Препарат, влияющий на тканевой обмен и применение штамма гриба fusarium sambucinum fuckel var ossicolum (berk.et curf) bilai для его получения

 

Использование: медицина, медицинская промышленность для получения препарата, влияющего на тканевой обмен из штамма Fusarium sambucium Fuckel var ossicolum (Berk et Curt) Bi lai ВСБ 917 (всесоюзная коллекция промышленных микроорганизмов института ВНИИгенетика, коллеционный номер ВКПМ Г 169). Сущность изобретения: предложен новый штамм гриба рода Fusarium и препарат на его основе широкого спектра действия, применяющийся для профилактики и лечения заболеваний, связанных с нарушением обмена веществ, обладающий адаптогенным и иммуномодулирующим действием и не вызывающий неблагоприятных побочных эффектов. 2 с. и 1 з. п. ф-лы, 9 табл.

Изобретение относится к микологии и медицине, в частности, к штаммам грибов-продуцентов физиологически активных веществ и препаратов на их основе для применения в здравоохранении.

Известен штамм высшего гриба Inonotus Obliguus и препарат бефунгин, созданный на его основе.

Бефунгин экстракт наростов, образующихся на березе под воздействием этого гриба. Препарат представляет собой полугустую текучую массу, содержащую 30% сухих веществ с добавлением 1% кобальта хлорида или 1,5% кобальта сульфата. Его применяют в качестве симптоматического средства, улучшающего самочувствие больных с хроническим гастритом и дискинезиях желудочно-кишечного тракта с преобладанием атонии (Машковский М. Д. Лекарственные средства. М. Медицина, т. 2, 1984, с. 162).

Однако ресурсы чаги-сырья для получения бефунгина весьма ограничены, как и спектр физиологического воздействия препарата.

Известно также, что грибы Lentinus edodes, Ganoderma Jucidum, Pleurotis ostreatus обладают антисклеротическим действием и оказывают влияние на содержание холестерина, нормализуя его уровень в организме (Ли Хва Реи, Л. В. Васильев, Л. Н. Орехов, В. В. Тертов, В. А. Тутьян. Антисклеротические свойства высших грибов. Вопросы питания N 1, 1989, с. 16-20).

Однако указанные грибы имеют низкую скорость роста: мицелий растет 5-7 сут, а плодовое тело свыше 70 сут и обладают узким спектром физиологического воздействия.

Более высокой скоростью роста с использованием современных биотехнологий обладают грибы из рода Fusarium Известен штамм гриба Fusarium sambucinum Fuckel var. ossicolum (Berk. et Curt. ) Butai ВСБ-917 продуцента белка пищевого или кормового назначения (Всесоюзная коллекция промышленных микроорганизмов института ВНИИгенетика, коллекционный номер ВКПМ Г-169).

Штамм F. sambucinum Fuckel var. ossicоlum (Berk. et Curt) Bulai ВСБ-917 выделен в стадии активного роста в процессе непрерывного культивирования мицелия штамма F.sambucinum P^s-64 (Всесоюзная коллекция промышленных микроорганизмов института ВНИИгенетика, коллекционный номер ЦМПМ-Г-165).

Штамм F. sambucinum ВСБ-917, Г-169 имеет следующие культуральные и физиологические признаки: сусло-агаре образует белые войлочные колонии, розовеющие при старении, плодовых тел не образует, пряжки не выявлены. Имеет два вида спороношения конидии и хламидоспоры, конидии серповидной формы с 2-5 перегородками. При культивировании в жидкой питательной среде образует многоклеточный нитевидный мицелий с перегородками аскомицетного типа с тельцами Воронина. В стадии активного роста клетки мицелия гомогенны, без липидных или иных включений, концы гифов (мицелия) равномерно закруглены. При старении в клетках появляются многочисленные жировые включения.

Штамм является аэробом, растет в интервале температур 22-28^оС и в интервале рН 4,5-7,0, оптимальное значение рН 5,8. Желатин не разжижает. Усваивает глюкозу, сахарозу, лактозу, мальтозу, галактозу, раффинозу, а также крахмал, этанол, глицерин, уксусную кислоту, маннит, ксилит.

Отношение к источнику азота: ассимилирует аммонийные соли, нитраты, мочевину, пептон.

