Способ получения фосфолипазы д

 

Использование: техническая биохимия, медицина, пищевая промышленность. Сущность изобретения: фосфолипазу Д получают экстракцией белков из корнеплода среднеазиатской редьки с осаждением целевого фермента ацетоном, при этом для повышения выхода и каталитической активности экстракцию проводят боратным буфером рН 8,2 с добавлением в среду выделения 5-15 мМ ионов кальция. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИГТИЧЕГКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ltЕЗН4Я

Ю|н4ч(Щф

4O l" о, ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4920186/13 (22) 19.03.91 (46) 23.06.93. Бюл. М 23 (71) Ташкентский государственный университет им, В.И.Ленина (72) M.Ì,Pàõèìoâ, P.Х.Зиятдинова, Р,П,Игламназаров (56) Авторское свидетельство СССР

N 560614, кл. А 61 К 35/78, 1976.

Рахимов М.М„ Ахмеджанов Р., Мадьяров Ш.P.,TàøìóõàìåäoB Б.А. Разделение и свойства молекулярных форм фосфопипаэы

Д из растений.-Биохимия, 1982, т. 47, вып,9, с. 1454 — 1465.

Изобретение относится к технической биохимии и может быть использовано в медицине и пищевой промышленности.

Цель изобретения — повышение выхода белка и каталитической активности фосфолипазы Д.

Для достижения поставленной цели в способе получения фосфолипазы Д, включающем экстракцию белков из корнеплода среднеазиатской редьки с осаждением целевого фермента, зкстракцию проводят боратно-щелочным буфером, при этом в среду выделения добавляют 5 — 15 мМ ионов кальция.

Новым в предлагаемом решении является прием очистки фермента на этапе его экстракции из сырьевого продукта путем применения соединений кальция. Существенные отличия изобретения состоят в использовании вместо трис-буфера боратно-щелочного буфера с включением в него 5-15 м М ионов кальция.

Сущно т предлагаемого способа заключается в том, что экстракцию белков проводят боратно-щелочным буфером рН 8,2 в присутствии ионов кальция с концентрацией 10 MM.

„„5U ÄÄ 1822878 А1

s С 12 N 9/20, А 61 К 35/78 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФОСФОЛИПАЗЫД (57) Использование: техническая биохимия, медицина, пищевая промышленность. Сущность изобретения: фосфолипазу Д получают экстракцией белков из корнеплода среднеазиатской редьки с осаждением целевого фермента ацетоном, при этом для повышения выхода и каталитической активности экстракцию проводят боратным буфером рН 8,2 с добавлением в среду выделения 5-15 мМ ионов кальция. 1 табл.

Предлагаемый способ поясняется следующими примерами.

Пример 1. Навеску 200 г корнеплода среднеазиатской редьки размельчают, экстрагируют в течение 4 ч при 4 С десятикратным объемом боратно-щелочного буфера рН

8,2, гомогенизируют гомогенизатором типа

РТ-2 при 8000 об/мин в течение 20 мин. Растворимые белки отделяют от осадка центрифугированием при 5000 об/мин 20 мин. К надосадочной жидкости добавляют 2 объема охлажденного ацетона (-10 С) и перемешивают. Осадок отделяют декантацией, промывают безводным ацетоном и сушат на воздухе для удаления ацетона. Осаждение ацетоном проводят дважды. Смена буфера на боратнощелочной приводит к увеличению выхода белка до 596 мг и увеличению активности ферментного препарата до 1073 ед.

Пример 2. Процесс проводят по примеру 1, но экстракцию проводят боратно-щелочным буфером рН 8,2, содержащим

5 мМ кальция, Введение 5 мМ кальция повышает выход по белку до 660 мг, активность ферментного препарата до 1584 ед, 1822878

Пример 3. Процесс проводят по примеру 1, но экстракцию проводят боратно-щелочным буфером рН 8,2, содержащим

10 мМ кальция, Введение 10 мМ кальция повышает выход по белку до 674 мг, активность ферментного препарата до 2292 ед.

Пример 4. Процесс проводят по примеру 2, но экстракцию проводят боратно-щелочным буфером рН 8 2, содержащим

15 мМ кальция, Введение 15 мМ кальция повышает выход по белку до 650 мг, активность ферментного препарата до 1365 ед.

Пример 5, Процесс проводят по примеру 1, но зкстракцию проводят боратно-щелочным буфером рН 8,2, содержащим

20 мМ кальция, Введение 20 мМ кальция повышает выход по белку до 610 мг, активность ферментного препарата до 1037 ед.

В таблице представлены сравнительные данные выхода фосфолипазы Д, полученной по известному и предлагаемому способам.

Активность фосфолипазы Д выражена в микромолях холина, образующегося из лецитина за 1 мин под действием 1 мг фосфолипазы Д по белку, При сравнении данных по известному и предлагаемому способам видно, что повышение концентрации трис-буфера до 0,1 М при рН 8,2 дает выход белка 409 мг, что выше известного (267 мг), Смена буфера на боратно-щелочной приводит к увеличению выхода белка до 596 мг. Точно так же ) иеличивается выход по активности ферментного препарата: 900 ед, и 1073 ед, вместо 368 ед, Введение 5-20 мМ кальция повышает как выход по белку, так и активность фермента (см. таблицу). Максимальное увеличение наблюдается при введении 10 мМ кальция; выход по белку увеличивается до 674 мг, а активность ферментного препарата — до

2292 ед.

Таким образом, предлагаемый способ обла15 дает следующими преимуществами по сравнению с прототипом: повышает выход фермента в

2,5 раза; увеличивает каталитическую активность полученного препарата в 6.2 раза.

Формула изобретения

Способ получения фосфолипазы Д, включающий экстракцию белков буфером иэ корнеплода среднеазиатской редьки и осаждение целевого фермента охлажденнымацетоном,отл ичающийсятем,что

25 с целью повышения выхода белка и каталитической активности фосфолипазы Д, экстракцию проводят боратным буфером рН 8,2. содержащим от 5 до 15 мМ кальция.

Способ получения фосфолипазы д Способ получения фосфолипазы д 

 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к получению фермента липазы гидролизующего жиры

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, в частности к лекарственным средствам растительного происхождения, используемым для лечения гнойно-некротических ран

Изобретение относится к медицине, в частности к гастроэнтерологии и касается диагностики и лечения желчно-кёменной болезни

Изобретение относится к медицине, а именно к химико-фармацевтической промышленности, и касается способа получения средства, обладающего активностью против миксовирусов

Изобретение относится к медицине, а именно к химико-фармацевтической промышленности , и касается способа получения флавоноидов

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается способа получения урсоловой кислоты формулы обладающей различной биологической активностью и служащей исходным сырьем для получения новых биологически активных веществ
Изобретение относится к медицине, конкретно к фармацевтической промышленности, а именно к получению средств, обладающих профилактическим и общеукрепляющим свойством
Изобретение относится к медицине, а именно препаратам лечебного питания

Изобретение относится к медицине, в частности к гасроэнтерологии, и касается больных язвенной болезнью вне обострения

Изобретение относится к медицине и биохимии, точнее, к способам получения средств, обладающих антикоагулянтной активностью из природных источников
Изобретение относится к медицине, в частности, к гинекологии
Наверх