Штамм бактерий yersima pestis - тест-объект в генетических и микробиологических исследованиях

 

Использование: микробиология штамм, антибиотики , вирулентность, генетические исследования, чума Сущность изобретения: высоковирулентный стрептомицини полимиксинустойчивый штамм чумногомикробаUersiniapesfis A-132Strr, plmrKM 936 выделен от больного чумой в процессе лечения стрептомицином и используется как текст-объект для расшифровок механизма резистентности к упомянутым антибиотикам и высокой вирулентности возбудителя. Особенность штамма - высокая устойчивость к стрептомицину (растет на средах в концентрации 5 тысед) и полимкксина (растет на средах в концентрации 500 ед/мл). A-132Strr, pirn может быть применен также в качестве контрольного заражения для установления степени поствакционного и постинфекционного иммунитета у экспериментальных животных

(В) RU (11) 2 (51) 5 C12N1 20

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ

К ПАТЕНТУ

Комитет Российской Федерации по патентам и товарным знакам (21) 5009357/13 (22) 24.07.91 (4Е) 15.1193 Боп, Na 41-42 (76) Билялов Зияш Адилович; Силантьев Владимир

Викторович; Степанов Владимир Михайлович; Айкимбаев Алим Мазгутович; Мартиневский Иван

Лукьянович; Дмитровский Андрей Михайлович; Сапожников Валерий Иванович (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ YERS(MA PEST|S—

TECT-ОБЪЕКТ В ГЕНЕТИЧЕСКИХ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ (57) Использование: микробиология, штамм, антибиотики, вирулентность, генетические исследования, чума Сущность изобретения: высоковирупентный стрептомицин- и полимиксинустойчивый IUTBMM чумного микроба Uersinia pesfis

А-132Str, ptrrI КМ=936 выделен от больного чумой в процессе лечения стрептомицином и используется как текст-объект для расшифровок механизма резистентности к упомянутым антибиотикам и высокой вирулентности возбудителя. Особенность штамма— высокая устойчивость к стрептомицину (растет на средах в концентрации 5 тысед.) и полимиксина (растет на средах в концентрации 500 ед/мл).

Г Г

А-132Str, plrrI может быть применен также в качестве контрольного заражения дпя установления степени поствакционного и постинфекционного иммунитета у экспериментальных животных.

2002802

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к генетике чумного микроба, в особенности к ее разделу о генетике лекарственной резистентности и патогенности.

Аналогов и прототипов изобретения, касающегося высоковирулентного и одновременно устойчивого к стрептомицину и полимиксину возбудителя чумы, выделенного от больного чумой в процессе лечения, не имеется. Целью изобретения является нахождение высоковирулентного стрептомицин- и полимиксинрезистентного штамма возбудителя чумы в процессе лечения больного чумой стрептомицином. пригодного для расшифровки устойчивости к упомянутым антибиотикам, изучении генетики вирулентности и для решения некоторых других, имеющих значение для противочумной практики.

В процессе лечения больного чумой выделен стабильный высоковирулентный стрептомицин- и полимиксинустойчивый штамм чумного микроба и обозначен как N

132 str" р1гп". Обозначение str р1гл дано согласно генетической терминологии, предлагаемой Демерек с соавторами.

Штамм А-132 зтг, plm" выделен 2 июня

1989 г. от больного чумой Сорокина А.Г. (возраст 53 года, сезонный дезинфектор).

Дезинфектор Сорокин А.Г. заболел утром 30 мая 1989 r. Госпитализирован вечером 31 мая с диагнозом: первично-септическая, осложненная вторично-легочной формой чумы (тяжелое течение) и было назначено специфическое (стрептомицин 1,0х4 раза в день внутримышечно (в/м), пенициллин 500 тыс.ед х 2 раза в/м), пенициллин 500 тыс,ед. х 2 раза в/м), а также симптоматическое лечение.

До начала лечения вечером 31 мая для бактериологического исследования были взяты кровь, мазок из зева. посев из проб, взятых "при кашле", и мокрота с заражением белых мышей и морских свинок накожным и подкожными методами, Через 14 ч после посева на агар Хоттингера с генцианвиолетом выделены культуры типичные для возбудителя чумы из мокроты и из пробы, взятой "при кашле", Однако эти культуры были высокочувствительные к стрептомицину и некоторым другим антибиотикам. Обладали природной устойчивостью к полимиксину, т,е. были

str, plm".

Штамм А-132 str", plm выделен от больного уже через сутки после лечения стрептомицином только иэ посева мокроты и аналогичные субкультуры (1. 2, 3 и 5) штамма

А-132 str", plm" были получены соответственно на протяжении пяти дней из мокроты при ежедневном заборе для бактериологического исследования, а также крови и содержимого из зева, Специфические антитела к фракции 1 появились с сыворотке на седьмой день заболевания, Проведенное лечение позволило снизить до нормальной температуру тела и улучшить общее состояние больного, Однако 3 июня температура вновь начала повышаться с резким ухудшением состояния больного. Проведенное предварительное определение чувствительности к стрептомицину у культуры, полученной после односуточного лечения, показало ее устойчивость к этому антибиотику, что и послужило заменой его лечения левомицетином(2млн ЕД всутки) и ампиоксом(2 млн

ЕД в сутки) внутривенно и внутримышечно).

20 Такое лечение оказалось эффективным (температура начала сначала снижаться и 6 июня прекратилось выделение культуры), Лечение закончили 18 июня 1989 г. Больной выздоровел.

Особенность штамма А-132 мг, plm"— высокая устойчивость к стрептомицину (растет на твердых и жидких средах с концентрацией этого препарата 5 тыс,ед/мл) и полимиксину (500 ед/мл). Штамм обладает

30 высокой чувствительностью к левомицетину, пенициллину, тетрациклину, хлортетрациклину, гентамицину, мономицину, рифампицину, минимальная подавляющая доза (МПД) которых-составляет 2-5 мкг/мл среды.