В условиях глубинного культивирования хорошо растет на молочной сыворотке (4-6% лактозы), при этом выход АСВ составляет 20-25 г на л питательной среды.

Продуктивность при отъемно-доливном процессе составляет 1,4-1,5 кг/м³/ч.

Новое назначение штамма F. sambucinum ВСБ-917 заключается в применении его в качестве продуцента физиологических активных веществ профилактического и лечебного назначения.

В основу изобретения положено применение штамма F. sambucinum ВСБ-917 для создания на его основе препарата, обладающего широким спектром физиологического действия в организме и не имеющего противопоказаний к применению.

На основе вышеописанного штамма получен препарат, обладающий широким спектром лечебно-профилактического действия за счет содержащихся в нем различных физиологических активных веществ: незаменимых аминокислот, иммуномодулирующих полисахаридов, эссенциальных жирных кислот, биологических аминов, убихинонов, витаминов и микроэлементов, находящихся в естественных соотношениях. Препарат оказывает нормализующее действие на нарушенные обменные процессы в организме, приводящие к сердечно-сосудистым заболеваниям, ожирению, диабету, иммунодефицитным состояниям, авитаминозам. Препарат не вызывает аллергических реакций, сочетается с традиционными терапевтическими средствами, усиливая их действие на организм и снижая побочные неблагоприятные эффекты, в частности, при проведении радиотерапии онкологическим больным.

Изучены: химический состав препарата и возможные патогенность, острая и хроническая токсичность, тератогеность в пяти поколениях животных, канцерогенность, коканцерогенность. Исследования проведены в соответствии с требованиями Всемирной организации Здравоохранения (ВОЗ) для испытания веществ микробного происхождения. В результате проведения этой серии экспериментов препарат разрешен органами здравоохранения для применения.

Препарату присвоено товарное наименование "Милайф".

Химический состав препарата Милайф, мас. Общий белок 60-63 Истинный белок 42-46 Углеводы 10-13 Липиды 4-8 Нуклеиновые кислоты 3-6 Минеральные вещества 6-8 Витамины 2,6-3,1 Вода Остальное В состав белковых компонентов Милайфа входят все незаменимые аминокислоты (% к общему белку): лизин 9,2, изолейцин 3,4, лейцин 4,5; фенилаланин + тирозин 4,5; цистин+метионин 2,3; треонин 3,7; триптофан 0,8; валин 3,6, на долю которых приходится 35-45% от суммы аминокислот. По этому показателю Милайф приближается к мышечным белкам, содержащим также 45% незаменимых аминокислот. Как известно, белковые вещества и их производные играют большую роль в обменных процессах пищеварения, дыхания, выделения, движения. А так называемые незаменимые аминокислоты должны поступать в человеческий организм в готовом виде, т.к. они в организме не синтезируются.

Углеводная часть Милайфа, составляющая 10-13% в расчете на сухое вещество, представлена 1-3-β-D гликанами, проявляющими иммуномодулирующую активность. (Кашкин М.А. Елинов Н.Г. Иммуномодулирующая активность полисахаридов из грибов, Микология и фитопатология, том 19, вып. 4, 1985, с. 1-3).

Мономерный состав этих гликанов представлен глюкозой, галактозой, маннозой и фруктозой в соотношении 1,0:1,38:1,79:0,5 cоответственно.

В липидной фракции Милайфа, составляющей 4-8% в расчете на сухое вещество, содержатся физиологически активные вещества различного типа соединений: фосфолипиды, стерины, глицериды, жирные кислоты. Данные об их количественном содержании представлены в табл. 1.

Содержащиеся в Милайфе физиологически активные фосфолипиды (фосфатидилсерин, фосфатидилэтаноламин и фосфатидил+холин) принимают участие в различных метаболических процессах и энергообмене.

Фосфолипиды являются основными элементами в структуре клеточной оболочки и клеточных органелл. Их функциональное значение основано на регулировании проницаемости клеточных оболочек. Они поддерживают работу клеточного механизма: ионный обмен, дыхание, биологическое окисление, влияют на активность энзимов в митохондриях. Из-за недостатка фосфолипидов происходит нарушение жирового обмена, что может привести к жировому перерождению печени.

