Способ количественного определения вещества, содержащего хлоралкильные группы

 

Сущность: для количественного определения п-бис-(|3-хлорэтил)-аминофенилуксусной кислоты в присутствии цитостатиков-производных п-бис- З-хлорэтил}- амина готовят пробу путем растворения анализируемого вещества в этилацетате, добавляют к полученному раствору 20%- ный раствор никотиновой кислоты в 25%- ном водном растворе гидроксида калия до концентрации никотиновой кислоты в фотометрируемом растворе 8%. Полученный раствор нагревают на кипящей водяной бане до удаления этилацетата, охлаждают раствор , добавляют уксусную кислоту до концентрации 3% и этанол до концентрации 20-25% в фотометрируемом растворе. Фотометрирование раствора проводят при 510 нм. сл с

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)л G 01 и 21/78

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4887288/25 (22) 04.12.90 (46) 07.08.93. Бюл. М 29 (71) Алма-Атинский государственный медицинский институт и Всесоюзный онкологический научный центр АМН СССР (72) Э.М.Бисенбаев, В.Н.Толкачев и Б.С.Кикоть (56) Бисенбаев Э.M. и др. 1И съезд фармацевтов Казахской ССР, тез докл. Кустанай, 1987, с.249-250.

Белоконь О.M. и др. Фармация, 1976, т.26, hh 6, с, 52-55.

Патоцкене Л,А. и др. Институт биохимии

АН Лит, ССР, Вильнюс, 1985, с,10 (рукопись депонирована в ВИНИТИ, hh 2496 — 85.

Коренман И.М. Фотометрический анализ. M.: Химия, 1975, с. 96 — 102, Изобретение относится к фармацевтической и аналитической химии, преимущественно к анализу промежуточных продуктов, получаемых при синтезе цитостатиков и может быть использовано как при синтезе, так и в контроле чистоты лекарственных препаратов.

Цель изобретения -разработка способа количественного определения БХФК, отличающегося воэможностью селективного определения его в присутствии цитостатиков — производные БХЭА, а также увеличения точности определения.

Сущность способа заключается в образовании полиметинового красителя при нагревании БХФК с никотиновой кислотой и,, Ж,, 1832188 А1 (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, СОДЕРЖАЩЕГО

ХЛОРАЛКИЛЬНЫЕ ГРУППЫ (57) Сущность: для количественного определения и-бис-ф-хлорэтил)-аминофенилуксусной кислоты в присутствии цитостатиков-производных п-бис.ф-хлорэтил)- амина готовят пробу путем растворения анализируемого вещества в этилацетате, добавляют к полученному раствору 207ный раствор никотиновой кислоты в 25фном водном растворе гидроксида калия до концентрации никотиновой кислоты в фотометрируемом растворе 8 . Полученный раствор нагревают на кипящей водяной бане до удаления этилацетата, охлаждают раствор, добавляют уксусную кислоту до концентрации 3 и этанол до концентрации з

20-25ь в фотометрируемом растворе. Фотометрирование раствора проводят при 510 нм. гидроксидом калия. Продукт реакции имеет малиновую окраску gm>x 510 нм), не изменяющуюся в течение нескольких суток; интенсивность окраски пропорциональна концентрации БХФК в исходном растворе.

Наряду с полиметиновым красителем в растворе образуется глутаконовый альдегид

+ax 365 нм), который также может использоваться для селективного количественного определения БХФК; интенсивность поглощения глутаконового альдегида в максимуме полосы поглощения в 6 раз больше интенсивности поглощения полиметинового красителя. Для других производных

БХЭА появление окраски в условиях этой реакции не характерно. Поскольку цитоста1832188 тики, производные БХЭА, при нагревании с производными пиридина в щелочной среде не окрашиваются, а окраска БХФК, полученная в этих условиях, интенсивна и устойчива во времени, мы использовали это свойство для определения БХФК в присут-, ствии цитостатиков как точного, селективного метода. Стабилизатором окрашивания является уксусная кислота, При необходимости, определение ЬХФК можно проводить при двух длинах волн — 365 и 510 нм.

По сравнению с известными способами определения веществ с хлоралкильными группами, данный способ позволяет надежно определять БХФК в чистом виде, в технических образцах, и что является совершенно новым — определять его как примесь в кортифене, тестифене и др, производных БХЭА. Определение осуществляется следующим образом: навеску препарата (с точностью до 0,0002 г) растворяют в этилацетате.

К аликвоте раствора анализируемого образца в пробирке прибавляют 20% раствор никотиновой кислоты в 25% растворе гидроксида калия и нагревают ее на кипящей водяной бане до испарения этилацетата. После охлаждения в пробирку прибавляют уксусную кислоту, переносят смесь в мерную пробирку и доводят общий объем раствора этанолом до 5 мл. Измеряют поглощение окрашенного раствора не спектрофотометре при длине волны 510 нм или на фотоэлектроколориметре с зеленым светофильтром (490 нм) в кюветах 1 см, расчет концентрации проводят по калибровочному графику или по известной формуле с учетом поглощения стандартного раствора БХФК.

При анализе чистого препарата измерение поглощения проводят при длине волны 365 или 510 нм.

Закон Бугера-Бера соблюдается в пределах от 0,1 до 3 мг/мл для полиметиновых красителей +„„510 нм) и для глутаконового альдегида +» 365 нм) в пределах от 8 до 40 мкг/мл. Относительная ошибка метода составляют «+ 0,7%.

В примерах 1-3 были использованы образцы БХФК серии 911089.

