Ассоциированная инактивированная вакцина против хламидиоза, кампилобактериоза, сальмонеллеза и лептоспироза мелкого рогатого скота

 

Использование: биотехнология, ветеринария, профилактика у мелкого рогатого скота абортов инфекционной этиологии, вызываемых хламидиями, кампилобактериями, сальмонеллами, лептоспирами. Сущность изобретения: ассоциированная инактивированная вакцина против хламидиоза, кампилобактериоза, сальмонеллеза и лептоспироза мелкого рогатого скота содержит суспензии клеток лептоспир серогрупп Grippotyphosa, Pomona, Tarassovi, Serjoe, суспензии клеток сальмонелл видов Salmonella abortus ovis, Salmonella dublin, Salmonella typhimurium, клеток кампилобактерий штамма Campylobacter fetus Sub. intestinalis N30, формалин и адъювант при определенном соотношении компонентов. Вакцина обеспечивает одновременно 100%-ную защиту от лептоспирозов, сальмонеллезов, хламидиоза и кампилобактериоза у овец и коз. 1 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарии и может быть использовано в животноводстве для профилактики у мелкого рогатого скота абортов инфекционной этиологии, вызываемых хламидиями, кампилобактериями, сальмонеллами, лептоспирами.

Известна инактивированная вакцина против кампилобактериоза и хламидиоза овец [1] Известна также бивалентная вакцина с масляным адъювантом против хламидиоза и сальмонеллеза овец (Патент ЧССР N 254937, А 61 К 39/116, 12.02.87 г. ).

Известные вакцины не обеспечивают 100%-ной иммунологической защиты животных от абортов лептоспирозной, хламидиозной, сальмонеллезной и кампилобактериозной этиологии. Кроме того, эти вакцины приходится применять отдельно друг от друга, что является очень трудоемким и приводит к большим экономическим потерям.

Техническим результатом заявляемого изобретения является создание высокоиммуногенной ассоциированной инактивированной вакцины, обеспечивающей одновременно 100%-ную защиту от хламидиоза, сальмонеллеза, кампилобактериоза и лептоспироза овец и коз.

Технический результат достигнут подбором и введением в состав вакцины неконкурирующих между собой антигенов производственным штаммов и оптимальным количественным соотношением этих антигенов, инактивирующего агента (формальдегида) и адъюванта (масляный адъювант или гель гидроокиси алюминия).

Изобретение иллюстрируется следующими примерам.

Пример 1. Технологический процесс получения ассоциированной вакцины включает отдельные стадии изготовления антигенов лептоспир, сальмонелл, кампилобактерий, хламидий и адъюванта и объединение всех компонентов в отдельных соотношениях.

А. Для изготовления антигенов лептоспиры выращивают на питательной среде, обычно используемой для культивирования лептоспир, например на среде, содержащий 5-7% сыворотки овец, или твин-альбуминовой среде.

Примечание: питательная среда должна содержать не менее 0,22% белка.

Производственные штаммы и матровые расплодки лептоспир культивируют только в сывороточной среде, приготовленной на фосфатном буфере и проверенной на стерильность. Твин-альбуминовая питательная среда используется только для однократного получения производственной расплодки.

Приготовление матровых расплодок производят из отобранных и проверенных лептоспир (чистые и содержащие не менее 60 подвижных лептоспир в поле зрения микроскопа при увеличении 40х7-10), которые засевают каждый отдельно и культивируют в течение 4-7 сут при температуре 27-28^oC.

Выросшие и проверенные на чистоту культуры засевают в бутыли, содержащие 1-1,5 л стерильной питательной среды, и культивируют при температуре 27-28^oC в течение 5-10 дней до накопления не менее 60 лептоспир в поле зрения микроскопа.

Для приготовления производственных расплодок лептоспир матровую расплодку засевают в бутыли вместимостью 16 л, содержащие 10-12 л питательной среды из расчета 10% к среде (1-1,2 л культуры на 10-12 л питательной среды). Культивирование лептоспир проводят в течение 5-10 сут при температуре 27-28^oC без доступа света. Контроль за ростом лептоспир осуществляют путем просмотра бутылей в проходящем свете и проб культуры из бутылей в темном поле микроскопа при увеличении 40х7-10.

