"питательная среда "бактофет" для культивирования бифидобактерий"

 

Использование: биотехнология, питательная среда, ростовая активность, культивирование бифидобактерий. Сущность способа: мышечную ткань плодов коров (свиней, овец), являющуюся отходом производства сыворотки крови, подвергают легкому ферментативному гидролизу медицинским панкреатином или гомогенатом поджелудочной железы свиньи при 40 - 20°С в щелочной зоне рН 7.7 - 8.0 в течение 4 - 5 сут в присутствии хлороформа с последующим прогреванием при 90° С в течение 5 - 10 мин. осаждением из надосадочнсй жидкости высокомолекулярных соединений в изоэлектрич ской точке белка с последующим высушиванием препарата. Полученный препарат - основа питательной среды Бактофет для культивирования бифидобактерий содержит следующие компоненты, мас.%: лактоза 0,95 - 1.00; натрий хлористый 0,45 - 0,50, агар-агар 0,065 - 0.070; раствор ферментативного гидролизата мышечной ткани плодов коров 6-и 8-месячного возраста и/или свиней 2,5 - 3-месячного возраста, и/или овец последних сроков суягности с конечной концентрацией аминного азота 100-140 мг% остальное. Питательная среда проста в изготовлении, содержит доступные отечественные компоненты и не требует дорогостоящего оборудования для своего производства, обеспечивает рост и развитие различных штаммов бифидобактерий в титрах, несколько превышающих титры эталонной среды Блаурока 5 табл.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ

К ПАТЕНТУ

Комитет Российской Федерации по патентам и товарным знакам (21) 4943685/13 (22) 16.05.91 (46) 15.1193 Бюл. Ив 41 — 42 (71) Научно-производственный центр медицинской биотехнологии (72) Ермишина И.Г„Власова Т.Ф.; Лизько Н.Н„Егоров Б.Б.; Ермолин ГА; Попова НА; Лукина Н.Н. (73) Научно-производственный центр медицинской биотехнологии (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА "БАКТОФЕТ" ДЛЯ

КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БИФИДОБАКТЕРИЙ (57) Использование: биотехнология, питательная среда, ростовая активность, культивирование бифидобактерий. Сущность способа: мышечную ткань плодов коров (свиней, овец), являющуюся отходом производства сыворотки крови, подвергают легкому ферментативному гидролизу медицинским панк— реатином или гомогенатом поджелудочной железы свиньи при 40- 20 С в щелочной зоне рН 7,7 — 8,0 в течение 4 — 5 сут в присутствии хлороформа с (193 RU (11) 20О28О1 С1 (5Ц 5 C 12 N 1 20 последующим прогреванием при 90 С в течение 5 — 10 мин, осаждением из надосадочной жидкости высокомолекулярных соединений в изоэлектричес— кой точке белка с последующим высушиванием препарата. Полученный препарат — основа питательной среды "Бактофет" для культивирования бифидобактерий содержит следующие компоненты, мас.%: лактоза 0,95 — 1.00; натрий хлористый 0,45—

0,50; агар-агар 0,065 — 0,070; раствор ферментативного гидролизата мышечной ткани плодов коров б-и 8-месячного возраста и/или свиней 2,5 =

3 — месячного возраста. и/или овец последних сроков суягности с конечной концентрацией аминного азота 100 — 140 мг% остальное. Питательная среда проста в изготовлении, содержит доступные отечественные компоненты и не требует дорогостощего оборудования для своего производства, обеспечивает рост и развитие различных штаммов бифидобактерий в титрах, несколько превышающих титры эталонной среды Блаурока. 5 табл.

2002801

25

55

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологической промышленности, в частности к созданию новой питательной среды (ПС) "Бактофет", предназначенной для выращивания бифидобактерий, которые используются при получении медицинского препарата — бифидумбактерина, Известна питательная среда для выращивания бифидобактерий, которая содержит, г: пептон 8 — 9 лактозу 9 — 10

1=цистеин солянокисл ый 0,1 — 0,2 питательный бульон сухой 12-13 экстракт кормовых дрожжей 7 — 8 аминокровин 150 — 160 агар-агар 0,70 — 0.80 дистиллированную воду до 1 л

Однако данная среда многокомпонентна, содержит трудноподдающиеся стандартизации ингредиенты (пептон, экстракт кормовых дрожжей), что существенно снижает воспроиэводимость результатов, Недостатком этой ПС также является сложная технология приготовления, дорогостоящие ингредиенты, дефицитные пищевые продукты. В условиях биотехнологического производства при использовании больших . количеств ПС для получения микробной,биомассы такая среда нерентабельна.