В составе жирнокислотной фракции Милайфа содержатся физиологически активные жирные кислоты, относящиеся к эссенциальным. Более 50% от суммы жирных кислот приходится на долю линолевой кислоты, которая является предшественником простагландинов-регуляторов гормональной деятельности животных и человека.

Благодаря своим известным фармакологическим свойствам фосфолипиды и ненасыщенные жирные кислоты регенерируют поврежденные митохондрии, активируют нарушенные ферментные системы, усиливают детоксикационную функцию печени, аналогично известному препарату Эссенциале (Машковский М.Д. Лекарственные средства. М. Медицина, 1984, том 2, с. 46).

Высокой физиологической активностью обладает 22,23-дигидроэргостерин, являющийся одним из витаминов группы D (D₄). Он проявляет активность, сходную с холекальциферолом (витамин D₃), способствуя правильному фосфорнокальциевому обмену, особенно у растущих организмов, своевременному отложению веществ в растущие кости. (Машковский М.Д. Лекарственные средства. М. Медицина, 1984, с. 34).

Убихинон Q₉ (убинон), является метаболитом организма животных, а убихинон Q₁₀ метаболитом человека.

Сравнительное исследование убинона и убихинона Q₁₀ с витамином Е (активным противоокислительным средством) показали, что антиоксидантная и антицитолитическая активность убинона и убихинона Q₁₀ была в 5 раз выше, чем у витамина Е. Убинон и убихинон О₁₀ в 5 раз более активны по сравнению с витамином Е и в 1,5 раза более активны по сравнению с липоевой кислотой, нормализуют детоксицирующую и экскреторную функции печени при поражении ее четыреххлористым углеродом.

Убинон и убихинон Q₁₀ являются универсальными незаменимыми компонентами в функционировании биологических мембран и метаболизма клетки в целом, в том числе и гепатоцитов в животном и человеческом организмах. Их высокая гепатопротекторная активность является следствием ингибирования молекулярных мембранных патогенетических механизмов, связанных с усилением перекисного окисления липидов.

На основании известных экспериментальных данных выявлено, что убинон и убихинон Q₁₀ обладают антиоксидантной активностью в ткани печени при ее токсическом повреждении. Убинон и убихинон Q₁₀предупреждают цитолиз и некроз гепатоцитов и нормализуют экскреторную и детоксицирующую функции печени, измененные при токсическом гепатите (Виноградов Л.В. Обольникова Е.А. и др. Убихиноны перспективные гепатопротекторы метаболического типа действия. Первый Российский национальный конгресс "Человек и лекарство", 1992, Москва, тезис 408).

В результате анализа состава липидного компонента препарата Милайф можно сделать вывод о его высокой физиологической активности в организме. Минеральный состав Милайфа приведен в табл. 2.

Из приведенных в табл. 2 данных следует, что в Милайфе в значительном количестве содержатся физиологически-активные элементы.

Кальций в организме участвует в образовании костной ткани, активации ферментов свертывания крови, понижении возбудимости отдельных участков нервной системы, ослаблении действия токсинов, повышении устойчивости к инфекции, возбуждении биоэлектрических потенциалов на поверхности клеточных мембран.

Калий обеспечивает нормализацию внутриклеточного давления и является активатором многих ферментов.

Фосфор и его соединения служат составной частью костной ткани и зубов, участвуют в энергетических процессах.

Медь участвует в превращениях железа в формы, доступные для синтеза гемоглобина.

Марганец влияет на синтез гликогена, принимает участие в нормализации углеводного обмена.

Железо входит в состав гемоглобина, недостаток железа приводит к тяжелому заболеванию-анемии.

Таким образом, широкий спектр химических элементов, входящих в состав Милайфа, и современные представления об их роли в организме человека подтверждают физиологическую активность этого препарата.

Водорастворимые витамины, содержащиеся в Милайфе, представлены в табл. 3.

В препарате Милайф содержатся витамины, в основном группы В, количество которых суммарно составляет 2,6-3,1% Физиологическое действие витаминов группы В хорошо изучено. Установлено, что они играют важную роль в процессах белкового, жирового и углеводного обмена, повышают сопротивляемость организма к инфекционным заболеваниям благодаря иммуностимулирующему действию, участвуют в синтезе простагландинов, ферментов и коферментов, обладают эффективным профилактическим действием. В Милайфе эти витамины имеют естественное происхождение и находятся в виде природного комплекса, что является значительным преимуществом по сравнению с их синтетическими аналогами и искусственно созданными композициями (метиовит, витамин В₁).