Все бутыли с чистой культурой и накоплением в поле зрения микроскопа не менее 60 лептоспир (75 млн/см³) используют для включения в состав ассоциированной вакцины.

Отобранные (в бутылях) культуры лептоспир заключают в реактор в следующих соотношениях: Гриппотифоза (шт. "Бувим"), Тарассови (шт. ВГНКИ-4), Помона (шт. "Белус") по 25% каждого штамма; Сейро (штаммы 2709, "Мих", Харджио) по 8,3% каждого штамма. Например: в 100л содержится по 25 л культур лептоспир штаммов "Бувим", ВГНКИ-4 и "Белус" и по 8,3 л 2709, "Мих" и Харджио. Смесь культур лептоспир консервируют формалином в соотношении 0,2% (с содержанием формальдегида не ниже 36%). После внесения формалина перемешивание культуры ведут в течение 1ч. Инактивацию лептоспир проводят в течение 12 ч при комнатной температуре, после чего проводят контроль полноты инактивации. Лептоспиры должны быть неподвижны и стерильны.

Смесь инактивированных культур лептоспир подвергают концентрированию, которое осуществляют с помощью установки УПВ-6,0. Суспензию лептоспир концентрируют в 20-30 раз по объему. Концентрация лептоспир должна составлять (0,5 3)·10⁷ клеток в 1см³. О степени концентрирования лептоспир судят по накоплению фильтрата в емкости и по концентрации лептоспир. Концентрат хранят в отдельной емкости до исследования (но не более 15 дней).

Б. Для приготовления инактивированного антигена хламидий готовят матровую расплодку хламидий из штамма Chl. Psittaci N8. Суспензией хламидий в разведении 10^-2 10^-3 в дозе 0,2 мл заражают в желточный мешок необходимое количество 6-7-суточных развивающихся куриных эмбрионов (РКЭ). Разведения хламидий готовят на фосфатно-буферном растворе или растворе Хенкса (pH 7,2-7,4) с добавлением гентамицина из расчета 50 мг на 1 л раствора.

Перед заражением 6-7-суточные эмбрионы овоскопируют, отбирают хорошо развитые, активно подвижные и размещают их вертикально воздушной камерой вверх. Зараженные эмбрионы инкубируют при 36-37^oC и относительной влажности 60-65% в течение 9 сут с овоскопированием не менее двух раз в сутки.

Куриные эмбрионы павшие и слабоподвижные с седьмых по девятые сутки вскрывают с соблюдением правил асептики. Из каждой оболочки желточного мешка делают мазок-отпечаток, который исследуют на наличие хламидий и чистоту материала путем высева на МПА, МПБ, МППБ под вазелиновым маслом, среду Сабуро. Неконтаминированный материал с наличием хламидий используют для дальнейшей работы.

Отобранные неконтаминированные желточные мешки с хламидиями гомогенизируют и центрифугируют при 3-5 тыс. оборотов в минуту в течение 3-5 мин. Из общей массы отбирают пробу для определения инфекционного титра и стерильности. Оставшуюся массу помещают в стерильные колбы, закрывают их стерильными резиновыми пробками, а затем фольгой, и хранят в парах жидкого азота не более трех месяцев. В последующем по мере необходимости матровую расплодку можно готовить из лиофилизированного или нативного материала, полученного из ВГНКИ ветпрепаратов, или же использовать в качестве матры хламидиосодержащие оболочки желточных мешков, взятых из очередных производственных партий хламидий с инфекционным титром не ниже 10^6,0-10^9,0 ЭЛД ₅₀/0,2 мл.

Полученную матровую расплодку используют для заражения куриных эмбрионов при изготовлении производственных серий вакцины.

Матровую расплодку хламидий, используемую для заражения, размораживают при температуре 37^oC и добавляют забуференный физраствор или раствор Хенкса pH 7,2-7,4 до разведения 10^-1.

Из этой суспензии делают разведение хламидий 10^-2 10^-8. Указанными разведениями заражают РКЭ и инкубируют.

