@ -аминофлуоресцеинтиокарбамилэтиламид 5-изоамил-5-(5 @ - карбоксипентил)барбитуровой кислоты в качестве реагента для поляризационного флуороиммуноанализа барбамила
Использование: в качестве реагента для поляризационного флуороиммуноанализа барбамила. Сущность изобретения: продукт / -аминофлуоресцеинтиокарбомил-этилам ид 5-изоамил-5-(5 -карбоксипентил)бар6итуровой кислоты. БФ CagH/nNsOgS; выход 40% Реагент 1: 5-изоамил-5-(5 -карбоксипентил)барбитуровая кислота. Реагент 2: изобутилформиат. Реагент 3: /5-флуоресцеинтиокарбамилэтилендиамин. Условия процесса вдиоксане при 1 табл.
СОЮЗ СОВЕ ТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧГСКИХ
РЕСПУБЛИК
ГОСУДАРСТВЕН-3ОЕ ПАТЕНТНОЕ
ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
0 Сн3 нн сн сн сн
N сн (сн ) СОмнс 1 сн NHcsN о (21) 4913450/04 (22) 31.01.g1 (46) 07.07.93. Бюл. М 25 (71) Московская медицинская академия им.
И.М.Сеченова. Химический факультет МГУ им, М.В.Ломоносова (72) А.Н.Ермаков, 6,Н.Изотов, С.А,Еремин, А.А.Щеголев и А.М.Егоров (56) Colbert 0.1. et а1. Single reagent
polarization fluorolmmunoassay for
barbiturates!и urine, — СИп. Chem, 1984, ч, 30. Ф 11, р. 1765. (54) j3-АМИНОФЛУОРЕСЦЕИНТИОКАРБАМИЛЭТИЛАМИД 5-ИЗОАМИЛ-5-(5 -КАР-
Б О К С И П Е Н Т ИЛ ) БА P Б И ТУ P О В О Й
КИСЛОТЫ В КАЧЕСТВЕ РЕАГЕНТА ДЛЯ
Изобретение относится к новому производному барбитуровой кислоты, обладающему свойствами реагента для поляриэационного флуороиммунанализа.
Цель изобретения — новое производное барбитуровой кислоты. обладающее более высокой чувствительностью и специфичностью, Пбставленная цель достигается аминофлуоресцентнокарбамилэтиламидом 5изоамил-5-(5 -карбоксипентил)барбитуров. ой кислоты формулы:
Получение флуоресцеин-i эченного производного барбитуровой кислоты осуществляют следующим образом: к раствору
5-изоамил-5-(5 -карбоксипентил) барбитуровой кислоты в диоксане, добавляют триэ, . Ж „„1825793 А1 (5П5 С 07 D 405/12, G 01 N 21/64 (С 07 D 405/12 239;62, 311;90) ПОЛЯРИЗАЦИОННОГО ФЛУОРОИММУНОАНАЛИЗА БАРБАМИЛА (57) Использование: в качестве реагента для поля риза цион ного флуороиммуноаналиэа барбамила, Сущность изобретения: продукт
/3-аминофлуоресцеинтиокарбомил-этилам ид 5-изоамил-5-(5 -карбоксипентил)барбитуровой кислоты. БФ СЗ9Н41й50я5; выход
40%, Реагент 1: 5-иэоамил-5 5 -карбоксипентил)барбитуровая кислота. Реагент 2: изобутилформиат, Реагент 3: Р-флуоресцеинтиокарбамилэтилендиамин. Условия процесса: в диоксане при 0-10 С. 1 табл.тиламин, для связывания выделяющейся соляной кислоты, и при охлаждении доба ел я ют изобутилхлорформиат, Полученную реакционную смесь перемешивают в течение 2 — 3 мин при 0 — 10 C и добавляют к водному раствору флуоресцеинтиокарбамилэтилендиамина. Реакцию ведут 24 ч при
0-10 С. Р-аминофлуоресцентнокарбамилэтиламид 5-изоамил-5-(5 -карбоксипентил)барбитуровой кислоты выделяют хроматографией в тонком слое на пластинках "Силуфол".
Нижеследующие примеры иллюстрируют синтез соединения по изобретению и его свойства в качестве реагента:
Пример 1. Получение Р-аминофлуоресцентнокарбамилэтиламида 5-изоамил-5(5 -карбоксипентил)барбитуровой кислоты (1).
