Способ получения биоматериала для использования в офтальмологии

 

Предлагаемый способ может быть использован для приготовления материалов при оперативном лечении миопии средней и высокой степени, для получения склеропластического материала и антиглаукоматозных дренажей. Способ заключается в том, что в качестве животного сырья используют перихард, который механически очищают, нарезают, пятикратно замораживают и размораживают в 1% - ном растворе хлорида натрия и дистиллированной воды в соотношении 1 : 1 от 48 до 72 ч.

Изобретение относится к медицине, а более конкретно к офтальмологии и может быть использовано для приготовления материалов при оперативном лечении миопии средней и высокой степени для получения склеропластического материала, при оперативном лечении глаукомы для получения антиглаукоматозных дренажей, а также как источник получения растворов коллагена при лечении миопии легкой степени и изготовления наружных лекарственных форм.

Известен способ для лечения близорукости, который осуществлен благодаря получению и использованию материала из ткани перикарда. Материал заливают физраствором с антибиотиком на 1-2 ч, затем обрабатывают водным раствором бриллиантовой зелени, помещают в 70%-ный этиловый спирт и высушивают (авт. св. СССР N 1621921).

Недостатками данного способа является то, что обработка материала не приводит к разрушению клеток стромы перикарда, кровеносных сосудов, не выводятся другие несвязанные высокомоллекулярные биологические вещества, а водный раствор бриллиантовой зелени обладает сравнительно слабыми антисептическими свойствами.

Целью изобретения является получение биоматериала для использования в офтальмологии, где в качестве источника животного сырья используют перикард быка, который соответствующим образом очищен и обработан растворами.

Техническим результатом, достигаемым при использовании изобретения, является получение универсального биоматериала, который может широко использоваться для получения ряда изделий, таких, как материал для склеропластики, антиглаукоматозные дренажи, материал для лечения макулярных дистрофий и для получения жидких лекарственных форм.

Технический результат достигается тем, что в качестве сырья используют перикард быка, который механически очищают, нарезают, пятикратно замораживают и размораживают в 0,9%-ном растворе хлорида натрия и дистиллированной воды в соотношении 1:1, дважды помещают в 1%-ный раствор аммиака и этилового спирта в соотношении 1: 1 от 48 до 72 ч, после чего пять раз отмывают по 15-30 мин в дистиллированной воде, помещают в раствор 70%-ного этилового спирта и стерилизуют γ-облучением дозой 2,5 Мград.

Перикард является соединительной оболочкой сердца, содержит мало сосудов, клеток, строма его состоит в основном из коллагена, который слабо растворим, обладает высокой механической прочностью и является низкоантигенным. Кроме того, раствор такого коллагена обладает высокой ферментативной устойчивостью, что очень важно при изготовлении коллагенопластичных материалов.

Механически очищенный перикард нарезают до необходимых размеров, подвергают пятикратному замораживанию и оттаиванию в растворе хлорида натрия и дистиллированной воды с целью выхода из ткани высокомоллекулярных белков и гликопротеинов, которые, как известно, являются основными антигенами этой ткани. Эксперимент показал, что для их полного выхода из данной ткани достаточно пятикратного замораживания и оттаивания.

Для освобождения ткани от липидов, липопротеинов ткань обрабатывают 1% -ным раствором спирта и аммиака от 48 до 72 ч. Эту процедуру повторяют дважды. Экспериментально установлено, что инкубация кусочков перикарда должна проводиться в таком растворе не менее 48 ч, поскольку при меньшем времени достаточного выхода липидов не происходит. Инкубация в течение 72 ч является достаточной, так как при большем времени инкубации может наступать деструкция коллагена.

Для полного вымывания раствора аммиака и спирта кусочки ткани помещают в дистиллированную воду. Установлено, что время выхода аммиака и спирта (в основном аммиака) происходит после 5 раз по 15 мин, при меньшем времени отмывки отмечали следы аммиака и кислые значения рН. 30-минутная отмывка полностью удаляет аммиак из ткани и поэтому большего времени для отмывки не требуется.

Консервирующей и одновременно стерилизующей средой для кусочков является 70%-ный этиловый спирт, а стандартной стерилизацией γ-облучение.

Способ осуществляется следующим образом.

Перикард механически очищают от жира, сосудов и прочих загрязнений.

Нарезают на кусочки необходимых размеров и конфигураций. Ополаскивают в водопроводной воде.

Готовят раствор хлорида натрия (0,9% ) и дистиллированной воды 1:1 и заливают им кусочки ткани, помещают их в морозильную камеру и после заморозки оттаивают. Процедуру повторяют 5 раз.

Готовят 1%-ный раствор аммиака и 1%-ный раствор этилового спирта, смешивают их в соотношении 1:1 и заливают этим раствором кусочки.

Через 48-72 ч раствор сливают и заменяют на свежий.

После повторной инкубации раствор сливают, а кусочки пять раз отмывают по 15-30 мин в дистиллированной воде, меняя каждый раз воду на свежую. Контроль рН и реакция Видаля на аммиак.

Отмытые кусочки расфасовывают по флаконам с 70%-ным этиловым спиртом и стерилизуют γ-облучением дозой 2,5 Мград.

Примеры конкретного выполнения способа.

П р и м е р 1. Получение антиглаукоматозных дренажей.

Хорошо очищенную строму перикарда нарезали на полоски шириной 0,2 см и пятикратно замораживали и оттаивали в 0,9%-ном растворе хлорида натрия и дистиллированной воды, после чего отмывали и помещали полоски в раствор аммиака (1%) и этилового спирта (1%), инкубировали в этом растворе 48 ч дважды, после чего пять раз отмывали в дистиллированной воде по 15 мин при рН 6,7-7,0 отмывание прекращали и закатывали полоски в пузырьки с 70%-ным этиловым спиртом. Стерилизовали γ-облучением и отдавали после бактериологического контроля в клинику.

П р и м е р 2. Приготовление склеропластического материала.

Хорошо очищенную строму перикарда вырубали на стандартной вырубке, пятикратно замораживали и оттаивали в 0,9% -ном растворе хлорида натрия и дистиллированной воды, дважды инкубировали кусочки по 50 ч в растворе аммиака и спирта (1%), после чего отмывали кусочки в дистиллированной воде пять раз по 20 мин при рН 6,5-7,0 и при отрицательной реакции на аммиак отмывку прекращали, фасовали кусочки во флаконы с 70%-ным этанолом, стерилизовали γ-облучением и передавали в клинику.

П р и м е р 3. Приготовление материала для лечения макулярных дистрофий.

Очищенный перикард нарезали на кружочки необходимого размера, пятикратно замораживали и оттаивали как и в предыдущем случае, отмывали и 72 ч инкубировали кружочки в растворе аммиака и этилового спирта (1%), отмывали пять раз по 30 мин и при рН 6,5-7,0 отмывание прекращали. Фасовали во флаконы с 70% -ным этанолом, стерилизовали γ-облучением и передавали в клинику.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАТЕРИАЛА ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В ОФТАЛЬМОЛОГИИ, включающий обработку перикарда сельскохозяйственных животных растворами, отличающийся тем, что в качестве сырья используют перикард быка, который механически очищают, нарезают, пятикратно замораживают и размораживают в 0,9%-ном растворе хлорида натрия и дистиллированной воды в соотношении 1 : 1, дважды помещают в 1%-ный раствор аммиака и этилового спирта в соотношении 1 : 1 от 48 до 72 ч, после чего пять раз отмывают по 15 - 30 мин в дистиллированной воде, помещают в раствор 70%-ного этилового спирта и стерилизуют облучением дозой 2,5 Мград.