Способ определения уровня секреции норадреналина в гипоталамусе экспериментальных животных

 

Использование: в области физиологии. Сущность изобретения: животным проводят краниоцеребральную гипотермию до температуры мозга 33-29°С, после чего внутрибрюшинно вводят 3Н-норадреналина и определяют радиоактивность гипоталамуса , по которой судят об уровне секреции норадреналина. Изобретение позволяет снизить травматичность способа. 5 табл.

(H) 01) СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (sos G 01 и 33/74, 33/58

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ .

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4924476/14 (22) 03.04.91 (46) 07.06.93. Бюл. f4 21 (71) Институтспроблем криобиологии и криомедицины АН УССР (72) Г.А.Бабийчук, В,С.Марченко, А.В.Шило, 8.В.Ломако, И.И.Ломакин, Л.H.Màð÷åíêî и

С.Н.Федосова (56) Физиол.журн. СССР 1979, т. 65, с. 141143. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УРОВНЯ

СЕКРЕЦИИ НОРАДРЕНАЛИНА В ГИПОТАИзобретение относится к области фиэиоnorw и может быть использовано для изучения механизмов синаптических процессов центральной нервной системы.

Целью изобретения является повышение выживаемости экспериментальных животных за счет уменьшения травматиэации головного мозга.

Поставленная цель достигается тем, что в способе определения уровня секреции норадреналина в гипоталамусе, включающем введение эН-норадреналина в организм и последующее определение радиоактивности гипоталамуса, предварительно проводят краниоцеребральную гипотермию (КЦГ) до температуры мозга 33 — 29 С, а Н-норадреналин вводят внутрибрюшинно, Пример 1. Перед началом эксперимента для блокировки терморегуляторных реакций организма животных (40 крыс весом 200-250 г) наркотиэировали внутрибрюшинными иньекциями смеси 5 /,-ного раствора тиапентала натрия и 30 -ного раствора гаммаоксимасляной кислоты иэ расчета 30 мг/кг и 100 мг / кг массы животного, соответственно. КЦГ до

ЛАМУСЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ (57) Использование: в области физиологии.

Сущность изобретения: животным проводят краниоцеребральную гипотермию до температуры мозга 33-29 С, после чего внутрибрюшинно вводят Н-норадреналина и

3 определяют радиоактивность гипоталамуса, по которой судят об уровне секреции норадреналина. Изобретение позволяет снизить травматичность способа. 5 табл. температуры мозга 33-29 С проводили на установке для программного охлаждения.

Для проведения КЦГ. на черепе животного устанавливали стеклянные трубки. залитые в протакрил; по K0TopblM продували пары азота. 8 ходе экспериментов измеряли ректальную температуру и температуру в среднем ухе. которая соответствует температуре гипоталамуса. Температуру коры 1ольших полушарий головного мозга измер,..1и тер- . ОО модатчиком, стереотоксически вво;.:.-иным Я через специальную направляющую трубку, ( укрепленную на черепе животного протак- (Ъ рилом, Измерение температуры осуществля- ) ли электронным термометром с диапазоном измерения (-50)-(+ 50) С (разрешающая спосооиость 0,1 С) и 4-мя датчиками температу-,тй ры (термореэисторы СТЗ-1 8), размещенными на конце медицинской иглы. После самоотогрева животного изучали секрецию Н вЂ” HA э радиоизотопным методом с использованием

"posh-pull" канюли, которую вводили по стереотоксическим координатам в переднюю и эаднгою области гипоталамуса. Канюлю с")едйняли с перистальтическим насосом и

1820331

Таблица1 всю систему заполняли раствором Кребса—

Рингера. После заполнения системы раствором канюлю вводили в передние и задние отделы гипоталамуса, животному внутрибрюшинно вводили 20 мкл раствора

Н вЂ” HA (1 мкл/мин) при помощи микрошприца. Перфуэию проводили со скоростью

25-30 мкл раствором Кребса-Рингера Собирали 20-минутные фракции. Измерение радиоактивности собранных фракций проводили, регистрируя возникающие при радиоактИвном распаде Р -частицы в сцинтилляционном счетчике. Коэффициент высвобождения (К8) рассчитывали из отношения радиоактивности исследуемой фракции к радиоактивности последней фракции отмывки, имеющей стабильный уровень радиоактивности: адиоактивиость послед емой кции . импlмин а радиоактивность последней фракции отмывки, !!Hl! мин

-1оя — в(Г 2 . 082 (пеРедний отдел и!поталамУса )

3114, 24 к ° — - -@- = 2 . 097 (аадний отдел гипоталамуса )

2824 . 89 . 1252.И

Результаты представлены в табл.1 s сравнении с прототипом.