Задача медико-биологических исследований Милайфа состояла в получении данных, гарантирующих безопасность его использования в лечебно-профилактических целях.

В результате исследований, проведенных на трех видах животных (крысы, куры, свиньи), было показано, что при пероральном поступлении в организм Милайф: не обладает отрицательным воздействием в условиях острого (30 дней), субхронического (60 дней) и хронического (1 год) эксперимента при 10, 25, 50 и 100% замене им протеина виварного корма; не обладает канцерогенным действием и не оказывает модифицирующего влияния на развитие спонтанных и индуцированных опухолей, не вызывает доминантных летальных мутаций в половых клетках животных.

не проявляет тератогенного и эмбриотропного действия в пяти поколениях животных, не проявляет аллергического действия, не оказывает влияния на массу сердца, печени, почек, селезенки, не влияет на морфологические показатели крови животных, которые остаются в пределах физиологической нормы.

В процессе изучения Милайфа отмечено повышение активности сукцинатдегидрогеназы и увеличение содержания гликогена в печени крыс, в диете которых потребности в протеине полностью покрывались за счет Милайфа. Отмечено снижение количества жира в печени у крыс, получавших протеин только за счет Милайфа.

Аналогичные результаты были получены на свиньях, кормление которых осуществляли по установленным физиологическим нормам.

Исследования проводили на трех группах животныx:
Первая группа получала обычный корм и в качестве белкового компонента (30%) мясо-костную муку.

Вторая группа также, как и первая получала обычный корм, а в качестве белкового компонента (30%) белок Милайфа.

В табл. 4 приведены результаты этих исследований.

Полученные данные свидетельствуют о том, что Милайф оказывает благоприятное воздействие на липидный обмен, вызывая значительное снижение содержания холестерина и триглицеридов.

Клиническое изучение терапевтического действия Милайфа при алиментарном ожирении (нарушении липидного обмена).

Известно, что алиментарное ожирение неизбежно ведет к развитию патологии, затрагивающей различные системы организма.

В связи с этим Милайф получали больные трех сформированных групп:
1. Больные ожирением в сочетании с заболеваниями метаболического профиля (гиперхолестеринемия, артериальная гипертензия, сахарный диабет с нарушением толерантности к глюкозе) 45 чел.

2. Больные ожирением в сочетании с патологией желчевыводящей системы (хронический холецистит, холелитиаз, дискинезия желчевыводящих путей) 18 чел.

3. Больные ожирением в сочетании с патологией желудочно-кишечного тракта (язвенная болезнь, эрозивный гастрит и бульбит, дуоденит) 12 чел.

1. Изучение влияния Милайфа на динамику клинико-биологических показателей у больных ожирением в сочетании с заболеваниями метаболического профиля
Под наблюдением находилось 45 больных, у которых ожирение сочеталось с гиперхолестеринемией (I группа мужчины 20 чел. II группа женщины 25 чел.).

Изучение традиционно используемых показателей липидного обмена, включающих: содержание в сыворотке крови общего холестерина (ОХС), липопротеидов высокой плотности (ЛПВП), триглицеридов (ТГ), коэффициента атерогенности (КА) выявило у больных закономерные сдвиги этих показателей (табл. 5). Особый интерес представляет анализ показателей, характеризующих риск развития ишемической болезни сердца (ИБС), поскольку в анализируемой группе подавляющее число пациентов (33 человека) имело возраст менее 40 лет.

Значение показателя ЛПВП/ОХС как по всей группе в целом, так и отдельно в группах мужчин и женщин, указывало на то, что пациенты находились в зоне высокого риска развития этой патологии: 17,6-18,7% при норме 20-25% Коэффициент атерогенности достоверно превышал нормальные значения (4,5±0,4 по сравнению с нормой 3,0).

У 50% наблюдаемых больных отмечены 2 фактора риска развития ИБС (гиперхолестеринемия и гипертензия). После проведенного курса лечения отмечено выраженное снижение значений липидных показателей как по группе в целом, так и в обеих изучаемых группах.

Особенно выраженные изменения отмечены у мужчин: статистически значимое снижение уровня холестерина, коэффициента атерогенности, триглицеридов и повышение значения ЛПВП/ОХС.

