Способ получения производных имидазола или их физиологически переносимых солей

 

Использование: в химико-фармацевтической промышленнности в качестве антогонистов ангиотензина 2. Сущность: способ получения производных имидазола ф-лы 1 или их физиологически переносимых солей. Реагент 1: соединения ф-лы 2 с определенными значениями радикалов. Реагент 2: соединения ф-лы 3. Структура соединений ф-лы 1, 2, 3: и CH₂Aʹ III 3 табл.

Изобретение относится к области органической химии и касается способа получения новых производных имидазола.

Из Европейских заявок ЕР-А-324377, ЕР-А253310, ЕР-А-28834 и ЕР-А-323841 известны производные имидазола, пиррола, пиразола или триазола и их применение в качестве антагонистов рецепторов ангиотензина-11.

Согласно данному изобретению получают новые производные имидазола, которые являются неожиданно высокоэффективными антагонистами рецепторов ангиотензина-11 как in vitro, так и in vivo.

Согласно изобретению предлагается способ получения производных имидазола общей формулы I где R¹ алкил (С₃-С₇); R² группа формила, карбоксила, (С₁-С₄)-алкоксикарбонила или гидроксиметила; R^2' хлор или группа S(O)r R³; R³ алкил (С₁-С₆); А гетероциклический остаток из группы: имидазо-(1,2а)-пиридил, имидазо-(1,2-а)-пиримидил, бензоксазолил, бензо(в)-тиофе- нил, причем этот остаток может быть замещен одним или двумя одинаковыми или различными остатками, выбранными из группы: хлор, тетразолил, карбоксил, карбокси-(С₁-С₄)-алкил, (С₁-С₄)-алкоксикарбонил и фенил, возможно замещенный на фтор; r 0,1 или 2; или их физиологически переносимых солей, отличающийся тем, что соединение общей формулы II
R где R¹ и R² имеют указанные выше значения,
R^2' хлор или группа S-R³, где R³ имеет вышеуказанное значение, причем когда заместитель R² содержит карбоксильную группу, то она может быть защищена, подвергают взаимодействию с соединением формулы III
UCH₂A¹ где А¹ означает вышеуказанный гетероциклический остаток, замещенный одним или двумя одинаковыми или различными остатками, выбранными из ряда, содержащего хлор, циано, карбоксил, карбокси (С₁-С₄) алкил, (С₁-С₄) алкоксикарбонил и фенил, возможно замещенный фтором, причем, когда заместитель А¹ содержит карбоксильную группу, то она может быть защищена, U отщепляемая группа с получением соединений общей формулы Ia
R где R¹, R² и А¹ имеют вышеуказанные значения,
R² хлор или группа S-R³, где R³ имеет вышеуказанное значение, причем когда R² содержит карбоксильную группу, то она может быть защищена, и в случае получения соединений общей формулы I, в которой R²' означает группу S(O)r R³, где R³ имеет вышеуказанное значение;
r равно 1 или 2, соединение формулы Iа, где R²' означает группу S-R³, где R³ имеет вышеуказанное значение, подвергают взаимодействию с окислителем, или в случае получения соединений общей формулы I, в которой заместитель А содержит тетразольный остаток, соединение формулы Iа, где заместитель А² содержит цианогруппу, подвергают взаимодействию с циклизующим агентом с последующим удалением при необходимости карбоксизащитной группы и выделением целевого соединения в свободном виде или в виде физиологически переносимой соли.

Под физиологически переносимыми солями соединений формулы I понимают их органические и неорганические соли, которые описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences, изд. 17, с. 1418 (1985). Исходя из физической и химической стабильности и растворимости предпочтительны для кислых групп соли натрия, калия, кальция и аммония; для щелочных групп являются предпочтительными соли соляной кислоты, серной кислоты, фосфоновой кислоты, карбоновой кислоты или сульфоновых кислот таких, как уксусная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, винная кислота, р-толуолсульфоновая кислота.

Реакции проводятся при температурах от ниже комнатной до температуры кипения реакционной смеси, преимущественно между +20^оС и температурой кипения реакционной смеси в течение приблизительно 1-10 ч.

Соответствующие изобретению соединения формулы I антагонистически влияют на ангиотензин-11 рецепторы, поэтому могут применяться для лечения зависимой гипертензии ангиотензина 11. Применение возможно далее при сердечной недостаточности, кардиозащите, инфаркте миокарда, гипертрофии сердца, артериосклерозе, нефропатии, почечной недостаточности, а также сосудистых заболеваниях мозга таких, как транзисторные ишемические приступы и апоплексия.

Ренин является протеолитическим ферментом из класса аспартилпротеаз, который как следствие различных стимуляторов (уменьшение объема, дефицит натрия, В-рецепторная стимуляция) выделяется юкстагломеруларными клетками почки в кровообращение. Там он отщепляет от выделившегося из печени ангиотензиногена декапептид ангиотензин 1. Последний переводится с помощью фермента превращения ангиотензина (АСЕ) в ангиотензин-II. Ангиотензин играет существенную роль при регуляции кровяного давления, так как он непосредственно повышает кровяное давление при ангиоспазме. К тому же он стимулирует выделение альдостерона из надпочечника и повышает таким образом с помощью замедления выделения натрия внеклеточный объем жидкости, что, со своей стороны, содействует повышению кровяного давления.

Действиями пострецептора являются к тому же стимуляция реакции обмена фосфоинозитола (Са²⁺ -высвобождение), активизация протеинокиназы С и упрощение зависимых от сАМР гормонрецепторов.

Сродство соединений формулы I к рецептору ангиотензина-11 может определяться при измерении ¹²⁵j-ангиотензин-11 или ³Н-ангиотензин-11 вытеснения рецепторами в гломерулозной зоне мембран надпочечников крупного рогатого скота. К этому суспендируются препарированные мембраны в порошке при рН 7,4.

