Вакцина против эшерихиоза животных

 

Использование: ветеринарная микробиология, биотехнология, вакцина против эшерихиоза животных. Сущность изобретения: вакцина содержит антигены эшерихий: соматические 078, 0141, белковые адгезивные антигены К88, К99, 987Р, F41, капсульные полисахаридные К80, К87, ТЛ, Тс анатоксины, обеспечивающие в крови иммунизированных животных синтез специфических антител, ингибирующих основные процессы развития коли-инфекции - колонизацию возбудителя в кишечнике животных и нейтрализацию эндо-и энтеротоксинов. Для профилактики эшерихиоза новорожденных вакцину вводят беременным животным двукратно с интервалом 12 14 дней за 1,5 2 месяца до родов, а также поросятам и ягнятам перед отъемом. 4 табл.

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и представляет собой вакцину, содержащую адгезивные антигены К88, К99, 987Р, F41, ТЛ и ТС анатоксины, предназначенную для профилактики эшерихиоза телят, поросят, ягнят и жеребят.

Эшерихиоз (колибактриоз, колидиарея, колиинфекция) широко распространен во всех странах мира и наносит значительной экономический ущерб из-за высокой заболеваемости и летальности. Основным средством борьбы с эшерихиозом является вакцинация беременных животных за 1-2 месяца до родов, а для профилактики отечной болезни поросят вакцинация их перед отъемом.

Известна поливалентная гидроокисьалюминиевая формолвакцина против колибактериоза (эшерихиоза) поросят, телят и ягнят. Вакцину изготавливают в двух вариантах из эшерихий следующих серологических групп и сероваров: Вакцина против колибактериоза поросят: 08:K43; 09:K30; 078:K80; 0138: K81; 0139:K82; 0141:K87:K88, 0147:K89:K88, 0149:K91:K88.

Вакцина против калибактериоза телят и ягнят: 08:K43, 09:K30, 015:K14: H30, 020, 026:K60, 041, 055, 078:K80, 086:K61:H32, 0115, 0117:К62:H4, 0119: K69:H4, 0101:K99.

Вакцину вводят внутримышечно двукратно с интервалом 10-15 дней крупному рогатому скоту в дозах10-15 и 10-15, свиньям 4-5 и 5-6, поросятам перед отъемом 1-1,5 и 1,5-2, овцам 3-4 и 4-5, ягнятам перед отъемом 1-1,5 и 1,5-2 см³.

Основными недостатками вакцины являются невысокая иммуногенность по отношению к эпизоотическим штаммам эшерихий, содержащим адгезивные антигены К88 и К99 и отсутствие иммунитета против штаммов с адгезивными антигенами F41 и 987Р, а также наличие большого числа штаммов различных серогрупп, предназначенных для создания иммунитета к О-антигенам, играющим, как оказалось второстепенную роль в развитии инфекционного процесса и в иммуногенезе.

Целью изобретения является повышение антигенной и иммуногенной активности, расширение спектра действия и защитного эффекта вакцины путем создания препарата нового класса, изготовленного на основе полисахаридных капсульных, соматических, адгезивных антигенов, термолабильного (ТЛ) и термостабильного (ТС) анатоксинов.

Поставленная цель достигнута созданием вакцины против эшерихиоза животных, содержащей полисахаридные капсульные антигены К80, К87, соматические антигены 078, 0141; антигены адгезии К88, К99, 987Р, F41; ТЛ и ТС-анатоксины эшерихий; адъювант, консервант, бульон Хоттингера и фосфатно-мочевинный буфер.

В качестве продуцентов антигенов использованы следующие штаммы: 1. Escherichia coli ВГНКИ N 305-37/11 (078:K80) 2. Escherichia coli ВГНКИ N 334-37/12 (0141:K87:K88) 3. Escherichia coli ВГНКИ N 453-37/17 (0115:K88) 4. Escherichia coli ВГНКИ N 353-37/17 (0141:K99) 5. Escherichia coli ВГНКИ N 397-37/14 (09:K103:987P) 6. Escherichia coli ВГНКИ N 398-37/14 (0101:F41) Штаммы Eschericgia coli: ВГНКИ N 397-37/14, ВГНКИ N 305-37/11, ВГНКИ N 398-37/14, ВГНКИ N 454-37/17, ВГНКИ N 334-37/12, ВГНКИ N 453-37/17 депонированы в коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов.

