Циклические пептиды или их фармацевтически приемлемые соли, способ их получения

 

Использование: в медицине как соединения, обладающие бронхолитической активностью. Сущность изобретения: циклические пептиды формулы I: где R₁=His, NCH₃Ala; R₂=Ala, Ser; R₆= группа; -NH-C(Q)-C(O)- где Q = (низший) аклиларил, причем арил может быть незамещенным или замещенным по кольцу одним или несколькими заместителями, выбранными из: OH, OCH₃, F, Cl, J, CH₃, CF₃, NO₂, NH₂, N(CH₃)₂, NHCOCH₃, NHCOC₆H₅, C(CH₃)₃; R₈= Asp, Ala, Glu; R₁₀=Tyr, незамещенный или замещенный низшей алкоксигруппой; или R₆, где Q= (низш.) алкилфенил; R₁₂=Arg, Lys или Orn; R₁₆=Ala или Gln; R₁₇=Nle или Ala; R₁₉=Ala или Val; R₂₂=Tyr или R₆, где Q=(низший) алкилфенил; R₂₄= Ala или Asn; R₂₆=Ile, Val, Leu; R₂₇=Lys или Leu; R₂₈=Asn, Thr, Lys; X = водород или ацил; Y = NH₂, OH; или R₂₉-R₃₀-R₃₁-Z, где Z = NH₂; R₂₉=Gly или Ala; R₃₀= Gly или Ala; R₃₁=Met, Cys(Asm), Ala , Thr или их фармацевтически приемлемые соли; способ получения пептидов I путем построения пептидной цепи твердофазным методом на полимерном носителе, отщепления защитных групп для получения аминогруппы со свободной боковой цепью в соответствующих положениях, необходимых для последующей циклизации, образования циклической ковалентной связи между этими защитными группами, отщепления защитных групп и полимера-носителя путем обработки соответствующим реганентом и, при необходимости, в присутствии таких добавок, как ацепторы катионов. 4 с.п. и 53 з. п. ф-лы, 6 табл.

Изобретение относится к новым циклическим пептидам или их фармацевтически приемлемым солям, которые являются аналогами вазоактивных пептидов (VIP), используемых при лечении бронхотрахеальных спазматических состояний.

Вазоактивный кишечный пептид (VIP) был впервые обнаружен, выделен и очищен с применением свиной кишки (патент США 3,879,371). Пептид содержит двадцать восемь аминокислот (28) и расширяет гомологический ряд соединений на основе секретина и глюкагона (Carlquist et al. Horm.Metab.Pes. 14, 28-29 (1982)). Последовательность аминокислот в VIP является следующей: His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu- Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn- NH₂[(SEQ ID NO:1)-NH₂]
VIP известен как вещество с широким диапазоном биологического действия на всем протяжении желудочно-кишечного тракта и сердечно-сосудистой системы. Ввиду его сходства с желудочно-кишечными гормонами, было обнаружено, что VIP способен стимулировать панкреатическую и билиарную секрецию, печеночный гликогенолиз, секрецию глюкагона и инсулина и активизировать выделение панкреотического бикарбоната [Kerrins C. and Said S.I. Proc.Soc. Exp.Biol. Med. 142, 1014-1017 (1972); Domschke S. et al. Gastroenterology, 73, 478-480 (1977)]
Нейроны, содержащие VIP, были определены путем иммуноанализа в клетках эндокринной и экзокринной систем, кишечной и гладкой мышц [Polak J.M. et al. Gut, 15, 720-724 (1974)] Было обнаружено, что VIP является нейроэффектором, вызывая выделение нескольких гормонов, включая пролактин [Frawley L.S. et al. Neuroendocrinology, 33, 79-83 (1981)] тироксин [Ahren B. et al. Nature, 287, 343-345 (1980)] инсулин и глюкагон [Schebalin M. et al. Am.J.Physiology E. 232, 197-200 (1977)] Была обнаружена также способность VIP стимулировать выделение ренина из почки в естественных и в искусственных условиях [Porter J.P. et al. Neuroendocrinology, 36, 404-408 (1983)] Было обнаружено, что VIP присутствует в нервах и нервных окончаниях дыхательных путей различных видов животных и человека [Dey R.D. and Said S.I. Fed.Proc. 39, 1062 (1980); Said S. I. et al. Ann.N.Y. Acad.Sci. 221, 103-114 (1974)] Действие VIP на сердечно-сосудистую и бронолегочную системы заключается в том, что, как было обнаружено, VIP является мощным вазодилататором и потенциальным релаксантом гладких мышц, оказывающим воздействие на периферические, легочные и коронарно-сосудистую системы [Said S.I. et al. Clin.Res. 20, 29 (1972)] Было обнаружено, что VIP обладает расширяющим действием на церебральные кровеносные сосуды [Lee T.J. and Berzin I. Science, 224, 898-900 (1984)] Проведенные в лабораторных условиях исследования показали, что экзогенное воздействие вазоактивного кишечного пептида на церебральные артерии вызывает расширение кровеносных сосудов, что позволяет сделать предположение о возможности использования VIP в качестве сосудорасширяющего средства для церебральной системы [Lee T. and Satio A. Science, 224, 898-901 (1984)] Было также обнаружено, что VIP обладает потенциальным сосудорасширяющим действие на глаза [Nilsson S.P.E. and Bill A. Acta Physiol.Scand. 121, 385-392 (1984)]
VIP может оказывать соответствующее действие на иммунную систему. O'Doriso et al. показали, что VIP может вызывать пролиферацию и миграцию лимфоцитов [J.Immunol. 135, 792s-796s (1985)]
Поскольку было обнаружено, что VIP обладает способностью к расслаблению гладких мышц и обычно присутствует в тканях дыхательных путей, как отмечено выше, то было высказано предположение о том, что VIP может оказывать эндогенное воздействие на расслабление гладких мышц бронхиальной системы [Dey R. D. and Said S.I. Fed.Proc. 39, 1962 (1980)] Было обнаружено, что ткани больных астмой не содержат иммуноактивного VIP по сравнению с тканями здоровых людей. Это может указывать на потерю VIP или VIP-содержащих нервных волокон, связанную с возникновением астмы [Ollerenshaw S. et al. New England J.Med. 320, 1244-1248 (1989)] При проведении испытаний в искусственных и естественных условиях было обнаружено, что VIP обладает способностью к расслаблению гладких мышц трахеи и к защите от воздействия таких бронхосжимающих агентов, как гистамин и простагландин F_2a [Wasserman M.A. et al. in Vazoactive Intestinal Peptide, S.I.Said ed. Raven Press, N.Y. 1982, pp.177-184; Said S. I. et al. Ann. N.Y. Acad. Sci. 221, 103-114 (1974)] Было обнаружено, что при внутривенном введении VIP обладает способностью к защите от воздействия таких бронхосжимающих агентов, как гистамин, простагландин F_2a, лейкотриены, факторов, вызывающих тромбоцит, а также антигеноиндуцированного бронхостеноза [Said S. I. et ak. supra, (1982)] Проведенные в лабораторных условиях испытания показали, что VIP также обладает способностью к ингибированию выделения слизи в тканях дыхательных путей человека [Coles S.J. et al. Am.Rev.Respir.Dis. 124, 531-536 (1981)]
При внутривенном введении VIP в организм человека, больного астмой, было выявлено, что VIP обладает способностью к увеличению максимальной скорости выдоха и к защите от гистамининдуцированного расширения бронхов [Morice A.H. and Sever P.S. Peptides, 7, 279-280 (1986); Morice A. et al. The Lancet, 11, 1225-1227 (1983)] Эффективное действие на легкие, наблюдаемое при таком внутривенном введении VIP, сопровождалось, однако, побочным действием на сердечно-сосудистую систему вызывал в особенности гипотензию и тахикардию, а также прилив крови к лицу. При дозированном внутривенном введении, не вызывающем сердечно-сосудистого действия, VIP не способен изменить удельную проводимость дыхательных путей [Palmer J.B.D. et al. Thorax, 41, 663-666 (1986)] Недостаточную степень воздействия VIP объясняют небольшим количеством допустимой дозы и, возможно, быстрым разрушением соединения.

При назначении больным в виде аэрозоля нативный VIP обладал минимальной активностью для защиты от гистамининдуцированного бронхостеноза [Altieri et al. Pharmacologist, 25, 123 (1983)] Было обнаружено, что VIP не оказывает значительного воздействия на основные параметры дыхательных путей, но обладает защитным действием от гистамининдуцированного бронхостеноза при ингаляционном введении в организм больного [Barnes P.J. and Dixon C.M.S. Am.Rev. Respir.Dis. 130, 162-166 (1984)] При введении в организм больного в виде аэрозоля VIP не вызывал тахикардии или понижения артериального давления, но оказывал бронхорасширяющее действие [Said S. I. et al. in Vasoactive Intenstinal Peptide, S.I.Said, ed. Raven Press, N.Y. 1928, pp.1-85-191]
Ввиду интересной биологической активности, которая может быть полезной, VIP явилось предметом изучения официально представленных программ синтеза, имеющих целью развить одно или более свойств данной молекулы. Takeyama et al. сообщили об аналоге VIP, имеющем в своем составе глютаминовую кислоту, замещенную аспарагиновой кислотой в положении 8. Было обнаружено, что это вещество не такое сильнодействующее, как нативный VIP [Chem.Pharm.Bull. 28, 2265-2269 (1980)] Wendlberger et al. обнаружили аналог VIP, имеющий в своем составе норлейцин, заменяющий метионин в положении 17 [Peptide, Proc. 16th Eur. Pep. Symp. 290-295 (1980)] Было обнаружено, что данный пептид обладает таким же сильным действием, как и нативный VIP, по его способности к замещению радиоиодированного VIP в препаратах на основе печеночной мембраны. Watts и Wooton сообщили о серии линейных и циклических фрагментов VIP, включающих в себя от 6 до 12 остатков, соответствующих последовательности нативного VIP (Eur. Pat. Nos. 184309 and 325044; U.S. Pat.Nos. 4,737,487 and 4,866,039). Turner et al. сообщили о том, что фрагмент VIP(10-28) является веществом-антагонистом по отношению к VIP [Peptides, 7,849-854 (1986)] Было также указано на то, что замещенный аналог [4-Cl-D-Phe⁶Leu¹⁷]-VIP присоединяется к рецептору VIP и подавляет активность VIP. [Pandol S. et al. Gastrointest. Liver Physiol. 13, G553-G557 (1986)] Gozes et al. сообщили о том, что аналог [Lys¹, Pro², Arg³, Arg⁴, Pro⁵, Tyr⁶]-VIP представляет собой конкурентноспособный ингибитор образования связи между VIP и его рецептором на уровне глиальных клеток. [Endocrinology, 125, 2945-2949 (1989)] Robberecht et al. сообщили о нескольких аналогах VIP с D-остатками, замещенными в N-концевой группе нативного VIP. [Peptides, 9, 339-345 (1988)] Каждый из этих аналогов имел менее прочную связь и обладал меньшей активностью, чем нативный VIP в отношении с-AMP активации. Tachibana и Ito сообщили о нескольких аналогах VIP, включающих в себя молекулу исходного вещества. [in Peptide Chem. T.Shiba and S.Sakakibara, eds. Prot. Res.Foundation, 1988, pp.481-486, Jap.Pat.No.1083012, U.S.Pat.4,822,774] Было указано на то, что бронхолитическое действие этих веществ на 1-3 порядка более, чем действие VIP, а гипотензивное действие на 1-2 порядка более, чем действие VIP. Musso et al. сообщили также о нескольких аналогах VIP, замещенных в положениях 6-7, 9-13, 15-17 и 19-28. [Biochemistry, 27, 8174-8181 (1988); Eur.Pat. No.8271141; U. S. Pat. 4,835,252] Было обнаружено, что действие этих веществ эквивалентно или менее активно, чем действие нативного VIP в отношении присоединения к рецептору VIP и биологической чувствительности. Bartfai et al. сообщили о серии многократно замещенных [Leu¹⁷]-VIP аналогах. (Международная заявка на патент N WO 89/05857).

Настоящее изобретение относится к аналогам циклических вазоактивных пептидов. Циклический пептид представляет собой пептид, в котором карбоксигруппа одной аминоксилоты соединена ковалентной связью с амино-группой другой аминокислоты с образованием амидной связи. В результате такой связи образуется циклическая структура. Биологическая активность циклических пептидов может существенно отличаться от биологической активности их исходных аналогов с линейной структурой. Структура циклических пептидов является более устойчивой и четко выраженной. Эти различия оказывают влияние на биологическую активность циклических пептидов. Циклическая структура аналога пептида может способствовать продолжительности его действия ввиду устойчивости структуры, которая уменьшает вероятность химической и ферментативной деструкции. Может быть увеличена и биологическая активность циклических пептидов в результате изменения физических свойств пептидов при повышении устойчивости структуры. Таким образом, четко выраженная форма циклического пептида может способствовать его большей избирательности действия в отношении избранного рецептора по сравнению с линейными пептидами, способствуя уменьшению нежелательного побочного действия.

В настоящем изобретении предложены новые циклические пептиды с формулой:

где
R₁ His, NCH₃Ala;
R₂ Ala, Ser;
R₆ группа
Q (низший) алкарил, в котором арил может быть незамещенным или замещенным одним или несколькими заместителями, выбранными из группы: OH, OCH₃, F, Cl, J, CH₃, CF₃, NO₂, NH₂, N(CH₃)₂, NHCOCH₃, NHCOC₆H₅, C(CH₃)₃;
R₈=Asp, Ala, Glu;
R₁₀= Tyr, незамещенный или замещенный низшей алкоксигруппой; или R₆, где Q= (низший) алкилфенил, незамещенный или замещенный в фенильном ядре одним или несколькими заместителями, выбранными из группы: N(CH₃)₂, OH, OCH₃, F, Cl, J, CH₃, CF₃, NO₂, NH₂, NHCOCH₃, NHCOC₆H₅, C(CH₃)₃; R₁₂=Arg,Orn или Lys; R₁₆= Ala или Gln; R₁₇=Nle, Ala; R₁₉=Als, Val; R₂₂=Tyr или R₆, где Q=(низший) алкилфенил незамещенный или замещенный в фенильном ядре одним или несколькими заместителями, выбранными из группы: OH, OCH₃, F, Cl, J, CH₃, CF₃, NO₂, NH₂, NHCOCH₃, NHCOC₆H₅, N(CH₃)₂, C(CH₃)₃; R₂₄=Ala, Asn; R₂₆=Ile, Val, Leu; R₂₇= Lys, Leu; R₂₈=Asn, Thr, Lys; X водород или ацил; Y NH₂ или OH-группа; R₂₉-R₃₀-R₃₁-Z, где Z NH₂; R₂₉=Gly, Ala; R₃₀=Gly, Ala; R₃₁=Met, Cys(Asm), Ala, Thr;
или их фармацевтически приемлемые соли.

Предпочтительны циклические пептиды, в которых Q представляет собой (C₁-C₂) алкарил; либо циклические пептиды, в которых Q (C₁-C₂)алкилфенил, где фенильное кольцо является незамещенным или замещенным одним или несколькими заместителями, выбранными из: F, Cl, I, NH₂, OH, OCH₃, CH₃, CF₃, NO₂, N(CH₃)₂, NHCOCH₃, NHCOC₆H₅, C(CH₃)₃, либо циклические пептиды, в которых Q-(C₁-C₂)алкилнафталин.

Преимущественно это циклические пептиды, выбранные из соединений формулы I, где R₂₆= Val, R₂₈= Thr [X (SEQ ID No. 11)Y]
или R₁₇= Nle, R₂₆= Val, R₂₈= Thr [X (SEQ ID No.12)Y]
в частности, пептид, представляющий собой Ae-[Glu⁸, Orn¹², Nle¹⁷, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸] -VIP цикло/Lys²¹, ___→ Asp²⁵/[Ac-/SEQ ID No.14/-Y/, или R₁₂ Lys, R₁₇ Nle, R₂₆ Val, R₂₈ Thr [X (SEQ ID No.31)-NH₂] в частности, пептид, представляющий собой: Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID No.28)- NH₂]
или Ac-[p-F-Phe⁶, Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸, Gly^29,30, Thr³¹]-VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:66)-NH₂]
или циклический пептид, где R₁₂ представляет собой Lys, R₁₇ представляет собой Nle, R₁₉ представляет собой Ala, R₂₆ представляет собой Val и R₂₈ представляет собой Thr [X-SEQ ID NO:15)-Y]
В частности, к ним относится циклический пептид, представляющий собой:
а) Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:29)- NH₂]
б) Ac-[p-F-Phe⁶, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸, Gly^29,30, Cys(Acm)³¹]-VIP (1-31)-NH₂ цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:32)-NH₂]
в) Ac-[Ala², Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:33)-NH₂]
г) Ac-[N-Me-Ala¹, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:34)-NH₂]
д) Ac-[O-Me-Tyr¹⁰, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:41)-NH₂]
е) Ac-[p-F-Phe⁶, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:49)-NH₂]
ж) Ac-[I-Nal⁶, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:50)-NH₂]
з) Ac-[p-NH₂-Phe¹⁰, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:54)-NH₂]
и) Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, m-OCH₃-Tyr²², Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸] -VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:55)-NH₂]
к) Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, m-F-L-Tyr²², Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:56)-NH₂]
л) Ac-[Glu⁸ Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸, Gly^29,30, Thr³¹] -VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:65)-NH₂] или к пептиду в), в котором R₂₆ представляет собой Leu, и R₂₇ и R₂₈ и представляют собой Lys[X-(SEQ ID NO:16)-Y] в частности, к пептиду, в котором R₁₂ представляет собой Lys, R₁₇ представляет собой Ala, R₁₉ представляет собой Ala, R₂₆представляет собой Leu и R₂₇ и R₂₈ представляют собой Lys [X-(SEQ ID NO: 17)-Y]
Среди последних можно назвать циклический пептид, представляющий собой Ac-[Glu, Lys¹², Ala^16,17,19, Asp²⁵, Lys^27,28]-VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO: 60)-NH₂] или Ac-[Ala⁸, Lys¹², Ala^16,17,19, Ala²⁴, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28] -VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:62)-NH₂] Ac-[Glu⁸, Lys¹², Ala^16,17,19,Ala²⁴, Asp²⁵,Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:64)-NH₂] либо циклический пептид, в котором R₁₂ представляет собой Lys, R₁₇ представляет собой Nle, R₂₆ представляет собой Leu и R₂₇ и R₂₈ представляют собой Lys[X-(SEQ ID No:18)-Y] в частности, циклический пептид, представляющий собой Ac-[Ala², Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Gly^29,30, Thr³¹]-VIP цикло [Lys²¹-->Asp²⁵] [Ac-(SEQ ID NO: 67)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Gly^29,30, Thr³¹]-VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:68)-NH₂] либо циклический пептид, в котором R₁₂ представляет собой Lys, R₁₇ представляет собой Nle, R₁₉ представляет собой Ala, R₂₆ представляет собой Leu и R₂₇ и R₂₈ представляют собой Lys[X-(SEQ ID NO: 19)-Y] циклический пептид, в котором R₁₂ представляет собой Lys, R₁₆ представляет собой Gln, R₁₇ представляет собой Nle, R₁₉ представляет собой Ala, R₂₆ представляет собой Leu и R₂₇ и R₂₈ представляют собой Lys[X-(SEQ ID NO:70)-Y] циклический пептид, в котором R₂ представляет собой Ser, R₁₂ представляет собой Lys, R₁₆ представляет собой Gln, R₁₇ представляет собой Nle, R₁₉ представляет собой Ala, R₂₆ представляет собой Leu, R₂₇ и R₂₈ представляет собой Lys[X-(SEQ ID NO:71)-Y] в частности циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Lys¹², -Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO: 38)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[N-Me-Ala¹, Lys¹², -Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:39)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO: 40)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Ala^29-31, -VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:42)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[N-Me-Ala¹, Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO: 44)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[p-F-Phe⁶, Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28] -VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:45)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[I-Nal⁶, Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO: 46)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Glu⁸, p-NH₂-Phe¹⁰, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28] -VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:47)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Glu⁸, O-Me-Tyr¹⁰, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO: 48)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Gly^29,30, Thr³¹]-VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:52)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, m-OCH₃-Tyr²², Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28] -VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO: 57)- NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹,m-F-L-Tyr²², Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO: 58)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Ala⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Ala²⁴, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO: 59)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Ala^29-31] -VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:69 )-NH₂] циклический пептид, в котором R₂ представляет собой Ala, R₁₂ представляет собой Lys, R₁₆ представляет собой GLu, R₁₇ представляет собой NLe, R₁₉ представляет собой Ala, R₂₆ представляет собой Leu и R₂₈ представляет собой Lys[X-(SEQ ID NO: 72)-Y] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Ala², Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Ala^29-31] -VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:43)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Ala², Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Ala^29,30, Thr³¹]-VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:51)- NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Ala², Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO: 53)-NH₂] циклический пептид, в котором R₁₂ представляет собой Lys, R₁₆ представляет собой Ala, R₁₇ представляет собой Nle, R₁₉ представляет собой Ala, R₂₆ представляет собой Leu и R₂₇ и R₂₈ представляют собой Lys[X-(SEQ ID NO: 73)-Y] в частности, циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Ala⁸, Lys¹², Ala¹⁶, Nle¹⁷, Ala¹⁹, Ala²⁴, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28] -VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:61)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Glu⁸, Lys¹², Ala¹⁶, Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:63)-NH₂]
Все указанные пептиды обладают терапевтической активностью, в частности, бронхолитической активностью. Особенно это относится к пептиду формулы: Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Gly^29,30, Thr³¹]-VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:52)- NH₂] обладающему терапевтической активностью, а именно бронхолитической активностью.

Данное изобретение относится к способу получения циклических пептидов общей формулы I

в которой R₁ представляет собой His, N-CH₃-Ala; R₂ представляет собой Ser или Ala; R₆ представляет собой

где
Q (низший)алкарил, причем арильное кольцо может быть незамещенным или замещенным по кольцу одним или несколькими заместителями, выбранными из группы: OH, OCH₃, F, Cl, J, CH₃, CF₃, NO₂, NH₂, N(CH₃)₂, NHCOCH₃, NHCOC₆H₅, C(CH₃)₃;
R₈ представляет собой Asp, Glu или Ala;
R₁₀ представляет собой Tyr, незамещенный или замещенный алкоксигруппой; или R₆, где Q-низший(алкфенил), незамещенный или замещенный по кольцу одним или несколькими заместителями, выбранными из группы: OH, OCH₃, F, Cl, J, CH₃, CF₃, NO₂, NH₂, N(CH₃)₂, NHCOCH₃, NHCOC₆H₅, C(CH₃)₃;
R₁₂ представляет собой Arg, Lys или Orn;
R₁₆ представляет собой Ala или Gln;
R₁₇ представляет собой Nle или Ala;
R₁₉ представляет собой Val или Ala;
R₂₂ представляет собой Tyr или R₆, где Q=низший (алкфенил), незамещенный или замещенный по кольцу одним или несколькими заместителями, выбранными из группы: OH, OCH₃, CF₃, CH₃, F, Cl, J, NO₂, NH₂, N(CH₃)₂, NHCOCH₃, NHCOC₆H₅, C(CH₃)₃;
R₂₄ представляет собой Asn или Ala;
R₂₆ представляет собой Ile, Val или Leu;
R₂₇ представляет собой Lys или Leu;
R₂₈ представляет собой Asn, Thr или Lys;
X представляет собой водород или ацил;
Y представляет собой NH₂ или группу OH;
R₂₉-R₃₀-R₃₁-Z; R₂₉=Gly, Ala;
R₃₀ представляет собой Gly или Ala;
R₃₁ представляет собой Ala, Met, Cys(Acm) или Thr;
Z представляет собой NH₂;
или их фармацевтически приемлемых солей.