Известна также модифицированная питательная среда Блаурокка, предназначенная для выращивания бифидобактерий, содержащая, г/n: печеночный отвар 1л натрий хлористый 5 пептон сухой 10 -цистин (по ТУ 6-09-3252-80) 0,1 агар-агар 0,75 рН 7,2-7,4

Приведенная питательная среда также является многокомпонентной, содержит печеночный отвар. источник сырья которого нестандартизован и является дефицитным пищевым продуктом, Технология приготовления питательной среды сложна и в условиях биотехнологического производства такая среда нерентабельна.

Задачей данного изобретения является создание новой дешевой, унифицированной питательной среды "Бактофет" с повышенной ростовой активностью.

Сущность данного изобретения заключается в том, что питательная среда "Бактофет" для культивирования бифидобактерий в качестве питательной основы содержит ферментативный гидролизат мышечной ткани плодов коров 6- и 8-месячного возраста и/или свиней 2,5 — 3-месячного возраста и/или овец последних сроков суягности при следующем соотношении компонентов, t430, /о: лактоза 0,95 — 1,00 натрий хлористый 0,45 — 0,50 агар-агар 0,065 — 0,070 ферментативный гидролизат мышечной ткани плодов коров 6 — 8-месячного возраста и/или свиней 2,5 — 3 — х месячного возраста и/или овец последних сроков суягности с конечной концентрацией аминного азота 100 — 140 мг/, остальное

Ферментативный гидролизат мышечной ткани плодов коров и/или свиней и/или овец получают путем ферментативного расщепления мышечной ткани последних медицинским панкреатином, взятым в количестве 2,0 об, /, или гомогенатом поджелудочной железы свиньи, взятым в количестве

10 — 15 об. /,, в присутствии хлороформа при

40 — 42 С в щелочной зоне рН 7;6 — 8,0 в течение 4 — 5 сут с последующим прогреванием биомассы при 90 С в течение 5 — 10 мин, осаждением высокомолекулярных соединений в иэоэлектрической точке белка, фильтрованием полученного препарата и высушиванием.

Пример 1, Получение ферментативного гидролизата мышечной ткани плодов коров 6-8-месячного возраста.

Мышечную ткань плодов коров 6-8-месячного возраста разбавляют дистиллированной водой в обьемном соотношении

1:1,5 и подвергают гидролиэу с помощью медицинского панкреатина (МРТУ 42594684), взятого в количестве 2 об. /, или гомогената поджелудочной железы свиньи, взятого в количестве 10 об. /. Процесс ведут в присутствии 3 об. / хлороформа при 4042 С в щелочной зоне рН 7,6 — 8,0 в течение

4 — 5 сут. Гидролиз прекращают прогреванием реакционной массы при 90 С в течение

5 — 10 мин, при этом коагулируют и выпадают в осадок нераэгидролизованные белки. Оставшиеся в надосадочной жидкости высокомолекулярные соединения осаждают в изоэлектрической точке белка, надосадочную жидкость фильтруют, затем подвергают высушиванию методом распыления. Режим высушивания (на входе 150 — 160 С и на выходе 90-95 С) обеспечивает получение сухого препарата с остаточной влажностью не более 2,5 — 3 /. Полученный ферментативный гидролиэат имеет следующие физикохимические характеристики:

2002801

0,45 — 0,55 рН 1%-ного раствора 6,2-7,2 растворимость, % не менее 5,0 массовая доля влаги, % не более 2,5-3,0 массовая доля общего азота, % в пределах 10 — 11 массовая доля аминного азота, % в пределах 4,5-5,5 аминный коэффициент

N (общий } коэффициент протеоN остат, 0.9-1,0

1 ч общ. аминокислотный состав 1%-ного раствора полученного ферментативного гидролизата, мг;%:,изопейцин 16,2; лейцин 28,5; валин 18,4; треонин 21,8; серин 26,5; метионин 9,5; тирозин 13,5; фенилаланин 13,2; цист(е)ин 18,9; аспарагиновая кислота 19,7; глутаминовая кислота 35,3; пролин 20,1; глицин 5,5; аланин 20,2; лизин 20,5; гистидин

8,5; аргинин 29,5; триптофан 5,0; полипептиды, мол. м. (в дальтонах) по электрофорезу

37000-24000, 6000-5500, Пример 2. Получение ферментативного гидролизата мышечной ткани плодов свиней 2,5 — 3-месячного возраста.