Штаммы Escherichia coli, предназначенные для изготовления вакцины, характеризуются следующими свойствами.

Морфологические свойства. Полиморфные палочки размером 0,8-1,5 х 2,0-6,0 мкм, не образуют спор, перитрихи, окрашиваются по Граму отрицательно.

Культуральные свойства. На мясопептонном агаре все штаммы образуют круглые колонии с ровными краями, слегка выпуклые, серо-белого цвета без пигмента, слизистые, мелкозернистые с диаметром 2-4 мм и более. На среде Эндо колонии малинового цвета с металлическим отливом. Все штаммы находятся в стойкой S форме и в обычных условиях не диссоциируют. На мясопопептонном бульоне видимое помутнение среды наблюдается через 4-5 ч культивирования при температуре 37-38^оС, через 14-16 ч рост бывает обильным. Генерированное время у штаммов составляет 21±3 мин.

Ферментативные свойства. Все штаммы имеют следующие ферментативные свойства: образуют индол, не образуют сероводород, дают положительную реакцию с митиленовым красным на среде Кларка, не образуют ацетил-метил-карбинол, не растут на среде Симонса, не растут на среде с цианистым калием, не разжижают желатину и свернутую кровяную сыворотку, свертывают, но не пептонизируют молоко, восстанавливают нитраты в нитриты, сбраживают с образованием кислоты и газа глюкозу, лактозу, маннит, арабинозу, мальтозу, ксилозу, тригалозу, сорбит, рафинозу (кроме штаммов 397-37/14, 398-37/14, 453-37/17), несбраживают дульпит (кроме штаммов ВГНКИ N 305-37/11, 334-37/12), сахарозу, адонит, инозит, целлобиозу.

Характеристика свойств штаммов приведена в табл.1.

В качестве продуцента адгезивного антигена К88 использован штамм Escherichia coli ВГНКИ N 453-37/17, в качестве продуцентов адгезивного антигена К99 использован штамм Escherichia coli N 454-37/11.

Антигены К88 и К99 представляют собой филаментозные образования на поверхности бактериальных клеток. Данные антигены выделяют из бактериальной массы штаммов-продуцентов путем тепловой обработки как описано в примере 1. Антиген К88 имеет белковую природу и состоит из белковых субъединиц с мол.м. 25000-26200 дальтон, определенной путем электрофореза в SDS 11% полиакриламидном геле (в качестве стандартов использованы бычий альбумин, пепсин, трипсин и лизоцим с мол.м. соответственно 68000, 35000, 24000 и 14600 дальтон). В лиофилизованном препарате содержит 95-96% белка; 2-3% липидов и 1-2% углеводов. Антиген К88 термолабилен и денатурируется при температуре 70^оС в течение 30 мин. Изоэлектрическая точка антигена К88 при рН 3,5. При электронно-микроскопическом исследовании антиген имеет палочковидную структуру следующих размеров: 4,5 нм в диаметре и до 120 нм в длину. Подлинность и серологическую активность адгезивного антигена К88 определяют в РДП с МкАт или моноспецифической анти-К88 сывороткой (титр 1:64). Титр антигена в этой реакции составляет (1:16)-(1:32). Антигенную активность определяют в опытах на кроликах путем внутрибрюшинного введения антигена с последующим тестированием сыворотки в РА с моноплазмидным штаммом. Титр антител в сыворотке крови кроликов должен быть не ниже 1:1600. Антиген К99 представляет собой белок и состоит из субъединиц с мол.м. 18500-22500 дальтон. В лиофилизированном препарате содержится 93-94% белка, 4-5% липидов и 1-2% углеводов. Антиген К99 термолабилен и денатурируется при температуре 70^оС в течение 30 мин. Изоэлектрическая точка антигена К99 при рН 9,5. При электронно-микроскопическом исследовании антиген имеет палочковидную структуру с диаметром 8,4 нм и длиною до 130 нм с большой склонностью к агрегации. Титр адгезивного антигена К99 в РДП с МкАт или моноспецифической анти-К99 сывоpоткой (титр 1:64) составляет (1:8)-(1:16). Антигенную активность определяют методом, описанным для антигена К88. Титр антител в сыворотке крови кроликов должен быть не ниже 1:1280.