Павшие эмбрионы на 5-9 сутки вскрывают, желточные оболочки помещают в стерильные банки. 10-15 желточных оболочек отбирают для контроля путем микроскопии. При наличии хламидий в 70% мазках материал используют для приготовления вакцины.

Для концентрации хламидий оболочки желточных мешков измельчают, сливают в бутыль и готовят 10%-ную суспензию на фосфатно-буферном физрастворе или растворе Хенкса с pH 7,2-7,4 из расчета 4,5 мл раствора на одну желточную оболочку. Затем суспензию охлаждают до 4-5^oC, осаждают на центрифуге марки К-70 при 3000 об/мин в течение 30 мин, и надосадочную жидкость без жира разводят фосфатно-буферным физраствором pH 7,2-7,4 в 5 раз и концентрируют путем осаждения на центрифуге марки ОТР-101К при 15000 об/мин. Осадок хламидий снимают со стенок ротора центрифугируют и ресуспендируют в физиологическом растворе из расчета 1:2 (масса/объем). Концентрация хламидий должна составлять 80-120 мкг/мл.

В приготовленную суспензию хламидий добавляют формалин до концентрации формальдегида 0,16% и выдерживают в течение 4 сут при 37^oC, периодически встряхивая (2-3 раза в сутки). Инактивацию хламидий контролируют путем инокуляции материала в разведении 1:100 в желточный мешок десяти РКЭ. Если в мазках обнаружены хламидии, суспензию снова инактивируют при 37^oC в течение 6 сут.

Суспензия в период контроля инактивации и стерильности, а также до составления серии вакцины хранится при (3-5)+1^oC (не более 15-20 дней).

В. Для приготовления инактивированного антигена кампилобактерий используют культуру штамма Camp. fetus sub. intestinalis N 30. Содержание ампулы (лиофилизированная культура) растворяют 1 мл МПБ, содержащего 10% стерильной дефибринированной крови барана, и рассевают в 3-4 пробирки в ПЖА с 5% аминопептида. Культивирование осуществляют в течение 48-72 ч при температуре 37^oC в эксикаторе, в котором замещают 15-20% воздуха углекислым газом. Культуру, выросшую в ПЖА с 5% ферментативного гидролизина в пробирках, пересевают во флаконы, а затем в бутыли с ПЖА, содержащим 0,025% железа сернокислого закисного или 0,5% натрия янтарнокислого и 5% ферментативного гидролизина, из расчета 1 пробирка на 1-2 флакона. Культивирование осуществляют при 37^oC в течение 48-72 ч.

Культуру кампилобактерий с накоплением не менее 2,5 млрд/мл используют для посева в аналогичную среду в ферментеры.

Для выращивания кампилобактерий используют ферментеры емкостью от 0,1 до 1 м³, оборудованные приборами для контроля и регулирования основных технологических параметров: растворенного кислорода (pO₂), pH, температуры, окислительно-восстановительного потенциала (eH), давления (p), оборотов мешалки (n).

При периодическом культивировании в среде поддерживают в пределах 20% уровень растворенного кислорода (pO₂) до начала интенсивного роста культуры, а затем уровень pO₂ доводят до 40% и поддерживают его до конца культивирования путем изменения расхода воздуха на аэрацию (при уменьшении pO₂ необходимо увеличить подачу воздуха, а при увеличении pO₂ уменьшить). Обороты мешалки постоянные: 50-60 в минуту у крупных ферментеров и 200-240 в минуту у малогабаритных.

Продолжительность культивирования кампилобактерий составляет 10±2 ч (использование посевного материала, полученного на питательной среде в баллонах) и 26±4 ч (использование культуры, выращенной в ПЖА в матрасах).

Полученную культуру кампилобактерий с соблюдением стерильности перекачивают в реактор-инактиватор, добавляют формалин до концентрации формальдегида 0,2% и выдерживают в течение 3 сут при температуре 37±0,5^oC, перемешивая 3-4 раза в сутки.

Инактивированную баксуспензию концентрируют методом центрифугирования или сепарирования на центрифуге марки ОТР-101К или на сепараторе марки АСГ-3М. Затем бакмассу выгружают в емкость, гомогенизируют в течение 1-2 мин при 4000 об/мин, суспендируют в стерильном физиологическом растворе, содержащем 0,5% формалина, до концентрации 1·10¹⁰- 3·10¹⁰ кл/мл и помещают в бутыль.