Штамм А-132 str", plm по своим культурально-морфологическим свойствам не отличается от типичных штаммов чумного микроба. Он хорошо растет на обычных пи40 тательных средах(бульон и агар Хоттингера, среда Мартена, обычный питательный агар, среда Эндо, дрожжевая среда, гидролизаты казеина и желатина), На всех этих средах растет в типичной шероховатости (Я) форме, 45 Оптимальная температура роста 27-28 С. минимальная (еле заметный рост на 3-е сутки) — +2 С, максимальная — +40 С. Диаметр колоний при изолированном росте на среде

Хоттингера на 2-3-е сутки 2-3 мм, на пятые

50 — 4-8 мм (при 28 С выращивания), В мазках грамотрицательные, биполярные палочки.

Высокочувствителен к диагностическим чумному, псевдотуберкулезному фагам и фагу Л-413 "С". Штамм ферментирует с образованием кислоты беэ газа глицерин, глюкозу, мальтозу, маннит, арабиноэу, маннозу, ксилозу; не ферментируетлактозу, сахароэу, рамнозу, дульцит, эритрит, мелибиоэу и целлобинозу. Дает отрицательные реакции денитрификации и нитрификации.

2002802

Составитель В. Романова

Редактор В. Трубченко Техред М.Моргентал Корректор A. Обручар

Тираж Подписное

НПО "Поиск" Роспатента

113035. Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Заказ 3216

Производственно-издательский комбинат "Патент". т. Ужгород, ул,Гагарина, 101

Имеет Р-галактоэидазу: реакция Фогес—

Проскауэра — положительная, не имеет фермента уреазы, оксидазы, редуктазы, амилаэы, декарбоксилазы лизина и дегидролазы аргинина, Желатин не разжижает, не расщепляет малоната и тартрата натрия, На среде Джексона-Бэрроуза растет в аиде популяций, состоящий из 1007 пигментированных (pgm ) колоний. Кальцийзависимый, Имеет обычные для возбудителя чумы три плазмиды. pPst, pCad(pVir) и pFra/Тох.

Каких-либо дополнительных плазмид не имеет, т.е, не установлено плазмидной природы устойчивости к стрептомицину и полимиксину.

Растет при 28 С на среде следующего химического состава, г: (минимальная среда, на которой вырастает большинство. природных штаммов чумного микроба): глюкоза

3: двузамещенный фосфорнокислый калий

7; однозамещенный фосфорнокислый калий

2; цитрат натрия 0,5; сернокислая магнезия

0,1; сульфат натрия 0,5; цистеин 0,05; фенилаланин 0,05; метионин 0,05; треонин 0,05 (аминокислоты в ДЛ-форме), дистиллированная вода — t л (в случае приготовления плотных питательных сред добавляется 30 г агар-arapa).

Для экспериментальной проверки заявляемого штамма в качестве изобретения были подготовлены плотные и жидкие среды

Хоттингера, содержащие различные концентрации трех серий стрептомицина и полимиксина, а именно с 5, 10, 100, 500, 1 тыс. и 10тыс, единиц в 1 мл среды. Посевы штаммов 132 str", plm" и 132 strs, pim проводили в дозе 10 и 10 микробных клеток и выращивали при 28 С на протяжении пяти суток, Уже через 18-24 ч отмечен обильный рост штамма 132 str", plm" на среде со стрептомицином в концентрации 10 — 10 ед/мл з плотной или жидкой среды Хоттингера. Через двое суток аналогичный рост был на

Формула изобретения

Штамм бактерий Yerslnia pestis А-1895 (KM.- 936) Ос.об - 132 Str, plm" - тест-объсреде с концентрацией 5 тыс. ед/мл стрептомицина и в меньшей степени — 10 ед/мл.

На этих средах штамм 132 str, plm не вырастал. Оба штамма давали рост на среде с

5 полимиксином в концентрации 5 — 500 ед/мл и не вырастали в более высокой дозе этого антибиотика, Проверку характера вирулентности проводили на морских свинках и белых мышах, Заражали подкожным методом

10 дозой 10 и 10 м,к. На каждую дозу штаммов 132 з1г plm и 132 stt plm были взяты по три морские свинки и 5 белых мышей, Морские свинки погибли на 7 — 12, а белые мыши — 3 — 8 сутки. Из крови и всех внутрен15 них органов выделен возбудитель чумы, Субкультуры штамма 132 str . plm", лишенные плазмиды кальцийзависимости, как v. аналогичные культуры других вирулентных штаммов чумного микроба, являются авиру20 лентными для лабораторных животных.

Выделенный штамм А-132 str", plm может служить тест-объектом для расшифровок резистентности возбудителя чумы к стрептомицину, полимиксину и генетике

25 его высокой вирулентности. Он может быть применен также в качестве контрольного заражения для установления степени . поствакционного и постинфекционного иммунитета экспериментальных животных.

30 Ценным фактом штамма, который должен учитываться при проведении лечения больного чумой стрептомицином, это быстрое появление (.- ереэ сутки после лечения) стрептомицинрезистентной культуры воз35 будителя чумы, Поэтому этот факт также свидетельствует о том; что, с целью проведения эффективного лечения больных чумой,- необходимо ежедневное бактериологическое обследование на чуму, а в случае

40 выделения культуры — определять чувствительность ее к стрептомицину и другим антибиотикам. (56) Авторское свидетельство СССР

N. 1712405, кл. С 12 N 15/00, 1989.

45 ект в генетических и микробиологических исследованиях.