Способ заключается в том, что к полимерному носителю присоединяют C-концевую N-защищенную аминокислоту, деблокируют и присоединяют по аминогруппе N-защищенные аминокислоты в порядке, указанном в формуле I, деблокируя каждый раз аминогруппу очередной, присоединенной к пептидной цепи аминокислоты, от полученного пептидилполимера отщепляют защитные группы для получения аминогруппы со свободной боковой цепью в соответствующих положениях, необходимых для последующей циклизации, циклизуют с образованием циклической ковалентной связи между этими группами, отщепляют оставшиеся защитные группы и полимер-носитель путем обработки соответствующим реагентом и, при необходимости, в присутствии таких добавок, как акцепторы катионов.

Q предпочтительно представляет собой:

где
n 1, 2; X₁ и X₂ независимо означают атомы водорода, OH, OCH₃, F, Cl, I, CH₃, CF₃, NO₂, NH₂, N(CH₃)₂, NHCOCH₃, NHCOC₆H₅ или C(CH₃)₃.

Предпочтительно, если Q означает бензил, п-фторбензил, п-аминобензил, п-гидроксибензил, о-метил, 1-метилнафтил или 2-метилнафтил. Наиболее предпочтительным значением Q является бензил.

Целесообразно использовать пептиды, имеющие группу формул А, приведенных в конце описания,
где
X, Y, R₁, R₂, R₆, R₈, R₁₀, R₁₂, R₁₆, R₁₇, R₁₉, R₂₂, R₂₄ и R₂₇ имеют значения, указанные выше.

Наиболее целесообразно использовать циклический пептид в виде Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Gly^29,30, Thr³¹]-VIP цикло _[Lys21_{___→ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:52)- NH₂]
В соответствии с настоящим изобретением пептиды способствуют релаксации трахеобронхиальных гладких мышц без побочного действия на сердечно-сосудистую систему и, поэтому, являются пригодными для лечения нарушений, связанных с сужением просвета бронха, например, для лечения астмы.

Изобретение относится к неизвестным аналогам вазоактивных кишечных пептидов (VIP), которые оказывают соответствующее бронхорасширяющее действие без поддающихся наблюдению побочных эффектов.

Термин "низший алкил", используемый в описании, относится к остаткам насыщенных алифатических углеводородов с прямой и разветвленной цепью, содержащей 1-6 атомов углерода. Предпочтительной группой низшего алкила является метильная группа.

Термин "арил", используемый в описании, относится к таким группам одноядерных ароматических углеводородов, как фенил, который может быть незамещенным или замещенным в одном или нескольких положениях OH, OCH₃, F, Cl, J, CH₃-группами, аминогруппой, нитрогруппой, диметиламиногруппами, ацетиламино или бензоиламиногруппой. Термин "арил" также относится к многоядерным арильным группам, таким как нафтил, который может быть замещен одной или несколькими из вышеуказанных групп. Предпочтительными арильными группами являются фенил, незамещенный или однозамещенный фтором, или незамещенный нафтил.

X представляет собой водород или ацил, а Y представляет OH или NH₂ группу.

Используемые далее термины:
"гидролизуемая аминозащитная группа" и "гидролизуемая карбоксизащитная группа" согласно описанию данного изобретения означает любую ацильную группу.

Предпочтительными аминозащитными группами являются:

где
X₃ представляет собой низший алкил или низший галоидалкил. Наиболее предпочтительными из этих защитных групп являются те группы, в которых X₃ представляет собой C_1-3алкил или C_1-3галоалкил.

Предпочтительными карбозащитными группами являются низшие сложные алкиловые эфиры, NH₂ и низшие алкиламиды, наиболее предпочтительными из которых являются C_1-3алкиловые сложные эфиры, NH₂ и C_1-3алкиламиды.

В настоящем изобретении также рассматриваются новые циклические пептиды с формулой:

где
R₁ представляет собой N-CH₃-Ala; R₂ представляет собой Ser или Ala; R₆ представляет собой

где
R₈ представляет собой Asp, Glu или Ala;
R₁₀ представляет собой Tyr или R₆;
R₁₂ представляет собой Arg или Lys;
R₁₆ представляет собой Gln или Ala;
R₁₇ представляет собой Nle или Ala;
R₁₉ представляет собой Val или Ala;
R₂₂ представляет собой Tyr или R₆;
R₂₄ представляет собой Asn или Ala;
R₂₆ представляет собой Ile, Val или Ley;
R₂₇ представляет собой Leu или Lys;
R₂₈ представляет собой Asn, Thr или Lys;
X представляет собой водород или гидролизуемую аминозащитную группу-ацил;
Y представляет собой гидроксил, гидролизуемую карбоксизащитную группу - NH₂, или R₂₉-R₃₀-R₃₁-Z;
R₂₉ представляет собой Gly или Ala;
R₃₀ представляет собой Gly или Ala;
R₃₁ представляет собой Ala, Met, Cys(Acm) или Thr;
Z представляет собой гидроксильную или гидролизуемую карбоксизащитную группу NH₂.

Q представляет собой:

где
n 1, 2;
X₁ и X₂ представляют собой независимые эквивалентные группы водорода, OH, OCH₃, F, Cl, I, CH₃, CF₃, NO₂, NH₂, N(CH₃)₂, NHCOCH₃,NHCOC₆H₅ или C(CH₃)₃.

Наиболее предпочтительными из соединений в виде Q являются бензил, п-фторбензил, п-аминобензил, п-гидроксибензил, о-метил, 1-метилнафтил или 2-метилнафтил. Самым предпочтительным из соединений Q является бензил или фармацевтически-приемлемые соли этих соединений.

Предпочтительными пептидами являются пептиды с группой формул Б, приведенных в конце описания,
где значения радикалов указаны выше.

Как указано выше, способ получения циклических полипептидов заключается в том, что
(а) проводят избирательное удаление защитной группы пептида, если она имеется, и присоединяют к полимеру с получением свободной аминогруппы и карбоксильной группы;
(б) наращивают цепь путем взаимодействия реагента со свободной аминогруппой с реагентом со свободной кислотной группой, с образованием амидной ковалентной связи;
(в) проводят удаление полимера.

Номенклатура, используемая для определения пептидов, является обычной для соединений, в которых N-концевая аминогруппа находится слева, а C-концевая карбоксильная группа, находится справа. Природными аминокислотами являются существующие в природе аминокислоты, обнаруженные в протеинах, то есть Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Ser, Thr, Lys, Arg, Asp, Asn, Glu, Gln, Cys, Met, Phe, Tyr, Pro, Trp и His. Если не оговорено иное, они находятся в виде L-изомера.

Следующие сокращения или условные обозначения используются далее в дополнение к представленным выше защитным группам, растворителям, реагентам и прочим веществам, приведенным в табл.1.

Изменения аминокислотной последовательности в пептидной цепочке нативного VIP указаны в квадратных скобках перед обозначением "VIP". Производные по аминогруппе в N-положении, представленные выше в виде X, слева от аминокислот, заключенных в скобки. Последовательность чисел, появляющихся в круглых скобках справа от "VIP", указывает на удаление аминоксилот и добавление к нумерации последовательности нативного VIP. Такое обозначение, например, Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Gly²⁹] -VIP(1-29)-NH₂, указывает на полипептид, имеющий последовательность аминокислот, соответствующую нативному VIP, в котором ацетильная группа замещает водород в N-положении аминокислоты, лизин замещает аргинин в положении 12 и норлейцин замещает на метионин в положении 17. Дополнительно на месте карбоксильной группы в положении 28 вместо аспарагина и в положении 29 введены 2 остатка глицина. Суффиксы "-OH" и "-NH₂", следующие за "VIP", или круглые скобки указывают на свободную кислоту или амид соответствующего полипептида. В случае, когда ни один из двух суффиксов не используется, последовательность содержит обе формы.

Как указано выше, циклический пептид, о котором идет речь, представляет собой пептид, в котором карбоксильная группа, вводимая в боковую цепь аминокислоты в пептиде, соединена посредством ковалентной связи с аминогруппой другой аминокислоты в пептидной цепи, с образованием амидной связи. Для обозначения циклического пептида используют несколько номенклатур и условных обозначений. Ниже приведены примеры:

Leu-Arg-Lys-Gln-Nle-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr- a.

Leu-Asp-Ser-Val-Leu-Thr-NH₂
[Ac-(SEQ ID NO:20)-NH₂]
Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP cyclo (8 _____→ 12) b.

[Ac-(SEQ ID N0:20)-NH₂]
Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP cyclo (Asp⁸_____→ Lys¹²) c.

[Ac-(SEQ ID N0:20)-NH₂]
Вышеуказанные три структуры (a-c) и сопровождающее их обозначение SEQ ID NO: а также нижеуказанная последовательность показывает один и тот же пептид с последовательностью аминокислот, соответствующей нативному человеческому VIP, в котором ацетильная группа замещает водород в N- положении вводимой аминокислоты; лизин замещает аргинин в положении 12, норлейцин замещает метионин в положении 17, валин замещает изолейцин в положении 26 и треонин замещает аспарагин в положении 28. Кроме того, между амидной связью карбоксильной группы в положении 8 боковой цепи аспарагиновой кислоты и аминогруппой в положении 12 боковой цепи лизина образуется цикл. Вышеуказанные обозначения пептидной структуры считают эквивалентными и взаимозаменяемыми.

Как указано выше, обозначение "R_n" для аминокислоты в положении одной из вышепредставленных структур и обозначение "Xaa" для аминокислоты в положении соответствующей последовательности, представленной ниже, являются эквивалентными и взаимозаменяемыми в тех случаях, когда Xaa представляет собой вещество, выбираемое из двух или нескольких аминокислот.

В соответствии с настоящим изобретением циклические пептиды имеют следующие конфигурации, если не оговорено иное, (см.табл.2).

В соответствии с изобретением рассматриваемые вещества включают в себя пептиды, имеющие следующую последовательность аминокислот:
Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP cyclo _(Asp8_{_____→ Lys}12₎ [Ac-(SEQ ID N0:20)-NH₂]
Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Val²⁶, Thr²⁸] -VIP cyclo _(Glu8_{_____→ Lys}12₎ [Ac-(SEQ ID N0:21)-NH₂]
Ac-[Asn⁸, Asp⁹, Lys¹², Nle¹⁷, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP cyclo _(Asp9_{_____→ Lys}12₎[Ac-(SEQ ID N0:22)-NH₂]
Ac-[Orn¹², Nle¹⁷, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP cyclo _(Asp8_{_____→ Orn}12₎ [Ac-(SEQ ID N0:23)-NH₂]
Ac-[Lys⁸, Asp¹², Nle¹⁷, Val²⁶, Thr²⁸] -VIP cyclo _(Lys8_{_____→ Asp}12₎ [Ac-(SEQ ID N0:24)-NH₂]
Ac-[Glu⁸, Orn¹², Nle¹⁷, Val²⁶, Thr²⁸] -VIP cyclo _(Glu8_{_____→ Orn}12₎ [Ac-(SEQ ID N0:25)-NH₂]
Ac-[Lys¹², Glu¹⁶, Nle¹⁷, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:26)-NH₂]
Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Asp²⁴, Val²⁶, Thr²⁸] -VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:27)-NH₂]
Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:28)-NH₂]
Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:29)-NH₂]
Ac-[p-F-Phe⁶, 2-Nal¹⁰, Lys¹², Nle¹⁷, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸, Gly^29,30, Met³¹]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:30)-NH₂]
Ac-[Glu⁸, Orn¹², Nle¹⁷, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:31)-NH₂]
Ac-[p-F-Phe⁶, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸, Gly^29,30, Cys(Acm)³¹]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:32)-NH₂]
Ac-[Ala², Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:33)-NH₂]
Ac-[N-Me-Ala¹, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:34)-NH₂]
Ac-[2-Nal¹⁰, Leu¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸] -VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:35)-NH₂]
Ac-[O-CH₃-Tyr¹⁰, Leu¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:36)-NH₂]
Ac-[p-F-Phe⁶, p-NH₂-Phe¹⁰, Leu¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:37)-NH₂]
Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:38)-NH₂]
Ac-[N-Me-Ala¹, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:39)-NH₂]
Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28] -VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:40)-NH₂]
Ac-[O-Me-Tyr¹⁰, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:41)-NH₂]
Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Ala^29-31]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:42)-NH₂]
Ac-[Ala², Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28 Ala^29-31]-VIP cyclo [Ac-SEQ ID N0:43)-NH₂]
Ac-[N-Me-Ala¹, Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:44)-NH₂]
Ac-[p-F-Phe⁶, Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:45)-NH₂]
Ac-[1-Nal⁶, Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:46)-NH₂]
Ac-[Glu⁸, p-NH₂-Phe¹⁰, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:47)-NH₂]
Ac-[Glu⁸, O-CH₃-Tyr¹⁰, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:48)-NH₂]
Ac-[p-F-Phe⁶, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:49)-NH₂]
Ac-[1-Nal⁶, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸] -VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:50)-NH₂]
Ac-[Ala², Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28 Gly^29,30, Thr³¹]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:51)-NH₂]
Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28 Gly^29,30, Thr³¹] -VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:52)-NH₂]
Ac-[Ala², Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:53)-NH₂]
Ac-[p-NH₂-Phe¹⁰, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:54)-NH₂]
Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, m-OCH₃-Tyr²², Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸] VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:55)-NH₂]
Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, m-F-L-Tyr²², Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸] VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:56)-NH₂]
Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, m-OCH₃-Tyr²², Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28] VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:57)-NH₂]
Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, m-F-L-Tyr²², Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28] VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:58)-NH₂]
Ac-[Ala⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Ala²⁴, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28] VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:59)-NH₂]
Ac-[Glu⁸, Lys¹², Ala^16,17,19, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28] VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:60)-NH₂]
Ac-[Ala⁸, Lys¹², Ala¹⁶, Nle¹⁷, Ala¹⁹, Ala²⁴, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:61)-NH₂]
Ac-[Ala⁸, Lys¹², Ala^16,17,19, Ala²⁴, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:62)-NH₂]
Ac-[Glu⁸, Lys¹², Ala¹⁶, Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28] VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:63)-NH₂]
Ac-[Glu⁸, Lys¹², Ala^16,17,19, Ala²⁴, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:64)-NH₂]
Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸, Gly^29,30, Thr³¹]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:65)-NH₂]
Ac-[p-F-Phe⁶, Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸, Gly^29,30, Thr³¹] -VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:66)-NH₂]
Ac-[Ala², Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Gly^29,30, Thr³¹] -VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:67)-NH₂]
Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Gly^29,30, Thr³¹]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:68)-NH₂]
Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Ala^29-31]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:69)-NH₂]
В соответствии с настоящим изобретением вещества могут быть легко синтезированы любым из известных способов получения пептидов. Таким способом является, например, любое взаимодействие в растворе, вызывающее конденсацию между свободной альфа-аминогруппой аминокислоты или ее остатка, имеющих защищенную карбоксильную или другую реакционно-способную группу, и свободной первичной карбоксильной группой другой аминокислоты или ее остатка, имеющих защищенную аминогруппу или другую реакционноспособную группу.

Способ получения веществ в соответствии с настоящим изобретением может быть реализован путем одновременного последовательного добавления каждой аминокислоты в нужной последовательности к другой аминокислоте или ее остатку или путем предварительного синтеза пептидных фрагментов с желаемой последовательностью аминокислот и последующей их конденсацией для получения необходимого пептида.

Способы получения новых веществ, соответствующих настоящему изобретению, могут быть осуществлены, например, твердофазным синтезом. Согласно этому способу получение новых веществ может быть осуществлено путем последовательного присоединения необходимых аминокислотных остатков в растущую пептидную цепь в условиях, общепринятых для синтеза пептидов в твердой фазе [Merrifield R. B. J.Amer.Chem.Soc.85, 2149-2154 (1963); Barany et al. The Peptides, Analysis, Synthesis and Biology, Vol.2, Gross E. and Meienhofer J. Eds.Academic Press 1-284 (1980)]
Общей особенностью химического синтеза пептидов является защита реакционноспособных групп боковой цепи различных составляющих аминокислот соответствующими защитными группами, способными предотвратить возможное химическое взаимодействие в каком-то месте цепи до того времени, пока не будет удалена защитная группа. Обычно защищает альфа-аминогруппу аминокислоты или ее фрагмента при взаимодействии с карбоксильной группой, с избирательным удалением альфа-аминозащитной группы и последующим взаимодействием с кислотной группой. Защитные группы могут быть использованы не только при твердофазном методе, но и при синтезе в растворе.

Альфа-аминогруппы могут быть защищены соответствующей защитной группой, выбранной из ароматической защитной группы типа уретана, таких как бензилоксикарбонил и замещенный бензилоксикарбонил, например, п-хлорбензилоксикарбонил, п-нитробензилоксикарбонил, п-бромбензилоксикарбонил, п-бифенилизопропилоксикарбонил, 9-флуоренилметилоксикарбонил (Fmoc) и п-метоксибензилоксикарбонил (Moz); из алифатических защитных групп типа уретана, таких как t-бутилоксикарбонил (Boc), диизопропилметилоксикарбонил, изопропилоксикарбонил и аллилоксикарбонил. Для защиты альфа-аминогрупп наиболее целесообразно использовать Boc.

Карбоксильные группы могут быть защищены соответствующей защитной группой, выбранной из группы, образующей ароматический сложный эфир, такой как O-бензил (OBzl) или бензил, замещенный низшим алкилом, галоидом, нитро-, тио или тиозамещенным алкилом, например, низшим тиоалкилом (1-7 углеводородных атомов); алифатических сложных эфиров, таких как O-низший алкил, O-t-бутил (Ot-Bu), O-циклопентил, O-циклогексил (OcHx), O-циклогептил и О-9-флуоренилметил (OFm). OBzl и OFm целесообразно использовать для защиты глютаминовой кислоты (Glu). OChx, OBzl и OFm целесообразно использовать для защиты аспарагиновой кислоты (Asp).

Гидроксильные группы могут быть защищены соответствующей защитной группой, выбранной из таких сложных эфиров, как бензил (Bzl) или бензил, замещенный низшим алкилом, галоалкилом, например, 2,6-дихлорбензилом (DCB), нитроалкилом или метоксиалкилом; t-бутилом (t-Bu), тетрагидропиранилом и трифенилметилом (тритилом). Bzl целесообразно использовать для защиты серина (Ser) и треонина (Thr). Bzl и DCB целесообразно использовать для защиты тирозина (Tyr).

Аминогруппы боковой цепи могут быть защищены соответствующей защитной группой, выбранной из ароматических защитных групп типа уретана, таких как бензилоксикарбонил (Z) и замещенный бензилоксикарбонил, например, п-хлорбензилоксикарбонил, 2-хлорбензилоксикарбонил (2-Cl-Z), п-нитробензилоксикарбонил, п-бромбензилоксикарбонил, п-бифенилизопропилоксикарбонил, 9-флуоренилметилоксикарбонил (Fmoc) и п-метоксибензилоксикарбонил (Moz); из алифатических защитных групп типа уретана, таких как t-бутилоксикарбонил (Boc), диизопропилметилоксикарбонил, изопропилоксикарбонил и аллилоксикарбонил. Z целесообразно использовать для защиты орнитина (Orn). 2-Cl-Z и Fmoc целесообразно использовать для защиты лизина (Lys).

Гуанидино-группы могут быть защищены соответствующей защитной группой, выбранной из нитро-, п-толуолсульфонил (Tos), Z, адамантилоксикарбонил и Boc-группы. Tos целесообразно использовать для защиты аргинина (Arg).

Амидные группы боковой цепи могут быть защищены ксантенилом (Xan). Для аспарагина (Asn) и глютамина (Gln) не существует предпочтительной защитной группы.

Имидазольные-группы могут быть защищены соответствующей защитной группой, выбранной из таких групп, как п-толуолсульфанил (Tos), 9-флуоренилметилоксикарбонил (Fmoc), трифенилметил (тритил), 2,4-динитрофенил (Dnp), Boc и бензилоксиметил (Bom). Tos и Bom целесообразно использовать для защиты гистидина (His).

Если не оговорено иное, указанное ниже процентное содержание твердых веществ в твердых составах, жидких веществ в жидкостях и твердых веществ в жидкостях выражено соответственно в виде процентных соотношений масс, объемов и массы к объему. Кроме того, если не оговорено иное, поставщиком реактивов и приборов является не всегда одно и то же лицо. Специалист может выбрать подобные реактивы и приборы, воспользовавшись услугами других поставщиков.

Все растворители, изопропанол (iPrOH), метилхлорид (CH₂Cl₂) и диметилформамид (DMF) были от Fisher или Burdick Jackson и были использованы без дополнительной дистилляции. Трифторуксусная кислота была получена от Halocarbon и была использована без дополнительной очистки. Диизопропилэтиламин (DIPEA) был получен от Pfaltz and Bauer и очищен путем перегонки от CaO и нингидрина перед использованием. Дициклогексилкарбодимид (DCC) и диизопропилкарбодиимид (DIC) были получены от Fluka и были использованы без предварительной очистки. Гидроксибензотриазол (HOBT) и 1,2-этандитиол (EDT) были получены от Sigma Chemical Co. и были использованы без предварительной очистки. Аминокислоты с защитными группами в общем случае имели L-конфигурацию и были получены от Chemical Dynamics Corp. или Bachem. Чистота этих реактивов была подтверждена путем анализа методом тонкослойной хроматографии, ЯМР и путем определения точки плавления перед использованием. Boc-O-Me-Tyr, Boc-2-Nal и Boc-p-F-Phe были получены способом, описанным выше (Bolin D.R. U.S. Patent Appln. No. 374,503). Boc-Asp (OFm) и Boc-Glu (OFm) были получены способом, описанным выше [Bolin D.R. et al. Org.Prep.Proc.Int. 21, 67-74 (1989)] Бензгидриламиновая смола (BHA) представляла собой сополимер стирола 1% дивинилбензола (100-200 или 200-400 меш), полученный от Biomega, Bachem, Omni или Advanced Chemtech. Общее содержащие азота в этих смолах в общем случае составило от 0,3 до 1,2 миллиэквивалент/г.

Анализ методом тонкослойной хроматографии проводили на 60 F254 пластинках (Merck), покрытых силикагелем, со стеклянной подложкой с применением системы соответствующих растворителей. Обнаружение веществ проводили по флуоресценции при ультрафиолетовом облучении (254-нм абсорбция), окрашивания с применением иода или распыления нингидрина (для первичных и вторичных аминов).

Для определения состава аминокислот гидролиз пептидов проводили в 6H HCl, содержащей 1-4 мг фенола, при температуре 115^oC в течение 22-24 часов в герметизированных, находящихся под вакуумом трубках для гидролиза. Исследователи использовали или 121M Beckman анализатор аминокислоты, или систему Waters анализаторов аминокислот на основе высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC) с применением или катионообменной смолы от Waters, или Pierce AA511 колонки, а также проводили определение нингидрином.