Сравнение полученных результатов с данными контроля показывает более выраженный положительный эффект у пациентов, получавших Милайф. Воздействие традиционно проводимой терапии было менее выражено.

У 15 больных при первичном обследовании были выявлены повышенные показатели содержания сахара в крови. При тщательном обследовании (гликемическая кривая с нагрузкой 75 г глюкозы, гликемические индексы) у 5 больных констатирован сахарный диабет II типа, у 10 пациентов нарушение толерантности к глюкозе. Обнаружена статистически значимая депрессия этого показателя у группы больных, получавших Милайф, с 7,54±0,9 ммоль/л до 5,3±0,48 ммоль/л по сравнению с контролем 6,76±0,7 ммоль/л до 6,32±0,6 ммоль/л.

Переносимость препарата у всех больных была хорошая. У 75% наблюдаемых отмечалось значительное уменьшение чувства голода и снижение аппетита. Процесс снижения массы тела протекал более комфортно. Потеря массы тела у мужчин составила 11,9±1 кг, а у женщин 9,2±2,1 кг.

2. Влияние Милайфа на динамику клинико-биологических показателей у больных в сочетании с патологией гепатобилиарной системы.

Под наблюдением находились 18 больных с различной патологией желчевыделительной системы. У 50% больных были выявлены дискинетические функциональные расстройства гипомоторная дискинезия желчевыводящих путей. 50% больных имели более выраженную органическую патологию у них диагносцировалась рентгенологически подтвержденная желчекаменная болезнь. Все больные при поступлении отмечали тяжесть в правом подреберье, приступообразные боли при погрешностях в диете и после тяжелой физической нагрузки. У этих больных регистрировались также различные диспептические расстройства: горечь во рту, тошнота после употребления жирной пищи. Больные получали традиционный курс диетотерапии, направленный на снижение массы тела с применением желчегонных средств.

Милайф включался в курс проводимой терапии в течение 21 дня. Переносимость препарата у всех без исключения была хорошая. У 75% больных отмечено снижение аппетита.

Динамика биохимических показателей представлена в табл. 6.

Как видно из представленных данных, у больных данной группы патологии имели место отклонения, специфичные для всей группы тучных в целом. Повышение значений сывороточного билирубина, обусловленное желчезастойным синдромом, имело более значимую тенденцию к снижению в группе больных, получавших испытуемый препарат. Наблюдалось также снижение аппетита, уменьшение чувства голода и более выраженная депрессия липидных показателей (ОХС, ЛПВП, ТГ), что позволяет считать весьма целесообразным назначение препарата данной категории больных.

Таким образом, Милайф обладает способностью выраженной нормализации показателей холестерина и триглицеридов сыворотки крови у больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями, протекающими на фоне нарушений липидного обмена, тем самым снижая риск развития ишемической болезни сердца.

Изучение адаптогенного действия Милайфа.

Исследования проводили у 15 онкологических больных в возрасте от 31 до 65 лет с различной локализацией опухолей (рак шейки матки II и III стадии, рак почки III стадии, лимфогрануломатоз). Контролем служили 15 человек того же возраста и с теми же локализациями опухолей. Все больные получали облучение с разовой дозой 2-4 Гр, суммарной 40-60 Гр. У всех больных, получавших Милайф, отмечалось уменьшение лейкопении по сравнению с контрольной группой (на 1600±370, Р < 0,05). Даже когда исходный уровень лейкоцитов был низким (1,7 х 10⁸ 1,9 х 10⁸), удавалось за несколько дней (2-5) повысить его до 3,0 10⁸ 4,0 х 10⁸и иногда до 5,5 х 10⁸. Повышения числа лейкоцитов удавалось добиться при использовании и других биостимуляторов, но действие Милайфа отличала большая стабильность эффекта.

Повышение числа лейкоцитов было стабильным и часто наблюдалось на фоне продолжающегося облучения, что бывает крайне редко, особенно без переливания крови. У всех больных удавалось провести полный курс облучения без вынужденных из-за лейкопении перерывов и переливания крови.

Процентное содержание моноцитов было высоким, хотя и несколько ниже, чем в контроле: у 10 из 15 человек моноциты превышали норму лишь на 3-5% тогда как у остальных и в контроле отмечался значительный моноцитоз (18-26%).

