Композиция для ферментативного гидролиза белков

 

Использование: медицина и ветеринария. Цель: повышение эффективности композиции и расширение спектра ее применения Сущность изобретения: композиция содержит, мас%: комплекс иммобилизованных на водорастворимом носителе бактериальных нейтральных и щелочных протеиназ из Baalus subtilis с активностью 12 - 750 ПЕ/мл 10 - 30, а в качестве наполнителя и носителя - полиэтиленгликоль с молм. 1500 «Да или гель на его основе 70 - 90. Композиция сокращает сроки лечения в среднем в 2 раза

Комитет Российской Федерации ио патентам и товариым чиакам

ОБИТ. .АНИЕ ИЗОБРЕКЕБИЯ "— тза)

Г4 (21) 5002609/14 (22) 31.07.91 (46) 30.11,93 Бюл. Ия 43 — 44 (71) Институт цитологии и генетики СО АН СССР (72) Салганик P.È.; Гончар A.M Троицкий A.Â. (73) Салганик Рудольф Иосифович (54) КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ФЕРМЕНТАТИВИОГО

ГИДРОЛИЗА БЕЛКОВ (57) Использование; медицина и ветеринария.

Цель: повышение зффективности композиции и расширение спектра ее применения. Сущность изобретения: композиция содержит, мас%: комплекс иммобилизованных на водорастворимом носителе бактериальных нейтральных и щелочных протеиназ из ВасЫ subtilis с активностью !2 — 750

ПЕ/мл 10 — 30, а в качестве наполнителя и носителя — полизтиленгликоль с моли 1500 кДа или гель на его основе 70 — 90. Композиция сокращает сроки лечения в среднем в 2 раза

2003346

Изобретение относится к области медицины и ветеринарии, а именно к препаратам для лечения гнойно-некротических заболеваний человека и животных.

Предложенная композиция включает иммобилиэованный на водорастворимом носителе комплекс нейтральных и щелочных протеиназ (ИКП) из ВасИЬФ subtlllls c активностью 12-750 ПЕ/г, а в качестве наполнителя полиэтиленгликоль с мол.м. 6002000 кДа или гель полиэтиленгликоля (ПЭГ-гель), взятые в оптимальных концентрациях.

Предлагаемая композиция для ферментативного гидролиза белков некротических тканей и гнойных масс содержит, мас, ;

Комплекс иммобилиэованных на водорастворимом синтетичес. R ком полимере нейтральных и щелочных протеиназ из Bacillus sub tillis с активностью 12-750 ПЕ/г 10-30

Наполнитель — полиэтиленгликоль или гель полиэтиленгликоля с мол.м.

600 — 2000 кДа 70-90

Полученная композиция представляет собой бесцветную вязкую жидкость беэ вкуса и запаха, растворимую в воде. Предлагаемая композиция может быть применена в любой области медицины и ветеринарии для лечения различных заболеваний, где необходим ферментативный гидролиз белков некротических тканей и гнойных масс.

Предлагаемая композиция была испытана в медицине, конкретно стоматологии для лечения среднего и глубокого кариеса зубов, пульпитов, периодонтитов, в пульмонологии для лечения бронхолегочных заболеваний, в хирургии для лечения гнойных ран различной этиологии, в офтальмологии для удаления непрозрачного слоя роговицы . при термических и химических ожогах для восстановления зрения, а также в ветеринарии для лечения послеродовых эндометритов у коров, Стоматология.

Биологическая препаровка зубов с использованием предлагаемой композиции выполнена у 45 больных, имеющих средний и глубокий кариес. Больному в первое посещение проводили оперативное раскрытие кариозной полости и вводили композицию в количестве 0,1-0,25 мл с активностью ИКП

50-100 ПЕ/мл под временную пломбу. Через сутки временную пломбу, гидролизованные избирательно некротические ткани и композицию удаляли и накладывали постоянную пломбу.