Анализ методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC) проводили с применение LDC устройства, состоящего из Constametric I и III насосов, GRadient Master Solvent программирующего устройства и смесителя, а также детектора ультрафиолетового излучения на основе Spectromonitor III. Анализ методом HPLC проводили в реверсионной фазе с применением Waters μBondapak C₁₈ колонок (0,4·30 см). Экспериментальное HPLC разделение проводили на Whatman Magnum 20 partisil 10 ODS-3 в колонках (2·25 см или 2·50 см), оборудованных Waters Guard-Pak C₁₈ форколонкой. Гельхроматографический анализ проводили с применением колонки размером 2·85 см, LKB varioperpex peristaltic насоса и IBM детектора ультрафиолетового излучения.

Главным образом, пептиды получали методом синтеза в твердой фазе, описанным Merrifield [J.Amer.Chem.Soc. 85, 2149 (1963)] хотя могли быть использованы другие известные методы химического синтеза, указанные выше. Процесс синтеза в твердой фазе начинается с C-положения концевой группы цепи пептида путем присоединения защищенной альфа-аминокислоты к соответствующему полимеру. Исходный продукт в этом случае получают путем присоединения альфа-аминозащищенной аминокислоты через сложно-эфирную группу к хлорметилированным полимерам или гидроксиметилированнным полимерам или посредством амидной группы к бензгидриламиновым (BHA) или пара-метилбензгидриламиновым (MBHA) полимерам. Процесс получения гидроксиметилированного полимера хорошо известен в науке. Хлорметилированные полимеры являются коммерчески доступными, и способ их получения также хорошо известен в науке. Полимерные носители BHA и MBHA являются коммерчески доступными и обычно используются в процессе получения пептидов, содержащих незамещенную амидную группу в C-положении присоединяемого агента.

Обычно первая аминокислота, присоединяемая к BHA полимеру, представляла собой симметричный ангидрид Boc-аминокислоты при соотношении, равном 2-10 эквивалентам активированной аминокислоты на азотный эквивалент полимера. После присоединения полимер промывали и высушивали под вакуумом. Содержание аминокислоты в полимере может быть определено путем проведения анализа аминокислоты с использованием аликвоты полимера Boc-аминокислоты. Содержание аминокислоты в общем случае составляет от 0,2 до 0,4 ммол на г полимера. Любые, не вступившие в реакцию аминогруппы, могут быть дополнительно введены в реакцию с полимером, уксусным ангидридом, и диизопропилэтиламином в метиленхлориде.

Последующее добавление Boc-аминокислот к полимерам проводят несколькими повторяющимися циклами для обеспечения последовательного добавления аминокислот. Альфа-амино-Boc-защита была снята в кислой среде. Для этой цели могут быть использованы растворы трифторуксусной кислоты в метиленхлориде, HCl в диоксане или смесь муравьиной и уксусной кислот. Целесообразно использовать 50% раствор трифторуксусной кислоты (TFA) в метиленхлориде. Этот раствор может также содержать 1-5 об. EDT или диметилсульфида в качестве отщепляющего агента t-бутилкарбоновых кислот. Могут быть также использованы другие стандартные отщепляющие агенты, известные в науке.

Вслед за удалением альфа-аминозащитной группы защищенные аминокислоты последовательно соединяются постепенно в нужной последовательности для получения промежуточных защищенных пептидил-полимеров. Конденсирующие агенты, используемые для конденсации аминокислот при синтезе пептидов в твердой фазе, хорошо известны в науке. Например, таким агентом является бензотриазол-1- илокси-три-(диметиламино)фосфогексафторфосфат (BOP), дициклогексилкарбодиимид (DCC) и диизопропилкарбодиимид (DIC). Целесообразно использовать в данном случае DCC и DIC. Другие конденсирующие агенты, описанные Barany и Merrifield (in The Peptides, vol.2, J.Meienhofer, ed. Academic Press, 1979, pp.1-284), могут быть использованы. Такие соединения, как 1-гидроксибензотриазол (HOBT), N-гидроксисукцинимид (HOSu) и 3,4-дигидро-3-гидрокси-4-оксо- 1,2,3-бензотриазин (HOOBT) могут быть добавлены к смеси взаимодействующих веществ для ускорения циклов синтеза. В данном случае целесообразно использовать HOBT.

Схема проведения типового синтеза была следующей и приведена в табл.3.

Объем растворителей для промывания и взаимодействия соответствовал от 10 до 40 мл на г полимера. Взаимодействие происходило с применением или предварительно подготовленных симметричных ангидридов Boc-аминокислот, или O-ацилизоуреапроизводных. Обычно 2-10 эквивалентных частей активированной Boc-аминоксилоты добавляли к одному эквиваленту аминополимера с применением метиленхлорида в качестве растворителя. Boc-Arg(Tos), Boc-Glu, Boc-Asn, Boc-His(Tos) и Boc-His(Bom) конденсировали в 20-25% растворе DMF/CH₂Cl₂. Boc-Asn, Boc-Gln и Boc-His(Bom) были использованы так же, как их HOBT активные сложные эфиры с целью уменьшения известных побочных реакций.

Получение циклических пептидов в основном проводили с применением хорошо известных в науке методов следующим образом. В аминокислотной пептидной цепи, в местах соединения боковых цепей были использованы различные защитные группы. Для аминокислот с аминоцентром, Lys и Orn, в пептидную цепь были включены производные N^e- и N^d-Fmoc. Для аминокислот с карбоксильным центром, Asp и Glu, в пептидную цепь были включены производные Oβ- и Oγ--Fm. Пептид, все еще соединенный с полимером, был обработан 20-40% пиперидином в DMF для избирательного удаления Fmoc и Fm защитных групп. Амино- и карбоксильные группы свободной боковой цепи были затем конденсированы с образованием ковалентной связи путем обработки соответствующим амидообразующим реактивом, таким как дифенилфосфорилазид (DPPA), DCC, DIC или BOP. Целесообразно использовать в данном случае DCC и BOP.

Протокол проведения типового процесса циклизации был следующим и приведен в табл. 4.

Контроль за реакцией конденсации в ходе синтеза осуществляли путем контрольных испытаний по Кайзеру с применением нингидрина для определения степени завершенности реакции ([Kaiser et al. Anal.Biochem. 34, 595-598 (1979)] Медленную реакционную кинетику наблюдали при испытании Boc-Arg(Tos), Boc-Asn и Boc-Gln. Любая незаконченная реакция была или завершена путем повторного проведения с использованием свежеприготовленной активированной аминокислоты, или блокирована путем обработки пептидного полимера уксусным ангидридом, как описано выше. Полностью сформированные пептидные полимеры были высушены под вакуумом в течение нескольких часов.

После снятия защитных групп пептид был отщеплен от полимера нижеследующим способом. Пептидные полимеры обрабатывали этандитиолом объемом 25-100 мкл, анизолом объемом 1 мл и жидким фтористым водородом объемом 9 мл, приходящимся на 1 г смолы при температуре 0^oC в течение 45-60 мин в аппарате Teflon HF (Peninsula). В числе других можно было использовать методику двухступенчатого расщепления [Tam et al. Tetrahedron Letters, 23, 2939-2940 (1982)] в соответствии с которой пептидный полимер обрабатывали 3 мл диметилсульфида и 1 мл фтористого водорода в течение 2 ч при температуре 0^oC и выпаривали перед обработкой 90% раствором HF. Затем летучие реактивы удаляли под вакуумом при температуре ледяной бани. Остаток промывали два или три раза с использованием раствора Et₂O и EtOAc объемом по 20 мл и отфильтровывали. Экстракцию пептидов из полимера проводили путем промывания в течение трех или четырех раз 10%-ным раствором AcOH объемом по 20 мл и отфильтровывали. Объединенные водные фильтраты были лиофилизованы для получения технического продукта.

Неочищенные пептиды сначала подвергались очистке методом гель-проникающей хроматографии в тонкодисперсной среде Sephadex G-25 с целью отделения мономерных от олигомерных продуктов. Пептиды растворяли в минимальном объеме 10% -ного раствора AcOH и помещали в колонну с гелем. Элюированные колонны проводили с применением 10%-ного раствора AcOH при скорости потока 0,5-1,5 мл/мин. Получаемый продукт контролировали при длине волны 254 нм, и фракции, соответствующие желаемой длине волны, отстаивали и лиофилизировали для получения полуочищенных продуктов.

Очистку полуочищенных пептидов в основном проводили методом препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ЖХВР). Пептиды помещали в колонну с применением минимального объема или 1%-ного раствора AcOH или 0,1% -ного раствора TFA. Градиентное элюирование в общем случае начинали с применением 10%-ного буферного раствора В: 10-25%-ного буферного раствора В спустя 10 мин и 25-35%-ного буферного раствора В спустя 3 ч (буферный раствор Ф: 0,1% TFA/H₂O, буферный раствор В: 0,1% TFA/CH₃CN) при скорости потока, равной 8,0 мл/мин. Ультразвуковое исследование проводили при длине волны 220 нм. Фракции собирали за 1,5-2,5-минутные интервалы и контролировали методом аналитической ЖХВР. Фракции высокой чистоты собирали и лиофилизировали.

Чистоту полученных продуктов контролировали методом аналитической ЖХВР с применением колонны с реверсивной фазой, как указано выше. В общем случае градиентное элюирование проводили с применением 20-40% раствора В (буферный раствор А: 0,022%-ный раствор TFA/H₂O, буферный раствор В: 0,022%-ный раствор TFA/CH₃CN) в течение 15 мин при скорости потока, равной 2,0 мл/мин. Ультразвуковое исследование проводили при длине волны, равной 210 нм. Чистота всех продуктов соответствовала приблизительно 97-99% Затем проводили анализ аминокислот отдельных пептидов, который указывал на то, что полученные значения соответствовали допустимым пределам. В общем случае все полученные продукты были исследованы масс-спектрометрическим методом бомбардировки ускоренными атомами (FAB-MS). Выход парных ионов M+H исследуемых продуктов соответствовал допустимым пределам.

Новые вещества, соответствующие настоящему изобретению, обладают ценными фармакологическими свойствами. Они оказывают релаксационное действие на трахею и являются потенциальными бронходилататорами. Эти вещества также не оказывают побочного действия на сердечно-сосудистую систему. Бронхорасширяющее действие этих веществ может длиться более 2 ч. Поэтому, будучи активными бронходилататорами, эти вещества являются ценными фармацевтическими препаратами для лечения заболеваний, вызванных сужением просвета бронха, например, астмы.

Возможны комбинации новых веществ, соответствующих формулам I, с типичными фармацевтическими веществами-носителями, в основном с нетоксичными, инертными, терапевтически пригодными веществами-носителями для получения составов, пригодных для лечения заболеваний, вызванных сужением просвета бронха, например астмы. Доза этих веществ при введении в форме галеновых препаратов зависит от различных факторов, таких как особенности свойств и технологии приготовления отдельно взятого лекарственного средства. Эффективная доза может быть определена одним из специалистов в данной области техники в зависимости от эффективной концентрации (EC₅₀), указанной в данном описании. Обычные дозы для человека могли бы составить 0,01-100 мкг/кг. Для веществ с низкой ED₅₀, такой как 0,1 мкг, обычные для человека дозы составили бы около 0,02-20 мкг/кг.

Новые вещества, соответствующие формулам I, образуют фармацевтически пригодные соли при добавлении различных неорганических и органических кислот, таких как серная, фосфорная, хлористоводородная, бромистоводородная, иодистоводородная, азотная, сульфаминовая, лимонная, молочная, пировиноградная, щавелевая, малеиновая, янтарная, винная, коричная, уксусная, трифторуксусная, бензойная, салициловая, глюконовая, аскорбиновая и другие кислоты.

Вещества мгновенного действия вводят в организм больного парентеральным способом, то есть внутривенным, подкожным, внутримышечным, пероральным или внутриносовым способом. Для парентерального введения аэрозоля целесообразно использовать оральный или внутриносовой способы.

Настоящее изобретение более подробно иллюстрируется нижеследующими примерами.

Пример 1. Способ получения Boc-Thr(Bzl)-BHA полимера.

Полимер на основе сополимера бензгидриламина и стирола-1% дивинилбензола (9,5 г, 3,6 мэкв, 200-400 меш ASTM, Vega Biochem) подвергали набуханию в метиленхлориде объемом 100 мл, отфильтровывали и промывали в соответствии со стадиями 7-8 схемы 1. Boc-Thr(Bzl) (3,35 г, 10,8 ммоль) и дициклогексилкарбодиимид (1,12 г, 5,42 ммолей) взаимодействия с CH₂Cl₂ объемом 50 мл в течение 1 ч, с последующим фильтрованием и добавлением в раствор CH₂Cl₂ объемом 50 мл к разбухшему полимеру. Эту смесь встряхивали в течение 18 ч при комнатной температуре. DIPEA (630 мл, 3,6 ммолей) добавили к смеси, а затем встряхивали еще в течение 1 ч, отфильтровывали и действовали в соответствии со стадиями 10-14 схемы 1. Результат проведения анализа нингидрина по Кайзеру был отрицательным. Все, не вступившие в реакцию, аминогруппы были деблокированы путем обработки полимера уксусным ангидридом объемом 1 мл и DIPEA объемом 1 мл, находящимися в метиленхлориде объемом 50 мл, в течение 30 мин, отфильтрованы и промыты по стадиям 13-14 схемы 1. Полимер был высушен под вакуумом в течение ночи до получения 9,8 г Boc-Thr(Bzl)-BHA полимера. Часть полимера была подвергнута анализу на содержание аминокислоты, результат которого составил 0,17 ммол Thr/r.

Пример 2. Способ получения Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло _(Asp8_{_____→ Lys}12₎ [Ac-(SEQ ID N0:20)-NH₂]
Boc-Thr(Bzl)-BHA полимер (9,8 г, 1,7 ммоля) из примера 1 был подвергнут синтезу в твердой фазе в соответствии с вышепредставленной схемой 1. Все стадии были проведены с применением симметричных ангидридов, полученных из Boc-аминокислот и дициклогексилкарбодиимида. Конденсация с использованием Boc-аспарагина, Boc-глютамина и Boc-гистидина (бензилоксиметила) была проведена соответственно с HOBT активными сложными эфирами. Время реакции составило в основном 1-18 ч. Было проведено 5 циклов в одну стадию, каждую из которых проводили с применением Boc-Leu (1,5 г, 6,0 ммоль), Boc-Val (1,3 г, 6,0 ммоль), Boc-Ser(Bzl) (1,8 г, 6,0 ммоль), Boc-Asn (773 мг, 3,3 ммоль) и Boc-Leu (1,5 г, 6,0 ммоль). Полимер был высушен под вакуумом до получения 12,2 Boc-гексанпептидного полимера.

Было проведено 6 циклов сочетания порции данного полимера массой 8,2 г (1,13 ммоль) за один общий цикл, каждый из которых Boc-Tyr (2,6-DCB)(1,77 г, 4,0 ммоль), Boc-Lys (2-Cl-Z)(1,67 г, 4,0 ммоль), Boc-Lys (2-Cl-Z)(1,67 г, 4,0 ммоль), Boc-Val (876 мг, 4,0 ммоль), Boc-Ala (762 мг, 4,0 ммоль) и Boc-Nle (932 мг, 4,0 ммоль) для получения 10,2 г Boc-додекапептидного полимера.

Было проведено две стадии конденсации с использованием полимера в количестве 1,26 г (0,139 ммоль) за один общий цикл, каждый из которых проводили с применением Boc-Gln (205 мг, 0,93 ммоль) и Boc-Lys (2-Cl-Z)(627 мг, 1,5 ммоль). Было проведено 14 стадий половины порции данного полимера (0,069 ммоль) за один общий цикл, каждый из которых проводили с применением Boc-Arg(Tos) (324 мг, 0,76 ммоль), Boc-Leu (188 мг, 0,76 ммоль), Boc-Lys(Fmoc) (354 мг, 0,76 ммоль), Boc-Thr(Bzl) (234 мг, 0,76 ммоль), Boc-Tyr (2,6-DCB)(333 мг, 0,76 ммоль), Boc-Asn (97 мг, 0,76 ммоль), Boc-Asp(OFm)(311 мг, 0,76 ммоль), Boc-Thr(Bzl)(234 мг, 0,76 ммоль), Boc-Phe(201 мг, 0,76 ммоль), Boc-Val(164 мг, 0,76 ммоль), Boc-Ala(143 мг, 0,76 ммоль), Boc-Asp(OcHx)(238 мг, 0,76 ммоль), Boc-Ser(Bzl)(223 мг, 0,76 ммоль), Boc-His(Bom) (156 мг, 0,41 ммоль). Было проведено 1-8 этапов обработки пептидного полимера в соответствии со схемой 1 при последующей обработке уксусным ангидридом объемом 1,0 мл и DIPEA объемом 66 мл (0,38 ммоль) в растворе метиленхлорида объемом 20 мл в течение 30 мин. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14.

Полимер был затем избирательно отщеплен путем обработки в соответствии со стадиями 1-11 схемы 2 и в течение 7 раз подвергнут взаимодействию с DCC (49 мг, 0,24 ммоль) и HOBT (32 мг, 0,24 ммоль) в дистиллированном растворе DMF объемом 20 мл в течение 24 ч. Результат проведения анализа нингидрина по Кайзеру был отрицательным. Полимер промывали в соответствии со стадиями 13-26 схемы 2 и высушивали под вакуумом до получения 0,72 г вещества.

Этот полимер обрабатывали с применением диметилсульфида объемом 6 мл и жидкого HF объемом 2 мл в течение 2 ч при температуре 0^oC. Реакционную смесь выпаривали, а остаток обрабатывали анизолом объемом 0,7 мл и жидким HF объемом 6 мл в течение 45 мин при температуре 0^oC. Реакционную смесь выпаривали, а остаток промывали Et₂O объемом 1·15 мл и EtOAc объемом 3·15 мл. Полимер экстрагировали 10% -ным раствором AcOH объемом 3·20 мл. Объединенные водные фильтраты лиофилизировали до получения 227 г твердого вещества белого цвета.

Данный технический продукт очищали методом препаративной ЖХВР на Whatman Magnum-20 ODS-3 колонке (2·25 см) и элюировали в соответствии с линейным градиентом 10-40%-ным раствором В (буферный раствор А: 0,1% TFA/H₂O; буферный раствор В: 0,1% TFA/CH₃CN) в течении 4 ч. Основной пик был получен путем проведения анализа методом аналитической ЖХВР собранных фракций, выдержанных и лиофилизированных до получения 26,7 мг полуочищенного продукта. Этот продукт был снова помещен в Magnum-20 ODS-3 колонну (2·50 см) и элюирован тем же способом. Основная фракция была отделена и лиофилизирована до получения 9,5 мг аморфного порошка белого цвета. Это вещество было гомогенизировано методом ЖХВР, и в результате аминокислотного анализа были получены правильные результаты. FAB-MS: MH рассч. 3277,8, обнаружено 3276,1.

Пример 3. Способ получения Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло (Glu⁸_____→ Lys¹²) [Ac-(SEQ ID N0:21)-NH₂]
Полимер с поперечной связью на основе сополимера бензгидриламина и стирола-1% дивинил- бензола (17,7 г, 2,6 мэкв. 200-400 меш ASTM, Vega Biochem) подвергали набуханию в метиленхлориде объемом 160 мл, отфильтровывали и промывали в соответствии со стадиями 7-8 схемы 1. Полимер был повторно суспендирован в метиленхлориде объемом 160 мл при последующем добавлении к нему Boc-Thr(Bzl) (6,25 г, 20,2 ммоль) и дициклогексилкарбодиимида (2,10 г, 10,1 ммоль). Эту смесь встряхивали в течение 8 ч при комнатной температуре, отфильтровывали и действовали затем в соответствии со стадиями 10-14 схемы 1. Результат анализа нингидрина по Кайзеру был отрицательным. Непрореагировавшие аминогруппы были деблокированы путем обработки полимера уксусным ангидридом объемом 5 мл и DIPEA объемом 5 мл в растворе метиленхлорида объемом 150 мл в течение 60 мин, отфильтрованы и промыты в соответствии со стадиями 13-14. Полимер был высушен под вакуумом в течение ночи до получения 18,0 г Boc-Thr(Bzl)-BHA полимера. Порцию полимера подвергали анализу на содержание аминокислоты, результат которого составил 0,17 ммоль Thr/r.

Boc-Thr(Bzl)-BHA полимер (18,0 г, 3,06 ммоль) был подвергнут синтезу в твердой фазе в соответствии с вышепредставленной схемой 1. Все реакции были проведены с применение симметричных ангидридов, полученных из Boc-аминокислоты и дициклогексилкарбодиимида. Реакцию Boc-аспарагина, Boc-глютамина и Boc-гистидина (бензилоксиметил) вели с соответствующим HOBT активным сложным эфиром. Было проведено 5 циклов за одну общую стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Leu (6,1 г, 24,5 ммоль), Boc-Val (5,32 г, 24,5 ммоль), Boc-Ser(Bzl) (7,23 г, 24,5 ммоль), Boc-Asn (3,13 г, 13,5 ммоль) и Boc-Leu(6,1 г, 24,5 ммоль). Полимер высушивали под вакуумом до получения 22,9 г Boc-гексапептидного полимера.

Было проведено 10 циклов с применением порции данного полимера массой 7,48 г (1,0 ммоль) в одну общую стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Tyr (2,6-DCB) (1,76 г, 4,0 ммоль), Boc-Lys (2-Cl-Z)(1,66 г, 4,0 ммоль), Boc-Lys (2-Cl-Z)(1,66 г, 4,0 ммоль), Boc-Val (869 мг, 4,0 ммоль), Boc-Ala (1,5 г, 8,0 ммоль), Boc-Nle (925 мг, 4,0 ммоль), Boc-Gln (1,08 г, 4,4 ммоль), Boc-Lys (2-Cl-Z)(1,66 г, 4,0 ммоль), Boc-Arg(Tos) (1,71 г, 4,0 ммоль) и Boc-Leu (998 мг, 4,0 ммоль) до получения 9,6 г Boc-гексадекапептидного полимера.

Был проведен один цикл конденсации с применением порции данного полимера массой 7,68 г (0,8 ммоль) и с Boc-Lys(Fmoc) (1,5 г, 3,2 ммоль) до получения 8,32 г Boc-гексадекапептидного полимера.

Было проведено два цикла конденсации с порцией данного полимера массой 6,24 г (0,6 ммоль) за один общий цикл, каждый из которых проводили с применением Boc-Thr(Bzl) (742 мг, 2,4 ммоль) и Boc-Tyr (2,6-DCB)(1,06 г, 2,4 ммоль) до получения 6,28 г Boc-нонадекапептидного полимера.

Было проведено 9 циклов с порцией данного полимера массой 2,09 г (0,2 ммоль) за один общий цикл, каждый из которых проводили с применением Boc-Asn (204 мг, 0,8 ммоль), Boc-Asp(OFm)(340 мг, 0,8 ммоль), Boc-Thr(Bzl)(248 мг, 0,8 ммоль), Boc-Phe(212 мг, 0,8 ммоль), Boc-Val(174 мг, 0,8 ммоль), Boc-Ala(151 мг, 0,8 ммоль), Boc-Asp(OcHx)(258 мг, 0,8 ммоль), Boc-Ser(Bzl)(236 мг, 0,8 ммоль), Boc-His(Bom) (330 мг, 0,88 ммоль). Пептидный полимер обрабатывали в соответствии со стадиями 1-8 схемы 1, а затем уксусным ангидридом объемом 0,25 мл и DIPEA объемом 70 мл в растворе метиленхлорида объемом 20 мл в течение 20 мин. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14.