У всех больных отмечалось уменьшение слабости, улучшался аппетит, сон и настроение.

Таким образом, проведенные исследования говорят о том, что Милайф является адаптационным средством и защищает организм от действия такого повреждающего фактора, как повторное облучение.

Влияние Милайфа также изучено у больных со спонтанной лейкопенией (5 чел) и лейкопенией вследствие радиотерапии (11 чел.). Показатели лейкоцитов изучались у больных, получавших Милайф в течение 15, 30 и 60 дней (I этап), и во время повторного курса через 12 месяцев (II этап). Полученные результаты представлены в табл. 7.

Из данных табл. 7 прослеживается четкая динамика увеличения числа лейкоцитов у больных лейкопенией различной этиологии.

Таким образом, адаптогенное действие Милайфа выражается в повышении неспецифической резистентности организма у больных лейкопенией различных этиологий.

Изучение влияния Милайфа на иммунные процессы.

Исследовались дети в возрасте 3-5 лет, проживающие в экологически неблагоприятном районе, и в отношении которых был установлен синдром периоксидации. Всего обследовано 77 человек, из них 56 составили основную группу (I), 21 контрольную (II).

Дети основной группы получали ежедневно Милайф на протяжении 20-25 дней.

Контрольная группа получала стандартное лечение в стационаре.

Дети обеих групп были тщательно обследованы педиатром, отоларингологом, аллергологом, невропатологом, иммунологом, микробиологом и другими специалистами.

Из 56 детей основной группы 39 оказались сенсибилизированы к тканям внутренних органов, из них у 21 диагностирован хронический гастрит, у 18 хронический колит с явлениями дисбактериоза, у 32 хронический холецистит и холецистоангиохолит.

Наряду с общепринятыми исследованиями (общий анализ крови, мочи, кала, ЭКГ) выполнялись иммунохемилюминесцентные методы исследования крови и слюны на определение противоорганных и противобактериальных антител на "Бета-2-анализаторе", основанные на сверхслабом свечении биосред и клеток в видимой области спектра, обусловленном липидными структурами.

Изменения показателей аутоиммунизации в результате применения Милайфа представлены в табл. 8.

Из данных табл. 8 видно, что у детей, как основной, так и контрольной групп, в крови скапливается значительное количество противоорганных антител и выявляется выраженная аутоиммунизация к тканям селезенки, печени, тонкого и толстого кишечника, желудка. Сопоставление результатов лечения основной и контрольной групп показало, что у детей контрольной группы снижение интенсивности аутоиммунизации было менее выражено к органам пищеварения и недостоверно снижалась к тканям селезенки, легкого и сердца.

Назначение Милайфа детям основной группы на протяжении 20-25 дней способствовало достоверному снижению циркулирующих в крови аутоиммунных антител к тканям селезенки, почки, печени, желудка и кишечника.

Следовательно, целесообразно назначать Милайф в случаях заболевания органов пищеварения, сопровождающихся аутоиммунным процессом и снижением защитных сил организма.

Изучено влияние Милайфа на микрофлору у детей этих же групп.

У 54,2% детей было выявлено нарушение одного или нескольких показателей, характеризующих кожную флору, у 38,2% встречалось повышенное количество микроорганизмов на единицу кожной поверхности, у 36,8% детей обнаружены маннитразлагающие, а у 44,5% гемолитические бактерии не свойственные здоровому организму ребенка.

Нарушения микрофлоры кишечника характеризовались существенным снижением высеваемости бифидобактерий, обнаружением кишечной палочки с ослабленной ферментативной активностью, эшерихий в лактозоотрицательной форме, а также изменением нормальных соотношений между различными представителями кишечной микрофлоры за счет появления большого количества кокковых форм золотистого стафилококка, стрептококка.

У 6,4% детей в посевах фекалий зарегистрированы грибы рода Candida в активном состоянии.

Поэтому необходимо было изучить возможность развития сенсибилизации или бактериального инфицирования детей патогенной аутофлорой и возможности лечения их Милайфом.

Сенсибилизация к бактериальным аллергенам изучалась методом иммунохемилюминесценции.

Определялось накопление в крови и слюне бактериальных антител по отношению к антигенам стрептококка, стафилококка, кишечной палочки, протея, энтерококка, синегнойной палочки.