Г. Для приготовления инактивированных антигенов сальмонелл используют производственные штаммы Salm. abortus ovis, Salm. dublin, Salm, typhimurium, которые выращивают на бульоне Хоттингера с добавлением необходимых ингредиентов.

Для получения матричной расплодки культур сальмонелл каждый штамм отдельно засевают по 0,5 мл во флакон вместимостью 200 мл, содержащий 80-100 мл бульона Хоттингера (pH 769-8,0).

Культуры 8-10-часового роста проверяют на чистоту путем микроскопии мазков, окрашенных по Граму, серологические свойства с монорецепторными сыворотками и биохимические свойства высевом на короткий цветной ряд.

Проверенные культуры из флакона засевают каждую отдельно в бутыли с бульоном Хоттингера и выращивают в течение 8-10 ч при 37-38^oC, периодически встряхивая.

Полученную матричную расплодку перед засевом в реактор проверяют микроскопией мазков, окрашенных по Граму, и высевом на среду Эндо или Плоскирева.

Все матричные расплодки сальмонелл одного серотипа засевают в отдельные реакторы в количестве 8-10% от объема среды и выращивают в течение 10-14 ч при 37-38^oC, при непрерывной аэрации и перемешивании. Для улучшения условий роста микробов и снижения pH при повышении его до 7,6-7,8 добавляют стерильный 40% -ный раствор глюкозы до концентрации 0,1-0,2% (200-500 мл раствора глюкозы на 100 л культуры).

По окончании культивирования определяют концентрацию микробных тел, pH и чистоту выращенной культуры микроскопией мазков, окрашенных по Граму, высевами на дифференциальную среду и типированием выращенной культуры из реактора, включают мешалку для получения равномерной взвеси.

При необходимости выращенные культуры сальмонелл концентрируют на центрифуге ОТР-101К и доводят до концентрации 40-60 млрд кл/мл.

К выращенным культура сальмонелл при включенной мешалке добавляют формалин, разведенный физраствором 1:1 с таким расчетом, чтобы его концентрация в культуре составляла 0,2% Инактивацию культуры сальмонелл формалином проводят в течение 20 сут при 37-38^oC.

Д. Приготовление адъюванта. Для изготовления вакцины можно использовать как масляный адъювант, так и гель гидроокиси алюминия (ГОА).

Для изготовления масляного адъюванта масло для эмульгированных вакцин (ПС-3) и ланолин безводный смешивают в соотношении 83:17 об.ч. помещают в емкость и автоклавируют в течение 1 ч при 115-120^oC. После автоклавирования адъювант проверяют на стерильность. Стерильный адъювант используют для составления серии вакцины. Адъювант можно хранить при 4-10^oC в течение года.

Для приготовления адъюванта на основе ГОА готовят 1/15 М (молярные) растворы NaH₂PO₄ и KH₂PO₄.

На этом буфере готовят 2%-ный раствор гидроокисьалюминиевых квасцов, которые стерилизуют в автоклаве при 115-120^oC в течение 30-40 мин. Стерильный фосфатно-буферный 2% -ный раствор гидроокиси алюминия используют в качестве адъюванта. После того, как все компоненты вакцины готовы, непосредственно приступают к получению вакцины.

Пример 2 (из расчета на 100 л готовой вакцины). В стерильный реактор с адъювантом вносят при включенной мешалки инактивированные клетки лептоспир серогрупп Grippotyphosa (штамм "Бувим"), Pomona (штамм "Белус"), Tarassovi (штамм ВГНКИ-4), Serjoe (штаммы "Мих" 2709, hardjo), суспензии клеток сальмонелл видов Salmonella abortus ovis штамма 2703/93, Salmonella dublin штамма 3004/93, Salmonella typhimurium 2305/93, суспензии клеток кампилобактерий штамма Camp. fetus sub. intestinalis N 30, антиген хламидий из штамма Chlamydia psittaci N 30, формалин и адъювант при следующем соотношении компонентов,об.