Затем полимер избирательно деблокировали путем обработки в соответствии со стадиями 1-11 схемы 2. Три четверти от общей массы данного полимера (0,15 ммоль) подвергали взаимодействию с DCC (77 мг, 0,37 ммоль) и HOBT (51 мг, 0,37 ммоль) в дистиллированном растворе DMF объемом 20 мл в течение 72 ч и в растворе толуола объемом 20 мл в течение 24 ч. Результат анализа по нингидрину по Кайзеру был отрицательным. Полимер промывали в соответствии со стадиями 13-16 схемы 2 и высушивали под вакуумом до получения 1,72 г.

Порцию данного полимера массой 1,14 г (0,099 ммоль) деблокировали путем обработки по примеру 2, за исключением того, что анизол объемом 1 мл и HF объемом 9 мл использовали на втором этапе. Реакционную смесь выпаривали, а остаток промывали Et₂O объемом 1·15 мл и EtOAc объемом 3·15 мл. Полимер экстрагировали с применением 10% раствора AcOH объемом 3·20 мл. Объединенные водные фильтраты лиофилизировали до получения 535 мг твердого вещества белого цвета.

Полученный продукт очищали методом фильтрации через слой геля на Sephadex G-25 фильтре тонкой очистки (2·100 см колонна) путем элюирования 10%-ным раствором AcOH. Мономерный пик был получен методом аналитической ЖХВР при анализе собранных фракций, выдержанных и лиофилизованных до получения 83,5 мг полуочищенного продукта. Этот продукт был далее подвергнут очистке методом препаративной ЖХВР в соответствии с примером 2, за исключением того, что градиентное элюирование 20-40%-ным раствором было проведено в течение 3 ч. Основной пик был получен путем проведения анализа собранных фракций методом аналитической ЖХВР, выдержанных и лиофилизированных до получения 18,9 мг аморфного порошка белого цвета. Это вещество было гомогенизировано методом ЖХВР, и по результатам проведенного аминокислотного анализа имела следующие характеристики: FAB-MS: MH рассч. 3292,0, обнаружено 3201,8.

Пример 4. Способ получения Ac-[Asn⁸, Asp⁹, Lys¹², Nle¹⁷, Val²⁶, Thr²⁸] -VIP цикло (Asp⁹_____→ Lys¹²) [Ac-(SEQ ID N0:22)-NH₂]
Было проведено 9 циклов конденсации порции Boc-нонадекапептидного полимера из примера 3 массой 1,55 г (0,15 ммоль) за один общий цикл с применением Boc-Asp(OFm)(247 мг, 0,6 ммоль), Boc-Asn (153 мг, 0,66 ммоль), Boc-Thr(Bzl)(248 мг, 0,8 ммоль), Boc-Phe(159 мг, 0,6 ммоль), Boc-Val(130 мг, 0,6 ммоль), Boc-Ala(113 мг, 0,6 ммоль), Boc-Asp(OcHx)(189 мг, 0,6 ммоль), Boc-Ser(Bzl)(177 мг, 0,6 ммоль) и Boc-His(Bom)(248 мг, 0,66 ммоль). Пептидный полимер обрабатывали в соответствии со стадиями 1-8 схемы 1, а затем уксусным ангидридом объемом 0,25 мл и DIPEA объемом 70 мл в растворе метиленхлорида объемом 20 мл в течение 30 мин. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14.

Затем полимер избирательно деблокировали путем обработки в соответствии со стадиями 1-11 схемы 2 и дважды подвергали взаимодействию с DCC (77 мг, 0,37 ммоль) и с HOBT (51 мг, 0,37 ммоль) в дистиллированном растворе DMF в течение 24 и 72 чв и дважды в растворе толуола объемом 20 мл в течение 24 и 48 ч. Результат анализа на нингидрин по Кайзеру был отрицательным. Полимер промывали в соответствии со стадиями 13-15 схемы 2 и высушивали под вакуумом до получения 1,54 г вещества.

Порцию данного полимера массой 1,26 г (0,122 ммоль) деблокировали путем обработки HF в соответствии с примером 3. Реакционную смесь выпаривали, а остаток промывали с применением 1·15 мл Et₂O и 3·15 мл EtOAc. Полимер экстрагировали с 10% -ным раствором AcOH объемом 3·20 мл. Объединенные водные фильтраты лиофилизировали до получения 485 мг твердого вещества белого цвета.

Полученный продукт очищали методом фильтрации с применением геля на Sephadex G-25 фильтре тонкой очистки в соответствии с примером 3 до получения 83,5 мг полуочищенного продукта. Продукт был подвергнут дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР в соответствии с примером 3, за исключением того, что градиентное элюирование 20-45%-ным раствором было проведено за 3 ч. Основной пик был получен путем анализа методом аналитической ЖХВР были получены и собраны нужные фракции, выдержанны и лиофилизированны до получения 11,5 мг аморфного порошка белого цвета. Это вещество было гомогенизировано методом ЖХВР, а анализ на содержание аминокислоты дал правильные результаты. FAB-MS: MH рассч. 3277,8, обнаружено 3277,6.

Пример 5. Способ получения Ac-[Orn¹², Nle¹⁷, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло (Asp⁸_____→ Orn¹²) [Ac-(SEQ ID N0:23)-NH₂]
Было проведено 12 циклов конденсации с применением порции Boc-гексадекапептидного полимера массой 1,92 г (0,2 ммоль) из примера 3 за одну общую стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Orn(Fmoc)(364 мг, 0,8 ммоль),Boc-Thr(Bzl)(495 мг, 1,6 ммоль), Boc-Tyr(2,6-DCB)(352 мг, 0,8 ммоль), Boc-Asn (102 мг, 0,44 ммоль), Boc-Asp(OFm)(329 мг, 0,8 ммоль), Boc-Thr(Bzl)(495 мг, 1,6 ммоль), Boc-Phe(212 мг, 0,8 ммоль), Boc-Val(174 мг, 0,8 ммоль), Boc-Ala(151 мг, 0,8 ммоль), Boc-Asp(OcHx)(252 мг, 0,8 ммоль), Boc-Ser(Bzl)(236 мг, 0,8 ммоль) и Boc-His(Bom)(330 мг, 0,88 ммоль). Пептидный полимер обрабатывали в соответствии со стадиями 1-8 схемы 1, а затем уксусным ангидридом объемом 0,25 мл и DIPEA объемом 70 мл в растворе метиленхлорида объемом 20 мл в течение 30 мин. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14 и высушивали в течение ночи до получения 2,38 г.

Порцию данного полимера массой 1,38 г (0,11 ммоль) затем избирательно деблокировали путем обработки в соответствии со стадиями 1-11 схемы 2 и подвергали взаимодействию с DCC (55 мг, 0,27 ммоль) и с HOBT (37 мг, 0,27 ммоль) в дистиллированном растворе DMF объемом 20 мл в течение 24 ч, в растворе толуола объемом 20 мл в течение 24 ч и 5 раз в дистиллированном растворе DMF объемом 20 мл в течение 24 ч. Результата анализа на нингидрин по Кайзеру были частично положительными. Полимер промывали в соответствии со стадиями 13-16 схемы 2 и высушивали под вакуумом.

Порцию данного полимера массой 0,8 г (0,05 ммоль) деблокировали путем обработки HF в соответствии с примером 3. Реакционную смесь выпаривали, а остаток промывали раствором Et₂O 1·15 мл и EtOAc 3·15 мл. Полимер экстрагировали с применением 10%-ного раствора AcOH объемом 3·20 мл. Объединенные водные фильтраты лиофилизировали до получения 429 мг клейкого твердого вещества.

Этот технический продукт очищали методом фильтрации с применением геля на Sephadex G-25 фильтре тонкой очистки в соответствии с примером 3 до получения 107 мг полуочищенного продукта. Этот продукт подвергали дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР в соответствии с примером 3, за исключением того, что градиентное элюирование 10-40%-ного раствором проводили в течение 3 ч. Путем анализа методом аналитической ЖХВР были получены и собраны нужные фракции, выдержанны и лиофилизированны до получения 17,5 мг аморфного порошка белого цвета. Это вещество было гомогенизировано методом ЖХВР, а анализ на содержание аминокислоты дал правильные результаты. FAB-MS: MH рассч. 3263,7, обнаружено 3264,1.

Пример 6. Способ получения Ac-[Lys⁸, Asp¹², Nle¹⁷, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло (Lys⁸_____→ Asp¹²) [Ac-(SEQ ID N0:24)-NH₂]
Было проведено 12 циклов конденсации с применением порции Boc-гексадекапептидного полимера массой 1,0 г (0,1 ммоль) в соответствии с примером 3 за одну стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Asp(OFm)(165 мг, 0,4 ммоль), Boc-Thr(Bzl)(124 мг, 0,4 ммоль), Boc-Tyr(2,6-DCB)(176 мг, 0,4 ммоль), Boc-Asn (102 мг, 0,44 ммоль), Boc-Lys(Fmoc)(187 мг, 0,4 ммоль), Boc-Thr(Bzl)(124 мг, 0,4 ммоль), Boc-Phe(106 мг, 0,4 ммоль), Boc-Val (87 мг, 0,4 ммоль), Boc-Ala (76 мг, 0,4 ммоль), Boc-Asp(OcHx)(126 мг, 0,4 ммоль), Boc-Ser(Bzl) (118 мг, 0,4 ммоль) и Boc-His(Bom)(150 мг, 0,4 ммоль). Пептидный полимер обрабатывали в соответствии со стадиями 1-8 схемы, а затем уксусным ангидридом объемом 0,5 мл и DIPEA объемом 35 мл в растворе метиленхлорида объемом 20 мл в течение 30 мин. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14 и высушивали в течение ночи до получения 1,2 г вещества.

Порцию данного полимера массой 0,8 г (0,066 ммоль) затем избирательно деблокировали путем обработки в соответствии со стадиями 1-11 схемы 2 и подвергали взаимодействию с BOP (58 мг, 0,13 ммоль) в дистиллированном растворе DMF объемом 20 мл в течение 24 ч. Результат анализа на нингидрин по Кайзеру был отрицательным. Полимер промывали в соответствии со стадиями 13-16 схемы 2 и высушивали под вакуумом.

Этот полимер деблокировали путем обработки с применением HF в соответствии с примером 3. Реакционную смесь выпаривали и остаток промывали с применением 1·15 мл Et₂O и 3·15 мл EtOAc. Полимер экстрагировали с применением 10% -ного раствора AcOH объемом 3·20 мл. Объединенные водные фильтраты лиофилизировали до получения клейкого твердого вещества.

Этот технический продукт очищали методом фильтрования с применением геля на Sephadex G-25 фильтре тонкой очистки в соответствии с примером 3 до получения 43,8 мг полуочищенного продукта. Этот продукт подвергали дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР, за исключением того, что градиентное элюирование 10-40%-ного раствора проводили в течение 3 ч. Основной пик был получен путем анализа методом аналитической ЖХВР собранных фракций, выдержанных и лиофилизированных до получения 7,5 мг аморфного порошка белого цвета. Это вещество было гомогенизировано методом ЖХВР, а анализ на содержание аминокислот дал правильные результаты. FAB-MS: MH рассч. 3277,8, обнаружено 3276,4.

Пример 7. Способ получения Ac-[Glu⁸, Orn¹², Nle¹⁷, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло (Glu⁸_____→ Orn¹²)[Ac-(SEQ ID N0:25)-NH₂]
Полимер с поперечной связью на основе сополимера бензгидриламина и стирола-1% дивинилбензола (25,0 г, 17,5 мэкв, 200-400 меш ASTM, Bachem) подвергали набуханию в растворе метиленхлорида объемом 160 мл, отфильтровывали и промывали в соответствии со стадиями 7-8 схемы табл.5. Полимер повторно суспендировали в растворе метиленхлорида объемом 160 мл и добавляли к нему Boc-Thr(Bzl) (16,2 г, 52,5 ммоль) и дициклогексилкарбодиимид (5,4 г, 26,2 ммоль). Эту смесь встряхивали в течение 6 ч при комнатной температуре, отфильтровывали и затем действовали в соответствии со стадиями 10-14 схемы 1. Результат анализа на нингидрин по Кайзеру был отрицательным. Непрореагировавшие аминогруппы были деблокированы путем обработки полимера уксусным ангидридом объемом 5 мл и DIPEA объемом 5 мл в растворе метиленхлорида объемом 150 мл в течение 60 мин, отфильтрованы и промыты в соответствии со стадиями 13-14 схемы 1. Полимер высушивали под вакуумом в течение ночи до получения 29,6 г Boc-Thr(Bzl)-BHA полимера. Порцию этого полимера подвергали анализу на содержание аминокислоты, которое составило 0,21 ммоль Thr/r.

В соответствии со схемой, что и в примере 2, порцию данного полимера массой 14,0 г (2,94 ммоль) подвергали синтезу в твердой фазе. Было проведено 11 циклов сочетания за один общий цикл, каждый из которых проводили с применением Boc-Leu (5,9 г, 23,5 ммоль), Boc-Val (5,1 г, 23,5 ммоль), Boc-Ser(Bzl) (6,9 г, 23,5 ммоль), Boc-Asn (3,0 г, 13,0 ммоль), Boc-Leu(5,9 г, 23,5 ммоль), Boc-Tyr (2,6-DCB) (10,3 г, 23,5 ммоль), Boc-Lys (2-Cl-Z)(9,8 г, 23,5 ммоль), Boc-Lys (2-Cl-Z)(9,8 г, 23,5 ммоль), Boc-Val (5,1 г, 23,5 ммоль), Boc- Ala (4,4 г, 23,5 ммоль) и Boc-Nle (5,4 г, 23,5 ммоль) до получения 26 г Boc-декапептидного полимера.

Было проведено 4 цикла конденсации порции полимера массой 5,5 г (0,61 ммоль) за один цикл, каждый из которых проводили с применением Boc-Gln (655 мг, 2,7 ммоль), Boc-Lys (2-Cl-Z)(2,0 г, 4,8 ммоль), Boc-Arg(Tos) (2,1 г, 4,8 ммоль) и Boc-Leu (1,2 г, 4,8 ммоль). Полимер высушивали под вакуумом до получения 6,12 г Boc-гексадекапептидного полимера.

Было проведено 12 циклов с порцией данного полимера массой 2,0 г (0,2 ммоль) за один цикл, каждый из которых проводили с применением Boc-Orn(Fmoc)(91 мг, 0,2 ммоль), Boc-Thr(Bzl)(250 мг, 0,8 ммоль), Boc-Tyr(2,6-DCB)(352 мг, 0,8 ммоль), Boc-Asn (102 мг, 0,44 ммоль), Boc-Glu(OFm)(340 мг, 0,8 ммоль), Boc-Thr(Bzl)(248 мг, 0,8 ммоль), Boc-Phe(212 мг, 0,8 ммоль), Boc-Val(174 мг, 0,8 ммоль), Boc-Ala(152 мг, 0,8 ммоль), Boc-Asp(OcHx)(252 мг, 0,8 ммоль), Boc-Ser(Bzl)(236 мг, 0,8 ммоль) и Boc-His(Bom)(150 мг, 0,4 ммоль). Пептидный раствор обрабатывали в соответствии со стадиями 1-8 схемы 1, а затем уксусным ангидридом объемом 0,5 мл и DIPEA объемом 38 мл в растворе метиленхлорида объемом 30 мл в течение 180 мин. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14, а затем высушивали под вакуумом до получения 2,4 г вещества.

Порцию данного полимера массой 1,15 г (0,1 ммоль) затем избирательно деблокировали путем обработки в соответствии со стадиями 1-11 схемы 2 и дважды подвергали взаимодействию с BOP (58 мг, 0,13 ммоль) и раствора DIPEA объемом 400 мл в дистиллированном растворе DMF объемом 20 мл. Результат анализа на нингидрин по Кайзеру был отрицательным. Полимер промывали в соответствии со стадиями 13-16 схемы 2 и высушивали под вакуумом до получения 1,05 г вещества.

Данный полимер деблокировали путем обработки HF объемом 9 мл, анизолом объемом 1 мл и этандитиолом объемом 100 мл в течение 1 ч при температуре 0^oC. Реакционную смесь выпаривали, а остаток промывали Et₂O объемом 2·15 мл и EtOAc объемом 2·15 мл. Полимер экстрагировали 10%-ным раствором AcOH объемом 4·20 мл. Объединенные водные фильтраты лиофилизировали до получения 385 мг клейкого твердого вещества желтого цвета.

Данный технический продукт очищали методом фильтрации с применением геля на Sephadex G-25 фильтре тонкой очистки в соответствии с примером 3 до получения 134 мг полуочищенного продукта. Данный продукт подвергали дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР в соответствии с примером 3, за исключением того, что градиентное элюирование 25-36% раствора было проведено в течение 3 ч. Основной пик определяли путем анализа методом аналитической ЖХВР собрали нужные фракции, выдерживали и лиофилизировали до получения 23,2 мг аморфного порошка белого цвета. Данное вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа на содержание аминокислот. FAB-MS: MH рассч.3277,8, обнаружено 3276,3.

Пример 8. Способ получения Ac-[Lys¹², Glu¹⁶, Nle¹⁷, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло (Lys¹²_____→ Glu¹⁶) [Ac-(SEQ ID N0:26)-NH₂]
Полимеры с поперечной связью на основе сополимера бензгидриламина и стирола-1% дивинилбензола (30 г, 21,4 мэкв, 200-400 меш ASTM, Bachem) обрабатывали в соответствии с примером 22 за исключением того, что были использованы 19,9 г Boc-Thr(Bzl) (64,3 ммоль) и 6,6 г дициклогексилкарбодиимида (32,1 ммоль). Данную смесь встряхивали в течение 18 ч при комнатной температуре, отфильтровывали и затем действовали в соответствии со стадиями 10-14 схемы 1. Результаты анализа нингидрина по Кайзеру были отрицательными. Не вступившие в реакцию аминогруппы деблокировали путем обработки полимера уксусным ангидридом объемом 8 мл и DIPEA объемом 8 мл в растворе метиленхлорида объемом 200 мл в течение 60 мин, отфильтровывали и промывали в соответствии со стадиями 13-14 схемы. Полимер высушивали под вакуумом в течение ночи до получения 34,2 г Boc-Thr(Bzl)-BHA полимера. Порцию данного полимера подвергали анализу на содержание аминокислоты, которое составило 0,47 ммоль Thr/r.

Порцию данного Boc-Thr(Bzl)-BHA полимера массой 0,85 г (0,4 ммоль) подвергали синтезу в твердой фазе с применением пептидного синтезатора модели 430А для биосистем. Все конденсации были проведены с применением симметричных ангидридов, полученных из Boc-аминокислот и дициклогексилкарбодиимида. Сочетания Boc-аспарагина, Boc-глютамина и Boc-аргинина (тозил) были получены обычным способом, также как и соответствующие HOBT активные сложные эфиры. Одиннадцать циклов проводили за один общий цикл, каждый из которых проводили с применением Boc-Leu (499 мг, 2,0 ммоль), Boc-Val (435 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ser(Bzl) (590 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asn (464 мг, 2,0 ммоль), Boc-Leu (499 мг, 2,0 ммоль), Boc-Tyr (2,6-DCB) (880 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys (2-Cl-Z)(830 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys (2-Cl-Z)(830 мг, 2,0 ммоль), Boc-Val (435 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ala (378 мг, 2,0 ммоль) и Boc-Nle (462 мг, 2,0 ммоль) для получения Вос-додекапептидного полимера.

Было проведено 5 циклов конденсации данного полимера в соответствии с примером 2 за одну общую стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Glu(OFm) (340 мг, 0,8 ммоль), Boc-Lys (2-Cl-Z)(664 мг, 1,6 ммоль), Boc-Arg(Tos) (685 мг, 1,6 ммоль), Boc-Leu (398 мг, 1,6 ммоль) и Boc-Lys(Fmoc)(375 мг, 0,8 ммоль). Полимер высушивали под вакуумом до получения 2,12 г Boc-гептадекапептидного полимера.

Порция данного полимера массой 1,06 г (0,2 ммоль) была затем избирательно деблокирована путем обработки в соответствии со стадиями 1-11 схемы 2 и дважды была подвергнута взаимодействию с BOP (177 мг, 0,4 ммоль) и с DIPEA объемом 200 мл в дистиллированном растворе DMF объемом 20 мл в течение 2 и 8 ч. Результат анализа на нингидрин по Кайзеру был частично положительным. Не вступившие в реакцию аминогруппы были деблокированы путем обработки полимера уксусным ангидридом в 6%-ном растворе DIPEA/метиленхлорида объемом 20 мл в течение 10 мин, отфильтрованы и промыты в соответствии со стадиями 13-16 схемы 2. Был проведен один цикл сочетания данного полимера с применением Boc-Thr(Bzl)(495 мг, 1,6 ммоль), который затем был снова помещен в пептидный синтезатор модели 430А для биосистем, как указано выше. Было проведено 10 циклов сочетания за один общий цикл, каждый из которых проводили с применением Boc-Tyr(2,6-DCB)(880 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asn (464 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asp(OcHx)(630 мг, 2,0 ммоль), Boc-Thr(Bzl)(618 мг, 2,0 ммоль), Boc-Phe(531 мг, 2,0 ммоль), Boc-Val(435 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asp(OcHx)(630 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ser(Bzl)(590 мг, 2,0 ммоль) и Boc-His(Tos)(819 мг, 2,0 ммоль). Затем пептидный полимер обрабатывали в соответствии со стадиями 1-8 схемы 1 и подвергали взаимодействию с уксусным ангидридом объемом 0,5 мл и раствором DIPEA объемом 100 мл в растворе метиленхлорида объемом 20 мл в течение 30 мин. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14 и высушивали под вакуумом.

Пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 340 мл технического пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как в примере 3, до получения полуочищенного продукта. Данный продукт подвергали дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что градиентное элюирование 25-35% раствора до получения 15,6 мг аморфоного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа на содержание аминокислот. FAB-MS: MH рассч.3276,6, обнаружено 3278,0.

Пример 9. Способ получения Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Asp²⁴, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:27)-NH₂]
Было проведено 9 циклов конденсации порции Boc-Thr(Bzl) полимера массой 0,42 г (0,2 ммоль) в соответствии с примером 8 за один общий цикл с применением Boc-Leu (200 мг, 0,8 ммоль), Boc-Val (174 мг, 0,8 ммоль), Boc-Ser(Bzl) (236 мг, 0,8 ммоль), Boc-Asp(OFm) (239 мг, 0,8 ммоль), Boc-Leu(200 мг, 0,8 ммоль), Boc-Tyr (2,6-DCB) (352 мг, 0,8 ммоль), Boc-Lys (2-Cl-Z)(332 мг, 0,8 ммоль), Boc-Lys (Fmoc)(375 мг, 0,8 ммоль) и Boc-Val (174 мг, 0,8 ммоль).

Данный полимер затем избирательно деблокировали путем обработки в соответствии со стадиями 1-11 схемы 2 и подвергали взаимодействию с ВОР (177 мг, 0,4 ммоль) и 200 мл DIPEA в дитиллированном растворе DMF объемом 20 мл в течение 6 ч. Результат анализа на нингидрин по Кайзеру был отрицательным.