Изучение бактериального инфицирования и бактериальной сенсибилизации позволили обнаружить иммунологические реакции по отношению к бактериальным антигенам. Наиболее часто как у детей основной группы, так и контрольной, отмечалась сенсибилизация к кишечной палочке, стафилококку и протею.

Оказалось, что перестройка микробного пейзажа у детей, как правило, сопровождалась интенсификацией продукции антител по отношению к нескольким бактериям одновременно.

В табл. 9 приведены данные, полученные при изучении иммунных реакций по отношению к бактериальным антигенам у детей основной и контрольной групп.

Из данных таблицы следует, что прием Милайфа у детей, отнесенных к основной группе, способствовал выраженному снижению концентрации антител к гемолитическому стафилококку, стрептококку, кишечной палочке, энтерококку, синегнойной палочке.

Следовательно, целесообразно назначать Милайф больным с явлениями дисбактериоза, развившегося на фоне угнетения защитных сил организма.

Таким образом, применение Милайфа у больных хроническими холецистоангиохолитами, гастритами, гастродуоденитами, колитами, часто с явлениями дисбактериоза, развившегося на фоне синдрома переоксидации способствовало уменьшению выраженности аутоиммунных реакций, в основном на антигены желудочно-кишечного тракта и гипосенсибилизации к нескольким бактериальным аллергенам одновременно.

Практическая применимость
Штамм гриба F. sambucinum ВСБ-917 применяется для промышленного получения препарата Милайфа.

Предлагаемый препарат найдет применение в здравоохранении и может использоваться как:
дополнительное средство терапии при нарушениях обмена липидов, холестерина и глюкозы (атеросклероз, ишемическая болезнь сердца, заболевания печени, ожирение, диабет II типа), особенно в геронтологии;
профилактическое средство соматических заболеваний и осложнений, развивающихся на фоне лучевой терапии у онкологических больных;
вспомогательное средство для проведения общеукрепляющей и дезинтоксикационной терапии;
профилактическое средство соматических заболеваний у лиц, живущих и работающих в экологически осложненных условиях и в зонах повышенной радиации;
средство лечения дисбактериозов;
средство при авитаминозах;
средство для коррекции микроэлементов.

Учитывая аутоиммунную активность, применение препарата возможно при трансплантации органов и тканей.

Описание способа получения препарата Милайф.

Процесс получения препарата включает следующие стадии:
подготовка и стерилизация жидкой питательной среды;
приготовление посевного мицелия гриба;
выращивание мицелия в рабочих ферментационных аппаратах;
сгущение, выделение, сушка и расфасовка препарата.

В качестве источника углерода для роста мицелия могут использоваться: свеклосахарная и тростниковая мелассы, сахар-сырец, сахароза, глюкоза, технологические отходы спиртового и коньячного производства (спиртовая и коньячная барды), молочная сыворотка, соки корнеплодов и зеленой массы. В качестве источников азота, калия и фосфора используются азотнокислый аммоний и кислый фосфорно-кислый калий.

Стерилизация питательной среды проводится с помощью установки непрерывной стерилизации при температуре 195±2^оС, время пребывания в зоне стерилизации 3 мин. Посевной мицелий для рабочего ферментационного аппарата выращивается сначала в пробирках на твердой питательной среде, затем в колбах на качалке в жидкой питательной среде и далее в инокуляторе при следующем технологическом режиме: температура 25±2^оС; рН 5,5-6,2; аэрация 1 м³/м³/мин.

Посевной материал считается готовым, когда концентрация сухих веществ мицелия в культуральной среде достигает 9-12 г/л. 5-10 объемных процентов такой среды служат посевным материалом, который с соблюдением правил асептики переносится в рабочий ферментационный аппарат.

Культивирование мицелия в рабочем аппарате осуществляется при тех же режимах, что и в инокуляторе на питательной среде того же состава. Возможно осуществление периодического отъемно-доливного и непрерывного процесса культивирования.

Следующей стадией технологического процесса является сгущение культуральной среды с помощью вакуумных фильтрующих аппаратов. Далее осуществляется обезвоживание продукта с помощью инфракрасных сушильных аппаратов в щадящем (до +50^оС) температурном режиме, при котором сохраняется биологическая активность компонентов.