Чтобы помешать распаду радиоактивной лиганды во время инкубирования, добавляется апротинин, ингибитор пептидазы. Дополнительно применяются приблизительно 14000 срм индикатора с удельной активностью 74 ТВg (ммоль) товарный продукт) и некоторое количество рецепторного протеина, которое связывает 50% индикатора. Реакция начинается при добавлении 50 мкл мембранной суспензии к смеси из 100 мкл буфера + апротинина; 50 мкл буфера с ангиотензином-11 или рецептор ангатонистом или без них и 50 мкл индикатора. Через 60 мин инкубационного времени при 25^оС отделяется связанный и свободный радиолиганд благодаря фильтрационному анализу с фильтрами Whatmann® GFIC на Skatron -клеточном накопителе. Нехарактерные связи разрушаются при обработке фильтров 0,3% полиэтиленимино рН-10 (sigma, N 3143). При измерении радиоактивности в гаммасцинтилляционном счетчике определяется сила вытеснения радиолиганды рецептором. IС₅₀ значения, которые обозначают концентрацию ангибитора для вытеснения 50% лиганды, определяются по Сhem. и др. J.Theor.Biol. 59, 253 (1970). Они находятся для соединений формулы (I) в пределах 1˙10^-4 1˙10^-9 М. Для определения антагонистического действия соединений формулы (I) может измеряться их действие на индуцированное ангиотензином-11 повышение кровяного давления у наркотизированных крыс Sprague-Dawley.

В качестве наркотика служит Na-тиобарбитал /Trapanal® Byk Gulden (в дозировке 100 мг/кг внутрибрюшинно. Внутривенное введение осуществляется в яремную зону. Кровяное давление измеряется в А.сarotis, прежде всего предварительно обрабатываются животные тартратом пентолиния. (10 мг/г внутримышечно) таким образом, что достигается более низкий уровень кровяного давления (блокада ганглиев). АНG 11 /гипертензин®, Циба) вводится в объеме 0,1 мл (100 г внутривенно через 10-минутные промежутки. Доза составляет 0,5 мг/кг. Соединения формулы (I) растворяются в дистиллированной воде и вводятся в дозировках 0,1-1; 10 и 100 мг/кг внутривенно или интрадуоденально.

Соединения формулы (I) эффективны в пределах 0,1 100 мг/кг. Изобретение касается также получения фармацевтических составов, состоящих из соединения формулы I и других активных веществ, например диуретика, или нестероидные антивоспалительные активные вещества. Соединения формулы I могут применяться также в качестве диагностика для ренин-ангиотензин-системы.

Фармацевтические препараты содержат эффективное количество активного вещества формулы I и, возможно, другие активные вещества вместе с неорганическим или органическим применяемым в фармацевтике веществом-носителем. Применение может осуществляться через нос, внутривенно, подкожно или через рот. Дозировка активного вещества зависит от вида теплокровных, веса тела, возраста и от вида употребления.

Фармацевтические препараты данного изобретения получаются в виде раствора, смеси, гранул или драже.

Для оральной формы применения смешиваются активные соединения с обычными для этого дополнительными веществами добавками, такими как вещества-носители, стабилизаторы или инертные разбавители, и с помощью обычных методов доводятся до необходимой формы введения (таблетка, драже, капсулы, водные, спиртовые или масляные суспензии или водные, спиртовые или масляные растворы). В качестве инертных носителей могут применяться, например, гуммиарабик, магнезия, карбонат магния, фосфат калия, молочный сахар, глюкоза, стеарилфумарат магния или крахмал, в частности маисовый крахмал. При этом можно получать как сухие, так и влажные гранулы. В качестве масляных веществ-носителей или растворителей рассматриваются, например, растительные или животные масла такие, как подсолнечное масло или рыбий жир.

Для подкожной или внутривенной инъекции активные соединения или их физиологически переносимые соли желательно с обычными для этого веществами, такими как растворители-посредники, эмульгаторы или другие вспомогательные вещества, переводят в форму растворов, суспензии или эмульсии. В качестве растворителей рассматриваются, например вода, физиологические растворы повареной соли или спирты, например, этанол, пропандиол или глицерин, наряду с этим также сахарные растворы такие, как растворы глюкозы или маннита или также смесь из различных упомянутых растворителей.

1. Примеры на получение новых химических соединений.

Используемые в примерах сокращения имеют следующие значения:
DMF N, N-диметилформамид,
NBS N-бромсукцинимид,
AlBN -α,α-азобис-изобутиронитрил,
EI обработка быстрыми электронами,
DCl десорбционная химическая ионизация,
RT комнатная температура,
ЕЕ этилацетат (ЕtOAC),
DIP диизопропиловый эфир,
Н н.гептан.

П р и м е р 1. 1-[(2-карбокси-бензо[b]фуран-5-ил)метил]-2-бутил-4-хлоро-5-гидрокси- метил-имидазол
а) сложный этиловый эфир 5-метил-бензо[b]фуран-2-карбоновой кислоты.

12 г (0,088 моль) 2-гидрокси-5-метил-бензальдегида растворяются в 150 мл абс. DMF. Добавляются 14,6 г карбоната калия (0,105 моль), затем по каплям 9,5 г (0,088 моль) этилового эфира хлоруксусной кислоты. Через 3 ч разбавляют с обратным потоком 500 мл Н₂О, экстрагируют 3 раза этилацетатом, 4 раза промывают водой, сушат с сульфатом магния и сгущают. Хроматография на SiO₂ с этилацетатом (циклогексаном (1: 5) дала 7,6 г масла. МS (EI) 204 (М⁺)R_f [SiO₂; ЕtOAc)циклогексан (1:4)] 0,41.

b) сложный этиловый эфир 5-бромометил-бензо[b]фуран-2-карбоновой кислоты.