Мышечную ткань плодов свиней 2,5 — 3месячного возраста измельчают, разбавляют дистиллированной водой в объемном соотношении 1 1,5 и подвергают гидролизу с помощью медицинского панкреатина (МРТУ 425946-84), взятого в количестве 2 об.% или гомогената поджелудочной железы свиньи, взятого в количестве 15 об,%.

Процесс ведут в присутствии хлороформа при 40-42 С в щелочной зоне рН 7,6-8,0 в течение 4 — 5 сут. Гидролиз прекращают прогреванием реакционной массы при 90 С в течение 5 — 10 мин, при этом коагулируют и выпадают в осадок неразгидролизованные белки. Оставшиеся в надосадочной жидкости высокомолекулярные соединения осаждают в изоэлектрической точке белка, надосадочную жидкость фильтруют, затем подвергают высушиванию методом распыления. Режим высушивания (на входе 150—

160 С и на выходе 90 — 95 С) обеспечивает получение сухого препарата с остаточной влажностью не более 2,5 — 3%. Полученный ферментативный гидролизат имеет следующие физико-химические характеристики; рН 1%-ного раствора 6 2 — 7,2 растворимость, % не менее 5,0 массовая доля влаги, % не более 2.5-3,0 массовая доля общего

55 азота, % в пределах 10-11 массовая доля аминного азота, % в пределах 4.5-5,5 аминной коэффициент

М(аминныи )

0,45-0,55

N (общий ) коэффициент протеолиза

N остат.

0,9-1,0

N общ. аминокиспотный состав 1%-ного раствора ферментативного гидропизата, мг%; изопейцин 15,1; лейцин 25,4; валик 19,2; треонин 24.4, серин 26,2; метионин 10,2: тирозин 12,5; фенилаланин 13,0; цист(е)ин

20,0; аспарагиновая кислота 19,9; глутаминовая кислота 34,7; пролин 20,5; глицин 5,6; алании 20,9; лизин 19,8; гистидин 8,9; аргинин 30,2; триптофан 4,9; полипептиды, мол,м. (в дальтонах) по элсктрофорезу

37000-24000, 6000-5500.

Пример 3. Получение ферментативного гидролизата мышечной ткани плодов овец последних сроков суягности.

Мышечную ткань плодов овец последних сроков суягности измельчают, разбавляют дистиллированной водой в объемном соотношении 1;1,5 и подвергают ферментативному гидролизу и высушиванию полученного препарата в условиях, описанных в примере 2. Физико-хил;ические характеристики полученного ферментативного гидролизата находятся в пределах, указанных в примерах 1 и 2 для ферментативного гидролизата мышечной ткани плодов коров 6 — 8-месячного возраста и для ферментативного гидролизата мышечной ткани плодов свиней 2,5-3-месячного возраста соответственно. Аминокислотный состав

1%-ного раствора ферментативного гидролиэата мышечной ткани плодов овец последних сроков суягности следующий. мг%: изолейцин 16,4; лейцин 27,9; валин 17,9; треонин 23,1; серин 25,9; метионин 9,0; тирозин 13,2; фенилаланин 12.9; цист(е)ин

19, 1; аспарагиновая кислота 20,0; глутаминовая кислота 33,8; пролин 19,9; глицин 6,0; аланин 20.5; лизин 20,3; гистидин 7,9; аргинин 31,4; триптофан 5,2; полипептиды, мол,м, (e дальтонах) по электрофорезу

37000-24000, 6000-5500.

Пример 4. Получение ферментативного гидролизата мышечной ткани плодов коров 6 — 8-месячного возраста и плодов свиней 2.5-3-месячного возраста.

