Штамм вируса эфемерной лихорадки крупного рогатого скота для контроля иммуногенности вакцины

 

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии Целью изобретения яапяется штамм вируса эфемерной лихорадки крупного рогатого скота для контроля иммуногенности вакцины Цель достигается использованием штамма вируса эфемерной лихорадки крупного рогатого скота ВГНКИ N 80. Штамм вызывает у крупного рогатого скота буйволов и сайгаков заболевание с характерными для эфемерной лихорадки признаками. Выращивается на перевиваемой линии клеток ВНК-21.

ОТА ДЛЯ ется на перевиваемой ликии клеток ВНК-21.

1839188

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и представляет собой новый штамм вируса эфемерной лихорадки.

Известно несколько штаммов вируса эфемерной лихорадки (ЭЛ) в зарубежных странах: в Южной Африке выделены штаммы В 57; 73/1 (Theodoridis et al,//

Onderstepoort J, Vet. Res. — 1973, 40, 3, 7782), в Японии — Ymaguchy (inaba// Bull. Off, Int. Eplz. — 1973, 79, 627-673).

Эти штаммы вируса ЭЛ вызывают заболевание с характерными для ЭЛ признаками, но не размножаются без предварительной адаптации в культуре клеток. Для адаптации их к культуре клеток требуется предварительное размножение в мозгу односуточных мышей, а затем 2-3кратное пассирование в культуре клеток, После таких пассажей штаммы вируса теряют патогенность для KPC и становятся непригодными для контроля иммуногенности вакцин, Известен также штамм ВВ7721 (прототип) вируса ЭЛ, выделенный в Австралии (Tzipori// Austr. Vet, J. — 1975, 51, 5), Штамм ВВ7721, выбранный в качестве прототипа, патогенен для KPC и используется в качестве контрольного при испытании иммуногенности вакцины против эфемерной лихорадки, Недостатком штамма является то, что он не размножается в культурах клеток, нестабилен, хранится в виде вирулентной крови в жидком азоте и это усложняет его транспортировку.

B нашей стране до настоящего времени не был выделен еирулентный и иммуногенный штамм вируса ЭЛ, что затрудняло разработку средств специфической профилактики этого заболевания.

Целью изобретения является получение вирулентного штамма для KOHTpoll$I иммуногенности вакцины против эфемерной лихорадки крупного рогатого скота, Цель достигнута путем выделения вируса на крупном рогатом скоте от больных животных в период эпизоотии эфемерной лихорадки в Монголии, проведения 5 последовательных пассажей на телятах 8-10-месячного возраста и адаптации к культуре клеток ВНК-21.

Полученный штамм М 80/M имеет преимущества перед известными зарубежными штаммами в том, что обладает более высокой патогенностью для крупного рогатого скота, что проявляется более коротким инкубационным периодом и более длительным течением заболевания, более выраженными клиническими признаками.

Кроме того, в отличие от аналогов и прототипа, новый штамм без адаптации размножается в культуре клеток и может храниться

55 в лиофилизированном состоянии при температуре 4 С.

Штамм N 80/M хранится в коллекции лаборатории "Музейные штаммы микроорганизмов" Научно-исследовательского сельскохозяйственного института и имеет следующую характеристику.

Морфологические свойства. Вирус штамма М 80/M представлен частицами пулевидной формы. Средний диаметр основания вириона равен 90 нм, средняя длина—

140 нм. Вирус содержит P HK и имеет липидсодержащую мембрану с поверхностными шипиками, Толщина мембраны вириона 12 нм, высота поверхностных шипиков 16 нм, диаметр шипиков 5,5 нм, диаметр внутреннего компонента (РНК) 14 нм. Плавучая плотность в градиенте хлористого цезия равна 1,20 г/мл, Вирулентные свойства(Рьмь+ признак).

При внутривенном заражении крупного рогатого скота, буйволов и сайгаков в дозе

10000-20000 ТЦД5о вирус этого штамма вызывает резкий подъем температуры тела (до

40,7 — 42 С) на третьи-пятые сутки после введения, угнетение с отказом от корма, истечение из глаз, носа, иногда слюнотечение.

Через одни-двое суток после подъема температуры тела появляется хромота, больные животные обычно лежат и неохотно поднимаются. Часто ртмечают дрожание мышц эаднебедренной группы или всего тела.

Культуральные свойства. Вирус штамма

М 80/М выращивается в культуре клеток

ВНК-21, вызывает хорошо выраженное цитопатогенное действие (ЦПД) на 3 — 6 сут после заражения. В стационарных культурах клеток ВНК-21 вирус накапливается в титрах 10 -10 ТЦДьо/см, а в роллерных культурах клеток ВНК-21 в титрах10 — 10

ТЦД5о/см . Размножается без предварительной адаптации, вызывает ЦПД в культурах клеток Чего и CV (TCvего + ТСсч + признаки) и способен размножаться при температуре 41 С (rct4> + признак), Антигенные свойства. При подкожном и внутривенном введении крупному рогатому скоту вызывает образование вируснейтрализующих, комплементсвязывающих и преципитирующих антител (Ag + признак).

Иммуногенные свойства. Штамм в дозе

1000 ТЦД5о создает стойкий иммунитет у телят (lm + признак).