Данный полимер затем подвергали синтезу в твердой фазе с применением пептидного синтезатора модели 430А для биосистем, как описано в примере 8. Было проведено 17 циклов за одну общую стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Nle (462 мг, 2,0 ммоль), Boc-Gln (493 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys (2-Cl-Z)(830 г, 2,0 ммоль), Boc-Arg(Tos) (856 мг, 2,0 ммоль), Boc-Leu (499 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys (2-Cl-Z)(830 г, 2,0 ммоль), Boc-Thr(Bzl)(618 мг, 2,0 ммоль), Boc-Tyr(2,6-DCB)(880 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asn (464 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asp(OcHx)(630 мг, 2,0 ммоль), Boc-Thr(Bzl)(618 мг, 2,0 ммоль), Boc-Phe(531 мг, 2,0 ммоль), Boc-Val(435 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asp(OcHx)(630 мг, 2,0 ммоль) и Boc-Ser(Bzl)(590 мг, 2,0 ммоль). Данный полимер использовали для проведения одного цикла конденсации с применением Boc-His(Tos)(164 мг, 0,4 ммоль) и затем действовали в соответствии со стадиями 1-8 схемы 1 при последующей обработке полимера уксусным ангидридом объемом 1 мл в 6%-ном растворе DIPEA/метиленхлорида объемом 20 мл в течение 30 мин. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14 схемы 1 и высушивали под вакуумом до получения 1,94 г.

Порцию полимера массой 0,97 мг (0,1 ммоль) деблокировали, как описано в примере 7, до получения 265 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 149 мг полуочищенного продукта. Данный продукт подвергали дальнейшей очистке методом препаративной хроматографии, как описано в примере 3, за исключением того, что проводили градиентное элюирование 25-35% раствора до получения 28,1 мг аморфоного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа на содержание аминокислот. FAB-MS: MH рассч.3278,6, обнаружено 3278,8.

Пример 10. Способ получения Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:28)-NH₂]
Полимер с поперечной связью на основе сополимера стирола и бензгидриламина-1% дивинилбензола (5,0 г, 2,6 мэкв, 200-400 меш ASTM,Vega Biochem)подвергали набуханию в растворе метиленхлорида объемом 50 мл, отфильтровывали и промывали в соответствии со стадиями 7-8 схемы 1. Полимер повторно суспендировали в метиленхлориде объемом 60 мл и добавляли к нему Boc-Thr(Bzl) (2,32 г, 7,5 ммоль) и дициклогексилкарбодиимид (774 мг, 3,75 ммоль). Данную смесь встряхивали в течение 4 ч при комнатной температуре, отфильтровывали, а затем действовали по стадиям 10-14 схемы 1. Результат анализа на нингидрин по Кайзеру был отрицательным. Любые, не вступившие в реакцию аминогруппы, были деблокированы путем обработки полимера уксусным ангидридом объемом 5 мл и DIPEA объемом 5 мл в растворе метиленхлорида объемом 50 мл в течение 60 мин, отфильтрованы и промыты в соответствии со стадиями 13-14 схемы. Полимер высушивали под вакуумом в течение ночи до получения Boc-Thr(Bzl)-BHA полимера массой 5,8 г. Порцию данного полимера подвергали анализу на содержание аминокислоты, результат которого соответствовал 0,276 ммоль Thr/r.

Порцию данного полимера массой 1,44 г (0,4 ммоль) подвергали синтезу в твердой фазе в соответствии с вышеприведенной схемой 1, как описано в примере 2. Было проведено 3 цикла за одну общую стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Leu (399 мг, 1,6 ммоль), Boc-Val (348 мг, 1,6 ммоль) и Boc-Asp(OFm) (329 мг, 0,8 ммоль). Было проведено 4 цикла с применением половины массы данного полимера (0,2 ммоль) за один общий цикл, каждый из которых проводили с применением Boc-Asn (204 мг, 0,88 ммоль), Boc-Leu (199 мг, 0,8 ммоль), Boc-Tyr (2,6-DCB) (352 мг, 0,8 ммоль) и Boc-Lys (Fmoc)(375 мг, 0,8 ммоль).

Полимер затем избирательно деблокировали путем обработки в соответствии со стадиями 1-11 схемы 2 и подвергали взаимодействию с BOP (177 мг, 0,4 ммоль) в 1%-ном растворе DIPEA/DMF объемом 20 мл в течение 2 ч. Результат анализа на нингидрин по Кайзеру был отрицательным.

Был проведен один цикл конденсации данного полимера с применением Boc-Lys (2-Cl-Z)(332 г, 0,8 ммоль), а затем его подвергали синтезу в твердой фазе с применением пептидного синтезатора модели 430А для биосистем, как описано в примере 8. Было проведено 19 циклов за одну общую стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Val (435 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Nle (462 мг, 2,0 ммоль), Boc-Gln (493 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys (2-Cl-Z)(830 г, 2,0 ммоль), Boc-Arg(Tos) (856 мг, 2,0 ммоль), Boc-Leu (499 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys (2-Cl-Z)(830 г, 2,0 ммоль), Boc-Thr(Bzl) (618 мг, 2,0 ммоль), Boc-Tyr(2,6-DCB)(880 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asn (464 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asp(OcHx)(630 мг, 2,0 ммоль), Boc-Thr(Bzl) (618 мг, 2,0 ммоль), Boc-Phe(531 мг, 2,0 ммоль), Boc-Val(435 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asp(OcHx)(630 мг, 2,0 ммоль) Boc-Ser(Bzl)(590 мг, 2,0 ммоль) и Boc-His(Tos)(819 мг, 2,0 ммоль), затем действовали в соответствии со стадиями 1-8 схемы 1 при последующей обработке полимера уксусным ангидридом объемом 1 мл в 20 мл 6%-ного раствора DIPEA/метиленхлорида в течение 30 мин. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14 схемы 1 и высушивали под вакуумом.

Пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 210 мл неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 93 мг полуочищенного продукта. Данный продукт подвергали дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что проводили градиентное элюирование 27-37%-ного раствора до получения 26,2 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа на содержание аминокислоты. FAB-MS: MH рассч. 3305,8, обнаружено 3305,8.

Пример 11. Способ получения Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:29)-NH₂]
В соответствии с вышепредставленной схемой проводили синтез с использованием порции бензгидриламинового полимера (100-200 ASTM меш, Bachem) массой 0,4 г (0,1 ммоль) в твердой фазе. Все реакции были проведены с применением равных молярных эквивалентов Boc-аминокислоты и диизопропилкарбодиимида. Boc-аспарагин и Boc-глютамин были введены в виде соответствующих активных сложных эфиров путем добавления избытка HOBT к данной смеси. Время взаимодействия до завершения этапа конденсации в основном составляло 2-18 ч. Было проведено 9 циклов конденсации за одну общую стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Thr(Bzl)(309 мг, 1,0 ммоль), Boc-Leu (248 мг, 1,0 ммоль), Boc-Val(217 мг, 1,0 ммоль), Boc-Asp(OFm)(206 мг, 0,5 ммоль) Boc-Asn (232 мг, 1,0 ммоль), Boc-Leu (249 мг, 1,0 ммоль), Boc-Tyr(2,6-DCB)(440 мг, 1,0 ммоль), Boc-Lys (Fmoc)(234 мг, 0,5 ммоль) и Boc-Lys (2-Cl-Z)(415 мг, 1,0 ммоль).

Данный полимер затем избирательно деблокировали путем обработки в соответствии со стадиями 1-11 схемы 2 и подвергали взаимодействию с BOP (88 мг, 0,2 ммоль) в 1%-ном растворе DIPEA/DMF объемом 20 мл в течение 2 ч. Результат анализа на нингидрин по Кайзеру был отрицательным.

Было проведено 19 циклов сочетания за один общий цикл, каждый из которых проводили с применением Boc-Ala(189 мг, 1,0 ммоль), Boc-Ala(189 мг, 1,0 ммоль), Boc-Nle (231 мг, 1,0 ммоль), Boc-Gln (245 мг, 1,0 ммоль), Boc-Lys (2-Cl-Z)(415 г, 1,0 ммоль), Boc-Arg(Tos) (428 мг, 1,0 ммоль), Boc-Leu (249 мг, 1,0 ммоль), Boc-Lys (2-Cl-Z)(415 г, 1,0 ммоль), Boc-Thr(Bzl)(309 мг, 1,0 ммоль), Boc-Tyr(2,6-DCB)(440 мг, 1,0 ммоль), Boc-Asn (232 мг, 1,0 ммоль), Boc-Asp(OcHx)(315 мг, 1,0 ммоль), Boc-Thr(Bzl)(309 мг, 1,0 ммоль), Boc-Phe(265 мг, 1,0 ммоль), Boc-Val(217 мг, 1,0 ммоль), Boc-Ala(189 мг, 1,0 ммоль), Boc-Asp(OcHx) (315 мг, 1,0 ммоль) и Boc-Ser(Bzl)(295 мг, 1,0 ммоль) и Boc-His(Tos)(409 мг, 1,0 ммоль). Затем пептидный полимер обрабатывали в соответствии со стадиями 1-8 схемы 1 и обрабатывали уксусным ангидридом объемом 0,5 мл в течение 30 мин. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14 и высушивали под вакуумом.

Данный пептидный полимер был деблокирован, как описано в примере 7, до получения 304 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 215 мг полуочищенного продукта. Данный продукт подвергали дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что проводили градиентное элюирование 26-36%-ным раствором до получения 20,1 мг аморфного порошка белого цвета. Это вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа на содержание аминокислоты. FAB-MS: MH рассч. 3277,6, обнаружено 3277,7.

Пример 12. Способ получения Ac-[p-F-Phe⁶, 2-Nal¹⁰, Lys¹², Nle¹⁷, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸, Gly^29,30, Met³¹]-VIP(1-31)-NH₂ цикло [Ac-(SEQ ID N0:30)-NH₂]
В соответствии с примером 11 проводили синтез с использованием порции бензгидриламинового полимера (100-200 ASTM меш, Bachem) массой 0,4 г (0,1 ммоль) в твердой фазе. Было проведено 6 циклов за одну стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Met(249 мг, 1,0 ммоль), Boc-Gly (175 мг, 1,0 ммоль) и Boc-Gly (175 мг, 1,0 ммоль). В соответствии с примером 11 было проведено 9 циклов конденсации и циклизация. В соответствии с примером 11 было проведено 19 циклов конденсации, за исключением того, что при проведении десятого цикла Boc-Val был заменен Boc-Ala(217 мг, 1,0 ммоль), Boc-Tyr(2,6-DCB) при проведении девятнадцатого цикла был заменен Boc-2-Nal(158 мг, 0,5 ммоль), и Boc-Phe при проведении двадцать третьего цикла был заменен Boc-p-F-Phe(142 мг, 0,5 ммоль).

Данный пептидный полимер был деблокирован, как описано в примере 7, до получения 345 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 215 мг полуочищенного продукта. Данный продукт подвергали дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что проводили градиентное элюирование 30-40%-ного раствора до получения 16,4 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа на содержание аминокислоты. FAB-MS: MH рассч. 3574,7, обнаружено 3575,1.

Пример 13. Способ получения Ac-[Glu⁸, Orn¹², Nle¹⁷, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸] -VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:31)-NH₂]
В соответствии с примером 11, порцию бензгидриламинового полимера (100-200 ASTM меш, Bachem) массой 0,4 г (0,1 ммоль) подвергали синтезу в твердой фазе. Было проведено 9 циклов конденсации и циклизации, как описано в примере 11. Девятнадцать циклов было проведено в соответствии с примером 11, за исключением того, что Boc-Ala при проведении десятого цикла заменяли Boc-Val(217 мг, 1,0 ммоль), Boc-Lys(2-Cl-Z) при проведении семнадцатого цикла замещали Boc-Orn(Z)(366 мг, 1,0 ммоль), и Boc-Asp(OcHx) при проведении двадцать первого цикла заменяли Boc-Glu(Bzl)(337 мг, 1,0 ммоль).

Данный пептидный полимер был деблокирован, как описано в примере 7, до получения 255 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 200 мг полуочищенного продукта. Данный пептид подвергали дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что проводили градиентное элюирование 28-38%-ного раствора до получения 30,7 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа на содержание аминокислоты. FAB-MS: MH рассч. 3305,8, обнаружено 3305,5.

Пример 14. Способ получения Ac-[p-F-Phe⁶, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸, Gly^29,30, Cys(Acm)³¹]-VIP(1-31)-NH₂ цикло [Ac-(SEQ ID N0:32)-NH₂]
Бензгидриламиновый полимер (0,4 г, 0,1 ммоль), 100-200 ASTM меш, Bachem) подвергали синтезу в твердой фазе в соответствии с примером 11. Было проведено 3 цикла конденсации за одну общую стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Cys(Acm)(292 мг, 1,0 ммоль), Boc-Gly (175 мг, 1,0 ммоль) и Boc-Gly (175 мг, 1,0 ммоль). Девять циклов конденсации и циклизации проводили, как описано в примере 11. Девятнадцать циклов проводили как описано в примере 11, за исключением того, что Boc-Phe при проведении двадцать третьего цикла заменяли Boc-p-F-Phe(142 мг, 0,5 ммоль).

Данный пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 268 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 165 мг полуочищенного продукта. Данный пептид подвергали дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что проводили градиентное элюирование 25-35%-ного раствора до получения 28,1 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа аминокислоты. FAB-MS: MH рассч.3584,1, обнаружено 3584,0.

Пример 15. Способ получения Ac-[Ala², Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:33)-NH₂]
Бензгидриламиновый полимер (1,5 г, 0,4 ммоль, 100-200 ASTM меш, Bachem) подвергали синтезу в твердой фазе с использованием пептидного синтезатора модели 430А для биосистем, как описано в примере 11. Было проведено восемь циклов конденсации за одну общую стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Thr(Bzl)(619 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lue (499 мг, 2,0 ммоль), Boc-Val (435 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asp (OFm)(822 г, 2,0 ммоль), Boc-Asn (464 мг, 2,0 ммоль), Boc-Leu (499 мг, 2,0 ммоль), Boc-Tyr (2,6-DCB)(880 г, 2,0 ммоль) и Boc-Lys(Fmoc)(938 мг, 2,0 ммоль).

Данный полимер затем избирательно деблокировали путем обработки в соответствии со стадиями 1-11 схемы 2 и подвергали взаимодействию с BOP (356 мг, 0,8 ммоль) в 1%-ном растворе DIPEA/DMF объемом 20 мл в течение 2 ч. Результат анализа на нингидрин по Кайзеру был отрицательным. Полимер промывали в соответствии со стадиями 13-16 схемы 2 и высушивали под вакуумом до получения 1,9 г Boc-октапептидного полимера.

Порцию данного полимера массой 0,95 г (0,2 ммоль) снова подвергали синтезу в твердой фазе с использованием пептидного синтезатора модели 430А для биосистем, как описано в примере 11. Было проведено 18 циклов конденсации за одну общую стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Lys (2-Cl-Z)(830 г, 2,0 ммоль), Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Nle (462 мг, 2,0 ммоль), Boc-Gln (493 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys (2-Cl-Z)(830 г, 2,0 ммоль), Boc-Arg(Tos) (856 мг, 2,0 ммоль), Boc-Leu (499 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys (2-Cl-Z)(830 г, 2,0 ммоль), Boc-Thr(Bzl)(618 мг, 2,0 ммоль), Boc-Tyr(2,6-DCB)(880 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asn(464 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asp(OcHx)(630 мг, 2,0 ммоль), Boc-Thr(Bzl)(618 мг, 2,0 ммоль), Boc-Phe(531 мг, 2,0 ммоль), Boc-Val(435 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль) и Boc-Asp(OcHx)(630 мг, 2,0 ммоль) до получения 1,54 г Boc-гексакозапептидного полимера.

Порцию данного полимера массой 0,77 г (0,1 ммоль) подвергали синтезу в твердой фазе в соответствии с вышепредставленной схемой, как описано в примере 2. Было проведено два цикла сочетания за один цикл, каждый из которых проводили с применением Boc-Ala (76 мг, 0,4 ммоль) и Boc-His (Tos)(328 мг, 0,8 ммоль). Пептидный полимер обрабатывали в соответствии со стадиями 1-8 схемы 1, а затем с применением уксусного ангидрида объемом 0,5 мл в 6%-ном растворе DIPEA/метиленхлорида объемом 20 мл в течение 60 мин. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14 и высушивали под вакуумом до получения 0,74 г.

Пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 172 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 110 мг полуочищенного продукта. Данный продукт подвергали дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что проводили градиентное элюирование 22-37%-ного раствора до получения 40,0 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа аминокислоты. FAB-MS: MH рассч. 3261,7, обнаружено 3261,8.

Пример 16. Способ получения Ac-[N-Me-Ala¹, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:34)-NH₂]
Порцию Boc-гексаокозапептидного полимера из примера 15 массой 0,77 г (0,1 ммоль) подвергали синтезу в твердой фазе в соответствии с вышеприведенной схемой, описанной в примере 2. Было проведено два цикла конденсации за одну общую стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Ser(Bzl)(118 мг, 0,4 ммоль) и Boc-N-Me-Ala (81 мг, 0,4 ммоль). Пептидный полимер обрабатывали в соответствии со стадиями 1-8 схемы 1, а затем с применением BOP (442 мг, 1,0 ммоль), уксусной кислоты (57 мл, 1,0 ммоль) и DIPEA (523 мл, 3,0 ммоль) в DMF объемом 20 мл в течение 6 ч, а затем уксусным ангидридом объемом 0,5 мл в 6%-ном растворе DIPEA/метиленхлорида объемом 20 мл в течение 60 мин. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14 и высушивали под вакуумом до получения 0,73 г.

Данный пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 191 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 138 мг полуочищенного продукта. Данный продукт подвергали дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что проводили градиентное элюирование 22-37%-ного раствора до получения 28,0 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа аминокислоты. FAB-MS: MH рассч. 3225,4, обнаружено 3225,8.

Пример 17. Способ получения Ac-[2-Nal¹⁰, Leu¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:35)-NH₂]
Бензгидриламиновый полимер (4,0 г, 1,08 ммоль, 100-200 ASTM меш, Bachem) подвергали синтезу в твердой фазе в соответствии со схемой 1, как описано в примере 2. Было проведено 8 циклов конденсации за одну общую стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Thr(Bzl) (1,34 г, 4,3 ммоль), Boc-Lue (925 мг, 4,3 ммоль), Boc-Val (938 мг, 4,3 ммоль), Boc-Asp (OFm)(889 г, 2,1 ммоль), Boc-Asn (557 мг, 2,4 ммоль), Boc-Leu (925 мг, 4,3 ммоль), Boc-Tyr (2,6-DCB)(1,9 г, 4,3 ммоль) и Boc-Lys(Fmoc)(1,1 г, 4,3 ммоль).

Затем данный полимер избирательно деблокировали путем обработки в соответствии со стадиями 1-11 схемы 2 и подвергали взаимодействию с BOP (885 мг, 2,0 ммоль) в 20 мл 1% -ного раствора DIPEA/DMF в течение 2 ч. Результат анализа на нингидрин по Кайзеру был отрицательным. Полимер промывали в соответствии со стадиями 13-16 схемы 2.

Был проведен один цикл конденсации полимера с применением Boc-Lys(2-Cl-Z)(1,79 г, 4,3 ммоль) и последующее высушивание под вакуумом до получения 6,3 г Boc-нонапептидного полимера.

Было проведено 9 циклов конденсации порции данного полимера массой 1,89 г (0,3 ммоль) за одну общую стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Ala(227 мг, 1,2 ммоль), Boc-Ala(227 мг, 1,2 ммоль), Boc-Nle (278 мг, 1,2 ммоль), Boc-Gln (325 мг, 1,32 ммоль), Boc-Lys (2-Cl-Z)(498 мг, 1,2 ммоль), Boc-Arg(Tos) (514 мг, 1,2 ммоль), Boc-Leu (299 мг, 1,2 ммоль), Boc-Lеu (498 vг, 2,0 ммоль) и Boc-Thr(Bzl) (371 мг, 1,2 ммоль) до получения 2,06 г Boc-октадекапептидного полимера.

Было проведено 10 циклов конденсации с применением порции данного полимера массой 0,68 г (0,1 ммоль) за один общий цикл, каждый из которых проводили с применением Boc-2-Nal (126 мг, 0,4 ммоль), Boc-Asn (102 мг, 0,44 ммоль), Boc-Asp (OcHx)(126 г, 0,4 ммоль), Boc-Thr (Bzl)(124 мг, 0,4 ммоль), Boc-Phe(106 мг, 0,4 ммоль), Boc-Val (87 мг, 0,4 ммоль), Boc-Ala(76 мг, 0,4 ммоль), Boc-Asp(OcHx)(126 мг, 0,4 ммоль), Boc-Ser(Bzl)(118 мг, 0,4 ммоль) и Boc-His(Tos)(164 мг, 0,4 ммоль). Пептидный полимер обрабатывали в соответствии со стадиями 1-8 схемы 1, а затем уксусным ангидридом объемом 0,5 мл в 20 мл 6%-ного раствора DIPEA/метиленхлорида в течение 60 мин. Пептид промывали в соответствии со стадиями 10-14 и высушивали под вакуумом до получения 0,82 г.

Данный пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 261 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 186 мг полуочищенного продукта. Данный продукт подвергали дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что проводили градиентное элюирование 30-40%-ного раствора до получения 60,1 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа аминокислоты. FAB-MS: MH рассч. 3296,8, обнаружено 3295,6.

Пример 18. Способ получения Ac-[O-Ме-Tyr¹⁰, Leu¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:36)-NH₂]
Было проведено 10 циклов конденсации с применением порции Boc-октадекапептидного полимера массой 0,68 г (0,1 ммоль) из примера 17, как описано в данном примере, за исключением того, что Boc-2-Nal при проведении девятнадцатого цикла заменили Boc-Tyr(O-Me) (59 мг, 0,2 ммоль) с получением 0,61 г продукта.

Данный пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, с получением 175 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3 до получения 136 мг полуочищенного продукта. Данный продукт далее очищали методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что проводили градиентное элюирование 28-38% -ного раствора до получения 42,4 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали правильные результаты анализа аминокислоты. FAB-MS: MH рассч. 3276,7, обнаружено 3276,0.

Пример 19. Способ получения Ac-[p-F-Phe⁶, p-NH₂- Phe¹⁰, Leu¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸] -VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0: 37)-NH₂]
Было проведено 10 циклов конденсации порции Boc-октадекапептида полимера массой 0,625 г (0,09 ммоль) как описано в примере 17, за исключением того, что Boc-2-Nal при проведении девятнадцатого цикла заменили Boc-p-NH(Z)-Phe(166 мг, 0,4 ммоль) и Boc-Phe при проведении двадцать третьего цикла заменяли Boc-p-F-Phe (113 мг, 0,4 ммоль) с получением 0,84 г продукта.

Данный пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 182 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрования, как описано в примере 3, за исключением того, что проводили градиентное элюирование 25-35% -ного раствора до получения 47,2 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа аминокислоты. FAB-MS: MH рассч. 3279,7, обнаружено 3279,8.