Мышечную ткань плодов коров 6-8-месячного возраста и плодов свиней 2,5-3-месячного возраста измельчают, разбавляют дистиллированной водой в объемном соотношении 1:1,5 и подвергают ферментативному гидролизу и высушиванию препарата

2002801

20

30

50 в условиях, описанных в примере 2. Физико-химические характеристики полученного ферментативного гидролизата находятся в пределах, указанных в примерах 1 и 2 для ферментативных гидролизатов, полученных по этим примерам.

Пример 5. Получение ферментативного гидролизата мышечной ткани плодов свиней 2,5 — 3-месячного возраста и плодов овец последних сроков суягности.

Мышечную ткань плодов свиней 2,5—

3-месячного возраста и плодов овец последних сроков суягности измельчают, разбавляют дистиллированной водой в объемном соотношении 1:1,5 и подвергают ферментативному гидролизу и высушиванию препарата в условиях, описанных в примере 2. Получают продукт, физико-химические характеристики которого находятся в пределах, указанных в примерах 1 и 2 для ферментативных гидролизатов, полученных по этим примерам.

Пример 6. Подбирают концентрацию ферментативного гидролизата мышечной ткани плодов коров и/или свиней и/или овец. обеспечивающую оптимальные условия жизнедеятельности бифидобактерий на примере производственного штамма

B.bifidum 1. Результать| исследования представлены в табл. 1.

Пример 7. При выбранной в примере

6 концентрации ферментативного гидролизата подбирают концентрации компонентов питательной среды "Бактофет", обеспечивающие оптимальные условия жизнедеятельности бифидобактерий на примере производственного тест-штамма

В.ЬИЫов 1, Результаты исследований представлены в табл, 2 и 3.

Как видно из данных табл. 1, 2 и 3, ростстимулирующие свойства питательной среды "Бактофет" на питательной основе (ПО) из ферментативного гидролизата мышечной ткани плодов коров и/или свиней и/или овец при концентрации аминного азота

100-140 мг /, несколько превышают ростстимулирующие свойства ПС Блаурокка.

Изменение концентраций остальных компонентов в питательной среде "Бактофет " в указанных в формуле изобретения пределах не влияют на ростовые свойства исследованного вида бактерий.

Пример 8. Исследуют возможность использования ферментативных гидролизатов (ФГ), полученных согласно примерам 1, 2 и 3 из различных видов сырья, с установленным в примере 6 диапазоном аминного азота (100-140 мг%) для выращивания бифидобактерий на примере тест-штамма

В.bifidum производственный 1. Результаты и редста вл ен ы в табл, 4.

Из данных табл, 4 следует, что использование ФГ на основе различных видов животного сырья обеспечивает рост бифидобактерий в титрах, несколько превышающих контрольные данные.

Пример 9. Изучена возможность применения ПС "Бактофет" для культивирования различных видов и штаммов бифидобактерий при оптимальных концентрациях питательной основы. Состав ПС "Бактофет" идентичен составу, приведенному в примере 6. Результаты представлены в табл. 5.

Как видно из данных табл, 5, ПС "Бактофет" обеспечивает рост и развитие различных штаммов бифидобактерий в титрах, несколько превышающих титры, полученные в эталонной среде Блаурокка, Пример 10. Проведено изучение влияния ПС "Бактофет", состав которой представлен в примере 6, на культуральноморфологические признаки штаммов Производственный N 1, 791, ЛВА-3. Показано, что при различных концентрациях питательной основы от 140 до 100 мг% сохраняются типичные культурально-морфологические особенности различных видов и штаммов

В,bifidum, В мазках из культур, выросших в высоком столбике полужидкой ПС "Бактофет". микробы представляют собой грамположительные палочки, характерным признаком которых является раздвоение концов. Часто палочки образуют скопления, напоминающие китайские иероглифы или оленьи рога. При выращивании на полужидкой ПС "Бактофет" при 37,5 — 38 С микробы вызывают в первые сутки неравномерное помутнение, а через 2 — 3 сут формируются палочки микроорганизмов в виде гвоздиков, комет, находящихся во взвешенном слое, с четким обозначением "стерильной зоны", Таким образом, описываемая питательная среда "Бактофет" содержит стандартизованный легкодоступный ферментативный гидролизат отходов производства сыворотки крови — плодов коров или свиней, или овец при получении каракульчи, имеющихся в достаточно больших количествах на крупных мясокомбинатах и на заготовительных пунктах получения каракульчи, что позволяет получать описываемую питательную основу для нужд микробиологического производства в больших количествах (десятки тонн), унифицируя условия получения медицинского препарата бифидумбактерина, Описываемая питательная среда проста в изготовлении, содержит доступные отечественные компоненты и не требует дорогостоя щего оборудования для своего