Пример 1. Определение БХФК. Точную навеску 0,1280 г БХФ К внесли в мерную колбу, вместимостью 25 мл, растворили в 10 мл этилацетата и довели этим же растворителем объем раствора в колбе до метки.

Тщательно перемешали содержимое, перенесли в 3 пробирки по 0,25 мл полученного раствора, прибавили по 2 мл 20 раствора никотиновой кислоты в 25% растворе гидроксида калия, пробирки нагрели на кипящей водяной бане до испарения этилацетата, 5

После охлаждения в пробирки внесли по

0,15 мл уксусной кислоты, содержимое пробирок перенесли в мерные пробирки на 10 мл и смыли остатки с помощью 40% этанола в мерные пробирки. Общий объем довели этим же этанолом до 5 мл, перемещали и измеряли поглощение на спектрофотометре при 510 нм, В расчетах использовали средние значения из 3 измерений. Параллельно проводили определение со стандартным раствором БХФК с известной концентрацией. Раствором сравнения служила смесь реактивов, без исследуемого вещества, используемая для получения окрашенного раствора БХФК.

Концентрацию анализируемого вещества Сх (в %) рассчитывали по формуле:

Ох Сст а 100

Сх

Ост p где Dx — поглощение анализируемого раствора; равное 0,29;

Ост — поглощение стандартного раствора БХФК. 100% чистоты равное 0,30;

С вЂ” концентрация стандартного раствора, равная 0,00025 г/мл; а — разведение препаратов, равное

1:500; р — навеска анализируемого препарата—

0,1260 г.

Расчет показал, что во взятой навеске содержится 95,87% БХФК.

Пример 2. Определение БХФК по глутаконовому альдегиду. Навеску 0,0220 r

БХФК внесли в мерную колбу вместимостью

25 мл, растворили в 10 мл этилацетата и довели этим же растворителем содержимое колбы до метки. После перемешивания отобрали по 1 мл раствора в 3 пробирки, прибавили по 2 мл 20% раствора никотиновой кислоты в 25% растворе гидроксида калия и нагревали пробирки на кипящей водяной бане до испарения этилацетата. После охлаждения к содержимому пробирок прибавили по 0,15 мл уксусной кислоты и по 3 мл

40% этанола, размещали и перенесли раствор в мерные колбы вместимостью 25 мл, довели объем содержимого колб до метки, перемешали и измерили поглощение раствора при 365 нм, В расчетах использовали средние значения результатов из 3 измерений, Параллельно проводили определение со стандартным раствором БХФК, Раствором сравнения служила смесь реактивов без исследуемого вещества.

Концентрацию анализируемого вещества (в %) рассчитывали но формуле, приведенной в примере 1, Концентрация стандартного раствора равна 0,00004 г/мл;

1832188

Составитель Е.Воробьева

Техред М.Моргентал . Корректор М.Андрушенко

Редактор

Заказ 2607 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101

Поглощение анализируемого раствора равно 0,59;

Поглощение стандартного раствора равно 0,69;

Разведение растворов равно 1:625;

Концентрация БХФК во взятой навеске равна 97,16 .

Пример 3. Определение содержания

БХФК в смеси с гормоноцитостатиком кортифеном. Навески 0,0204 г БХФК и 0,9520 г кортифена внесли в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворили в 20 мл этилацетата и довели этим же растворителем содержимое колбы до метки. После перемешивания в 3 пробирки из колбы отобрали по

1 мл полученного раствора, прибавили по 2 мл 20 раствора никотиновой кислоты в

25ф растворе гидроксида калия и нагревали пробирки на кипящей водяной бане до испарения этилацетата. После охлаждения в пробирки внесли по 0,15 мл уксусной кислоты, перенесли содержимое в мерные пробирки на 10 мл и смыли остатки с помощью

40 этанола в мерные пробирки; общий объем довели этим же этанолом до 5 мл, перемешали и измерили поглощение на спектрофотометре при 510 нм. В расчетах использовали средние значения результатов из 3 измерений. Параллельно проводили определение со стандартным раствором

БХФК с известной концентрацией. Раствором сравнения служила смесь реактивов без исследуемого вещества.

Содержание БХФК (в r) рассчитывали

Ох Сст а по формуле: Хт—

Ост

Поглощение анализируемого раствора равно 0,198:

Поглощение стандартного раствора равно 0,20;

Концентрация стандартного раствора равна 0,00016 гlмл;

5 Разведение равно 1:125;

Содержание БХФК равно 0,0198 r, что соответствует 97,05 от взятой навески, Результаты определения БХФК, полученные в примерах 1-3,имеют хорошую

10 сходимость, что свидетельствует о правильности полученных результатов.

Формула изобретения

Способ количественного определения

15 вещества, содержащего хлоралкильные группы, заключающийся в том, что готовят пробу образца, добавляют к пробе производное пиридина в водном растворе щелочи. нагревают полученный раствор, 20 охлаждают его и фотометрируют, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью возможности селективного определения и-бис-(P-хлорэтил)-аминофенилуксусной кислоты в присутствии цитостатиков — производных п-бис-ф.

25 хлорэтил)-амина, а также увеличения точности определения, пробу готовят, растворяя анализируемое вещество в этилацетате, добавляют в качестве производного пиридина

207ь-ный раствор никотиновой кислоты в

30 25 -ном растворе гидроксида калия до концентрации никотиновой кислоты в фотометрируемом растворе 8, а полученный раствор нагревают на кипящей водяной бане до удаления этилацетата, затем добавля35 ют уксусную кислоту и этанол до концентрации 3 уксусной кислоты и 20257; этанола в фотометрируемом растворе и фотдметрируют раствор при 510 нм.