В больш инстве случаев (39 больных или

86,6 ) для получения четкого клинического эффекта достаточно было сднократного введения композиции, содержащей ИК с ак5 тивностью 50-100 ПЕ/мл.

При использовании ИКП в дозе меньше

50 ПЕ/мл возникала необходимость повторного введения композиции для доочищения кариозной полости зубов, а при использова10 нии же дозы больше 100 ПЕ/мл возможны побочные эффекты (например, болевой синдром).

Заявляемая композиция имеет преимущество перед традиционным очищением ка15 риозной полости зубов путем оперативного (бормашиной) удаления некротических тканей зуба и пломбирования его полости, так как позволяет строго избирательно удалить некротические ткани, не повреждая живые

20 ткани зуба, резко снизить вредные воздействия на пульпу зуба вибрации и высоких температур при сверлении и безболезненно . проводить очищение кариозной полости.

Пульмонология.

В клинике композицию применили у 122 больных, страдающих различными бронхолегочными заболеваниями (хронические бронхиты, бронхопневмонии, осложненная бронхиальная астма, силикозы). Компози30 цию вводили через назотрахеальный катетер, бронхоскоп или ингаляционно 1-4 раза, при этом активность действующего компонента (MKfl) составляла 12 — 100 ПЕ/мл.

Через сутки после однократного введе35 ния композиции количество мокроты у больных увеличивалось в 3-4 раза, а вязкость снижалась в 2,5-4 раза, что позволяло сократить сроки лечения больных в среднеи в

2-2,5 раза.

40 Хирургия, В хирургических клиниках композицию применили у 48 больных с гнойно-некротическими процессами различной этиологии и локализации, но только для наружного применения.

45 Активность ИКП в композиции составляла 70-750 ПЕ/мл. Композицию наносили на гнойный очаг под марлевые повязки. которые меняли через 1 — 2 дня, композицию применяли до полного очищения раны от гнойных масс, в среднем 3-4 дня.

Предлагаемая композиция наряду с известным свойством, присущим протеолитическим ферментам — гидролизом белков некротических тканей, проявляет и новое неочевидное свойство — сорбировать на себя продукты гидролиза, что способствует более эффективному и быстрому очищению

rноймык очагов.

Данное свойство композиция проявляет эа счет применения в качестве носителя

2003346

15

20 размешивая 30 мин при 2-4 С, затем раствор центрифугировали.при 7000 О, 5 мин. 25

50

55 для иммобилизации КП и наполнИтеля полиэтиленгликаля или его геля. которые оказались активными сорбентами продуктов протеолиза.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами конкретного. выполнения.

Приготовление ПЭГ-геля.

ПЭГ-гель готовили из продажного препарата ПЭГ с мол,м. 1500 кДа (ПЭГ-1500)—

100 г ПЭà — 1500 плавили в сосуде, погруженном в водяную баню при 400С и разводили в 2 л дистиллированной воды. Раствор

ПЭГ облучали ускоренными электронами, генерируемыми линейным ускорителем электронов ИЛУ-6 (Институт ядерной физики СО PAH. Новосибирск). Энергия электронов составляла 2 Меч, а общая доза 20,0 мегарад при мощности 40=500 килорад/с.

Полученный гель представляет собой бесцветную стекловидную массу.

Иммобилизация КП на ПЭГ-1500.

5 r протосубтилина растворяли в 107, ПЭГ-1500 в 0,1 М ацетатном буфере (рН 8,2), Протеолитическая активность супернатанта была не ниже 1000 протеолитических единиц (ПЕ)/мл, измеренная стандартным методом. Раствор фильтровали через мембранный фильтр для очистки от бактерий, продуцирующих фермент, и облучали ускоренными электронами (общая доза 1 мегарад), как описано в примере 1. Конечная активность препарата составила 250—

500 ПЕ/мл, Приготовление композиции.

К 20 г ИКП добавляли 80 г ПЭГ с мол.м, 1500 кДа или геля ПЭГ при перемешивании.