7,6 г (37 ммоль) соединения из а) кипятятся с 6,6 г N-BS и 300 мг AlBN 10 ч в 200 мл ССl₄ при обратном потоке. После охлаждения смешиваются с Н₂О. Фазы разделяются, органические фазы сушатся с MgSO₄ и сгущаются. Хроматография на SiO₂ с ЕtОАс (циклогексаном (1:4) дает 5,4 г масла. MS (EI) 282,284 (М⁺).

R_f [SiO₂, Et OAc/циклогексан (1:4)] 0,38
с) 1-[(2-Этоксикарбонил-бензо[b] фуран-5-ил)метил]-2-бутил-4-хлоро-5-гидроксиме- тил-
1 г (5,3 ммоль) 2-бутил-4-хлоро-5-гидроксиметил-имидазола (полученного согласно ЕР-А 253 310) растворяют в 20 мл метанола и смешивают с раствором 127 мг натрия в 5 мл метанола. Через 30 мин смесь сгущают и растворяют в 40 мл ДМF. 1,5 г (5,5 ммоль) соединения из b) добавляют и перемешивают 14 ч при 25^оС. После вливания в 200 мл Н₂О экстрагируют EtОАс, органическую фазу промывают водой, сушат с MgSO₄ и сгущают. Хроматография на SiO₂ с Еt ОАс/циклогексаном (1:1) дает 0,73 г масла.

MS (DCl) 391 (М⁺ + Н).

R_f [SiO₂; Et OAс (циклогексан) (1:2)]0,29.

d) 1-[2-карбокси-бенз-[b] -фуран-5-ил)-метил]-2-бутил-4-хлор-5-гидроксиметил- имидазол.

0,79 г (2,5 ммоль) соединения из с) кипятят в 20 мл этанола с 20 мл 2N NaOH при обратном потоке. Через 2 ч растворяют в воде, устанавливают рН 3,5 2N HCl и экстрагируют с дихлорметаном. После высушивания и сгущения получают 0,31 г вышеназванного соединения в виде аморфного порошка.

MS(DCl) 363 (M⁺ + H).

R_f (SiO₂, Et OAc/циклогексан (1:1)]0,03.

П р и м е р 2. 1-[(2-карбокси-бензо[b]тиофен-5-ил)метил]-2-бутил-4-хлоро-5-гидро-ксиметилим идаз
а) 4-Толуол-тио-ацетальдегид-диэтилацетат.

В раствор 12,5 г натрия в 250 мл этанола прикапывают 62 г пара-тиокрезола в 100 мл этанола при 0^оС. После добавки 15 г иодида натрия прикапывают 98,5 г бромацетальдегид диэтилацеталя и кипятят 4 ч при обратном потоке. После охлаждения выливают на 1 л воды и экстрагируют с Еt ОАс. После высушивания с MgSO₄ сгущают и дистиллируют.

Температура кипения 118^о (0,01 торр), выход 92,9 г.

b) 5-метилбензо[b]тиофен.

320 г Р₂O₅ смешивают с 246 мл ортофосфорной кислоты и нагревают до 130^оС (1 ч). При 180^оС добавляют 92,9 г соединения из а) при 5 мм Нg с помощью капиллярной трубки ниже поверхности полифосфорной кислоты. Продукт отгоняют. Получают 26 г в качестве масла.

MS(EI) 135 (М⁺)
с) 2-ацетил-5-метилбензо[b]тиофен.

Раствор 26 г соединения из b) и 13,5 г ацетилхлорида в 250 мл СН₂Сl₂ прикапывают к суспензии 23,4 г AlCl₃ в 780 мл СН₂Сl₂. Через 90 мин наливают темно-зеленый раствор в ледяную разбавленную НСl, органическую фазу отделяют, сушат с MgSO₄ и сгущают. Получают 25,5 г продукта в виде масла.

MS(EI) 178 (M⁺).

d) 5-метил-бензо[b]тиофен-2-карбоновая кислота.

11,7 г NaOH растворяют в 58 мл Н₂О и смешивают при 10^оС с 14,1 г брома. При 0^оС добавляют 5,2 г 2-ацетил-5-метил-бензо[b]тиофена в 50 мл диоксана. Через 90 мин устанавливают кислое значение рН с помощью 5N HCl и экстрагируют с СН₂Сl₂. После высушивания с Na₂SO₄ сгущают. После растирания с Еt ОАс отсасывают. Получают 3 г криталлов. MS (EI) 192 (M⁺).

R_f[SiO₂; CH₂Cl₂/MeOH (10:1)] 0,37
е) этиловый сложный эфир 5-метил-бензо[b]-тиофен-2-карбоновой кислоты.

3 г соединения из d) кипятят в 2,5 н. этанольном растворе НСl (50 мл) в течение 2,5 ч с обратным потоком. После сгущения получают 2,27 г масла.

MS (EI) 220 (M⁺)
R_f [SiO₂; CH₂Cl₂) MeOH (100:1)] 0,82.

f) этиловый сложный эфир 5-бром-метил-бензо-[b] -тиофен-2-карбоновой кислоты.

Из 2,27 г соединения из е) и 1,83 г NBS получают согласно примеру 1b (1,77 г масла).

MS (EI) 298 + 300 (М⁺).

g) 1-[(2'-этоксикарбонил-бензо[b]тиофен-5'-ил)метил]-2-бутил-4-хлоро-5-гидрок- симетилимидазол.

Из 1,1 г 2-бутил-4-хлоро-5-гидроксиметилимидазола и 1,77 г соединения из f) получают аналогично примеру 1 с) 0,5 г вышеназванного соединения в виде масла.

MS (DCI) 407 (М + Н)
R_f (SiO₂; ЕtОАс/циклогексан (1:1) 0,2
h) 1-[(2-карбоксил-бензо[b] тиофен-5-ил)метил] -2-бутил-4-хлоро-5-гидроксиметил- имидазол.

Аналогично примеру 1 d) получают из соединения из g) 0,26 г вышеназванного соединения, температура плавления 195^оС (разложение).

