Поливалентная сыворотка против чумы, парвовирусного энтерита и аденовирусных инфекций плотоядных "витакан-с" и поливалентный иммуноглобулин против чумы, парвовирусного энтерита и аденовирусных инфекций плотоядных "витакан"

 

Использование: биотехнология, ветеринарная вирусология, профилактические препараты против чумы, парвовиручного энтерита и аденовирусных инфекций плотоядных, в частности собак. Сущность изобретения: сыворотка поливалентная "Витакан-С" содержит антитела к возбудителям чумы, парвовирусного энтерита и аденовирусных инфекций в титрах не менее 1:64 (в РН), 1:128 (в РТГА) и 1: 4 (в РПД) соответственно. Сыворотка получена иммунизацией собак поливалентным антигеном, содержащим равные объемы культуральной суспензии вируса чумы штамм "Владимир", инактивированных культуральных суспензий парвовируса штамм "Чин" и аденовируса штамм "Геп-Ad-II". Из сыворотки осаждают глобулины известным способом и получают иммуноглобулин поливалентный "Витакан". Полученные препараты высокоспецифичны и активны, не вызывают побочных эффектов. 2 с.п. ф-лы.

Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарной вирусологии, в частности к изготовлению профилактических препаратов против вирусных болезней плотоядных.

Острые инфекционные заболевания - чума, парвовирусный энтерит и аденовирусная инфекция плотоядных (собак) остаются одними из самых актуальных проблем инфекционной патологии животных. Их характеризуют исключительный полиморфум клинического и патологоанатомического синдромов, отсутствие четко выраженных признаков, сложные особенности и взаимоотношения специфического возбудителя, вторичной микрофлоры и микроорганизма, огромные трудности в лечении и профилактике.

Антивирусная терапия чумы, парвовирусного энтерита и аденовирусных инфекций основана на использовании препаратов, содержащих специфические антитела: сывороток и глобулинов.

Наиболее близким аналогом является поливалентная сыворотка против чумы, парвовирусных инфекций и вирусного гепатита плотоядных, изготовленная из крови здоровых лошадей, гипериммунизированных штаммами вирусов чумы, парвовирусных инфекций и гепатита плотоядных. (Наставление по применению поливалентной сыворотки против чумы, парвовирусных инфекций и вирусного гепатита плотоядных, утв. Главным управлением ветеринарии от 20 июня 1991 г.).

Однако известная сыворотка является гетерогенным сывороточным препаратом и содержит большое количество чужеродных белков, неизбежно присутствующих в гетерогенной сыворотке: преципитинов, агглютининов, гемолизинов и других антител против белков, которые в известной мере противодействуют физиологическим защитным реакциям организма. Наличие в известной сыворотке чужеродных белков вызывает опасность анафилакции. Кроме того, известная сыворотка недостаточно активна и специфична.

Технической задачей изобретения является создание специфической высокоактивной гомологичной поливалентной сыворотки для лечения и профилактики вирусных болезней плотоядных.

Технический результат изобретения заключается в повышении специфичности и активности сыворотки и иммуноглобулина на ее основе, а также в снижении реактогенности получаемых препаратов.

Сущность изобретения заключается в следующем.

Сыворотка поливалентная "Витакан-С" против чумы, парвовирусного энтерита и аденовирусных инфекций плотоядных содержит антитела к возбудителям чумы, парвовирусного энтерита и аденовирусных инфекций в титрах не менее 1:64 (в РН), 1: 128 (в РТГА) и 1:4 (в РДП) соответственно, полученные иммунизацией собак поливалентным антигеном, содержащим равные объемы культуральной суспензии штамма Virus distеmer canis "Владимир", инактивированных культуральных суспензий штаммов Canine parvovirus "Чин" и Hepatitis adenovirus canine "Геп- Ad-II".

Иммуноглобулин поливалентный "Ватакан" против чумы, парвовирусного энтерита и аденовирусных инфекций плотоядных получен из сыворотки поливалентной "Витакан-С", содержит комплекс β- и γ - глобулиновых фракций белка сыворотки крови собак и имеет активность против вируса чумы не менее 2,2 lg (в РН), парвовирусного энтерита - не менее 9,5 log₂ (в РТГА) и аденовируса - не менее 2,2 log₂ (в РДП).

Для изготовления сыворотки "Витакан- С" и иммуноглобулина "Витакан" используют высокоактивные новые производственные штаммы Virus distemper canis "Владимир", Canine parvovirus "Чин" и Hepatitis adenovirus canine "Геп-Ad-II".

Производственный штамм вируса чумы плотоядных Virus distemper canis "Владимир" получен из селезенки байкальской нерпы и многократно пассирован в перевиваемой культуре клеток Vero, депонирован в коллекции Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ) и имеет регистрационный номер "Владимир 18-ДЕП".

Штамм вируса чумы плотоядных "Владимир" характеризуется следующими свойствами: Морфология. Капсид сферической формы, окруженный двухслойной оболочкой, размером 200 нм в диаметре.