В качестве продуцента адгезивного антигена 987Р использован штамм Escherichia coli ВГНКИ N 397-37/14 с антигенной формулой 09:K103:987P. Штамм выделен от поросенка 5-дневного возраста; агглютинируется гомологичной О-коли сывороткой до титра 1:9000, сывороткой 0137 1:200; с О-коли сыворотками других серогрупп в реакцию не вступает. Эшерихиозная анти-987Р сыворотка агглютинирует штамм до титра 1:800. Штамм активно продуцирует адгезивный антиген 987Р при культивировании в реакторе на среде Хоттингера при аэрации, активном перемешивании и температуре 37-38,5^оС. Антиген 987Р расположен на поверхности бактериальной клетки в виде филаментозных образований и выделяется из нее путем тепловой обработки как описано в примере 1. Адгезивный антиген 987Р имеет белковую природу и состоит из белковых субъединиц с мол.м. 19400-22500 дальтон. В лиофилизированном препарате содержится 97-98,5% белка; 2-2,5% липидов и 0,5-1% аминосахаров. Антиген 987Р термолабилен и денатурируется при температуре 70^оС в течение 30 мин. Изоэлектрическая точка антигена 987Р при рН 3,7. При электронно-микроскопическом исследовании антиген имеет палочковидную структуру следующих размеров: 7 нм в диаметре и до 200 нм в длину. Титр адгезивного антигена 987Р в РДП с МкАт или моноспецифический анти-987Р сывороткой (титр 1:64) составляет 1:8 1:16. Антигенную активность определяют в РА. Титр антител в сыворотке крови кроликов должен быть не ниже 1:1280.

В качестве продуцента адгезивного антигена F-41 использован штамм Escherichia coli ВГНКИ N 398-37/14 с антигенной формулой 0101:F41. Штамм выделен от теленка 3-дневного возраста; агглютинируется гомологичной О-коли сывороткой до титра 1:3200 и гетерологичными сыворотками 04-1:400, 09, 015, 0138-1: 200, 02, 018-1:100, 0117, 0142-1:50; анти-F41 сывороткой до титра 1:800; активно продуцирует адгезивный антиген F-41 на среде Хоттингера при культивировании в реакторе при температуре 37-38^оС, аэрации и активном перемешивании.

Антиген F41 расположен на поверхности бактериальной клетки в виде филаментозных образований и выделяется из нее путем тепловой обработки как описано в примере 1. Адгезивный антиген F41 представляет собой белок и состоит из субъединиц с мол.м. 28000-29000 дальтон. В лиофилизированном препарате содержится 95,5-96% белка; 3-3,5% липидов и 0,5-1% углеводов. Антиген F41 термолабилен и полностью денатурируется при температуре 70^оС в течение 30 мин. Изоэлектрическая точка антигена F41 при рН 4,0. При электронно-микроскопическом исследовании антиген имеет палочковидную структуру с диаметром 4 нм и длиною до 110 нм. Титр адгезивного антигена F41 в РДП с МкАт или моноспецифической анти-F41 сывороткой (титр 1:64) составляет 1:8-1:16. Антигенную активность определяют в РА. Титр антител в сыворотке крови кроликов должен быть не ниже 1:1280.

Адгезивные антигены К88, К990 987Р, F41 входят в состав вакцины в качестве основных иммуногенных компонентов, которые вызывают образование антител, препятствующих адсорбции энтеропатогенных эшерихий в тонком отделе кишечника молодняка сельскохозяйственных животных.