Из забл..1 видно, что предлагаемый способ позволяет определять уровень секреццц.норадренвлйна в гипоталамусе с такой желчностью, как и способ по прототипу.

После определения уровня секреции проводили наблюдение за выживаемостью крыс.

Результаты представлены в табл.2, Из табл,2 видно, что к 10-м суткам вы.живаемость крыс выше, чем в прототипе в 2 раза, что обусловлено меньшай травматичностью предлагаемого способа, Пример 2. Три группы животных (в каждой по 10-15 крыс и 10-15 хомяков) ох.лаждали, соответственно, до температуры мозга 36, 35 и 34 С. После самоотогрева исследовали уровень секреции Н-норадрез налина в передних и задних отделах гипоталамуса. Результаты свидетельствуют о там, что,при данном температурном режиме уровень секреции существенно ниже, чем в прототипе (табл.3).

Пример 3. Три группы животных (в

5 . каждом по 10-15 крыс и 10-15 хомяков) охлаждали, соответственно, до температуры

33, 31, 29 С (заявляемый режим). Исследовали уровень секреции Н-норадреналина в передних и задних отделах гипоталамуса.

Результаты представлены в табл.4.

Из табл.4 видно, что в заявляемом температурном режиме (33-29 С) секреция эН-норадреналина s гипоталамусе не отличается от прототипа.

15 Пример 4. Три группы животных (в . каждой по 10-15 крыс и 10-15 хомяков) охлаждали. соответственно, до температуры мозга 28. 25, 22 С (температурный режим ниже заявляемого) и исследовали уровень

20 секреции Н-норадреналина. Результаты указывают на то, что при данных температурах уровень секреции практически не определяется, Результаты представлены в табл.5.

Из приведенных примеров следует, что заявляемый способ позволяет определять уровень секреции Н-норадреналина в гиз поталамусе головного мозга экспериментальных животных с минимальной

30 травматиэацией мозга, что,обеспечивает высокую выживаемость после окончания. эксперимента.

Формула изобретения

Способ определения уровня секреции

-35 норадреналина в гипоталамусе экспериментальных животных, включающий введе- ние Н-норадреналина в организм животного и последующее определение радиоактивности гипо-:аламуса, о т л и ч а ю щ40 и и с я тем, что. с целью повышения выживаемости жиъотных эа счет уменьшения травматиззции головного мозга, предварительно осуществляют краниоцеребральную гипотермию до температуры мозга

45 33-29ОС, а зН-норадреналин вводят внутрибрюшинно.

1820331

7- и ень

98й 02

98й 02

100

100

70 "= 2,0

95 «4- 1,0

85+ 1.0

50 1,0

Темпе а а ОС

Передние о делы. гипоталамуса ректум мозг

Контроль (нормотермия ) 35 38

35

Прототип

Заявляемый

П ототип

1- и ень

3- и ень

Вид животного

Хомяки

Крысы

Хомяки

Крысы

Хомяки

Крысы

Хомяки

Крысы

Хомяки

Крысы

0,008 +

0,007 +

0,008 и

0.006 +

0.009 и

0,008

0,010 0,01

2,2 +

2,1

0,003

0,002

0,001

0,001

0,001

0,002

0.001

0,006

0,1

0,09

Таблица 2

10 - и день

Таблица 3

Задние отделы гипоталамуса

0,014 и 0,005

0,009 «+ 0.003

0013 +. 0,004

0,008 + 0,001

0,014 «0,004

0007 и 0,002

0015 4- 0.004

0,012 0,006

2,19 и 0,1

207 и 01

Табл и ца 4

Таблица 5