Способ диагностики аутоиммунной патологии

 

Использование: иммунология, для диагностики и дифференциальной диагностики аутоиммунной патологии. Цель: повышение точности. Сущность изобретения: перед постановкой теста Е-розеткообразования исследуемые лимфоциты подвергают лазерному импульсному низкоинтенсивному облучению и подсчитывают раздельно число низко- и среднеаффинных Е - РОК. Вычисляют соотношение этих клеток и сравнивают полученный показатель с соответствующим показателем необлученных лимфоцитов того же больного.

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано в клинике для диагностики и дифференциальной диагностики аутоиммунной патологии.

Известно, что одним из общедоступных способов выявления аутоиммунной патологии у человека в клинической иммунологии является определение чувствительности Е-розеткообразующих клеток (Е-РОК) к теофиллину в совокупности с определением содержания общего количества спонтанных Е-РОК.

Суть метода заключается в том, что выделенные из крови человека лимфоциты, помещают в несколько пробирок, в одну из которых добавляют эритроциты барана (ЭБ) и раствор теофиллина. Часть лимфоцитов под действием теофиллина прекращает образование "розеток" - это теофиллинчувствительные лимфоциты (Е_тфч-РОК), другая часть остается устойчивой к действию химического реактива - это теофиллинрезистентные клетки (Е_тфр-РОК). Параллельно в контрольную пробирку добавляют лишь ЭБ. Подсчитывают число Е-РОК в контроле и в пробирке с теофиллином (Е_тфр-РОК). Вычисление Е_тфр-РОК производят по формуле (Е_тфч-РОК)= (Е-РОК)-(Е_тфр-РОК) В норме у здорового человека соотношение (иммунорегуляторный индекс, ИРИ)= 1,8-2,5. Изменение этого показателя в сторону увеличения может служить ориентировочным критерием наличия аутоиммунной патологии у человека.

Недостатком данного способа является невозможность выявления аутоиммунной патологии во всех случаях, так как, во-первых, нередко число (Е_тфр-РОК)>(Е-РОК), а во-вторых, на результат исследования может повлиять измененная чувствительность исследуемого человека к теофиллину.

Целью изобретения является повышение точности диагностики.

Цель достигается тем, что в известном способе диагностики аутоиммунной патологии путем иммунологического исследования, заключающегося в подсчете количества Е-РОК в двух пробирках, согласно изобретению, на лимфоциты в одной из пробирок воздействуют лазерным импульсным излучением, после чего осуществляют дифференцированный подсчет низко- и среднеаффинных Е-РОК в обеих пробирках, вычисляют отношение низкоаффинных Е-РОК к среднеаффинным Е-РОК и при повышении этого показателя у облученных лимфоцитов по сравнению с необлученными диагностируют аутоиммунную патологию.

Способ осуществляется следующим образом. У исследуемого человека берут из вены кровь в объеме 5-6 мл в центрифужную пробирку с гепаринов и выделяют лимфоциты путем центрифугирования в градиенте плотности фикол-верографина. Выделенные лимфоциты дважды отмывают в среде 199, затем готовят взвесь лимфоцитов с концентрацией 2˙ 10⁶/мл. Из приготовленной взвеси лимфоцитов переносят 0,5 мл в пенициллиновый флакон и помещают в специальную насадку для облучения низкоинтенсивным импульсным лазером типа "Узор". Режим облучения: длина волны равна 0,89 мкм, частота импульсов 150 Гц, время экспозиции 5 мин, рукоятка "Мощность" в крайне правом положении. Затем из флакона переносят 0,1 мл облученной взвеси лимфоцитов в центрифужную пробирку. В другую центрифужную пробирку вносят 0,1 мл взвеси интактных лимфоцитов. После этого параллельно в обе пробирки вносят по 0,1 мл 0,5% взвеси ЭБ и ставят пробирки в термостат на 5 мин при 37^оС. После этого центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин и оставляют их на 1 ч в холодильнике при 4^оС. Затем в каждую пробирку добавляют по 1-2 капли 3% -ного раствора глютарового альдегида, выдерживают при комнатной температуре в течение 5 мин. Отсасывают надосадочную жидкость и к осадку добавляют 0,05 мл среды 199, ресуспендируют и готовят мазки на стекле. После высушивания мазков фиксируют их в 96^о спирте 15 мин. Окрашивают по Романовскому 20 мин. Подсчитывают дифференцированно низко- и среднеаффинные Е-РОК и определяют отношение низкоаффинных Е-РОК к среднеаффинным (индекс аффинитета, ИАФ) в обеих пробирках отдельно.

При увеличении показателя ИАФ после облучения по сравнению с соответствующим показателем у необлученных лимфоцитов диагностируют наличие аутоиммунной патологии.

П р и м е р 1. Больной П. , 26 лет, с подозрением на гломерулонефрит. При исследовании лимфоцитов предлагаемым способом были получены следующие показатели ИАФ: без лазерного воздействия 0,48, после лазерного облучения 8,6. На основании полученных результатов был сделан вывод о наличии аутоиммунной патологии у больного. После проведения дополнительных клинико-биохимических и инструментальных методов исследования диагноз гломерулонефрита был подтвержден. Больному было назначено соответствующее лечение.

П р и м е р 2. Больная Ш. , 20 лет, диагностически неясный случай, подозрение на сепсис. В результате исследования лимфоцитов предлагаемым способом были получены следующие данные: ИАФ без лазерного воздействия равен 0,4; после лазерного воздействия равен 9,2, что позволило сделать вывод о наличии у больной аутоиммунной патологии. В результате углубленного обследования в Институте ревматизма АМН СССР был подтвержден диагноз аутоиммунного заболевания - системная красная волчанка.

П р и м е р 3. Больная П. , 15 лет, поступила в хирургическую клинику в тяжелом состоянии с симптомами умеренно выраженной интоксикации, желтухой, болями в правом подреберье, повышенной кровоточивостью. Возникло подозрение об аутоиммунной гемолитической анемии. Были определены индексы аффинитета: ИАФ без облучения равен 8,0; после облучения 4,1. На основании проведенного исследования наличие аутоиммунной патологии было исключено. В дальнейшем пациентке проведена диагностическая лапаратомия. Диагноз - желчно-каменная болезнь. Выписана из стационара в удовлетворительном состоянии.

Использование предлагаемого способа обеспечивает следующие преимущества: - повышается точность диагностики, так как получаемые данные можно интерпретировать однозначно: повышение индекса аффинитета при исследовании облученных лимфоцитов по сравнению с необлученными свидетельствует о наличии аутоиммунной патологии; - исключается побочное влияние на результат исследования химических препаратов; - способ прост, общедоступен и не занимает много времени.

Формула изобретения

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АУТОИММУННОЙ ПАТОЛОГИИ путем иммунологического исследования, включающего подсчет количества Е-РОК в двух пробирках, отличающийся тем, что, с целью повышения точности диагностики, на лимфоциты в одной из пробирок воздействуют лазерным низкоинтенсивным импульсным излучением, после чего осуществляют дифференцированный подсчет низко- и среднеаффинных Е-РОК в обеих пробирках, вычисляют отношение низкоаффинных Е-РОК к среднеаффинным Е-РОК и при повышении этого показателя у облученных лимфоцитов по сравнению с необлученным диагностируют наличие аутоиммунной патологии.