Суспензия клеток лептоспир серогруппы Grippotyphosa в культуральной среде с концентрацией клеток 5·10⁶-3·10⁷ в 1 мл 3,8 Суспензия клеток лептоспир серогруппы Pomona в культуральной среде с концентрацией клеток 5·10⁶-3·10⁷ в 1 мл 3,8 Суспензия клеток лептоспир серогруппы Tarassovi в культуральной среде с концентрацией клеток 5·10⁶-3·10⁷ в 1 мл 3,8 Суспензия клеток лептоспир серогруппы Сейро в культуральной среде с концентрацией клеток: - Штамм "Мих" 5·10⁶-3·10⁷ кл/мл 1,3 Штамм 2709 5·10⁶-3·10⁷ кл/мл 1,3 Штамм hardjo 5·10⁶-3·10⁷ кл/мл 1,3 Суспензия клеток Salmonella abortus ovis в культуральной среде с концентрацией клеток 1·10⁹-3·10¹⁰ в 1 мл 7,3
Суспензия клеток Salmonella typhimurium в культуральной среде с концентрацией клеток 6·10⁸-15·10⁹ в 1 мл 1,0
Суспензия клеток Salmonella dublin в культуральной среде с концентрацией клеток 6·10⁸-15·10⁹ в 1 мл 1,0
Суспензия клеток кампилобактерий C.fetus sub.intestinalis в физиологическом растворе с концентрацией клеток 1·10¹⁰-3·10¹⁰ в 1 мл 0,88
Антиген хламидий Chl.psittaci с активностью 10⁶ 10⁹ ЭЛД₅₀/0,2 см³ 11,0
Формалин 0,2
Адъювант Остальное
Соединенную смесь эмульгируют в реакторе-эмульгаторе в течение 15-20 мин при 28-32^oC или перемешивают с ГОА. После этого проводят расфасовку вакцины в стерильные флаконы по 100 или 200 мл, укупоривают стерильными резиновыми пробками, закрывают металлическими колпачками и обкатывают.

Пример 3. По технологии и указанному порядку введения составных частей вакцину получают аналогично примеру 1 при следующем соотношении компонентов, об.

Суспензия клеток лептоспир серогруппы Grippotyphosa в культуральной среде с концентрацией клеток 5·10⁶-3·10⁷ в 1 мл 4,035
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Pomona в культуральной среде с концентрацией клеток 5·10⁶-3·10⁷ в 1 мл 4,035
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Tarassovi в культуральной среде с концентрацией клеток 5·10⁶-3·10⁷ в 1 мл 4,035
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Сейро в культуральной среде с концентрацией клеток:
Штамм "Мих" 5·10⁶-3·10⁷ кл/мл 1,37
Штамм 2709 5·10⁶-3·10⁷ кл/мл 1,37
Штамм hardjo 5·10⁶-3·10⁷ кл/мл 1,37
Суспензия клеток Salmonella abortus ovis в культуральной среде с концентрацией клеток 1·10⁹-3·10¹⁰ в 1 мл 8,3
Суспензия клеток Salmonella typhimurium в культуральной среде с концентрацией клеток 6·10⁸-15·10⁹ в 1 мл 1,75
Суспензия клеток Salmonella dublin в культуральной среде с концентрацией клеток 6·10⁸-15·10⁹ в 1 мл 1,75
Суспензия клеток кампилобактерий C.fetus sub.intestinalis в физиологическом растворе с концентрацией клеток 1·10¹⁰-3·10¹⁰ в 1 мл 1,14
Антиген хламидий Chl. psittaci с активностью 10⁶ 1010⁹ ЭЛД ₅₀/0,2 см² 12,0
Формалин 0,3
Адъювант Остальное
Пример 4. По технологии и указанному порядку введения компонентов вакцину готовят аналогично примеру 1 при следующем соотношении компонентов,об.