П р и м е р 3. 1-[(2-карбокси-индол-5-ил)-метил]-2-бутил-4-хлоро-5-гидроксиметил- имидазол.

а) 30 г (0,189 моль) р-толилгидразина растворяют в 600 мл 1N HCl и нагревают до 40-50^оС. Добавляют 23 г пировиноградной кислоты. Через 2 ч отсасывают осадок и сушат (вакуум). Получают 37 г продукта.

МS (EI) 220 (М⁺)
b) Этиловый эфир 5-метил-индол-2-карбоновой кислоты.

130 г Р₂О₅ добавляют к 111 мл ортофосфорной кислоты. После охлаждения добавляют 37 г соединения из а) и нагревают до 80^оС. После начала реакции температура повышается до 130^оС. После охлаждения выливают на ледяную воду и экстрагируют с уксусным эфиром. Органическую фазу промывают NaHCO₃ (1N), Н₂О и насыщенным NaCl раствором, сушат с Na₂SO₄ и сгущают. Продукт перекристаллизовывается из н-гексана (Еt OAc). Получают 11,7 г продукта с температурой плавления 158^оС.

с) этиловый эфир 1-ацетил-5-метил-индол-2-карбоновой кислоты.

11,7 соединения из b) смешивают в 100 мл обезвоженного DMF с 2,6 г гидрида натрия (50% в масле). Затем добавляют 4,5 г ацетилхлорида и перемешивают 3,5 ч. После выливания в Н₂О экстрагируют Et ОАс. Органическую фазу промывают трижды Н₂О и 1 раз насыщенным раствором NaCl, сушат с MgSO₄ и сгущают. После хроматографии на SiO₂ получают 6 г вышеназванного соединения в виде масла.

MS (EI) 245 (М⁺)
R_f [SiO₂; Et OAc (циклогексан (1:4)] 0,23
d) этиловый эфир 1-ацетил-5-бромметил-индол-2-карбоновой кислоты
Аналогично примеру 1 b) получают из 6 г соединения из примера 3 с) и 4,3 г NBS вышеназванного соединения в виде 3,6 г масла.

MS(ЕI) 323 + 325 (М⁺)
R_f [(SiO₂); Et OAc (циклогексан (1:0)]0,21
е) 1-[(2-этоксикарбонил-индол-5-ил)-метил] -2-бутил-4-хлор-5-гидроксиметил-имид- азол.

Аналогично примеру 1 с) получают из 0,6 г 2-бутил-4-хлор-5-гидроксиметил-имидазола и 1,1 соединения из примера 3d) 160 мг вышеназванного соединения в виде мыла.

MS (DCI) 390 (М + Н⁺)
R_f[SiO₂; Et OAc (циклогексан (1:1)] 0,2
f) 1-[(2-карбокси-индол-5-ил)-метил] -2-бутил-4-хлоро-5-гидроксиметилимидазол.

Аналогично примеру 1 d) получают из 160 мг соединения из примера 3 е) 40 мг вышеназванного соединения в виде смолы.

MS (DCl) 362 (M + H⁺);
R_f [SiO₂; CH₂Cl₂ (MeOH) (2:1)] 0,27
Соединения примеров 4 11 синтезируют аналогично примеру 1. Эти соединения имеют следующую общую формулу:
H₃C(CH₂)CH₂OH
MS Пример (DCl; A-CH₂
M + H)
4 413
5 423
6 379
7 407
8 409
9 371
10 439
11 440
3-(5-Метил-индол-1-ил)-пропионитрил (см. пример 9).

К 4 мл гидрокиси триметилбензиламмония и 10 мл акрилнитрила в 100 мл диоксана добавляют при помешивании 13 г (0,1 моль) 5-метилиндола. Затем нагревают 2 ч до 80^оС, затем дают постоять 3 дня при комнатной температуре. Сильно разбавленную уксусную кислоту добавляют затем, чтобы нейтрализовать основание. Далее экстрагируют с ЕЕ (3х30 мл). Объединенные органические фазы сушатся с Na₂SO₄ и сгущаются в вакууме. Осадок хроматографировался на SiO₂ с DIP в качестве элюента.

R_f(DIP) 0,3
Условия для этерификации радикала А в примерах 5, 6 и 7 20 г 5-метил-2,3-дикарбокси-бензо[b] тиофена (пример 5) кипятят 6 ч в 400 мл абсолютного метанола, который содержит 3% серной кислоты, при обратном потоке. После охлаждения до комнатной температуры выливают на лед. Осадок отфильтровывают и Н₂О-фазу экстрагируют 3 раза с эфиром, после сушки сгущают с Na₂SO₄, причем эфир образуется в виде масла.

П р и м е р 10 (а) Альтернатива для омыления этилового эфира примера 10 до соединения, полученного в примере 10.

180 мг (0,38 ммоль) этилового эфира в 2 мл этанола смешивают с 0,5 мл водного 1N NaOH и перемешивают 20-60 ч при 25^оС. Затем сгущают, а осадок очищают на SiO₂ с СН₂СL₂/МеОН 8/2 в качестве жидкости носителя, причем кислота образуется в виде аморфного порошка.

П р и м е р 12. 1-[(3-карбокси-2-фенилимидазол[1,2-a]пиридин-6-ил)метил] -2-бутил-4-хлоро-5-ф орми
а) 2-бутил-4-хлоро-5-формил-имидазол.

К 20 г (0,106 моль) 2-бутил-4-хлоро-5-гидроксиметил-имидазола в 350 мл ледяной уксусной кислоты добавляют при 10-15^оС медленно 305 мл раствора 1 М (NH₄)₂Ce(NO₃)₆ в Н₂О. Через 2,5 ч при RT устанавливают рН-значение и с помощью 2Н КОН (20^оС во время добавления основания). Далее экстрагируют 4 раза каждый раз по 50 мл с СН₂Сl₂ и промывают объединенные органические экстракты 3 раза каждый раз по 30 мл с насыщенным водным NaНСО₃ раствором, сушат с Na₂SO₄ и сгущают, причем вышеназванное соединение образуется в виде бесцветного твердого вещества (18 г). Т.пл. 90^оС.

b) 1-[(3-этоксикарбонил-2-фенилимидазол[1,2-a] пиридин-6-ил)метил]-2-бутил-4- хлоро-5-формил-имидазол.