Продолжительность сушки составляет 15-20 мин.

Далее препарат гранулируется, таблетируется, расфасовывается и упаковывается.

Срок хранения полученного таким образом препарата без потери активности составляет 24 мес в условиях комнатной температуры 17-25^оС.

Примеры, иллюстрирующие предлагаемый состав препарата Милайфа.

П р и м е р 1. Мицелий гриба выращивали в условиях отъемно-доливного культивирования в ферментационном аппарате объемом 200 л, с использованием следующей питательной среды, мас. Свекловичная меласса 4 (2 по редуцирующим веществам) Аммоний азотнокислый 0,3 Калий кислый фосфорно- кислый 0,2 Вода до 100 рН 5,5-5,8
Посевной материал вносили в количестве 5 об. температура культивирования 24±1^оС, продолжительность одного цикла культивирования 14 ч. Содержание АСВ составило 20 г в 1 л среды. Продуктивность процесса 1,4 кг/м³/ч.

Полученный таким образом препарат имел следующий состав, мас. Общий белок (N x 6,25) 60 Углеводы 13 Липиды 8 Нуклеиновые кислоты 3 Минеральные вещества 8 Витамины 2,6 Вода 5,4
П р и м е р 2. Мицелий выращивали в условиях отъемно-доливного культивирования в ферментационных аппаратах объемом 30 л на питательной среде следующего состава, мас. Сахар-сырец 2 Аммоний азотнокислый 0,3 Калий кислый фосфор- нокислый 0,2 Кукурузный экстракт 0,05 Вода До 100 рН 5,7-6,0
Посевной материал вносили в количестве 8 об. температура культивирования 25±1^оС. Продолжительность одного цикла 13 ч. Далее осуществляли слив культуральной среды в объеме 92% вносили новую питательную среду и продолжали культивирование, через 13 ч операцию повторяли. Концентрация АСВ составила 20,1 г в л.

Продуктивность процесса 1,5 кг/м³/ч.

Полученный таким образом препарат имел следующий состав, мас. Общий белок (N x 6,25) 63 Углеводы 10 Липиды 4 Нуклеиновые кислоты 6 Минеральные вещества 6 Витамины 3,1 Вода 7,9
П р и м е р 3. Выращивание мицелия проводили так же, как указано в примере 2, за исключением того, что посевной материал вносили в количестве 10 об. Температура культивирования 26±1^оС, рН среды 6,0-6,2.

В этом случае продолжительность культивирования составила 12,5 ч, накопление АСВ 20,2 г в л.

Продуктивность процесса 1,6 кг/м³/ч.

Препарат имел следующий состав, мас. Общий белок (N x 6,25) 61,5 Углеводы 11,5 Липиды 6 Нуклеиновые кислоты 4,5 Минеральные вещества 7 Витамины 2,8 Вода 6,7

Формула изобретения

Препарат, влияющий на тканевой обмен, отличающийся тем, что он получен в результате жидкофазного глубинного культивирования гриба Fusarium sambusinum Fuckel var. ossicolum(Berk.et Curt)Bilai ВСБ 917 (ВКПМ F169) с последующим отделением от культуральной среды и обезвоживанием, при этом препарат характеризуется составом, мас.

Общий белок (N x 6, 25) 60 63
Углеводы 10 13
Липиды 4 8
Нуклеиновые кислоты 3 6
Минеральные вещества 6 8
Витамины 2,6 3,1
Вода Остальное
и обладает способностью нормализации показателей холестерина и триглицеридов в сыворотке крови больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями, протекающими на фоне нарушений липидного обмена, снижает риск развития ишемической болезни сердца, повышает неспецифическую резистентности организма и является протекторным средством защиты от повторного облучения, способствует увеличению числа лейкоцитов при лейкопениях, уменьшает выраженность аутоиммунных процессов в основном на антигены желудочно-кишечного тракта и является гипосбалансирующим средством к бактериальным аллергенам.

2. Препарат по п.1, отличающийся тем, что обезвоженный продукт таблетирован или гранулирован, или порошкообразного состояния.

3. Применение штамма гриба Fusarinm sambucinum Fuckel var. ossicolum (Bercet Curt) Bilai ВСБ-917 (ВКПМ F169) для получения препарета, влияющего на тканевой обмен.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6