К раствору 31 мг (100 мкмоль) 5-изоамил-5-(5 -карбоксипентил) барбитуровой кислоты в 1 мл диоксана добавляют 50 мкл триэтилвмина, охлаждают до 0 — 10 С, и до1825793 бавляют 20 мкл изобутилформиата. Реакционную смесь перемешиоают при 0-10 С в течение 2 — 3 мин. Затем 100 мкл смеси добавляют к раствору 3 мгр-флуоресцеинтиокэрбамилэтилендиэмина в 100 млк воды, содержащему 50 мкл триэтиламина, реакцию проводят в течение 24 ч при 0-10 С, Полученный продукт выделяют хроматографией в тонком слое на пласти??ках "Силуфол", в системе этилацетат метанол уксусная кислота 60 .15:1, собирая оранжевую полосу С R? 0,7, из которой полученное вещество элюируют 3 мл метанола. Выход аминофлуоресцеинтиокарбамилзтиламида
5-изоамил-5-(5 -карбоксипентил) барбитурооой кислоты составляет 40, Элементный анализ: найдено, : С
61,9; Н 5,4; N 9,2; S 4,3.Вычислено, : С 62,0;
Н 5,5; N 9,3; S 4.2: Сзэ Н41ИоОрЯ. Данные ИК спектра 1045, 1115, 1177, 1215, 1265, 1385, 1420, 1609, 1709. 1720, 2932. 2955, 3095, 3217 см . Данные УФ спектра в метаноле, т ?„„- 276, 454, 480 нм, Пример 2, Определение барба В пластмассооые контейнеры, помещенные в измерительную карусель с кюве.тами, вносят по 50 мкл модельных образцов мочи, содержащих различные концентрации барбэл ила, Разбавленная о 40 раз кроличья антисывороткэ против барбэмила, раствор ?В-ал1инофлуоресцеинтиокэрбамилэтиламида 5-изоамил-5-(5 -кэр&оксипентил) барбитурооой кислоты о концентрации 130 нмоль/л и фосфатный буфер (рН 7,6), содержащий 1 г бычьего гамма-глобулина и 1 r азида натрия, наливают в три отдельных флакона, установленных в одной специальной коробке, Коронку с реагентами и карусель устанавливают о прибор (ТДх-анализатор фирмы "Abbott" ), который автоматически выпол??яет анализ по заданной программе. Концентрацию барбамилэ в образце мочи прибор автоматически определяет по величине поляризации флуоресценции на построенном заранее и хранимом в памяти прибора калибровочном графике: концентрация барбамила — поляризация флуоресценции. % перекрестных реакций при 50% ингибировании связывания антител рассчитывали по формуле (С1/С2) х 100 где С1 — концентрация барбамила при 50 ингибировании связывания антител; Cz — концентрация того или иного вещества, взятого для проведения исследованИй по кросс-реактивности, вызывающая 50 g ингибирование связывания антител к барбамилу Морфин, кодеин, налорфин, кокаин, 9ТНС-СООН, эфедрин, перветин, норэфедрин, димедрол, аминазин, дипразин, кэрбамазепин, амитриптилин, пэпаверин, хлозепид, кофеин, диазепам, клофелин,ме20 тадон, фенциклидин, метаквалон, анапрелин, новокаин имели перекрестное реагирование менее 0.1 . Чувствительность определения барбамила составляет 0,05 мкг/мл или 2,2x10 М (молекулярная масса барбэмила — 226,3). Использование предлагаемого соединения . в качестве реагента для определения барбамила позволит повысить чувствительность определения барбамила в 2,5 раза, à $ перекрес1ных реакций с другими структурноподобными соединениями уменьшить с 1364 до 8 (см. таблицу), Формула изобретения /3-Аминофлуоресцеинтиокарбамилэти лэмид 5-изоамил-5-(5 -кэрбоксипентил)барбитурооой кислоты формулы 40 „о сн сн сн NH, СН (СЧ СО??НСН?СН ? HCSNH+ O>2 ?.4 2 2 -с со он 45 в качестве реагента для поляризационного, флуороиммуноанализа барбамила. 1825793 Продолжение таблицы Составитель А. Ермаков Редактор Т. Никольская Техред М, Моргентал Корректор M. Самборская Заказ 2305 Тирам Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5 Ф Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101