0,2 г (1,07 ммоль) 2-бутил-4-хлоро-5-формил-имидазола, 0,38 г (1,07 ммоль) 6-бромметила-3-этоксикарбонил-2-фенилимидазо) 1,2-а(пиридина, 0,15 г К₂СО₃) (1,07 ммоль) 0,5 порошкообразного молекулярного сита перемешивают 5 ч при 60^оС в 5 мл DMF. Далее добавляют 100 мл ЕЕ и 3 раза промывают водой. После высушивания с Na₂SO₄ сгущают, а осадок хроматографируют на SiO₂ c ЕЕ/H 1/1 в качестве элюента.

MS(DCI) 465 (М⁺ + Н);
R_f[SiO₂; EE/H (1:1)] 0,18.

с) Получение бромметилового соединения из b) и омыление вышеназванного соединения b) проводится аналогично примеру 1 или 10а.

Пример 13 осуществляют аналогично примеру 12. Эти соединения имеют следующую общую формулу
H₂C-(CH₂)
MS Пример (DCl; A-CH₂
M + H)
12 437 -H₂C
13 438
14 437
15 437
16 411
17 377
18 405
19 449
20 455 F
21 455 F
К примеру 15: получение гетероциклического основного вещества.

а) этиловый эфир пировиноградной кислоты.

К 10 г (0,061 моль) фенилпировиноградной кислоты, 8,6 г (0,073 моль) диизопропилэтиламина в 200 мл дихлорметана добавляют 13,9 г (0,073 моль) триэтилоксониегоитетрафторобората. Через 4 ч при RT промывают органическую фазу 2 раза 10%-ным раствором лимонной кислоты и 2 раза насыщенным раствором бикарбоната натрия. После высушивания с MgSO₄сгущают. После хроматографии на SiO₂ c ЕЕ/H 1/5 в качестве элюента получают 7 г масла.

R_f (ЕЕ/Н 1/5) 0,3
b) 2-этиловый эфир бромопировиноградной кислоты.

7 г (0,036 моль) этилового эфира пировиноградной кислоты (а), 50 мл четыреххлористого углерода смешивают при 5^оС с 2,6 мл брома. Затем нагревают до кипения 1 ч, сгущают и растворяют осадок в 100 мл ЕЕ. ЕЕ-фаза промывается 2 раза с 10%-ным раствором Na₂SO₄ и 1 раз с Н₂О и сушится с MgSO₄. Удаление растворителя в вакууме доставляет 9 г соединения в виде масла.

МS(DCI) 271 (М + Н)
c) 2-этоксикарбонил-3-фенил-6-метил-имидазо[3,2-a]пиридин
3 г 2-бромпировинограднокислого этилового эфира (b) и 1,2 г 2-амино-5-метилпиридина в 50 мл этанола нагревают 2 ч до кипения. После удаления спирта осадок растворяют в 100 мл ЕЕ. Органическую фазу промывают 1 раз с насыщенным раствором Na₂CO₃ и затем сушат с MgSO₄. После сгущения хроматографируют на SiO₄ с ЕЕ/Н 1/1 в качестве элюента.

Выход: 1,7 г
MS (DCI) 281;
R_f (ЕЕ/H 1/1) 0,2
П р и м е р 22. 1-[2-(тетразол-5-ил)-3-хлор-бензо[о]тиофен-6-ил(метил] -2-n-бутил-4-хлор-5-ги дрок
а) 3-хлор-6-метил-бензо(о)тиофен-2-карбонокислый амид.

К 30 мл (12,3 ммоль) хлорида 3-хлор-6-метил-бензо(о)тиофен-2-карбоновой кислоты.

(J. Org. Chem. 41, 3399, (1976) в диметоксиэтане прикапывают при 0^оС 100 мл 4 Н NH₃ в ДМЕ. Через 30 мин сгущают и кристаллизуют из этанола, причем образуется 14,5 г вышеназванного соединения.

MS(DCI) 226 (М + Н)
R_f (EE/H 1/1 0,3
Т.пл. 193^оС.

b) 3-хлор-2-циано-6-метил-бензо[b]тиофен
3 г (13,3 ммоль) вышеназванного соединения а) в 40 мл пиридина смешивают при 0^оС с 6,2 г (53,2 ммоль) тионилхлорида. Через 2 ч выливают на холодную, как лед 4n HCl и 3 раза экстрагируют каждый раз по 50 мл с ЕЕ. Объединенные органические фазы сушатся с MgSO₄ и сгущаются. Хроматография на SiO₂ c ЕЕ/H 1/2 дает вышеназванное соединение (1,5 г).

MS (DCI) 208 (M+H)
R_f (EE/H 1/1) 0,75
с) 1-[(2-тетразол-5-ил)-3-хлор-бензо-[b]-тиофен-6-ил-метил]-2-н.бутил-4-хлор-5- гид-роксиметил-имидазол.

0,4 г (1,0 ммоль) 1-[(2-циано-3-хлор-бензо-[b]-тиофен-6-ил)-метил]-2-н. бутил-4-хлор-5-гидрокси мети(получен из соединения 22в аналогично примеру 1 b,c) и 0,42 г (2,0 ммоль) триметилолово-азида в 50 мл толуола нагревали 24 ч до кипения. Затем сгущали и остаток обрабатывали 20 мл ЕЕ, далее при комнатной температуре добавляли 0,6 мл НВF₄ и 15 мл насыщенного раствора КF. Через 12 ч добавляли снова 20 мл ЕЕ и разделяли фазы. Органическую фазу высушивали с MgSO₄ и сгущали.