Пример 20. Способ получения Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:38)-NH₂]
Бензгидриламиновый полимер (1,25 г, 1,0 ммоль, 100-200 ASTM меш, Bachem) подвергали синтезу в твердой фазе в соответствии со схемой 1, как описано в примере 2. Было проведено 8 циклов конденсации за одну общую стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Lys (2-Cl-Z) (1,66 г, 4,0 ммоль), Boc-Lys(2-Cl-Z) (1,66 г, 4,0 ммоль), Boc-Leu (925 мг, 4,0 ммоль), Boc-Asp (OFm)(823 г, 2,0 ммоль), Boc-Asn (511 мг, 2,2 ммоль), Boc-Leu (925 мг, 4,0 ммоль), Boc-Tyr (2,6-DCB)(1,76 г, 4,0 ммоль) и Boc-Lys(Fmoc)(937 мг, 2,0 ммоль).

Данный полимер затем избирательно деблокировали путем обработки в соответствии со стадиями 1-11 схемы 2 и подвергали взаимодействию с BOP (885 мг, 2,0 ммоль) в 1% -ном растворе DIPEA/DMF объемом 20 мл в течение 2 ч. Результат анализа на нингидрин по Кайзеру был отрицательным. Полимер промывали в соответствии со стадиями 13-16 схемы 2.

Был проведен один цикл сочетания данного полимера с Boc-Lys(2-Cl- Z)(1,66 г, 4,0 ммоль) при последующем высушивании под вакуумом до получения 2,7 г Boc-нонапептидного полимера.

Порцию данного полимера массой 0,54 г (0,2 ммоль) подвергали синтезу в твердой фазе с использованием пептидного синтезатора модели 430А для биосистем, как описано в примере 8. Было проведено 18 циклов за одну стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Nle (462 мг, 2,0 ммоль), Boc-Gln (493 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys(2-Cl-Z) (830 мг, 2,0 ммоль), Boc-Arg(Tos) (856 мг, 2,0 ммоль), Boc-Leu (499 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys(2-Cl-Z)(830 мг, 2,0 ммоль), Boc-Thr(Bzl) (618 мг, 2,0 ммоль), Boc-Tyr(2,6-DCB) (880 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asn (464 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asp(OcHx)(630 мг, 2,0 ммоль), Boc-Thr(Bzl) (618 мг, 2,0 ммоль), Boc-Phe(531 мг, 2,0 ммоль), Boc-Val (435 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asp(OcHx)(630 мг, 2,0 ммоль) и Boc-Ser(Bzl)(590 мг, 2,0 ммоль) до получения 1,16 г Boc-гептакозапептидного полимера.

Было проведен один цикл конденсации с применением порции данного полимера массой 0,54 г (0,1 ммоль) с Boc-His(Tos)(819 мг, 2,0 ммоль) при последующей обработке в соответствии со стадиями 1-8 схемы 1 и уксусным ангидридом объемом 0,5 мл в 6%-ном растворе DIPEA/метиленхлорида объемом 20 мл в течение 60 мин. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14 схемы 1 и высушивали под вакуумом до получения 0,5 г.

Пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, за исключением того, что были использованы 5 мл HF и 0,5 мл анизола до получения 127 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 74,6 мг полуочищенного продукта. Данный продукт далее очищали методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что проводили градиентное элюирование 24-34% -ного раствора до получения 17,1 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа аминокислоты. FAB-MS: MH рассч. 3333,8, обнаружено 3333,4.

Пример 21. Способ получения Ac-[N-Me-Ala¹, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:39)-NH₂]
Был проведен один цикл конденсации порции Boc-гептакозапептидного полимера массой 0,58 г (0,1 ммоль) из примера 20 с Boc-N-Me-Ala(81 мг, 0,4 ммоль) при последующей обработке в соответствии со стадиями 1-8 схемы 1 и с применением BOP (443 мг, 1,0 ммоль), уксусной кислотой (57 мл, 1,0 ммоль) и DIPEA (523 мл, 3,0 ммоль) в 20 мл DMF в течение 6 ч и с применением 0,5 мл уксусного ангидрида в 6%-ном растворе DIPEA/метиленхлорида объемом 20 мл в течение 60 м. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14 схемы 1 и высушивали под вакуумом до получения 0,4 г.

Данный пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 20, до получения 165 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 101 мг полуочищенного продукта. Данный продукт далее очищали методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что проводили градиентное элюирование из 24-34%-ного раствора до получения 19,8 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа аминокислоты. FAB-MS: MH рассч. 3281,8, обнаружено 3281,9.

Пример 22. Способ получения Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:40)-NH₂]
Порцию Boc-нонапептидного полимера из примера 20 массой 0,54 г (0,2 ммоль) подвергали синтезу в твердой фазе с использованием пептидного синтезатора модели 430А для биосистем, как описано в примере 8. Было проведено 18 циклов за одну общую стадию с применением Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Nle (462 мг, 2,0 ммоль), Boc-Gln (493 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys(2-Cl-Z) (830 мг, 2,0 ммоль), Boc-Arg(Tos)(856 мг, 2,0 ммоль), Boc-Leu (499 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys(2-Cl-Z)(830 мг, 2,0 ммоль), Boc-Thr(Bzl) (618 мг, 2,0 ммоль), Boc-Tyr(2,6-DCB)(880 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asn (464 мг, 2,0 ммоль), Boc-Glu(ОBzl)(675 мг, 2,0 ммоль), Boc-Thr(Bzl) (618 мг, 2,0 ммоль), Boc-Phe(531 мг, 2,0 ммоль), Boc-Val (435 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asp(OcHx)(630 мг, 2,0 ммоль) и Boc-Ser(Bzl)(590 мг, 2,0 ммоль) до получения 0,58 г Boc-гептакозапептидного полимера.

Было проведен один цикл конденсации данного полимера с Boc-His (Tos)(164 мг, 0,4 ммоль) при последующем проведении обработки в соответствии со стадиями 1-8 схемы 1 и уксусным ангидридом объемом 0,5 мл в 6%-ном растворе DIPEA/метиленхлорида объемом 20 мл в течение 60 мин. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14 схемы 1 и высушивали под вакуумом до получения 0,53 г.

Данный пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, за исключением того, что были использованы HF объемом 0,5 мл и анизол объемом 0,5 мл до получения 151 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 110 мг полуочищенного продукта. Данный продукт был далее очищен методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что проводили градиентное элюирование из 23,5-33,5%-ного раствора до получения 22,8 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа аминокислоты. FAB-MS: MH рассч. 3347,9, обнаружено 3347,0.

Пример 23. Способ получения Ac-[O-Me-Tyr¹⁰, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:41)-NH₂]
Порцию Boc-нонапептидного полимера из примера 17 массой 1,84 г (0,3 ммоль) подвергали синтезу в твердой фазе с использованием пептидного синтезатора модели 430А для биосистем, как описано в примере 8. Было проведено 9 циклов за одну общую стадию с применением при проведении каждого цикла Boc-Ala(379 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Nle (462 мг, 2,0 ммоль), Boc-Gln (493 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys(2-Cl-Z) (830 мг, 2,0 ммоль), Boc-Arg(Tos)(856 мг, 2,0 ммоль), Boc-Leu (499 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys(2-Cl-Z)(830 мг, 2,0 ммоль) и Boc-Thr(Bzl) (618 мг, 2,0 ммоль) до получения 2,2 г Boc-октадекапептидного полимера.

Было проведено десять циклов конденсации порции данного полимера массой 0,73 г (0,1 ммоль) за одну стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Tyr(O-Me)(59 мг, 0,2 ммоль), Boc-Asn (102 мг, 0,44 ммоль), Boc-Asp(OcHx)(126 мг, 0,4 ммоль), Boc-Thr(Bzl) (124 мг, 0,4 ммоль), Boc-Phe(106 мг, 0,4 ммоль), Boc-Val (87 мг, 0,4 ммоль), Boc-Ala(76 мг, 0,4 ммоль), Boc-Asp(OcHx)(126 мг, 0,4 ммоль), Boc-Ser (Bzl)(118 мг, 0,4 ммоль) и Boc-His(Tos)(164 мг, 0,4 ммоль). Пептидный полимер обрабатывали в соответствии со стадиями 1-8 схемы 1, а затем уксусным ангидридом объемом 0,5 мл в 6%-ном растворе DIPEA/метиленхлорида объемом 20 мл в течение 60 мин. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14 под вакуумом до получения 0,77 г.

Данный пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 187 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, за исключением того, что проводили градиентное элюирование 26-36%-ного раствора до получения 5,3 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа аминокислоты. FAB-MS: MH рассч. 3291,8, обнаружено 3291,7.

Пример 24. Способ получения Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Ala^29-31]-VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:42)-NH₂]
Бензгидриламиновый полимер (1,1 г, 0,5 ммоль, 200-400 ASTM меш, Biomega) подвергали синтезу в твердой фазе в соответствии со схемой 1, как описано в примере 2. Было проведено 13 циклов за одну стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ala (378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys(2-Cl-Z) (830 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys(2-Cl-Z)(830 мг, 2,0 ммоль), Boc-Leu (499 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asp(OFm)(823 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asn (511 мг, 2,2 ммоль), Boc-Leu (499 мг, 2,0 ммоль), Boc-Tyr(2,6-DCB) (881 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys(Fmoc)(936 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys(2-Cl-Z)(830 мг, 2,0 ммоль) и Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль).

Затем данный полимер избирательно деблокировали путем обработки в соответствии со стадиями 1-11 схемы 2 и подвергали взаимодействию с BOP (443 мг, 1,0 ммоль) в 1% -ном растворе DIPEA/DMF объемом 20 мл в течение 1 ч. Результат анализа на нингидрин по Кайзеру был отрицательным. Полимер промывали в соответствии со стадиями 13-16 схемы 2 и высушивали под вакуумом до получения 2,02 г Boc-тридекапептидного полимера.

Порцию данного полимера массой 0,8 г (0,2 ммоль) подвергали синтезу в твердой фазе с применением пептидного синтезатора модели 430А для биосистем, как описано в примере 8. Было проведено 16 циклов сочетания за один цикл, каждый из которых проводили с применением Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Nle (462 мг, 2,0 ммоль), Boc-Gln (493 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys(2-Cl-Z) (830 мг, 2,0 ммоль), Boc-Arg(Tos) (856 мг, 2,0 ммоль), Boc-Leu (499 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys(2-Cl-Z)(830 мг, 2,0 ммоль), Boc-Thr(Bzl) (618 мг, 2,0 ммоль), Boc-Tyr(2,6-DCB) (880 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asn (464 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asp(OcHx)(630 мг, 2,0 ммоль), Boc-Thr(Bzl) (618 мг, 2,0 ммоль), Boc-Phe(531 мг, 2,0 ммоль), Boc-Val (435 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль) и Boc-Asp(OcHx)(630 мг, 2,0 ммоль) до получения 1,2 г Boc-нонакозапептидного полимера.

Было проведено два цикла конденсации данного полимера с применением порции массой 0,6 г (0,1 ммоль) с Boc-Ser(Bzl)(590 мг, 2,0 ммоль) и Boc-His(Tos)(819 мг, 2,0 ммоль) до получения 0,72 г. Данный полимер затем обрабатывали в соответствии со стадиями 1-8 схемы 1 и уксусным ангидридом объемом 0,5 мл в 6%-ном растворе DIPEA/метиленхлорида объемом 20 мл в течение 60 мин. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14 схемы 1 и высушивали под вакуумом до получения 0,645 г.

Пептидную смолу деблокировали, как описано в примере 7, до получения 280 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 160 мг полуочищенного продукта. Данный продукт подвергали дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что проводили градиентное элюирование из 22-32%-ного раствора до получения 23,1 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР с получением соответствующего результаты анализа аминокислоты. FAB-MS: MH рассч. 3561,1, обнаружено 3560,8.

Пример 25. Способ получения Ac-[Ala², Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28 Ala^29-31]-VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:43)-NH₂]
Было проведено два цикла конденсации с применением порции Boc-нонакозапептидного полимера из примера 24 массой 0,6 г (0,1 ммоль), как описано выше, с Boc-Ser(Bzl)(590 мг, 2,0 ммоль) и Boc-His(Tos)(819 мг, 2,0 ммоль) до получения 0,68 г. Данный полимер затем обрабатывали в соответствии со стадиями 1-8 схемы 1 и уксусным ангидридом объемом 0,5 мл в 6%-ном растворе DIPEA/метиленхлорида объемом 20 мл в течение 60 мин. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14 схемы 1 и высушивали под вакуумом до получения 0,56 г.

Данный пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 160 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 70 мг полуочищенного продукта. Данный продукт подвергали дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР хроматографии, как описано в примере 3, за исключением того, что проводили градиентное элюирование из 25-35%-ного раствора до получения 21,8 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующий аминокислотный анализ. FAB-MS: MH рассч. 3545,1, обнаружено 3545,3.

Пример 26. Способ получения Ac-[N-Me-Ala¹, Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:44)-NH₂]
Порцию Boc-нонапептидного полимера из примера 20 массой 1,1 г (0,4 ммоль) подвергали синтезу в твердой фазе с применением пептидного синтезатора модели 430А для биосистем, как описано в примере 8. Было проведено 17 циклов за одну стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Nle (462 мг, 2,0 ммоль), Boc-Gln (493 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys(2-Cl-Z) (830 мг, 2,0 ммоль), Boc-Arg(Tos)(856 мг, 2,0 ммоль), Boc-Leu (499 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys(2-Cl-Z)(830 мг, 2,0 ммоль), Boc-Thr(Bzl) (618 мг, 2,0 ммоль), Boc-Tyr(2,6-DCB)(880 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asn (464 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asp(OcHx)(630 мг, 2,0 ммоль), Boc-Thr(Bzl) (618 мг, 2,0 ммоль), Boc-Phe(531 мг, 2,0 ммоль), Boc-Val (435 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль) и Boc-Asp(OcHx)(630 мг, 2,0 ммоль) до получения 2,24 г Boc-гексакозапептидной смолы.

Было проведено два цикла конденсации с использованием порции данного полимера массой 1,1 г (0,2 ммоль) с Boc-Ser(Bzl)(238 мг, 0,8 ммоль) и Boc-N-Me-Ala(163 мг, 0,8 ммоль) при последующей обработке в соответствии со стадиями 1-8 схемы 1 и с применением BOP-Cl (100 мг, 0,2 ммоль), уксусного ангидрида (23 мл, 0,2 ммоль) и DIPEA (140 мл, 0,4 ммоль) в 20 мл DMF за один час. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14 схемы 1 и высушивали под вакуумом до получения 0,95 г.

Пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 245 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 165 мг полуочищенного продукта. Данный продукт подвергали дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что проводили градиентное элюирование 25-35% -ного раствора до получения 33,7 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали результаты анализа соответствующих аминокислот. FAB-MS: MH рассч. 3295,8, обнаружено 3294,5.

Пример 27. Способ получения Ac-[p-F-Phe⁶, Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28] -VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:45)- NH₂]
Бензгидриламиновый полимер (2,49 г, 2,0 ммоль, 100-200 ASTM меш, Bachem) подвергали синтезу в твердой фазе в соответствии со схемой 1, как описано в примере 2. Было проведено 6 циклов за одну общую стадию, каждый из которых проходил с применением Boc-Lys(2-Cl-Z) (3,32 г, 8,0 ммоль), Boc-Lys(2-Cl-Z) (3,32 г, 8,0 ммоль), Boc-Leu (1,85 г, 8,0 ммоль), Boc-Asp(OFm)(823 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asn (1,02 г, 4,4 ммоль) и Boc-Leu (1,05 г, 8,0 ммоль). Полимер высушивали при последующем удалении 0,4 ммолей. Было проведено три цикла за одну стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Tyr(2,6-DCB) (2,52 г, 6,4 ммоль) и Boc-Lys(Fmoc)(1,87 г, 6,4 ммоль) и Boc-Lys (2-Cl-Z)(2,65 г, 6,4 ммоль).

Затем данный полимер был избирательно деблокирован путем обработки в соответствии со стадиями 1-11 схемы 2 и взаимодействия с BOP (1,42 г, 3,2 ммоль) в 1%-ном растворе DIPEA/DMF объемом 20 мл в течение 4,5 ч. Результат анализа на нингидрин по Кайзеру был отрицательным. Полимер промывали в соответствии со стадиями 13-16 схемы 2 и высушивали до получения 6,56 г Boc-нонапептидного полимера.

Порцию данного полимера массой 1,64 г (0,4 ммоль) подвергали синтезу в твердой фазе с применением пептидного синтезатора модели 430А для биосистем, как описано в примере 8. Было проведено 13 циклов конденсации за одну стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Nle (462 мг, 2,0 ммоль), Boc-Gln (493 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys (2-Cl-Z)(830 г, 2,0 ммоль), Boc-Arg(Tos) (856 мг, 2,0 ммоль), Boc-Leu (499 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys (2-Cl-Z)(830 г, 2,0 ммоль), Boc-Thr(Bzl)(618 мг, 2,0 ммоль), Boc-Tyr(2,6-DCB)(880 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asn(464 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asp(OcHx)(630 мг, 2,0 ммоль) и Boc-Thr(Bzl)(618 мг, 2,0 ммоль) до получения 2,56 г Boc-докозапептидного полимера.

Было проведено 6 циклов конденсации с использованием порции данного полимера массой 0,64 г (0,1 ммоль) за один цикл, каждый из которых проводили с применением Boc-p-F-Phe(283 мг, 1,0 ммоль), Boc-Val (218 мг, 1,0 ммоль), Boc-Ala(189 мг, 1,0 ммоль), Boc-Asp(OcHx)(315 мг, 1,0 ммоль), Boc-Ser (Bzl)(295 мг, 1,0 ммоль) и Boc-His(Tos)(818 мг, 2,0 ммоль). Пептидный полимер обрабатывали в соответствии со стадиями 1-8 схемы 1, а затем уксусным ангидридом объемом 0,5 мл в 6%-ном растворе DIPEA/метиленхлорида объемом 20 мл в течение 60 мин. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14 под вакуумом до получения 0,69 г.

Данный пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 224 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 213 мг полуочищенного продукта. Данный продукт подвергали дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что проводили градиентное элюирование 27-37%-ного раствора до получения 70,5 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа аминокислоты. FAB-MS: MH рассч.3365,9, обнаружено 3365,6.

Пример 28. Способ получения Ac-[1-Nal⁶, Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:46)-NH₂]
Было проведено 6 циклов конденсации с использованием порции Boc-докозапептидного полимера из примера 27, массой 1,28 г (0,2 ммоль) как описано в примере 27, за исключением того, что Boc-p-F-Phe при проведении первого цикла заменяли Boc-I-Nal (315 мг, 1,0 ммоль). Пептидный полимер обрабатывали в соответствии со стадиями 1-8 схемы 1 и уксусным ангидридом объемом 0,5 мл в 6%-ном растворе DIPEA/метиленхлорида объемом 20 мл в течение 60 мин. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14 и высушивали под вакуумом до получения 1,41 г.

Пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 3, до получения 305 мг полуочищенного пептида. Данный продукт далее очищали методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что проводили градиентное элюирование из 25-35%-ного раствора до получения аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты аминокислотного анализа. FAB-MS: MH рассч.3398,0, обнаружено 3398,8.

Пример 29. Способ получения Ac-[Glu⁸, p-NH₂- Phe¹⁰, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28] -VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:47)- NH₂]
Порцию Boc-нонапептидного полимера из примера 27 массой 1,64 г (0,4 ммоль) подвергали синтезу в твердой фазе с использованием пептидного синтезатора модели 430А для биосистем, как описано в примере 8. Было проведено 9 циклов за одну стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Nle (462 мг, 2,0 ммоль), Boc-Gln (493 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys(2-Cl-Z) (830 мг, 2,0 ммоль), Boc-Arg(Tos)(856 мг, 2,0 ммоль), Boc-Leu (499 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys(2-Cl-Z)(830 мг, 2,0 ммоль) и Boc-Thr(Bzl) (618 мг, 2,0 ммоль) до получения 2,2 г Boc-октадекапептидного полимера.

Было проведено 10 циклов конденсации с использованием порции данного полимера массой 1,1 г (0,2 ммоль) за одну стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-p-NH(CBZ)-Phe(415 мг, 1,0 ммоль), Boc-Asn (512 мг, 2,2 ммоль), Boc-Glu(Bzl)(675 мг, 2,0 ммоль), Boc-Thr(Bzl) (620 мг, 2,0 ммоль), Boc-Phe(532 мг, 2,0 ммоль), Boc-Val (436 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asp(OcHx)(630 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ser (Bzl)(590 мг, 2,0 ммоль) и Boc-His(Tos)(1,64 г, 4,0 ммоль). Пептидный полимер обрабатывали в соответствии со стадиями 1-8 схемы 1, а затем уксусным ангидридом объемом 0,5 мл в 6% -ном растворе DIPEA/метиленхлорида объемом 20 мл в течение 60 мин. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14 и высушивали под вакуумом до получения 1,45 г.

Данный пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 580 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 400 мг полуочищенного продукта. Данный продукт далее очищали методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что проводили градиентное элюирование 22-32% -ного раствора до получения 60,9 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа аминокислоты. FAB-MS: MH рассч. 3346,8, обнаружено 3346,8.

Пример 30. Способ получения Ac-[Glu⁸, O-Ме- Tyr¹⁰, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28] -VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:48)- NH₂]
Было проведено 10 циклов конденсации Boc-октадекапептидного полимера из примера 29 с применением порции полимера массой 1,1 г (0,2 ммоль) за исключением того, что Boc-p-NH(CBZ)-Phe при проведении первого цикла заменяли Boc-O-Me-Tyr (148 мг, 0,5 ммоль). Пептидный полимер обрабатывали в соответствии со стадиями 1-8 схемы 1 и уксусным ангидридом объемом 0,5 мл в 6% -ном растворе DIPEA/метиленхлорида объемом 20 мл в течение 60 мин. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14 и высушивали под вакуумом с получением 1,45 г.

Пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 555 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, с получением 460 мг полуочищенного прдукта. Данный продукт очищали методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что проводили градиентное элюирование 25-35%-ного раствора до получения 152,9 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа аминокислоты. FAB-MS: MH рассч. 3361,9, обнаружено 3361,7.

Пример 31. Способ получения Ac-[p-F-Phe⁶, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:49)-NH₂]
Порцию Boc-нонапептидного полимера из примера 17, массой 1,2 г (0,2 ммоль) подвергали синтезу в твердой фазе с применением пептидного синтезатора модели 430А для биосистем, как описано в примере 8. Было проведено 13 циклов за одну стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Nle (462 мг, 2,0 ммоль), Boc-Gln (493 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys(2-Cl-Z) (830 мг, 2,0 ммоль), Boc-Arg(Tos)(856 мг, 2,0 ммоль), Boc-Leu (499 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys(2-Cl-Z)(830 мг, 2,0 ммоль) и Boc-Thr(Bzl) (618 мг, 2,0 ммоль), Boc-Tyr(2,6-DCB)(880 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asn (464 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asp(OcHx)(630 мг, 2,0 ммоль) и Boc-Thr(Bzl) (618 мг, 2,0 ммоль) до получения 1,3 г Boc-докозапептидного полимера.