Штамм Escherichia coli ВГНКИ N 334-37/12 с антигенной формулой 0141:K87: K88 выделен от поросенка 7-дневного возраста; агглютинируется гомологичной О-коли сывороткой до титра 1: 3200 и гетерологичными сыворотками 08, 09, 0142, 047 1:100 и 0103-1:300; анти-К88 сывороткой до титра 1:800; вызывает гемолиз типа β и гемолизирует с равной интенсивностью эритроциты барана и кролика.

Штамм Escherichia coli ВГКИ N 305-37/111 с антигенной формулой 078:К80 выделен от теленка 2-дневного возраста; агглютинируется гомологичной сывороткой 078 до титра 1:10000 и гетерологичными сыворотками 08 1:500, 0103, 0127 и 0137 1:400, 086 1:100, 0139 1:200, 10141 1:800; высоко вирулентен для белых мышей, ЛД₅₀ составляет 1,2 х 10⁷ микробных клеток при внутрибрюшинном введении.

Штаммы Escherichia coli ВГНКИ N 334-37/12, ВГНКИ N 397-37/14, ВГНКИ N 454-37/17 и ВГНКИ N 453-37/17 являются активными продуцентами термолабильного токсина. Термолабильный токсин стабильно накапливается в бульоне Хоттингера при реакторном культивировании штаммов. Индекс дилятации на изолированной петле кишечника поросенка составляет: для штамма ВГНКИ N 334-37/12 1,6-2,0; ВГНКИ N 397-37/14 1,0-1,2; ВГНКИ N 454-37/17 1,0-1,6 и ВГНКИ N 453-37/17 1,8-2,4. Оптимальными условиями, для которых наблюдается максимальное накопление ТЛ токсина в культуральной жидкости, являются: рН среды от 7,0 до 8,0 и температуре 36-38^оС. ТЛ токсин представляет собой белок и состоит из субъединиц с мол.м. 22000-24000 дальтон. В лиофилизированном препарате содержит 97-98% белка; 0,5-1% липидов и 1,5-2% углеводов. ТЛ токсин термолабилен и полностью инактивируется при температуре 60^оС в течение 15 мин. Изоэлектрическая точка ТЛ токсина при рН 4,0. Серологическую активность термолабильного токсина, содержащегося в среде культивирования, определяют в РДП с моноспецифической антисывороткой (титр 1:32). Титр ТЛ токсина в этой реакции составляет (1:4)-(1:8). Термолабильный токсин имеет антигенное родство с токсином холерного вибриона и дает перекрестные реакции с сыворотками, полученными к этому антигену.

Штаммы Escherichia coli ВГНКИ N 305-37/11 и ВГНКИ N 398-37/14 являются активными продуцентами термостабильного токсина, который стабильно накапливается в бульоне Хоттингера при культивировании в реакторе. Индекс дилятации на изолированной петле кишечника кролика после введения прогретого (80^оС 20 мин) токсина составляет: для штамма ВГНКИ N 305-37/11 1,2-1,5 и ВГНКИ N 398-37/14 1,0-1,2. Оптимальными условиями, при которых наблюдается максимальное накопление ТС токсина в культуральной жидкости, являются: рН среды 8,0-8,5 и температуре 36-36,5^оС. ТС токсин представляет собой низкомолекулярный белок и состоит из субъединиц с мол.м. 4400-5100 дальтон. В лиофилизированном препарате содержитcя 93-94% белка; 4-5% липидов и 1-2% углеводов. ТС токсин термолабилен и инактивируется при температуре 100^оС в течение 30 мин. Изоэлектрическая точка ТС токсина при рН 10. Титр ТС токсина в РДП с моноспецифической антисывороткой (титр 1:16) составляет 1:4 1:8. Термолабильный и термостабильный анатоксины входят в состав вакцины как и адгезивные антигены в качестве основных иммуногенных компонентов и предназначены для стимуляции образования антител, нейтрализующих действие токсинов эшерихий.

П р и м е р 1. Способ изготовления вакцины против эшерихиоза животных заключается в следующем.