Суспензия клеток лептоспир серогруппы Grippotyphosa в культуральной среде с концентрацией клеток 5·10⁶-3·10⁷ в 1 мл 4,27
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Pomona в культуральной среде с концентрацией клеток 5·10⁶-3·10⁷ в 1 мл 4,27
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Tarassovi в культуральной среде с концентрацией клеток 5·10⁶-3·10⁷ в 1 мл 4,27
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Сейро в культуральной среде с концентрацией клеток:
Штамм "Мих" 5·10⁶-3·10⁷ кл/мл 1,43
Штамм 2709 5·10⁶-3·10⁷ кл/мл 1,43
Штамм hardjo 5·10⁶-3·10⁷ кл/мл 1,43
Суспензия клеток Salmonella abortus ovis в культуральной среде с концентрацией клеток 1·10⁹-3·10¹⁰ в 1 мл 9,3
Суспензия клеток Salmonella typhimurium в культуральной среде с концентрацией клеток 6·10⁸-15·10⁹ в 1 мл 2,5
Суспензия клеток Salmonella dublin в культуральной среде с концентрацией клеток 6·10⁸-15·10⁹ в 1 мл 2,5
Суспензия клеток кампилобактерий C.fetus sub.intestinalis в физиологическом растворе с концентрацией клеток 1·10¹⁰-3·10¹⁰ в 1 мл 1,4
Антиген хламидий Chl.psittaci с активностью 10⁶ 10⁹ ЭЛД ₅₀/0,2 см² 13,0
Формалин 0,4
Адъювант Остальное
Пример 5. Вакцину готовят аналогично примеру 1 при следующем соотношении компонентов,об.

Суспензия клеток лептоспир серогруппы Grippotyphosa в культуральной среде с концентрацией клеток 5·10⁶-3·10⁷ в 1 мл 3,7
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Pomona в культуральной среде с концентрацией клеток 5·10⁶-3·10⁷ в 1 мл 3,7
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Tarassovi в культуральной среде с концентрацией клеток 5·10⁶-3·10⁷ в 1 мл 3,7
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Сейро в культуральной среде с концентрацией клеток: -
Штамм "Мих" 5·10⁶-3·10⁷ кл/мл 1,2
Штамм 2709 5·10⁶-3·10⁷ кл/мл 1,2
Штамм hardjo 5·10⁶-3·10⁷ кл/мл 1,2
Суспензия клеток Salmonella abortus ovis в культуральной среде с концентрацией клеток 1·10⁹-3·10¹⁰ в 1 мл 7,2
Суспензия клеток Salmonella typhimurium в культуральной среде с концентрацией клеток 6·10⁸-15·10⁹ в 1 мл 0,9
Суспензия клеток Salmonella dublin в культуральной среде с концентрацией клеток 6·10⁸-15·10⁹ в 1 мл 0,9
Суспензия клеток кампилобактерий C.fetus sub.intestinalis в физиологическом растворе с концентрацией клеток 1·10¹⁰-3·10¹⁰ в 1 мл 0,78
Антиген хламидий Chl.psittaci с активностью 10⁶ 10⁹ ЭЛД ₅₀/0,2 см² 10,0
Формалин 0,1
Адъювант Остальное
Пример 6. Вакцину готовят аналогично примеру 1, но при следующем соотношении компонентов,об.

Суспензия клеток лептоспир серогруппы Grippotyphosa в культуральной среде с концентрацией клеток 5·10⁶-3·10⁷ в 1 мл 4,37
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Pomona в культуральной среде с концентрацией клеток 5·10⁶-3·10⁷ в 1 мл 4,37
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Tarassovi в культуральной среде с концентрацией клеток 5·10⁶-3·10⁷ в 1 мл 4,37
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Сейро в культуральной среде с концентрацией клеток: -
Штамм "Мих" 5·10⁶-3·10⁷ кл/мл 1,53
Штамм 2709 5·10⁶-3·10⁷ кл/мл 1,53
Штамм hardjo 5·10⁶-3·10⁷ кл/мл 1,53
Суспензия клеток Salmonella abortus ovis в культуральной среде с концентрацией клеток 1·10⁹-3·10¹⁰ в 1 мл 9,4
Суспензия клеток Salmonella typhimurium в культуральной среде с концентрацией клеток 6·10⁸-15·10⁹ в 1 мл 2,6
Суспензия клеток Salmonella dublin в культуральной среде с концентрацией клеток 6·10⁸-15·10⁹ в 1 мл 2,6
Суспензия клеток кампилобактерий C.fetus sub.intestinalis в физиологическом растворе с концентрацией клеток 1·10¹⁰-3·10¹⁰ в 1 мл 1,5
Антиген хламидий Chl.psittaci с активностью 10⁶ 10⁹ ЭЛД ₅₀/0,2 см² 14,0
Формалин 0,5
Адъювант Остальное
Вакцина, приготовленная по примерам 1-3, обладает 100%-ной иммуногенной активностью. Уровень антител в сыворотке крови кроликов и овец, вакцинированных ассоциированной вакциной (по примерам 1-3) не ниже уровня антител, при применении моновакцин и соответствует требованиям технических условий. Тогда как вакцина, приготовленная по примерам 4 и 5, не обладает достаточной антигенной и иммуногенной активностью.