Было проведено 6 циклов конденсации с использованием порции данного полимера массой 0,65 г (0,1 ммоль), как описано в примере 27. Пептидный полимер обрабатывали в соответствии со стадиями 1-8 схемы 1 и уксусным ангидридом объемом 0,5 мл в 6%-ном растворе DIPEA/метиленхлорида объемом 20 мл в течение 60 мин. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14 и высушивали под вакуумом до получения 0,856 г.

Данный пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 550 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 225 мг полуочищенного продукта. Данный продукт подвергали дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что проводили градиентное элюирование из 27-37%-ного раствора до получения аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа аминокислоты. FAB-MS: MH рассч. 3295,7, обнаружено 3296,2.

Пример 32. Способ получения Ac-[1-Nal⁶, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:50)-NH₂]
Было проведено 6 циклов сочетания Boc-докозапептидного полимера массой 0,65 г (0,1 ммоль) из примера 31, как описано в примере 27, за исключением того, что Boc-p-F-Phe при проведении первого цикла заменяли Boc-I-Nal (315 мг, 1,0 ммоль). Пептидный полимер обрабатывали в соответствии со стадиями 1-8 схемы 1 и уксусным ангидридом объемом 0,5 мл в 6%-ном растворе DIPEA/метиленхлорида объемом 20 мл в течение 60 мин. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14 и высушивали под вакуумом до получения 0,801 г.

Данный пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 250 мг полуочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 188 мг полуочищенного продукта. Данный продукт очищали далее методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что проводили градиентное элюирование из 27-37%-ного раствора до получения 28,0 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа аминокислоты. FAB-MS: MH рассч.3327,8, обнаружено 3328,5.

Пример 33. Способ получения Ac-[Ala², Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28 Gly^29,30, Thr³¹]-VIP cyclo [Ac-(SEQ ID N0:51)-NH₂]
Бензгидриламиновый полимер (1,1 г, 0,5 ммоль, 200-400 ASTM меш, Biomega) подвергали синтезу в твердой фазе в соответствии со схемой 1, как описано в примере 2. Было проведено 13 циклов, как описано в примере 24, за исключением того, что Boc-Ala при проведении первого цикла заменяли Boc-Thr(Bzl)(619 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ala при проведении второго цикла заменяли Boc-Gly (350 мг, 2,0 ммоль) и Boc-Ala при проведении третьего цикла заменяли Boc-Gly (350 мг, 2,0 ммоль) до получения 2,03 мг Boc-тридекапептидного полимера.

Порцию данного полимера массой 1,22 г (0,3 ммоль) подвергали синтезу в твердой фазе с использованием пептидного синтезатора модели 430А для биосистем, как описано в примере 8. Было проведено 16 циклов, как описано в примере 24, за исключением того, что Boc-Asp(OcHx) при проведении 11-го цикла заменяли Boc-Glu(Bzl) (675 мг, 2,0 ммоль) до получения 1,95 г Boc-нонакозапептидного полимера.

Было проведено два цикла конденсации с использованием порции данного полимера массой 0,975 г (0,15 ммоль), как указано выше, с Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль) и Boc-His(Tos)(819 мг, 2,0 ммоль) до получения 1,05 г. Данный полимер обрабатывали в соответствии со стадиями 1-8 схемы 1 и уксусным ангидридом объемом 0,5 мл в 6%-ном растворе DIPEA/метиленхлорида объемом 20 мл в течение 60 мин. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14 схемы 1 и высушивали под вакуумом до получения 0,897 г.

Данный пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 270 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации, как описано в примере 3, до получения 150 мг полуочищенного продукта. Данный продукт далее очищали методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что проводили градиентное элюирование 24-34%-ного раствора до получения 28,7 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты аминокислотного анализа. FAB-MS: MH рассч.3547,1, обнаружено 3546,9.

Пример 34. Способ получения Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28 Gly^29,30, Thr³¹]-VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:52)-NH₂]
Было проведено два цикла сочетания порции Boc-нонакозапептидного полимера массой 0,975 г (0,15 ммоль) из примера 33, как описано в примере 33, за исключением того, что Boc-Ala при проведении первого цикла заменяли Boc-Ser(Bzl)(590 мг, 2,0 ммоль) до получения 0,915 мг.

Данный пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 303 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, за исключением того, что линейный градиент составил 25-35% и получали 42,8 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты аминокислотного анализа. FAB-MS: MH рассч.3563,1, обнаружено 3562,6.

Пример 35. Способ получения Ac-[Ala², Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:53)-NH₂]
Порцию Boc-нонапептидного полимера из примера 20, массой 0,27 г (0,1 ммоль) подвергали синтезу в твердой фазе с использованием пептидного синтезатора модели 430А для биосистем как в примере 8. Было проведено 19 циклов за одну стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Nle (462 мг, 2,0 ммоль), Boc-Gln (493 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys(2-Cl-Z) (830 мг, 2,0 ммоль), Boc-Arg(Tos) (856 мг, 2,0 ммоль), Boc-Leu (499 мг, 2,0 ммоль), Boc-Lys(2-Cl-Z)(830 мг, 2,0 ммоль), Boc-Thr(Bzl) (618 мг, 2,0 ммоль), Boc-Tyr(2,6-DCB)(880 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asn (464 мг, 2,0 ммоль), Boc-Glu(Bzl)(675 мг, 2,0 ммоль), Boc-Thr(Bzl) (618 мг, 2,0 ммоль), Boc-Phe(531 мг, 2,0 ммоль), Boc-Val (435 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ala(378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asp(OcHx) (630 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ser(Bzl)(590 мг, 2,0 ммоль), Boc-His(Tos)(818 мг, 2,0 ммоль) до получения 0,57 г Boc-октакозапептидного полимера.

Данный полимер затем обрабатывали в соответствии со стадиями 1-8 схемы 1 и уксусным ангидридом объемом 0,5 мл в 6%-ном растворе DIPEA/метиленхлорида объемом 20 мл в течение 60 мин. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14 и высушивали под вакуумом до получения 0,506 г.

Пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 160 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 100 мг полуочищенного продукта. Данный продукт очищали методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что линейный градиент составил 25-35% и получали 17,1 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты аминокислотного анализа. FAB-MS: MH рассч. 3331,9, обнаружено 3332,0.

Пример 36. Способ получения Ac-[p-NH₂-Phe¹⁰, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:54)-NH₂]
Порцию Boc-нонапептидного полимера из примера 17, массой 0,6 г (0,1 ммоль) подвергали синтезу в твердой фазе с применением пептидного синтезатора модели 430А для биосистем, как описано в примере 8. Было проведено 9 циклов, как описано в примере 23, до получения 0,72 г Boc-октадекапептидного полимера. Был проведен один цикл конденсации данного полимера с Boc-p-NH(CBZ)-Phe(166 мг, 0,4 ммоль) до получения 0,79 г Boc-нонапептидного полимера. Данный полимер подвергали синтезу в твердой фазе с использованием пептидного синтезатора модели 430А для биосистем, как описано в примере 8. Было проведено 9 циклов, как описано в примере 23, до получения 0,72 г Boc-октадекапептидного полимера. Данный полимер подвергали синтезу в твердой фазе с использованием пептидного синтезатора модели 430А для биосистем, как описано в примере 8. Было проведено 9 циклов за одну стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Asn (464 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asp(OcHx) (630 мг, 2,0 ммоль), Boc-Thr(Bzl) (618 мг, 2,0 ммоль), Boc-Phe (531 мг, 2,0 ммоль), Boc-Val (435 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ala (378 мг, 2,0 ммоль), Boc-Asp(OcHx) (630 мг, 2,0 ммоль), Boc-Ser (Bzl) (590 мг, 2,0 ммоль) и Boc-His(Tos) (819 мг, 2,0 ммоль) до получения 0,91 г. Данный полимер обрабатывали в соответствии со стадиями 1-8 схемы 1 и уксусным ангидридом объемом 0,5 мл в 6% -ном растворе DIPEA/метиленхлорида объемом 20 мл в течение 60 мин. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14 и высушивали под вакуумом до получения 0,85 г.

Пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 350 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 138 мг полуочищенного продукта. Данный продукт далее очищали методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что линейный градиент составил 25-35% до получения 25,2 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа аминокислоты. FAB-MS: MH рассч. 3276,8, обнаружено 3276,2.

Пример 37. Способ получения Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, м-OCH₃-Tyr²², Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸] VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:55)-NH₂]
Бензгидриламиновый полимер (0,125 г, 0,1 ммоль, 100-200 ASTM меш, Bachem) подвергали синтезу в твердой фазе в соответствии со схемой 1, как описано в примере 2. Было проведено 9 циклов сочетания за один цикл, каждый из которых проводили с применением Boc-Thr(Bzl)(310 мг, 1,0 ммоль), Boc-Leu (267 мг, 1,0 ммоль), Boc-Val (217 мг, 1,0 ммоль), Boc-Asp(OFm)(212 мг, 0,5 ммоль), Boc-Asn (255 мг, 1,1 ммоль), Boc-Leu (249 мг, 1,0 ммоль), Boc-m-OCH₃-Tyr(Bzl) (80 мг, 0,2 ммоль), Boc-Lys(Fmoc)(234 мг, 0,5 ммоль) и Boc-Lys (2-Cl-Z)(415 мг, 1,0 ммоль).

Затем данный полимер был избирательно деблокирован путем обработки в соответствии со стадиями 1-11 схемы 2 и взаимодействием с BOP (132 мг, 0,3 ммоль) в 1%-ном растворе DIPEA/DMF объемом 10 мл в течение 3,5 ч. Результат анализа на нингидрин по Кайзеру был отрицательным. Полимер промывали в соответствии со стадиями 13-16 схемы 2.

Было проведено 19 циклов за одну стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Ala(189 мг, 1,0 ммоль), Boc-Ala(189 мг, 1,0 ммоль), Boc-Nle (231 мг, 1,0 ммоль), Boc-Gln (270 мг, 1,1 ммоль), Boc-Lys (2-Cl-Z)(415 г, 1,0 ммоль), Boc-Arg(Tos) (428 мг, 1,0 ммоль), Boc-Leu (267 мг, 1,0 ммоль), Boc-Lys (2-Cl-Z)(415 г, 1,0 ммоль), Boc-Thr(Bzl)(310 мг, 1,0 ммоль), Boc-Tyr(2,6-DCB)(220 мг, 0,5 ммоль), Boc-Asn(256 мг, 1,0 ммоль), Boc-Asp(OcHx)(315 мг, 1,0 ммоль), Boc-Thr(Bzl)(310 мг, 1,0 ммоль), Boc-Phe(265 мг, 1,0 ммоль), Boc-Val (217 мг, 1,0 ммоль), Boc-Ala(189 мг, 1,0 ммоль), Boc-Asp(OcHx) (315 мг, 1,0 ммоль), Boc-Ser(Bzl)(295 мг, 1,0 ммоль) и Boc-His(Tos) (409 мг, 1,0 ммоль).

Затем данный полимер обрабатывали в соответствии со стадиями 1-8 схемы 1 и уксусным ангидридом объемом 0,5 мл в 6%-ном растворе DIPEA/метиленхлорида объемом 10 мл в течение 60 мин. Полимер промывали в соответствии со стадиями 10-14 схемы 1 и высушивали под вакуумом до получения 0,814 г.

Данный пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 265 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 150 мг полуочищенного продукта. Данный продукт очищали методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что линейный градиент составил 23-33% до получения 8,1 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты аминокислотного анализа. FAB-MS: MH рассч. 3307,8, обнаружено 3306,8.

Пример 38. Способ получения Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, м-F-L-Tyr²², Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸] VIP цикло ( Lys²¹-->Asp²⁵ [Ac-(SEQ ID N0:56)-NH₂]
Бензгидриламиновый полимер (0,125 г, 0,1 ммоль, 100-200 ASTM меш, Bachem) подвергали синтезу в твердой фазе в соответствии со схемой 1, как описано в примере 2. Было проведено 28 циклов, как описано в примере 37, за исключением того, что Boc-m-OCH₃-Tyr(Bzl) при проведении седьмого цикла заменяли Boc-m-F-DL-Tyr(Bzl)(78 мг, 0,2 ммоль) до получения 0,754 г.

Пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 254 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 114 мг полуочищенного продукта. Данный продукт далее очищали методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что линейный градиент составил 27-37% до получения 15,1 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа аминокислоты. FAB-MS: MH рассч. 3295,7, обнаружено 3295,5.

Пример 39. Способ получения Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, м-OCH₃-Tyr²², Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28] VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:57)-NH₂]
Бензгидриламиновый полимер (0,125 г, 0,1 ммоль, 100-200 ASTM меш, Bachem) подвергали синтезу в твердой фазе в соответствии со схемой 1, как описано в примере 2. Было проведено 28 циклов сочетания, как описано в примере 37, за исключением того, что Boc-Thr(Bzl) при проведении первого цикла заменяли Boc-Lys (2-Cl-Z)(415 г, 1,0 ммоль), Boc-Leu при проведении второго цикла заменяли Boc-Lys (2-Cl-Z)(415 г, 1,0 ммоль), Boc-Val при проведении третьего цикла заменяли Boc-Leu (268 г, 1,0 ммоль) и Boc-Asp(OcHx) при проведении двадцать первого цикла заменяли Boc-Glu(О-Bzl)(337 мг, 1,0 ммоль) до получения 0,90 г.

Пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 270 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 155 мг полуочищенного продукта. Данный продукт подвергали дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что линейный градиент составил 25-35% до получения аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа аминокислоты. FAB-MS: MH рассч. 3377,9, обнаружено 3377,9.

Пример 40. Способ получения Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, м-F-L-Tyr²², Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28] VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:58)-NH₂]
Бензгидриламиновый полимер (125 мг, 0,1 ммоль, 100-200 ASTM меш, Bachem) подвергали синтезу в твердой фазе в соответствии со схемой 1, как описано в примере 2. Было проведено 28 циклов, как описано в примере 39, за исключением того, что Boc-m-OCH₃-Tyr(Bzl) при проведении седьмого цикла заменяли Boc-m-F-DL-Tyr(Bzl)(78 мг, 0,2 ммоль) до получения 0,83 г продукта.

Данный пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 240 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 100 мг полуочищенного продукта. Данный продукт подвергали дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что линейный градиент составил 25-35% до получения 37,2 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа аминокислоты. FAB-MS: MH рассч. 3365,9, обнаружено 3365,8.

Пример 41. Способ получения Ac-[Ala⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Ala²⁴, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28] VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:59)-NH₂]
Бензгидриламиновый полимер (0,125 г, 0,1 ммоль, 100-200 ASTM меш, Bachem) подвергали синтезу в твердой фазе в соответствии со схемой 1, как описано в примере 2. Было проведено 28 циклов, как описано в примере 39, за исключением того, что Boc-Asn при проведении пятого цикла заменяли Boc-Ala(189 г, 1,0 ммоль), Boc-m-OCH₃-Tyr(Bzl) при проведении седьмого цикла заменяли Boc-Tyr(2,6-DCB)(440 мг, 1,0 ммоль) и Boc-Glu(О-Bzl) при проведении двадцать первого цикла заменяли Boc-Ala (189 г, 1,0 ммоль) до получения 0,85 г.

Пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 255 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 112 мг полуочищенного продукта. Данный продукт подвергали дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что линейный градиент составил 25-35% до получения 12,0 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа аминокислоты. FAB-MS: MH рассч. 3246,8, обнаружено 3246,7.

Пример 42. Способ получения Ac-[Glu⁸, Lys¹², Ala^16,17,19, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28] VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:60)-NH₂]
Бензгидриламиновый полимер (0,125 г, 0,1 ммоль, 100-200 ASTM меш, Bachem) подвергали синтезу в твердой фазе в соответствии со схемой 1, как описано в примере 2. Было проведено 28 циклов сочетания, как описано в примере 41, за исключением того, что Boc-Ala при проведении пятого цикла заменяли Boc-Asn(256 г, 1,1 ммоль), Boc-Nle при проведении двенадцатого цикла заменяли Boc-Ala(189 г, 1,0 ммоль), Boc-Gln при проведении тринадцатого цикла заменяли Boc-Ala (189 г, 1,0 ммоль) и Boc-Ala при проведении двадцать первого цикла заменяли Boc-Glu(ОBzl)(337 мг, 1,0 ммоль) до получения 0,80 г.

Пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 254 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 115 мг полуочищенного продукта. Данный продукт далее очищали методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что линейный градиент составил 20-30% до получения 32,1 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа аминокислоты. FAB-MS: MH рассч. 3248,7, обнаружено 3248,3.

Пример 43. Способ получения Ac-[Ala⁸, Lys¹², Ala¹⁶, Nle¹⁷, Ala¹⁹, Ala²⁴, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:61)-NH₂]
Бензгидриламиновый полимер (0,125 г, 0,1 ммоль, 100-200 ASTM меш, Bachem) подвергали синтезу в твердой фазе в соответствии со схемой 1, как описано в примере 2. Было проведено 28 циклов сочетания, как описано в примере 41, за исключением того, что Boc-Gln при проведении тринадцатого цикла заменяли Boc-Ala(189 г, 1,0 ммоль) до получения 0,93 г.

Данный пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 250 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 100 мг полуочищенного продукта. Данный продукт подвергали дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что линейный градиент составил 27-37% до получения 23,6 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа аминокислоты. FAB-MS: MH рассч. 3189,8, обнаружено 3189,9.

Пример 44. Способ получения Ac-[Ala⁸, Lys¹², Ala^16,17,19, Ala²⁴, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:62)-NH₂]
Бензгидриламиновый полимер (0,125 г, 0,1 ммоль, 100-200 ASTM меш, Bachem) подвергали синтезу в твердой фазе в соответствии со схемой 1, как описано в примере 2. Было проведено 28 циклов сочетания, как описано в примере 43, за исключением того, что Boc-Nle при проведении двенадцатого цикла заменяли Boc-Ala(189 г, 1,0 ммоль) до получения 0,762.

Данный пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 240 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 150 мг полуочищенного продукта. Данное вещество подвергали дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что линейный градиент составил 22-32% до получения 55,3 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты аминокислотного анализа. FAB-MS: MH рассч. 3147,7, обнаружено 3148,0.

Пример 45. Способ получения Ac-[Glu⁸, Lys¹², Ala¹⁶, Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28] VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:63)-NH₂]
Бензгидриламиновый полимер (0,125 г, 0,1 ммоль, 100-200 ASTM меш, Bachem) подвергали синтезу в твердой фазе в соответствии со схемой 1, как описано в примере 2. Было проведено 28 циклов сочетания, как описано в примере 42, за исключением того, что Boc-Ala при проведении двенадцатого цикла был замещен Boc-Nle(231 г, 1,0 ммоль) до получения 0,775 г.

Пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 203 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 100 мг полуочищенного продукта. Данный продукт очищали далее методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что линейный градиент составил 27-37% до получения 40,0 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты аминокислотного анализа. FAB-MS: MH рассч. 3290,8, обнаружено 3290,5.

Пример 46. Способ получения Ac-[Glu⁸, Lys¹², Ala^16,17,19, Ala²⁴, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:64)-NH₂]
Бензгидриламиновый полимер (0,125 г, 0,1 ммоль, 100-200 ASTM меш, Bachem) подвергали синтезу в твердой фазе в соответствии со схемой 1, как описано в примере 2. Было проведено 28 циклов сочетания, как описано в примере 43, за исключением того, что Boc-Ala при проведении двадцать первого цикла заменяли Boc-Glu(OBzl) (337 г, 1,0 ммоль) до получения 0,837 г.

Данный пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 178 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 126 мг полуочищенного продукта. Данный продукт подвергали дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что линейный градиент составил 20-30% до получения 24,9 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты анализа аминокислоты. FAB-MS: MH рассч. 3205,7, обнаружено 3205,2.

Пример 47. Способ получения Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸, Gly^29,30, Thr³¹]-VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:65)-NH₂]
Бензгидриламиновый полимер (0,125 г, 0,1 ммоль, 100-200 ASTM меш, Bachem) подвергали синтезу в твердой фазе в соответствии со схемой 1, как описано в примере 2. Было проведено три цикла за одну стадию, каждый из которых проводили с применением Boc-Thr(Bzl)(310 мг, 1,0 ммоль), Boc-Gly(175 мг, 1,0 ммоль) и Boc-Gly(175 мг, 1,0 ммоль). Было проведено 28 циклов, как описано в примере 37, за исключением того, что Boc-m-OCH₃-Tyr(Bzl) при проведении седьмого цикла заменяли Boc-Tyr(2,6-DCB)(440 мг, 1,0 ммоль) и Boc-Asp(OcHx) при проведении двадцать первого цикла заменяли Boc-Glu(O-Bzl)(337 мг, 1,0 ммоль) до получения 0,895 г.

Пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 440 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 120 мг полуочищенного продукта. Данный продукт подвергали дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что линейный градиент составил 25-35% до получения 27,7 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты аминокислотного анализа. FAB-MS: MH рассч. 3506,9, обнаружено 3205,8.

Пример 48. Способ получения Ac-[p-F-Phe⁶, Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸, Gly^29,30, Thr³¹]-VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0: 66)-NH₂]
Бензгидриламиновый полимер (0,125 г, 0,1 ммоль, 100-200 ASTM меш, Bachem) подвергали синтезу в твердой фазе в соответствии со схемой 1, как описано в примере 2. Был проведен 31 цикл, как описано в примере 47, за исключением того, что Boc-Ala при проведении тринадцатого цикла заменяли Boc-Val(217 г, 1,0 ммоль) и Boc-Phe при проведении двадцать шестого цикла заменяли Boc-p-F-Phe(142 г, 0,5 ммоль) до получения 0,754 г продукта.

Данный пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 280 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 152 мг полуочищенного продукта. Данный продукт подвергали дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что линейный градиент составил 27-38% до получения 53,4 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты аминокислотного анализа. FAB-MS: MH рассч. 3553,0, обнаружено 3552,2.

Пример 49. Способ получения Ac-[Ala², Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Gly^29,30, Thr³¹] -VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0: 67)-NH₂]
Бензгидриламиновый полимер (0,125 г, 0,1 ммоль, 100-200 ASTM меш, Bachem) подвергали синтезу в твердой фазе в соответствии со схемой 1, как описано в примере 2. Был проведен 31 цикл, как описано в примере 47, за исключением того, что Boc-Thr(Bzl) при проведении четвертого цикла заменяли Boc-Lys (2-Cl-Z)(414 г, 1,0 ммоль), Boc-Leu при проведении пятого цикла заменяли Boc-Lys (2-Cl-Z)(414 г, 1,0 ммоль), Boc-Val при проведении шестого цикла заменяли Boc-Leu (249 г, 1,0 ммоль), Boc-Ala при проведении тринадцатого цикла заменяли Boc-Val(217 г, 1,0 ммоль) и Boc-Ser(Bzl) при проведении тринадцатого цикла заменяли Boc-Ala(189 мг, 1,0 ммоль) до получения 0,838 г.

Данный пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 370 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 196 мг полуочищенного продукта. Данный продукт подвергали дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что линейный градиент составил 23-33% до получения 48,4 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты аминокислотного анализа. FAB-MS: MH рассч. 3575,1, обнаружено 3574,0.

Пример 50. Способ получения Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Gly^29,30, Thr³¹] -VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0: 68)-NH₂]
Бензгидриламиновый полимер (0,125 г, 0,1 ммоль, 100-200 ASTM меш, Bachem) подвергали синтезу в твердой фазе в соответствии со схемой 1, как описано в примере 2. Был проведен 31 цикл, как описано в примере 49, за исключением того, что Boc-Ala при проведении тридцатого цикла заменяли Boc-Ser(Bzl)(295 г, 1,0 ммоль) до получения 0,913 г.