Реактивацию штаммов и приготовление матровых расплодок проводят в соответствии с действующей Инструкцией по изготовлению и контролю поливалентной гидрооксиалюминиевой формолтиомерсаловой вакцины против колибактериоза (эшерихиоза) поросят, телят, ягнят, утвержденной ГУВ МСХ СССР 16 июня 1987 г. Штаммы выращивают раздельно в бульоне Хоттингера, содержащим аминный азот 150-200 мг/% триптофан 50-100 мг/% при рН 7,8-8,0. Способ получения адгезивных антигенов и токсинов заключается в следующем. Выращенные в реакторах штаммы NN 397-37/14, 398-37/14, 453-37/17, 454-37/17 отделяют от культуральной жидкости на сепараторе или центрифуге при 10-15 тыс.об/мин. Культуральную жидкость сливают в отдельную емкость и определяют концентрацию ТЛ и ТС токсинов в РДП. Титр термолабильного и термостабильного токсинов в культуральной жидкости должен быть не менее (1:4)-(1:8). Бактериальную массу штаммов ресуспендируют в фосфатно-мочевинном буфере до концентрации не менее 100 млрд/см³ микробных клеток; прогревают при температуре 60-65^оС в течение 20-25 мин; супернатант отделяют от бактериальной массы сепарированием при 10-15 тыс. об/мин и проверяют на концентрацию адгезивного антигена в РДП. Титр каждого антигена в супернатанте должен быть не менее 1:8-1:16. Полученные супернатанты смешивают в разных частях, консервируют формалином до 0,3% -ной концентрации и используют для изготовления вакцины. Бактериальную массу утилизируют. В выращенных культурах штаммов N 305-37/11 и N 334-37/12 определяют концентрацию микробных тел и разбавляют культуральной жидкостью полученной при выращивании штаммов 397-37/14, 398-37/14, 453-37/17, 454-37/17 до концентрации 15,0-16,0 млрд/см³ микробных тел. Культуры штаммов N 305-37/11 и N 334-37/12 cмешивают в равных частях, добавляют формалин до 0,3%-ной концентрации, выдерживают 15-16 дней при температуре 37-38^оС, затем добавляют содержащий адгезивные антигены супернатант до 25-30%-ной концентрации, гидроокись алюминия 6%-ную до 30%-ной концентрации и дополнительно формалин до 0,12-0,15% -ной концентрации. Доводят рН 10%-ным раствором NaoH до 7,2-7,4, оставляют вакцину при температуре 10-22^оС и проводят контроль на стерильность. Стерильную вакцину расфасовывают во флаконы при включенной мешалке, закрывают резиновыми пробками, обкатывают металлическими колпачками и этикетируют.

Расфасованную вакцину проверяют на стерильность, безвредность и активность.

Полученная вакцина имеет следующий компонентный состав: суспензия штамма в культуральной среде N 305-37/1 (078:K80) (микробных клеток) 4,05 х 10¹²-5,0 х 10¹²
суспензия штамма в культуральной среде N 334-37/12 (0141:K87:K88) (микробных клеток) 4,5 х 10¹²-5,0 х 10¹²
адгезивный антиген К88 в фосфатно-мочевинном буфере с титром в РДП 1:8-1:16 60-80 см³
адгезивный антиген К99 в фосфатно-мочевинном буфере с титром с РДП 1:8-1:16 60-80 см³
адгезивный антиген 987Р в фосфатно-мочевинном буфере с титром в РДП 1:8-1: 16 60-80 см³
адгезивный антиген F41 в фосфатно-мочевинном буфере с титром в РДП 1:8-1:16 60-80 см³
гидрат окиси алюминия 6%-ный 270-320 см³
формалин 2,7-3,2 см³
культуральная жидкость (бульон Хоттингера) с термолабильным и термостабильным анатоксинами (титр в РДП (1:4)-(1:8) до 1 л.