Антигенные свойства. В реакции нейтрализации (в РН) нейтрализует специфическое сыворотки, полученные на данный штамм вируса и штаммы вируса "Вакчум" и "ЭПМ".

Культуральные свойства. Штамм размножается в культуре клеток Vero.

Иммунногенная активность. Обладает антигенной активностью для собак, кроликов, свиней, лошадей, мелкого и крупного рогатого скота.

Безвредность штамма. Не контагиозен для собак. При внутривенном, внутримышечном и подкожном заражении собак и хорьков не вызывает заболевания.

Стабильность. Штамм стабилен, при длительном хранении и поддержании сохранение титра в течение 2 лет, ангигенная активность сохраняется не менее 2 лет и на протяжении не менее 20 пассажей.

Штамм поддерживается путем заражения перевиваемой культуры клеток Vero один раз в 2 года.

Производственный штамм парвовируса собак "Чин" выделен от больной собаки, депонирован в ВГНКИ и имеет регистрационный номер "Чин-14-ДЕП".

Штамм Canine parvovirus "Чин" характеризуется следующими свойствами.

Морфология. Безоболочечные икосаэдрические частицы диаметром около 20-24 нм.

Преобладающий тропизм - эпителиотропный.

Культурные свойства. Штамм размножается в первичной и субкультуре клеток почек котят, перевиваемых культурных клеток CrFK, МДСК, KF.

Иммуногенная активность. Обладает антигенной активностью для собак, кроликов, свиней, лошадей, мелкого и крупного рогатого скота.

Гемагглютинирующие свойства. Агглютинирует эритроциты свиньи и зеленой мартышки.

Серологические характеристики. Активен в РН и реакции торможения гемагглютинации (РТГА) со специфической сывороткой.

Восприимчивые животные. Штамм способен к распространению среди собак, контагиозен при оральном и внутривенном заражении, вызывает гибель не менее, чем одной из трех заболевших.

Штамм поддерживается путем орального заражения интактных собак один раз в 2 года.

Производственный штамм Hepatites adnovirus canine "Геп-Ad-II" возбудителя аденовирусных инфекций плотоядных получен путем проведения 12 пассажей в культуре клеток МДСК вирулентного штамма аденовируса собак тип 2, депонирован в коллекции ВГНКИ.

Штамм аденовируса "Геп-Ad-II" характеризуется следующими свойствами.

Морфология. Безоболоченный капсид кубической симметрии, несущий 12 фибрилл, размер вириона 70-80 нм в диаметре.

Преобладающий тропизм - эпителиотропный.

Культуральные свойства. Штамм размножается в первичной и субкультуре клеток почек собак, перевиваемой культуре клеток МДСК.

Иммуногенная активность. Обладает антигенной активностью для собак, кроликов, свиней, лошадей, мелкого и крупного рогатого скота.

Обладает преципитирующими свойствами.

Серологическая характеристика. Активен в РН и реакции диффузной преципитации (РДП).

Штамм аттенуированный. При оральном, подкожном и внутримышечном введении не вызывает заболевания собак. Не контагиозен.

Штамм поддерживается путем заражение перевиваемой культуры клеток МДСК один раз в год.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Поливалентную сыворотку "Витакан" получают иммунизацией собак-продуцентов следующими антигенами: против чумы плотоядных аттенуированным производственным штаммом "Владимир" в дозе 10 ТЦД/мл, против возбудителя парвовирусного энтерита собак суспензий инактивированного культурального штамма "Чин" с титром 1:1024 ГАЕ (гемагглютинирующих единиц), против аденовирусных инфекций (инфекционного гепатита и аденовироза) - инаквированным культуральным штаммом "Геп-Ad-II" с титром 10 ТЦД 50/мл.

Схема иммунизации продуцентов включает однократное подкожное введение антигенов в соотношении 1:1 с полным адъювантом Фрейнда в дозе 1 мл. Через 21 день после введения антигенов проводят тотальное обескровливание собак и получение сывороток крови, которые затем исследуют на наличие антител против чумы, возбудителя парвовирусного энтерита, инфекционного гепатита и аденовироза собак.

Сыворотку консервируют 5%-ным раствором карболовой кислоты до конечной концентрации 0,05%.

Полученный препарат "Витакан-С", представляющий собой сыворотку иммунных собак, по внешнему виду это прозрачная, светло-желтая, иногда с красноватым оттенком жидкость. При длительном хранении на дно флакона может выпасть осадок, который при встряхивании легко разбивается в равномерную взвесь. Препарат пригоден для применения в течении 2 лет со дня изготовления при условии его хранения в сухом, темном помещении при температуре 2-4^oC.