Хроматографией на SiO₂ с дихлорметан (метанол 5) 1 получали вышеназванное соединение.

R_f/CH₂Cl₂/MeOH 5/1) 0,4
MS (FAB) 437 M + H)
П р и м е р 23. 1-[(2-фенил-3-карбокси-имидазо[1,2-a]пиримидин-7-ил)метил]-2-n-бутил-4-метил тио-кислота
а) этиловый эфир 2-амино-2-циано-уксусной кислоты
К 35 г (0,246 моль) 2-оксима этилового эфира 1-цианоглиоксиаловой кислоты в 350 мл воды и 280 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия добавляют при комнатной температуре порционно (15 мин) 119 г дитионита натрия. Вслед затем нагревают 1 ч до 35^оС; затем насыщают NaCl и 5 раз экстрагируют с дихлорметаном. После сушения с хлоридом кальция органическая фаза сгущается. Получают 11,8 г масла целевого вышеназванного соединения.

R_f (CH₂Cl₂)CH₃OH 9/1) 0,6
b) этиловый эфир 2-циано-2-н.бутил-карбоний-амино-уксусной кислоты.

К 3,6 г (28,09 ммоль) соединения 23 b в 50 мл сухого СН₂Сl₂ и 2,3 мл (28,09 ммоль) пиридина накапывают при от -5^оС до 0^оС 3,39 мл (28,09 ммоль) валероилхлорида в 5 мл СН₂Сl₂. Затем 1 ч помешивают при комнатной температуре. Органическая фаза промывается затем 3 раза с Н₂О, 1 раз насыщенным раствором NaCl, сушится с хлоридом кальция и сгущается. Кристаллизация из DIP дает 1,7 г названного целевого соединения.

R_f (CH₂Cl₂/CH₃OH 9/1) 0,35
Т.пл. 87^оС.

с) этиловый эфир 3-амино-2-н.бутилкарбониламина-метилтиоакриловой кислоты.

К 2,9 г (13,67 ммоль) соединения 23 b) и 0,19 мл (1,36 ммоль) триэтиламина в 60 мл абсолютного этанола добавляют при комнатной температуре 2 мл (27,26 ммоль) конденсированного метилмеркаптана. Через 3 дня добавляют еще раз 0,5 мл метилмеркаптана. Через следующие 24 ч при комнатной температуре еще раз вспрыскиваются 0,5 мл метиленмеркаптана и 0,19 мл триэтиламина и перемешивают следующие 24 ч при комнатной температуре. Вслед за тем растворитель удаляют, а осадок кристаллизуется из DIP, причем образуется 2,4 г указанного целевого соединения.

R_f (CH₂Cl₂/EE 4/1) 0,3
Т.пл 120^оС.

d) этиловый эфир 2-н.бутил-4-метилтио-имидазол-5-карбоновой кислоты
К 4,27 г (20,0 ммоль) пентахлорида фосфора в 20 мл СНСl₂прикапывают при -78^оС 2,44 (20 ммоль) 4-диметиламинопиридина в 12 мл СН₂Сl₂. Через 5 мин прикапывают 2,42 г (10,0 ммоль) соединения 23 с) в 25 мл СН₂Сl₂. Затем поднимают температуру до комнатной температуры и разбавляют 30 мл СН₂Сl₂. Через 2 ч при охлаждении льдом добавляют 300 мл 1 Н раствора бикарбоната натрия и перемешивают 1 ч. Затем фазы разделяют, водную фазу 3 раза экстрагируют ЕЕ, а объединенные органические фазы сушат с хлоридом кальция. Хроматография на SiO₂ с СН₂Сl₂ (ЕЕ/9/1) дает 1,4 г вышеназванного соединения в виде масла.

R_f/CH₂Cl₂/EE 9/1/ 0,6
МS/DCI 243 /M⁺ + H/
Остальные мероприятия процесса для указанного целевого соединения 23 осуществляются аналогично примерам 12b и 10а.

R_f /EE/MeOH 5/1/ 0,2
MS/FAB/ 466 /M + H/
П р и м е р 24 1-[(2-фенил-3-карбокси-имидазо[1,2-a]-пиримидин-7-ил)-метил]-2- н.бутил-4-метилсульфоксил-имидазол-5- карбоновая кислота.

а) этиловый эфир 1-[(2-фенил-3-карбоксиэтил-имидазо [1,2-a]-пиримидин-7-ил)метил]-2-n-бутил-4-метилсульфоксил-имида- зол-5-карбоновой кислоты.

К 80 мг (0,15 ммоль) этилового эфира 1-[(2-фенил-3-карбоксиэтил-имидазо [1,2-a] пиримидин-7-ил)-метил] -2-н. бутил-4-метилтил-имидазол-5-карбоновой кислоты в 5 мл дихлорметана добавляют 52 г (0,15 ммоль) 50%-ной метахлорпербензойной кислоты при RT. Через 1 ч смесь промывают 1 раз насыщенным раствором Na₂CO₃ и 1 раз водой. Органическая фаза сгущается, осадок дает после хроматографии на SiO₂ с ЕЕ/H 1/1 в качестве элюента целевое указанное соединение.

R_f/EE/H 1/1/ 0,15
MS/FAB/ 538 /M+H) 45
b) Указанное целевое соединение 24 получают аналогично примеру 10а.

R_f/CH₂Cl₂/MeOH 5/1/ 0,2
MS/FAB/ 482 /M + H/
П р и м е р 25. 1-[(2-фенил-3-карбокси-имидазо [1,2-a]пиримидин-7-ил)-метил]-2-н.бутил-4-метилсульфонил-имидазол-5-кар- боновая кислота.