Вакцина приведенного состава содержит необходимое количество протектиновых антигенов, обеспечивающее формирование иммунитета высокой напряженности у животных различных видов по отношению к энтеропатогенным эшерихиям независимо от их серогрупповой принадлежности. Вакцина содержит соматические антигены 078 и 0141 в форме анаэндотоксинов, белковые адгезивные антигены К88, К99, 987Р, F41 широко распространенные полисахаридные капсульные антигены К80 и К87, термолабильный и термостабильный анатоксины.

П р и м е р 2. Концентрацию адгезивных и капсульных антигенов в предлагаемой вакцине против эшерихиоза, в отличие от прототипа, проверяли на кроликах. С этой целью кроликами массой 3-3,5 кг вводят внутрибрюшинно (можно внутримышечно) вакцину в дозе 0,75 см³. Через 24-27 дней у кроликов берут кровь и исследуют сыворотку в реакции агглютинации, используя в качестве антигенов производственные и моноплазмидные штаммы продуценты адгезивных антигенов. Результаты приведены в табл.2.

Из приведенных материалов видно, что предлагаемая вакцина вызывает образование антител и адгезивным антигенам К88, К99, 987Р, F41 в титре от 1: 367,6 до 1:735,2, а к соматическим и полисахаридным капсульным антигенам 1: 211,1 278,6, при полном отсутствии антител у кроликов после введения поливалентной ГОА формолвакцины против колибактериоза (эшерихиоза) телят, ягнят и поросят к антигенам 987Р и F41 и значительно меньшем содержании к адгезивным антигенам К88 и К99, соматическим и полисахаридным капсульным антигенам.

П р и м е р 3. Эффективность вакцины против эшерихиоза животных (Коли-Вак К88, К99, 987Р, F41 и ТЛ и ТС-анатоксины) проверена в остром опыте на поросятах. В опыт взято 12 свиноматок, из которых 5 вакцинировали предлагаемой вакциной, 5 вакциной прототипом и 2 оставлены не вакцинированными. В опыт отобрано 52 поросенка от вакцинированных и 20 от невакцинированных свиноматок. Поросят всех групп заражали перорально смесью контрольных штаммов эшерихий, продуцирующих адгезивные антигены, ТС и ТЛ токсины, в дозе ЭЛД₅₀. В группе поросят, иммунизированных предлагаемой вакциной, заболели 11, пали 4 и выжили 48 поросят; в группе животных, вакцинированных коммерческой вакциной заболели 26, пали 14 и выжили 38 поросят. В контрольной группе соответственно 20, 16 и 4 поросенка. Таким образом, выживаемость поросят при вакцинации предлагаемой вакциной составила 92,3% против 73,1% у поросят, иммунизированных коммерческой вакциной и 20% в контроле.

П р и м е р 4. Способ профилактики эшерихиоза включает иммунизацию животных путем двукратного внутримычшечного введения с интервалом 10-15 дней вакцины против эшерихиоза животных (Коли-Вак К88, К99, 987Р, F41, ТЛ и ТС-анатоксины), содержащей суспензию в культуральной среде штаммов Escherichia coli ВГНКИ N 305-37/11, ВГНКИ N 334-37/12 в концентрации 9,0 х 10⁹-10¹⁰ микробных клеток в 1 см³; адгезивные антигены К88, К99, 987Р, F41 в фосфатно-мочевинном буфере с титром в РДП не менее (1:8)-(1:16); термолабильный и термостабильный анатоксины в культуральной жидкости с титром в РДП не менее (1: 4)-(1:8); гидрат окиси алюминия 6%-ный до 27-32% формалин 0,27-0,32%-ной концентрации.

Вакцину вводят животным в следующих дозах (табл.3).

Эффективность вакцинации оценивают по количеству заболевших и павших от эшерихиоза животных. Результаты приведены в табл.4.