Сыворотку "Витакан-С" применяют для профилактики и лечения чумы, парвовирусного энтерита и аденовиручных инфекций плотоядных собак и других животных семейства псовых. Наибольший терапевтический эффект достигается при использовании его в начальной стадии болезни. Препарат вводят подкожно или внутримышечно. Для профилактики вирусных инфекций животным массой до 5 кг вводят 2,5 см³, свыше 5 кг - 5 см³ препарата. С лечебной целью "Витакан-С" вводят в указанных дозах 1-3 раза с интервалом 12-24 ч в зависимости от тяжести патологического процесса.

Сыворотку можно применять в комплексе с симптоматическим лечением, введением витаминных препаратов, антибиотиков, пробиотиков.

Пассивный иммунитет у животных, обработанных с профилактической целью, сохраняется до двух недель.

Сыворотка "Витакан-С" имеет активность против вирусов: чумы в РН - не менее 1: 64, парвовирусного энтерита в РТГА - не менее 1:128, аденовируса в РДП - не менее 1:4.

Пример 2. Получают сыворотку крови иммунных собак аналогично примеру 1. По стандартной методике проводят осаждение глобулинов 40%-ным раствором сульфата аммония или ПЭГ-6000. Выделившийся осадок глобулинов отделяют, очищают, стерилизируют и расфасовывают.

Полученный препарат "Витакан", содержащий комплекс бета- и гаммаглобулиновых фракций белка сыворотки крови иммунных собак, по внешнему виду представляет собой бесцветную, прозрачную, слегка опалесцирующую жидкость. При длительном хранении на дно ампулы (флакона) может выпадать осадок, который при встряхивании легко разбивается в равномерную взвесь. Препарат приготовлен для применения в течение 2 лет со дня изготовления при условии его хранения в сухом, темном помещении при температуре 2-4^oC.

Иммуноглобулин поливалентный "Витакан" применяют для профилактики и лечения чумы, парвовирусного энтерита, гепатита и аденовироза собак и других животных семейства псовых. Наибольший терапевтический эффект достигается при использовании его в начальной стадии болезни.

Препарат "Витакан" вводят подкожно, внутримышечно или внутривенно. При лечении чумы рекомендуется одновременное внесение 2-3 капель "Витакана" 2 раза в день на слизистые оболочки носа и глаз при рините и конъюнктивите. Для профилактики вирусных инфекций животным массой до 5 кг вводят 1,5 см³, свыше 5 кг - 3 см³ препарата. С лечебной целью "Витакан" вводят в указанных дозах 1-3 раза с интервалом 12-24 ч в зависимости от тяжести патологического процесса.

Пассивный иммунитет у животных, обработанных с профилактической целью, сохраняется до двух недель.

Пример 3. Проверка терапевтической активности препарата "Витакан" была произведена на 30 собаках различных пород и возраста.

Препараты вводят подкожно, внутримышечно, а "Витакан", кроме того, внутривенно и наружно для обработки слизистых оболочек носа и глаз при гнойном рините и конъюнктивите.

В опытах по изучению пассивного иммунитета, создаваемого этими препаратами, использовано 4 группы животных по 9 собак, одна группа из которых была контрольной. Заражение контрольных и опытных собак производили через 2 недели патогенными штаммами вирусов (по две собаки из каждой группы возбудителями чумы, парвовируса и аденовируса типа 1 и типа 2).

Результаты опыта показали следующее: в опытных группах ни одного случая заболевания не было отмечено. В контрольных группах наблюдаются заболевания собак.

Препараты "Витакан" и "Витакан-С" прошли успешные клинические испытания в ветеринарных клиниках, что дает основание считать их высокоспецифическими препаратами против чумы, парвовирусного энтерита и аденовирусных инфекций плотоядных.

Формула изобретения

1. Сыворотка поливалентная против чумы, парвовирусного энтерита и аденовирусных инфекций плотоядных, отличающаяся тем, что содержит антитела к возбудителям чумы, парвовирусного энтерита и аденовирусных инфекций в титрах не менее 1 64 (в РН), не менее 1 28 (в РТГА) и не менее 1 4 (в РДП) соответственно, полученные иммунизацией собак поливалентным антигеном, содержащим равные объемы культуральных суспензий штаммов Virus distemper canine "Владимир", инактивированных культуральных суспензий штаммов Canine parvovirus "Чин" и Hepatitis adenovirus canine "Геп-Аd-II".

2. Иммуноглобулин поливалентный против чумы, парвовирусного энтерита и аденовирусных инфекций плотоядных, отличающийся тем, что содержит комплекс β- и γ-глобулиновых фракций белка сыворотки крови собак, полученной иммунизацией собак поливалентным антигеном, содержащим равные объемы культуральных суспензий штаммов Virus distemper canine "Владимир", инактивированных культуральных суспензий штаммов Canine parvovirus "Чин" и Hepatitis adenovirus canine "Геп-Ad-II", и имеющий активность против вируса чумы не менее 2,2 lg (в РН), парвовирусного энтерита не менее 9,5 log₂ (в РТГА) и аденовирусных инфекций не менее 2,2 log₂ (в РДП).