Данный пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 378 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 240 мг полуочищенного продукта. Данный продукт подвергали дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что линейный градиент составил 25-35% до получения 28,8 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты аминокислотного анализа. FAB-MS: MH рассч. 3591,1, обнаружено 3590,3.

Пример 51. Способ получения Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Ala^29-31]-VIP цикло [Ac-(SEQ ID N0:69)-NH₂]
Бензгидриламиновый полимер (0,125 г, 0,1 ммоль, 100-200 ASTM меш, Bachem) подвергали синтезу в твердой фазе в соответствии со схемой 1, как описано в примере 2. Был проведен 31 цикл, как описано в примере 47, за исключением того, что Boc-Thr(Bzl) при проведении первого цикла заменяли Boc-Ala(189 мг, 1,0 ммоль), Boc-Gly при проведении второго цикла заменяли Boc-Ala(189 мг, 1,0 ммоль), Boc-Gly при проведении третьего цикла заменяли Boc-Ala(189 мг, 1,0 ммоль), Boc-Thr(Bzl) при проведении четвертого цикла заменяли Boc-Lys (2-Cl-Z)(414 г, 1,0 ммоль), Boc-Leu при проведении пятого цикла заменяли Boc-Lys (2-Cl-Z)(414 г, 1,0 ммоль), Boc-Val при проведении шестого цикла заменяли Boc-Leu (249 г, 1,0 ммоль) и Boc-Glu(OBzl) при проведении двадцать четвертого цикла заменяли Boc-Asp(OcHx)(315 мг, 1,0 ммоль) до получения 0,844 г.

Данный пептидный полимер деблокировали, как описано в примере 7, до получения 360 мг неочищенного пептида. Пептид очищали методом фильтрации с применением геля, как описано в примере 3, до получения 115 мг полуочищенного продукта. Данный продукт подвергали дальнейшей очистке методом препаративной ЖХВР, как описано в примере 3, за исключением того, что линейный градиент составил 24-34% до получения 34,7 мг аморфного порошка белого цвета. Вещество гомогенизировали методом ЖХВР и получали соответствующие результаты аминокислотного анализа. FAB-MS: MH рассч. 3547,1, обнаружено 3546,0.

Пример 52. Релаксационное действие аналогов VIP на трахею.

Релаксационное действие аналогов VIP на трахею исследовали с применением модели, имитирующей трахею морских свинок. [Wasserman M.A. et al. in Vasoactive Intestinal Peptide, S.I. Said, ed. Raven Press, N.Y. 1982, pp.177-184] Все ткани брали от морских свинок вида альбинос мужского пола массой 400-600 г, наркотизированных уретаном (2 г/кг, например). После вскрытия вынимали трахею и делили ее на четыре кольцеобразных сегмента (длиной по 3 мм). Каждый сегмент прикрепляли к проволоке из нержавеющей стали 30 калибра, помещали в подвешенном состоянии в баню с оболочкой из ткани объемом 10 мл и прикрепляли с помощью 4-0 шелковой нити к датчику Grass смещений силы (модели FT03C), Grass Instruments Co. Quincy, MA) для изометрической записи натяжения. Гладкую мышцу помещали в баню с модифицированным раствором Krebs следующего состава: NaCl, 120 ммоль; KCl, 4,7 ммоль; CaCl₂, 2,5 ммоль; MgSO₄·7H₂O, 1,2 ммоль; NaHCO₃, 25 ммоль; K₂HPO₄, одноосновный, 1,2 ммоль; и декстроза, 10 ммоль. Температуру в бане с оболочкой из ткани поддерживали равной 37^oC при наличии пузырей 95% O₂ и 5% CO₂. Показания снимали с применением 8-канальных и 4-канальных датчиков Hewlett-Packard (соответствующих 7702B и 7754A моделей) (Hewlett-Packard, Paramus, NJ). Сегменты трахеи подвергали воздействию остаточного натяжения, равного действию нагрузки массой 1,5 г, которое было определено, как оптимальное или близкое к оптимальному при проведении предварительных опытов. Часто повторяемая регулировка натяжения была необходима при последующем 60-минутном периоде стабилизации. Ткани прополаскивали через 15-минутные интервалы.

Для каждого типа ткани была получена кривая изменения кумулятивной концентрации путем последовательного увеличения концентрации VIP и аналогов VIP в используемой бане в соответствии с методом VanRossum [Arch.Int.Pharmacodyn. 143, 299-330 (1963)] Для одной ткани получали только одну кривую изменения кумулятивной дозы. Для уменьшения расхождения показаний при исследовании тканей различных типов полученные результаты представляли в виде максимального значения, выраженного в процентах (10^-6 100%), полученного при добавлении VIP в конце проведения каждого опыта при исследовании изменения концентраций. Результаты исследования трех типов тканей суммировали, а значения ED₅₀ определяли путем линейной регрессии.

Результаты, представленные в табл.5, показывают релаксационное действие на трахею аналогов VIP по сравнению с действием нативного VIP.

Пример 53. Бронхолитическое действие аналогов VIP.

Бронхолитическое действие VIP и аналогов VIP на морских свинок в естественных условиях было оценено путем введения их через трахею методом инстилляции. Для проведения оценки данным способом использовали мужские особи морских свинок (Hartley strain, Charles River) массой 400-600 г. Анестезию животных проводили интраперитониальным способом с применением уретана (2 г/кг), а полиэтиленовый катетер для внутривенного вливания лекарственных средств вводили в яремную вену.

Животные были подвергнуты вскрытию трахеи с введением в ее просвет специальной трубки, а дозировочные растворы дистиллированной воды или растворенного в воде вещества для испытаний вводили в трахею пипеткой на расстоянии, примерно равном трем четвертым расстояния до киля трахеи. Концентрацию дозировочного раствора регулировали до достижения постоянного объема, равного 100 мл. Животных оставляли в положении супинации на 1 мин для поступления лекарства в легкое. Через минуту самопроизвольное дыхание останавливали путем внутривенного вливания хлорида сукцинилхолина (1,2 мг/кг), а вентиляцию легких животного проводили с использованием небольшого респиратора для искусственного дыхания животного Harvard Model 680 со скоростью 40 вдохов/мин при систолическом объеме крови 4,0 см³. Затем в организм животного вводили максимальную анаболическую дозу гистамина (50 мг/кг, например) в качестве провокационной пробы, а показания трахеального давления (см воды) снимали с применением датчика давления Statham (P 32 AA).

Результаты изменения трахеального давления усредняли после проведения по крайней мере трех контрольных опытов на трех подопытных животных и рассчитывали процент ингибирования. Относительную активность веществ, введенных методом инстилляции, определяли путем введения различных доз испытуемых веществ и расчета средней эффективной дозы (ED₅₀). Значение ED₅₀ определяли по кривой зависимости log введенной дозы ответная реакция, полученной путем анализа по крайней мере трех доз, что вызывало от 10 до 90% ингибирования. Коэффициенты корреляции для регрессивной линии, соответствующей каждому веществу, составляли всегда более 0,95.

Для определения времени ингибирования, соответствующего действию различных веществ, изменяли промежуток времени между введением вещества и взятием провокационной пробы с применением гистамина. Период действия лекарственного средства рассчитывали, как промежуток времени, необходимый для уменьшения ингибирующего действия до 40%
В табл. 6 представлены суммарные результаты исследований бронхолитического действия аналогов VIP по сравнению с действием нативного VIP в естественных условиях.

Формула изобретения

1. Циклические пептиды общей формулы I

где R₁ His, N-CH₃-Ala;
R₂ Ala, Ser;
R₆ группа
где Q (низший) алкиларил, причем арил может быть незамещенным или замещенным по кольцу одним или несколькими заместителями, выбранными из OH, OCH₃, F, Cl, I, CH₃, GF₃, NO₂, NH₂, N(CH₃)₂, NHCOCH₃, NHCOC₆H₅ или C(CH₃)₃;
R₈ Asp, Ala, Gln;
R₁₀ Tyr, незамещенный или замещенный низшей алкоксигруппой или R₆, где Q (низший) алкилфенил, незамещенный или замещенный по кольцу одним или несколькими заместителями, выбранными из OH, OCH₃, F, Cl, I, CH₃, CF₃, NO₂, NH₂, N(CH₃)₂, NHCOCH₃ NHCOC₆H₅ или C(CH₃)₃;
R₁₂ Arg, Lys или Orn;
R₁₆ Ala или Gln;
R₁₇ Nle или Ala;
R₁₉ Ala или Val;
R₂₂ Tyr или R₆, где Q (низший) алкилфенил, незамещенный или замещенный по кольцу одним или несколькими заместителями, выбранными из OH, OCH₃, F, Cl, I, CH₃, CF₃, NO₂, NH₂, N(CH₃)₂, NHCOCH₃, NHCOC₆H₅ или C(CH₃)₃;
R₂₄ Ala или Asn;
R₂₆ IIe, Val, Leu;
R₂₇ Lys или Leu;
R₂₈ Asn, Thr, Lys;
X водород или ацил;
Y NH₂ или группа R₂₉-R₃₀-R₃₁Z, где Z NH₂, R₂₉ Gly или Ala;
R₃₀ Gly или Ala;
R₃₁ Met, Cys(Asm), Ala, Thr,
или их фармацевтически приемлемые соли.

2. Пептид по п.1, в котором Q (С₁ С₂)алкиларил.

3. Пептид по п. 2, в котором Q (C₁ C₂)алкилфенил, в котором фенильное кольцо является незамещенным или замещенным одним или несколькими заместителями, выбранными из OH, OCH₃, F, Cl, I, CH₃, NO₂, NH₂, N(CH₃)₂, NHCOCH₃, NHCOC₆H₅ или C(CH₃)₃.

4. Пептид по п.2, в котором Q (С₁ С₂)алкилнафталин.

5. Пептид по п.1, в котором R₂₆ Val и R₂₈ - Thr[X-(SEQIDN:II)-Y]
6. Пептид по п.1, в котором R₁₇ Nle, R₂₆ Val и R₂₈ Thr [X-(SEQIDN:12)-Y]
7. Пептид по п.6, представляющий собой Ас-(Clu⁸, Orn¹², Nle¹⁷, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸)-VIP цикло (Lys²¹----Asp²⁵)[Ac-(SEQIDN31)-NH₂]
8. Пептид по п.6, в котором R₁₂ Lys, R₁₇ - Nle, R₂₆ Val и R₂₈ Thr [X-(SEQIDN14)-Y]
9. Пептид по п.8, представляющий собой Ас-(Lys¹², Nle¹⁷, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸)-VIP цикло(Lys²¹---Asp²⁵)[Ac-(SEQIDN:28)- NH₂]
10. Пептид по п. 8, представляющий собой Ас-(р-F-Phe⁶, Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸, Gly^29,30, Thr³¹)-VIP цикло(Lys²¹ ----Asp²⁵)[Ac-(SEQIDN:66)-NH₂]
11. Пептид по п.8, в котором R₁₂ Lys, R₁₇ - Nle, R¹⁹ Ala, R₂₆ Val, R₂₈ - Thr[X-(SEQIDN:15)-Y]
12. Пептид по п.11, представляющий собой Ас-(Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸)-VIP цикло (Lys²¹----Asp²⁵)[Ac- (SEQIDN:29)-NH₂).

13. Пептид по п. 11, представляющий собой Ас-(р-F-Phe⁶, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸, Gly^29,30, Cys)Asm³¹ (-VIP)1-31(-NH₂ цикло (Lys²¹---Asp²⁵)[Ac-(SEQIDN:32)-NH₂]
14. Пептид по п.11, представляющий собой Ас-(Ala², Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸)-VIP цикло)Lys²¹----Asp²⁵)[Ac-(SEQIDN33)-NH₂]

15. Пептид по п.11, представляющий собой Ас-(N-Me-Ala¹, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸)-VIP цикло (Lys²¹----Asp²⁵)[Ac -(SEQIDN: 34)-NH₂]
16. Пептид по п.11, представляющий собой Ас-(O-Me-Tyr¹⁰, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸)-VIP цикло (Lys²¹---Asp²⁵)[Ac-(SEQIDN: 41)-NH₂]
17. Пептид по п. 11, представляющий собой Ас-(р-F-Phe⁶, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸)-VIP цикло (Lys²¹----Asp²⁵) [Ac-(SEQIDN: 49)-NH₂]
18. Пептид по п.11, представляющий собой Ас-(1-Nal⁶-Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸)-VIP цикло (Lys²¹---Asp²⁵) [Ac-(SEQIDN: 50)-NH₂]

19. Пептид по п.11, представляющий собой Ас-(p-NH₂ -Phe¹⁰-Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸)-VIP цикло(Lys²¹ ---Asp²⁵)[Ac-(SEQIDN: 54)-NH₂]
20. Пептид по п.11, представляющий собой Ас-(Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, m-OCH₃-Tyr²², Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸)-VIP цикло(Lys²¹---Asp²⁵) [Ac-(SEQIDN: 55)-NH₂]
21. Пептид по п.11, представляющий собой Ас-(Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, m-F-L-Tyr²², Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸)-VIP цикло(Lys²¹---Asp²⁵)[Ac-(SEQIDN: 56)-NH₂]
22. Пептид по п.11, представляющий собой Ас-(Clu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸, Gly^29,30, Thr³¹)-VIP цикло(Lys²¹---Asp²⁵) [Ac-(SEQIDN:65)-NH₂]
23. Пептид по п.1, в котором R₂₆ Leu и R₂⁷, R₂⁸ Lys[X-(SEQIDN:16)-Y]
24. Пептид по п.23, в котором R¹² Lys, R₁₇ Ala, R₁₉ Ala и R₂₆ Leu и R₂₇, R₂₈ Lys[X-(SEQIDN:17)-Y]
25. Пептид по п.24, представляющий собой Ас-(Glu, Lys¹², Ala^16,17,19, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28)-VIP цикло (Lys²¹----Asp²⁵) [Ac-(SEQIDN: 60)-NH₂]
26. Пептид по п.24, представляющий собой Ас-(Ala⁸, Lys¹², Ala^16,17,19,
Ala²⁴, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28)-VIP цикло (Lys²¹----Asp²⁵) [Ac-(SEQIDN:62)-NH₂]
27. Пептид по п.24, представляющий собой Ac-(Clu⁸, Lys¹², Ala^16,17,19, Ala²⁴, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28) -VIP цикло( Lys²¹-----Asp²⁵) [Ac-(SEQIDN:64)-NH₂]
28. Пептид по п. 23, в котором R₁₂ Lys, R₁₇ Nle, R₂₆ Leu и R₂₇, R₂₈ Lys[X-( SEQIDN:18)-Y]
29. Пептид по п.28, представляющий собой Ac-(Ala², Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Gly^29,30, Thr³¹)-VIP цикло (Lys²¹----Asp²⁵) [Ac-(SEQIDN:67)-NH₂]
30. Пептид по п.22, представляющий собой Ac-(Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Gly^29-30, Thr³¹)-VIP цикло (Lys²¹----Asp²⁵) [Ac-(SEQIDN:68)-NH₂]
31. Пептид по п.28, в котором R₁₂ Lys, R₁₇ Nle, R₁₉ Ala, R₂₆ Leu и R₂₇, R₂₈ Lys[X-(SEQIDN:19)-Y]
32. Пептид по п.31, в котором R₁₂ Lys, R₁₆ Gln, R₁₇ Nle, R₁₉ Ala, R₂₆ - Leu и R₂₇, R₂₈ представляют собой Lys[X-(SEQIDN:70)-Y).

33. Пептид по п. 32, в котором R₂ Ser, R₁₂ Lys, R₁₆ Gln, R₁₇ Nle, R₁₉ Ala, R₂₆ Leu и R₂₇, R₂₈ - Lys[X-(SEQIDN:71)-Y]
34. Пептид по п.33, представляющий собой Ac-(Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28)VIP цикло (Lys²¹----Asp²⁵)[Ac-(SEQIN:38)-NH₂]

35. Пептид по п.33, представляющий собой Ac-(N-Me-Ala¹, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28)- VIP цикло( Lys²¹----Asp²⁵)[Ac-(SEQIDN: 39)-NH₂]
36. Пептид по п.33, представляющий собой Ac-(Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28)-VIP цикло (Lys²¹----Asp²⁵)[Ac-(SEQN: 40)- NH₂]
37. Пептид по п.33, представляющий собой Ac-(Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Ala^29-31)-VIP цикло (Lys²¹----Asp²⁵)[Ac-(SEQIDN: 42)-NH₂]
38. Пептид по п. 33, представляющий собой Ac-(N-Me-Ala¹, Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28)-VIP цикло (Lys²¹----Asp²⁵) [Ac-(SEQIDN:44)-NH₂]
39. Пептид по п. 33, представляющий собой Ac-(p-F-Phe⁶, Clu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28)-VIP цикло (Lys²¹----Asp²⁵/ [Ac-(SEQIDN:45)-NH₂]
40. Пептид по п.39, представляющий собой Ac-(1-Nal⁶, Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹ Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28)-VIP цикло (Lys²¹----Asp²⁵/[Ac-(SEQIDN: 46)-NH₂]
41. Пептид по п.33, представляющий собой Ac(Glu⁸, p-NH₂-Phe¹⁰, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28)-VIR цикло (Lys²¹---Asp²⁵)[Ac-(SEQIDN: 47)-NH₂]
42. Пептид по п.33, представляющий собой Ac-(Glu⁸, O-Me-Tyr¹⁰, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28)-VIP цикло(Lys²¹----Asp²⁵) [Ac-(SEQIDN: 48)-NH₂]
43. Пептид по п.33, представляющий собой Ac-(Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Gly^29,30, Thr³¹) VIP цикло (Lys²¹----Asp²⁵) [Ac-(SEQIDN:52)-NH₂]
44. Пептид по п.33, представляющий собой Ac-(Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, m-OCH₂-Tyr²², Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28)-VIP цикло (Lys²¹---Asp²⁵)[Ac-(SEQIDN: 57)- NH₂]
45. Пептид по п.33, представляющий собой Ac-(Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, m-F-L-Tyr²², Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28)-VIP цикло (Lys²¹----Asp²⁵)[Ac-(SEQIDN: 58)-NH₂]
46. Пептид по п.33, представляющий собой Ac-(Ala⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Ala²⁴, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28)-VIP цикло (Lys²¹----Asp²⁵)[Ac-(SEQIDN: 59) -NH₂]
47. Пептид по п.33, представляющий собой Ac-(Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Ala²⁴, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Ala^29-31)-VIP цикло( Lys²¹---Asp²⁵)[Ac-(SEQIDN: 69)-NH₂]
48. Пептид по п. 32, в котором R₂ Ala, R¹² Lys, R₁₀ Gln, R₁₇ Nle, R₁₉ Ala, R₂₆ Leu, R₂₇, R₂₈ - Lys[X-(SEQIDN:72)-Y]
49. Пептид по п.42, представляющий собой Ac-(Ala², Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Ala^29-31)-VIP цикло (Lys²¹---Asp²⁵)[Ac-(SEQIDN:43)-NH₂]
50. Пептид по п. 49, представляющий собой Ac-(Ala², Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Gly^29,30, Thr³¹)-VIP цикло(Lys²¹---Asp²⁵)[Ac-(SEQIDN:51)-NH₂]
51. Пептид по п.49, представляющий собой Ac-(Ala², Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28)VIP цикло( Lys²¹----Asp²⁵)[Ac-(SEQIDN: 53)-NH₂]
52. Пептид по п.31, в котором R₁₂ Lys, R₁₆ Ala, R₁₇ Nle, R₁₉ Ala, R₂₆ - Leu и R₂₇, R₂₈ Lys[X-(SEQIDN:73)-Y]
53. Пептид по п.52, представляющий собой Ac-(Ala⁸, Lys¹², Ala¹⁶, Nle¹⁷, Ala¹⁹ Ala²⁴, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28)-VIP цикло (Lys²¹---Asp²⁵)[Ac-(SEQIDN: 61)-NH₂]
54. Пептид по п.52, представляющий собой Ac-(Glu⁸, Lys¹², Ala¹⁶, Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28)-VIP цикло (Lys²¹----Asp²⁵)[Ac-(SEQIDN: 63)-NH₂]
55. Циклический пептид Ac-(Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Gly^29,30, Thr³¹)-VIP цикло (Lys²¹---Asp²⁵) [Ac-(SEQIDN:52)-NH₂] отличающийся тем, что он обладает терапевтической активностью.

56. Пептид Ac-(Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Gly^29,30, Thr³¹)-VIP цикло (Lys²¹---Asp²⁵)[Ac-(SEQIDN:52)-NH₂] отличающийся тем, что он обладает бронхолитической активностью.

57. Способ получения циклического пептида общей формулы I

где R₁ His, N-CH₃-Ala;
R₂ Ala, Ser;
R₆-группа где Q (низший)алкиларил, причем арил может быть незамещенным или замещенным по кольцу одним или несколькими заместителями, выбранными из OH, OC₃, F, Cl, I, CH₃, GF₃, NO₂, NH₂, N(CH₃)₂, NHCOCH₃, NHCOC₆H₅ или C(CH₃)₃;
R₈ Asp, Ala, Glu;
R₁₀ Tyr, незамещенный или замещенный низшей алкоксигруппой или R₆, где Q (низший)алкилфенил, незамещенный или замещенный по кольцу одним или несколькими заместителями, выбранными из OH, OCH₃, F, Cl, I, CH₃, CF₃, NO₂, NH₂, N(CH₃)₂ NHCOCH₃, NHCOC₆H₅ или C(CH₃)₃;
R₁₂ Arg, Lys или Orn;
R₁₆ Ala или Gln; R₁₇ Nle или Ala;
R₁₉ Ala или Val; R₂₂ Tyr или R₆, где Q (низший)алкилфенил, незамещенный или замещенный по кольцу одним или несколькими заместителями, выбранными из OH, OCH₃, F, Cl, I, CH₃, NO₂, NH₂, N(CH₃)₂, NHCOCH₃, NHCOC₆H₅ или C(CH₃)₃;
R₂₄ Ala или Asn;
R₂₆ Ile, Val или Leu;
R₂₇ Lys или Leu;
R₂₈ Asn, Thr, Lys;
X водород или ацил;
Y NH₂ или группа R₂₉-R₃₀-R₃₁-Z, где Z NH₂, R₂₉ Gly или Ala, R₃₀ Gly или Ala, R₃₁ Met, Cys(Asm), Ala, Thr,
или их фармацевтически приемлемых солей, отличающийся тем, что к полимерному носителю присоединяют С-концевую N-защищенную аминокислоту, деблокируют и присоединяют по аминогруппе N-защищенные аминокислоты в порядке, указанном в формуле I, деблокируя каждый раз очередную присоединенную к пептидной цепи аминокислоту, от полученного пептидилполимера отщепляют защитные группы для получения аминогруппы со свободной боковой цепью в соответствующих положениях, необходимых для последующей циклизации, и образования циклической ковалентной связи между этими группами, отщепляют оставшиеся защитные группы и полимер-носитель путем обработки соответствующим реагентом и, при необходимости, в присутствии таких добавок, как акцепторы катионов.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17, Рисунок 18, Рисунок 19, Рисунок 20, Рисунок 21, Рисунок 22