония при температуре от 80 до 160 С.

Пример 1. Штамм Brevlbacterlum R

312/CBS 717.73/ культивируют в колбе с перемешиванием при 28 С в течение 14 ч в среде со следующим составом, r:

Глюкоза 10 (NH4) 2$04 . S

КН2Р04 . 1,01

NazHP04 12Н20 1,64

К2Н РО4 0,82

CaCl> 2Hz0 0,012

ЕпСЬ 0,0012

FeSO4 7Н20 0,0012 Мп$04 Н20 0.0012

MgS04.7Н20 0,5

Хлоргидрат тиамина 0,002

Вода в количестве, достаточном до смэ 1000

Эту предварительную культуру используют для затравки культуральной среды, имеющей тат же самый состав, но содержащий, кроме тога, N-метилацетамид с концентрацией 20 мм, Культивирование осуществляют в колбе с перемешиванием в течение 24 часов при 28ОС. Полученную биомассу отделяют путем центрифугирования, затем ее промывают два раза раствором хлорида натрия при 9 г/л.

Осадок центрифугирования, содержащий 320 мг клеток Brevlbacterlum R312 в расчете на сухое вещество,. переводят в суспензию с 5 см буфернога раствора (50 мМ) при рН = 7,0. Добавляют 71,2 мг рацемическога 2-(4-хлорфенил)3-метилбутирамида- 337 р моль/. После 117 часов перемешивания при 25ОС реакционную смесь разбавляют путем добавления 45 смэ смеси ацетанитрил-хларистоводарадная кислота N (90 — 10 объемн). Бактерии удаляют центрифугированием. Состав смеси определяют посредством высокоразрешающей жидкой хроматографии (В РЖХ).

5 Всплывшая часть содержит 258 р моль 2-(4-хлорфенил)-3-метилбутирамида, 73 р моль 2-(4-хлорфенил)-3-метилбутановой кислоты.

Добавляют хлорид натрия для улучшения разделения водных и органических фаз.

К отделенной путем декантации органической фазе добавляют смесь эфир — едкий натр 0,1N (3 — 1 объем). После разделения водных и органических фаз путем де15 кантации и подкисления .водной фазы экстрагируют хлороформом 2-(4-хлорфенил)-3-метилбутановую кислоту, Измерение вращательной способности показывает, что анантиомерный избыток

20 .изомера $(+) составляет 97,5о .

После отделения кислоты с R(+) а-метилбензиламином, анализ посредством хроматографии В РЖХ показы вает, что анантиомерный избыток превышает 90о .

Формула изобретения

Способ получения.$(+) анантиомера 2арилалкановой кислоты формулы

30 At — СН-СООН (1) где Ar- фенил, возможно замещенный атом галогена;

R — атил, пропил или изопропил, путем анантиоселективного гидролиза фун35 кционального производного 2-арилалкановой кислоты в присутствии фЕрментпродуцирующего микроорганизма, отличающийся тем, что, с целью повышения оптической чистоты целевого

40 продукта и выхода анантиомера, в качестве функционального производного 2-арилалкановой кислоты берут рацемический 2-(4хлорфенил)-3-метилбутирамид, а в качестве ферментпродуцирующего микроорганизма

45 используют Brevlbacterium Р312 (CBS

713.73).