Из табл. 4 видно, что иммунизация вакциной против эшерихиоза животных (Коли-Вак К88, К99, 987Р, F41, ТЛ и ТС-анатоксины) в указанных дозах обеспечивает более высокую сохранность по сравнению с поливалентной ГОА формолвакциной против колибактериоза (эшерихиоза) телят, ягнят и поросят. Сохранность составила поросят соответственно 95,5% против 87,9% телят 98% против 92,2% заболеваемость поросят 16,2% против 38,4% телят 11,2% против 33,3%

Формула изобретения

ВАКЦИНА ПРОТИВ ЭШЕРИХИОЗА ЖИВОТНЫХ, включающая антигены эшерихий, формалин, гидроксид алюминия и культуральную среду, отличающаяся тем, что из антигенов она содержит адгезивный антиген К 88 и фосфатно-мочевинном буфере с титром в РДП 1 8 1 16, выделенный из штамма Escherichia coli ВГНКИ N 453-37/17, представляющий собой белок из субъединиц с мол.м. 25000 26000 Д, палочковидной структуры 4,5 нм в диаметре и до 120 нм в длину, с изоэлектрической точкой 3,5, адгезивный антиген К 99 в фосфатно-мочевинном буфере с титром в РДП 1 8 1 16, выделенный из штамма Escherichia coli ВГНКИ N 454-37/17, представляющий собой белок из субъединиц с мол.м. 18500 - 22500 Д палочковидной структуры, 8,4 нм в диаметре и до 130 нм в длину, с изоэлектрической точкой 9,5, адгезивный антиген 987 Р в фосфатно-мочевинном буфере с титром в РДП 1 8 1 16, выделенный из штамма Escherichia coli ВГНКИ N 397-37/14, представляющий собой белок из субъединиц с мол.м. 19400 - 22500 Д, палочковидной структуры, 7 нм в диаметре и до 200 нм в длину, с изоэлектрической точкой 3,7, адгезивный антиген F 41 в фосфатно-мочевинном буфере с титром в РДП 1 8 1 16, выделенный из штамма Escherichia coli ВГНКИ N 398-37/14, представляющий собой белок из субъединиц с мол.м. 28000 - 29000 Д, палочковидной структуры, 4 нм в диаметре и до 110 нм в длину, с изоэлектрической точкой 4,0, термолабильный анатоксин в культуральной среде с титром в РДП 1 4 1 8, полученный при культивировании штаммов Escherichia coli ВГНКИ N 334-37/12, ВГНКИ N 397-37/14, ВГНКИ N 454-37/14 и ВГНКИ N 453-37/17, представляющий собой белок из субъединиц с мол.м. 22000 24000 Д и изоэлектрической точкой 4,0, термостабильный анатоксин в культуральной среде с титром в РДП 1 4 1 8, полученный при культивировании штаммов Escherichia coli ВГНКИ N 305-37/11 и ВГНКИ N 398-37/14, представляющий собой белок из субъединиц с мол. м. 4400 5100 и изоэлектрической точкой 10,0, суспензию клеток штамма Escherichia coli ВГНКИ N 305-37/11 в культуральной среде, суспензию клеток штамма Escherichia coli ВГНКИ N 334-37/12 в культуральной среде при следующем содержании компонентов, на 1 л вакцины:
Суспензия клеток штамма Escherichia coli ВГНКИ N 305-37/11 в культуральной среде, · 10¹² м.к. 4,5 5,0
Суспензия клеток штамма Escherichia coli ВГНКИ N 334-37/12 в культуральной среде, · 10¹² м.к. 4,5 5,0
Адгезивный антиген К 88 в фосфатно-мочевинном буфере с титром в РДП 1 8 1 16, см³ 60 80
Адгезивный антиген К 99 в фосфатно-мочевинном буфере с титром в РДП 1 8 1 16, см³ 60 80
Адгезивный антиген 987 Р в фосфатно-мочевинном буфере с титром в РДП 1 8 1 16, см³ 60 80
Адгезивный антиген F 41 в фосфатно-мочевинном буфере с титром в РДП 1 8 1 16, см³ 60 80
Гидроксид алюминия 6%-ный, см³ 270 320
Формалин, см³ 2,7 3,2
Термолабильный и термостабильный анатоксины в культуральной среде с титром в РДП 1 4 1 8, л До 1

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3