Высокая иммуногенная активность заявляемой вакцины подтверждена также в остром опыте на восприимчивых животных суягных овцематках. В опыт были отобраны 60 суягных овцематок из хозяйства благополучного по сальмонеллезу, хламидиозу, кампилобактериозу и лептоспирозу.

Ассоциированная вакцина против хламидиоза, кампилобактериоза, сальмонеллеза и лептоспироза предохраняла от абортов 100% овцематок, после их заражения лептоспирами Помона в дозе 2·10⁵ клеток и сальмонеллами в дозе 10 млрд микробных клеток. В невакцинированных группах от лептоспироза абортировало 3 головы из 7, у двух голов получен нежизнеспособный приплод, от сальмонеллеза абортировало 2 головы из 5 (при заражении 10 млрд клеток) и 3 из 5 при дозе заражения 30 млрд клеток.

Таким образом, вакцинация овцематок ассоциированной вакциной против хламидиоза, кампилобактериоза, сальмонеллеза и лептоспироза обеспечивает 100%-ную иммунологическую защиту от этих заболеваний.

Формула изобретения

1. Ассоциированная инактивированная вакцина против хламидиоза, кампилобактериоза, сальмонеллеза и лептоспироза мелкого рогатого скота, отличающаяся тем, что она содержит суспензии клеток лептоспир серогрупп Grippotyphosa, Pomona, Tarassovi, Serjoe, клеток сальмонелл видов Salmonella abortus ovis, Salmonella dublin, Salmonella typhimurium, клеток кампилобактерий штамма Campylobacter fetus Sub. intestinalis N 30, антиген хламидий из штамма Chlamydia psittaci N 8, формалин и адъювант при следующем соотношении компонентов, об.

Суспензия клеток лептоспир серогруппы Grippotyphosa в культуральной среде с концентрацией 5·10⁶ 3·10⁷ кл/мл 3,8 4,27
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Pomona в культуральной среде с концентрацией 5·10⁶ 3·10⁷ кл/мл 3,8 4,27
Суспензии клеток лептоспир серогруппы Tarassovi в культуральной среде с концентрацией 5·10⁶ 3·10⁷ кл/мл 3,8 4,27
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Serjoe в культуральной среде с концентрацией 5·10⁶ 3·10⁷ кл/мл 3,9 4,29
Суспензия клеток сальмонелл вида Salmonella abortusovis в культуральной среде с концентрацией 1·10⁹ 3·10¹⁰ кл/мл 7,3 9,3
Суспензия клеток сальмонелл вида Salmonella typhimurium в культуральной среде с концентрацией 6·10⁸ 15·10⁹ кл/мл 1,0 2,5
Суспензия клеток сальмонелл вида Salmonella dublin в культуральной среде с концентрацией 6·10⁸ 15·10⁹ кл/мл 1,0 2,5
Суспензия клеток кампилобактерий штамма Campylobacter fetus Sub.intestinalis N 30 в физиологическом растворе с концентрацией 1·10¹⁰ 3·10¹⁰ кл/мл 0,88 1,4
Антиген хламидий из штамма Chlamydia psittaci N 8 с активностью 10⁶ 10⁹ ЭЛД₅₀/0,2 см³ 11,0 13,0
Формалин 0,2 0,4
Адьювант Остальное
2. Вакцина по п.1, отличающаяся тем, что из адъювантов она содержит масляный адъювант на основе минерального масла и ланолина или гель гидроокиси алюминия.