К 120 мг (0,23 ммоль) этилового эфира 1-[(2-фенил-3-карбоксиэтил-имидазо [1,2-a] -пиримидин-7-ил)-метил] -2н. бутил-4-метил-тио-имидазол-5-карбоновой кислоты в 10 мл дихлорметана добавляют при RT 158 мг (0,46 ммоль) 50%-ной метахлорпербензойной кислоты. Последующий ход реакции и разделение аналогичны примеру 24а.

R_f (EE) 0,6
MS (FAB) 554 (M + H)
b) омыление указанного целевого соединения осуществляют аналогично примеру 10а).

R_f (CH₂Cl₂/MeOH 5/1) 0-2
MS (FAB) 498 (М + Н)
Соединение 26 и 27 получили аналогично примерам 24 и 25.

Примеры 28 33 осуществляют аналогично примеру 22.

Получение 2-фенил-3-амидо-7-метил-имидазо [1,2-a] пиримидина (для примера 28): 500 мг (1,78 ммоль) 2-фенил-3-карбетокси-7-метил-имидазо[1,2-a]пиридина, 213 микролитров (5,35 ммоль) формамида и 120 мг третичного бутилата калия нагреваются в 10 мл DMF 1 ч до 100^оС. Затем выливают в Н₂О, рН 8-9 устанавливают с помощью NaHCO₃ и отсасывают.

Rf (EE) 0,3
MS (DCI) 252 (М + Н)

MS Пример
(FAB; M+H) X Y A-CH₂ 22 437 Cl CH₂-OH N 23 466 -S-CH₃ CO₂H 24 482 -SOCH₃ CO₂H 25 498 -SO₂CH₃ CO₂H 26 455 SOCH₃ CO₂H 27 471 -SO₂CH₃ CO₂H 28 517 -S-CH₃ CO₂Et F 29 488 -S-CH₃ CO₂H 30 497 -S-CH₃ CO₂Et 31 463 -SCH₃ CO₂H 32 523 -SO₂CH₃ CO₂Et 33 495 -SO₂CH₃ CO₂H 34
1-[2-(4-Метоксикарбонил)-бензоксазолил)-метил] -2-н. бутил-4-хлор-5-формил-имидазол
а) метиловый сложный эфир 2-бромметил-бензоазол-4-карбоновой кислоты.

453 мг (2,37 ммоль) 2-метил-бензоксазол-4-карбонокислого метилового эфира (полученного согласно Н.Heterocyclic Chem. 27, 335, 1990) растворяются в 40 мл хлорбензола, 421 мг (2,37 ммоль) NBS и 20 мг перекиси бензоила добавляют, и полученная смесь нагревается 2 ч при обратном потоке. Смесь сгущают, осадок растворяется в этилацетате, взбалтывается с насыщенным раствором NaHCO₃, 10% NaS₂O₃ и насыщенным раствором NaCl и сушится над Na₂SO₄. Сгущение и хроматография на SiO₂ с н.гептаном/этилацетатом (2:1) дают 128 мг целевого соединения.

Т.пл. 110-113^оС
MS (CI) 271 (M+H)
b) 1-[2-(4-метоксикарбонил)-бензоксазолил)метил]2-н.бутил-4-хлоро-формил-ими-да зол.

К суспензии 176 мл (0,944 ммоль) 2-н.бутил-4-хлоро-5-формил-имидазола и 130 мг (0,944 ммоль) К₂СО₃ в 2 мл абсолютного DMF накапывается раствор 255 мг (0,944 ммоль) соединения из а) в 1 мл абсолютного DMF, и полученная суспензия перемешивается 1 ч при комнатной температуре. Сгущается досуха, осадок растворяется в этилацетате, промывается с водой и насыщенным раствором NaCl, сушится и сгущается. Хроматография на SiO₂ c CH₂Cl₂/этилацетатом (9:1) дает 103 мг необходимого соединения.

MS (CI) 376 (M + H)
П р и м е р 35. 1-[(2-(5-метоксикарбонил)-бензоксазолил)-метил]-2-н. бутил-4-хло- ро-5-формил-имидазол.

а) метиловый эфир 2-бромметил-бензоксазол-5-карбоновой кислоты
Целевое указанное соединение получают из метилового эфира 2-метил-бензоксазол-5-карбоновой кислоты аналогично примеру 14а.

MS (CI) 271 (M + H)
b) 1-[(2-(5-метоксикарбонил)-бензоксазолил)метил]-2-н.бутил-4-хлоро-5-формил-им идаз
Это соединение получается из соединения, полученного по а) и 2-Н-бутил-4-хлоро-формил-имидазола способом по примеру 34 b).

MS (CL) 376 (M + H)
II. Испытания биологической активности
Связывание in vitro рецептора ангиотензина 11 (АТ₁).

Принцип работы.

Это испытание проводится для определения сродства испытуемых соединений к рецептору ангиотензина-11 (ANG-11-подвид-1 (АТ₁) путем измерения его ингибирующего эффекта на связывание простого или радиоиодированного ANG 11 с плазменной мембраной, приготовленной из печени крысы.

Приготовление мембраны.

Получают 1 г печени самца крысы Sprague Dawley (150-200 г) и гомогенизируют в 40 мл 50 мМ трис-НСl буфера, рН7,4, с Brinkmann Polytron (4х10 с импульсов). Гомогенат центрифугируют при 25000 g в течение 15 мин. Получают чешуйки, которые ресуспендируют в 40 мл трис-НСl буфера концентрацией 50 мМ, рН 7,4 и снова центрифугируют. Эту процедуру промывки повторяют дважды. Окончательно чешуйки суспендируют в 400 мл (2,5 мг влажного веса исходной ткани (мл) инкубационного буфера и хранят на льду до использования.

Процедура испытания.