Конечная активность ИКП в композиции составила 250 ПЕ/мл, Композиция представляет собой слегка желтоватую вязкую. массу, растворимую B воде. Протеологическая активность композиции сохраняется два года при хранении при 2-4 С.

Использование в медицине.

Больная Ц., 38 лет, поступила в хирургическое отделение. клиники с диагнозом: химический ожог роговицы и коньюктивы правого глаза. Со слов больной, она получила ожог правого глаза концентрированной азотной кислотой.

При поступлении; правый тлаз — веки отечные. коньюктива на всем протяжении ишемичная с обширными участками некроза, лимб нечеткий, Роговая оболочка интенсивно мутная ("фарфоровая"), поверхность ее шероховатая, отечная. Глубоко лежащие

45 отделы не видны. Острота зрения: светоощущение не коррегируется. Больной назначено лечение: дезинфицирующие капли, миотические и мидриатические средства, Для очищения пораженной поверхности от нежизнеспособных тканей проведены инстилляции композицией. содержащей. мас. ь:

ИКП с активностью

750 ПЕ/мл 20

ПЭГ-гель с мол.м, 1500 кДа 3 раза в де:. ь по 0,2 — 0,2 мл 80

Через сутки после лечения уменьшился отек роговицы, через 6 суток началась эпителизация роговицы глаза, завершившаяся через 2 недели. восстановлением ее прозрачности. Острота зрения к этому сроку тоже восстановились и составила уже 0,25 — 0,3, Использование в ветеринарии.

Композицию применили для лечения гнойно-катарального эндометрита у 119 коров черно-пестрой породы, Из всех этих коров после отела диагностировали гнойно-катаральный эндометрит.

Из половых путей животных наблюдались гнойные выделения, вздутие живота, гипетермия, учащенное сердцебиение. За период болезни животные потеряли до 29 массы тела.

Для очищения полости матки животных от гнойного содержимого и устранения питательной среды вегетирующей микрофлоры в полость матки с помощью шприца

Жане через осеменительную пипетку вводили композицию. содержащую, мас,g:

ИКП с активностью

50 ПЕ/мл 10

ПЭГ с мол.м. 1500 кДа 90

Композицию вводили s количестве 75—

100 мл в течение 3 сут ежедневно. К концу 2 сут количество выделений резко сократилось, а на 5-е сутки выделений не наблюдалось, температура у животных нормализовалась. восстановился аппетит, Использование предлагаемой композиции позволит: повысить эффективность лечения эа счет сокращения сроков лечения в среднем в 2 раза, а в ряде случаев добиться извлечения, недостижимого иными способами; расширить сферу применения композиции не только для лечения гнойных ран, но и в стоматологии, пульмонологии, офтальмологии и др. областях медицины. а также ветеринарии. (56) Раны и раневая инфекция, 28 29.X.

1986. М„с. 166-167.

200334б

Составитель Р. Салганик

Техред M.Mîðãåíòàë Корректор С. Патрушева

Редактор Т. Пилипенко

Заказ 3291 Тираж Подписное

НПО "Поиск" Роспатента

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул Г,з: -:рине 0 I

КОМПОЗИЦИЙ ДЛЙ ФЕРМЕНТАТИВНОГО ГИДРОЛИЗА БЕЛКОВ некротических тканей, содержащая иммобилизованный на водо растворимой матрице комплекс бактериальных нейтральных и щелочных протеаз и наполнитель, отличающаяся тем, что в качестве водорастворимой матрицы и наполнителя используют полиэтиленгликоль или гель полиэтиленгликоля с мол.м 600 - 2000 кДа, преимущественно 1500 кДа, при соотношении компонентов, мас,,Д;

Иммобилизованный комплекс бактериальных нейтральных и щелочных протеаз с активностью 12 - 750 ПЕ/мл

Полизтиленгликоль или гель полизтиленгликоля 70-. 90