2002801

Та блица 1

Содержание бифидобактерий в ПС "Бактофет" при соотношении лактозы, натрия хлористого и агар-агара, мас.%: 0,975, 0,475 и 0,068 соответственно в сравнении с эталонной ПС Блаурокка

П р и м е ч а н и е. Данные по выращиванию бифидобактерий представлены в виде усредненных значений для ферментативных гидролизатов всех видов сырья и их смесей, Таблица 2

Содержание бифидобактерий в ПС "Бактофет" при соотношении лактозы, натрия хлористого и агар-агара, мас. : 0,95, 0,45 и 0,065 соответственно

Таблица 3

Содержание бифидобактерий в ПС "Бактофет" при соотношении лактоэы, натрия хлористого и агар-агара, мас.%. 1,00, 0,50 и 0,070 соответственно производства. Кроме того, данная питательная среда обеспечивает рост и развитие различных штаммов бифидобактерий в титрах, несколько превышающих титры эталонной среды Блаурокка, (56) Авторское свидетельство СССР

N. 1513029, кл. С 12 К 1/20, 1988.

Лизько Н,Н., Шилов В.М. Лабораторное дело, 1979, М 7. с. 430 — 433.

2002801

Таблица4

Содержание бифидобактерий в ПС "Бактофет", полученной на основе ферментативных гидролиэатов из различных видов сырья при соотношении лактоэы, натрия хлористого и агарагара, мас.%: 0,975, 0,475 и 0,068 соответственно

Таблица 5

0,95 - 1,00

0,45 - 0,50

0,065 - 0.070

Формула изобретения

Остальное

Составитель В. Романова

Редактор В, Трубченко Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор M. Самборская

Тираж Подписное

НПО "Поиск" Роспатента

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Заказ 3216

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Питательная среда для культивирования бифидобактерий, содержащая питательную основу, лактоэу, натрий хлористый, агар-агар, отличающаяся тем, 10 что в качестве питательной основы используют ферментативный гидролизат мышечной ткани плодов коров 6 - 8- и месячного возраста, и/или свиней 2,5 - 3- месячного возраста, и/или овец последних сроков су- 15 ягности при следующем соотношении компонентов, мас,, :

Лактоза

Натрий хлористый

Агар-агар

Ферментативный гидролиэат мышечной ткани плодов коров 6

- 8-месячного возраста, и/или свиней 2,5 - 3-месячного возраста, и/или овец последних сроков суягности с конечной ко нцентрацией аминного азота

100 - 140 мг. ф,

питательная среда бактофет для культивирования бифидобактерий питательная среда бактофет для культивирования бифидобактерий питательная среда бактофет для культивирования бифидобактерий питательная среда бактофет для культивирования бифидобактерий питательная среда бактофет для культивирования бифидобактерий питательная среда бактофет для культивирования бифидобактерий 

 

Похожие патенты:
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к производству вакцинных препаратов

Изобретение относится к биотехнологии и может найти применение при получении диагностических и профилактических препаратов против болезней рыб, вызываемых аэромонадами

Изобретение относится к области биотехнологии и органической химии, к способам получения изотопомодифицированных природных соединений, а именно: L--аминокислот, и может найти применение в экспериментальной биологии, медицине, ветеринарии, сельском хозяйстве

Изобретение относится к микробиологии и касается получения нового штамма бактерий, пригодного для очистки почвы, пресной и морской воды от нефти и нефтепродуктов в течение 7-14 суток, в широком диапазоне температур 12-30oC

Изобретение относится к медицинской микробиологии и иммунологии, в частности, к разработке, производству и контролю качества живых сибиреязвенных вакцин

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике коклюша
Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается нового штамма бактерий, используемых для биологической утилизации формальдегида, а также сопутствующих ему метанола и формиата в сточных водах химических производств (нефтехимзаводы, производства карбамидных смол, пластмасс и т.д.)
Наверх