Сохраняемость. B нативном состоянии вирус штамма М 80/М не снижает своей активности в течение 14 дней при 4 2 С в лиофилиэированном виде в присутствии 3 пептона, 2 $ лактозы и 0,1 поливинилпирролидона, его активность остается на исход88

Ф о р м у л а и э о б р е т е н и я крупного рогатого скота ВГНКИ N 80 для

Штамм вируса эфемерной лихо контроля иммуногенности вакцины.

J !

Редактор

Заказ 3404

Составитель Е, Гусева

Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор С. Юско

Тираж Подписное

НПО "Поиск" Роспатента

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

5 18391 ! ном уровне при 4 +. 2 С в течение 12 месяцев, при минус 40 — 70 С 3 года.

Заявляемый штамм успешно использовался в межведомственных комиссионных испытаниях по проверке напряженности и длительности иммунитета у крупного рогатого скота, привитого сухой культуральной вирусвакциной против эфемерной лихорадки.

Пример. Для непосредственного 10 использования лиофилизированный вирус заявляемого штамма разводят физраствором 1:10 и титрованием в культуре клеток

Чего или ВНК-21 определяют его биологическ ю активность(она должна быть не менее 15

10 ТЦДцо/смз) и затем вводят его по 2 см внутривенно вакцинированным и контрольным животным; В ответ на введение вируса у контрольных (невакцированных) животных развивается на 4 — 6 сут. заболевание с выраженными, характерными для эфемерной лихорадки клиническими признаками (гипертермия, угнетение с отказом от корма, хромота, дрожание мышц заднебедренной группы или всего тела). 25

Для получения очередной серии вирулентного вируса берут двух телят 8-12-месячного возраста и заражают их

1 ! внутривенно вирулентным вирусом пред- 30

ылущей серии. На высоте температурной р:кции от телят берут кровь в раствор гепарина из расчета 2 ед его на 1 мл крови, ее быстро охлаждают до 4 С и вносят по 5 см в 3 — 4 матраса с монослойной культурой кле- 35

1 ток ВНК-21, в которые после удаления среды роста и ополаскивания раствором

Хенкса вносят по 50 см поддерживающей э среды.

После двухчасового контакта при 37

2 С инокулят удаляют, монослой трехкратно промывают раствором Хенкса и заливают

100 см поддерживающей среды Игла с 1 f, сыворотки крупного рогатого скота. Матрасы продолжают. инкубировать при 37 + 2 C до появления ЦПД на 4 — 6 сутки. При поражении 60 — 70ф, клеток вируссодержащий материал собирают и заражают им сосуды с круговым монослоем. Культуральную вируссодержащую жидкость, разведенную 1. 10 поддерживающей средой, вносят по 300 см в трехлитровые сосуды с круговым монослоем культуры клеток BHK-21, из которых удалена ростовая среда. Сосуды герметически закрывают резиновыми пробками и помещают в роллерный аппарат, Выращивание вируса проводят при 37 ++

2 С при скорости вращения сосудов 10-12 об/ч. Сбор вируссодержащего материала иэ сосудов проводят через 3 — 6 сут. при поражении клеточного монослоя на 80 — 90 (,, Полученный вируссодержащий материал смешивают со стабилизирующей средой, состоящей иэ Зф, пептона, 2 лактоэы и .

0,1 поливинилпирролидона, и лиофилизируют, Вирулентный штамм М 80/М вируса ЭЛ депонирован под N. 80 в ВГНКИ. Штамм может быть использован для контроля иммуногенности вакцины против эфемерной лихорадки. (56) Tripori S. et al. Studies on the

development of a vaccine against bovine

ephemeral fever. Austr. Vet, J. — 1975, 51, р,5,

Штамм вируса эфемерной лихорадки крупного рогатого скота для контроля иммуногенности вакцины Штамм вируса эфемерной лихорадки крупного рогатого скота для контроля иммуногенности вакцины Штамм вируса эфемерной лихорадки крупного рогатого скота для контроля иммуногенности вакцины 

 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано для профилактики эпидемического вируса

Изобретение относится к вирусологии, точнее к способам концентрирования вирусов, и может быть использовано при изучении их физико-химических и биологических свойств, при создании средств специфической профилактики и диагностики вирусных инфекций сельскохозяйственных животных

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и представляет собой штамм нового серотипа энтеровирусов свиней, используемый для диагностики энтеровирусного гастроэнтерита свиней

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и представляет собой штамм нового серотипа энтеровирусов свиней, используемый для диагностики энтеровирусного гастроэн- ,терита свиней

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и представляет собой вирусвакцину из аттенуированного штамма вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней для перорального применения
Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к аттенуированным штаммам вируса трансмиссивного гастроэнтерита (ТГС), и может быть использовано для изготовления вакцины против трансмиссивного гастроэнтерита свиней в научно-исследовательских учреждениях и на предприятиях биологической промышленности

Изобретение относится к генной инженерии и касается векторов, содержащих дефектный вирусный геном, который экспрессирует антиген, пригодный для индукции секреторного и системного иммунных ответов, или антитело, обеспечивающее защиту против инфекционного агента
Изобретение относится к области биотехнологии
Наверх