Все инкубированные образцы (общий объем 200 мкл были приготовлены трижды. В качестве инкубационного буфера был использован 20 мМ трис-НСl буфер 20 мМ, рН 7,4, содержащий 135 мМ NaCl, 10 мМ KCl, 5 мМ глюкозы, 10 мМ MgCl₂, 0,3 мМ ПМСФ, 0,1 мМ Bacitracine и 1 г/л лизоцима; 50 мкл радиолиганда и 50 мкл раствора испытуемого вещества (или стандарта) наносят пипеткой на стенки 96-стеночной микроплаты; реакция начинается добавлением 100 мкл суспензии мембраны на каждую стенку. Микроплаты затем закрывают лентой и инкубируют при комнатной температуре на качающейся пластине в течение 60 мин.

Эксперименты по определению значения IС₅₀, которые сравнивали, проводили с одной концентрацией радиолиганда (3Н-АNG-11, 0,5-1 нМ) и 8-12 концентрациями (10 микроМ 0,1 нМ) стандартного или испытуемых соединений. Неспецифичное связывание измеряли добавлением 10 микроМ небелкового ANG-11-антагониста DUP-753 к набору образцов. Реакцию останавливали быстрой вакуумной фильтрацией через стекловолокнистые фильтры (Whatman GF/B) на приборе Scatnon с 96 ячейками микроплат и интенсивно промывают 50 мМ трис-НСl. Измеряли остаточную связанную с мембраной радиоактивность на фильтре (после отсасывания индивидуальных дисков фильтра в минисцинтиллирующие ампулы и добавлением 3 мл жидкой сцинтиллирующей смеси) на жидкостном счетчике сцинтилляции Taurus (ICN).

Расчет результатов.

Рассчитывали следующие параметры:
общее связывание (ОС) связывание радиолабильного ANG 11 в отсутствие ингибитора.

связь (С) связывание радиолабильного ANG 11 в присутствии испытуемого соединения или стандарта.

неспецифичное связывание (НСС)связывание в присутствии высокой концентрации антагониста (10 микроМ DUP-753),
специфическое связывание (СС) С -НСС.

Значение IC и К для соединений, вытесняющих радиолабильный ANG 11 из его рецептора, рассчитывают с использованием Biosoft Ligand PC-Software.

Для оценки соответствия изобретения критерию "положительный эффект" ниже приводятся данные по активности соединений согласно изобретению с аналогом по структуре.

Для сравнения брали следующие соединения:
а) соединения для сравнения;
Пример 28 из ЕР 253 310:
2-бутил-4-хлор-5-гидроксиметил-1-(4-N-фталимидобензил)-имидазол
значение IC₅₀: 8,0 х 10^-6 моль (см. таблицу 20 на стр. 278 ff).

Пример 183 из ЕР 253 310: 2-бутил-4-хлор-5-гидроксиметил-1-[(2'-аминобифенил)-метил]-имидазол
значение IC₅₀: 6,3 х 10^-6 моль
б) соединение согласно изобретению по примеру 22; 2-бутил-4-хлор-5-гидроксиметил-1-[2-(5-тетразолил)-3-хлорбензо[b]-тио- фен-6-ил-метил]-имидазол
значение IC₅₀ 1,8 х 10^-6 моль.

Таким образом, экспериментальные данные подтверждают, что введение различных гетероциклических остатков в молекулы соединений по изобретению приводит к заметному улучшению их фармакологических свойств.

Пример IC₅₀ [μM] на печени крыс
13 2,8
14 3,2
15 1,1
16
17 16,2
18
19
20 7,9
21
22 1,8
23 0,78
24
25
26 7,0
27 1,0
28 2,5
29 0,41
30 0,8
31 0,01
32 5,3
33 0,6
34
35 8,6

Формула изобретения

Способ получения производных имидазола общей формулы I

где R¹ C₃-C₇-алкил;
R² формильная, карбокси, C₁-C₄-алкоксикарбонильная или гидроксиметильная группа;
R¹₂ хлор или группа S(O)_rR³, где R³ - C₁-C₆-алкил; Z 0, 1 или 2;
A гетероциклический остаток, выбранный из ряда, содержащего бензо(b)тиофенил, имидизо(1,2-a)пиридил, имидазо(1,2-a)пиримидил, бензооксазолил, замещенный одним или двумя одинаковыми остатками, выбранными из ряда, содержащего хлор, тетразолил, карбоксил, карбокси, C₁-C₄-алкил, C₁-C₄-алкоксикарбонил и фенил, возможно замещенный на фтор,
или их физиологически переносимых солей, отличающийся тем, что производное имидазола общей формулы II

где R¹ и R² имеют указанные значения;
R¹₂ хлор или группа SR³, где R³ имеет указанное значение,
причем когда заместитель R² содержит карбоксильную группу, то она может быть защищена,
подвергают взаимодействию с соединением общей формулы III
UCH₂A¹,
где A¹ -указанный гетероциклический остаток, замещенный одним или двумя одинаковыми или различными остатками, выбранными из ряда, содержащего хлор, циано, карбоксил, карбокси, C₁-C₄-алкил, C₁-C₄-алкоксикарбонил и фенил, возможно замещенный на фтор,
причем когда заместитель A¹ содержит карбоксильную группу, то она может быть защищена;
U отщепляемая группа,
с получением соединений общей формулы Iа

где R¹, R² и A¹ имеют указанные значения;
R¹₂ хлор или группа SR³, где R³ имеет указанное значение, причем когда R² содержит карбоксильную группу, то она может быть защищена,
и в случае получения соединений общей формулы I, в которой R¹₂ - группа S(O)_zR³, где R³ имеет указанное значение, r 1 или 2, соединение формулы Iа, где R¹₂ означает группу SR³, где R³ имеет указанное значение, подвергают взаимодействию с окислителем, или в случае получения соединений общей формулы I, в которой заместитель A содержит тетразольный остаток, соединение формулы Iа, где заместитель A содержит цианогруппу, подвергают взаимодействию с циклизующим агентом с последующим удалением при необходимости карбоксизащитной группы и выделением целевого соединения в свободном виде или в виде физиологически переносимой соли.