Способ лечения гепатита, композиция, усиливающая ин виво инактивацию вируса гепатита с, препарат для лечения гепатита с

 

Изобретение относится к медицине, в частности к вирусологии и гепатологии. Раскрываются композиции и способы лечения млекопитающих, зараженных вирусом С. Композиции включают только один или несколько тимозинов, или в комбинации с одним или несколькими интерферонами. Способы лечения включают использование одних только тимозинов или вместе, или последовательно с интерфероном. 3 с. и 27 з.п. ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к лечению пациентов, зараженных вирусом гепатита С.

Вирус С (HCV), предполагаемого агента в большинстве заболеваний гепатита, приобретенных трансфузионным путем (после переливания крови), был недавно выделен новым серологическим анализом. КиО, G и др., Science, 244: 362-4 (1989). Несмотря на повышение качества депо донорской крови и недавнее введение анализов донорской крови, процент возможности острого заражения пациентов в результате переливания крови составляет в настоящее время 5-10%. Alter, H.J., in Zuckerman, A.J. ed Viral Hepatitis and Ziver Desease, Allen, K. 1988, с.537-42. Хронический гепатит развивается по меньшей мере у половины пациентов с острым заражением НСV (составляющих около 90% пациентов с не-А, не-В гепатитом (NANB), и цирроз развивается по меньшей мере у 20% этой группы. Таким образом, приблизительно из 3 млн человек, которые подверглись переливаниям крови в США, каждый год острый гепатит С развивается у 150000. Хронический гепатит С развивается по меньшей мере у 75000 из них, и среди этого числа пиррозом заболевают более 15000 человек. Среди больных с пост-трансфузионным гепатитом до 30% положительны на антитела HCV.

Davis, G.Z. и др. New England Journal of Medicine, 321:1501-6 (1989). У пациентов с отдельными случаями c NANB гепатита (без специфических факторов риска) также большая вероятность наличия анти-HCV антитела. Кио и др. (1989) цитирован выше. Хотя большинство пациентов, заражающихся гепатитом С, будут иметь продромальные или мягкие проявления заболевания, приблизительно у 50% пациентов заболевание примет хронический характер, характеризующийся отклонением и колебаниями содержания трансаминазы в сыворотке и воспламенением участков печени. По некоторым оценкам цирроз развивается у 20% в этой группе. Korets, R.L. и др. Gastroenterology, 88:1251-4 (1985).

С целью остановить или замедлить прогрессирование заболеваний, связанных с HCV, в последние годы опробывалось множество лекарств. И ацикловиры, и кортикостероиды (которые дают положительный эффект при аутоиммунном хроническом активном гепатите) не эффективны. Pappas, S.C.J. Med. Vir., 15:1-9 (1985); Stores, P. и др. Gastroenterology, 32:1783, реферат (1987).

В настоящий момент α -интерферон представляется наиболее эффективным среди лекарств, но поиски в этом направлении продолжаются. Hoofnale и др. Viral Hepatitis: 1981 International Symposium, Philadelphia, Franklin, I.P., 1982, стр. 573-83; Hoofnagle, J.H. и др. New England Journal of medicine, 315: 1575-8 (1976); Thompson, Sancet, 1:539-41 (1987); Kiyosawa, K. и др. in Zuckerman, A. ed Viral Hepatitis and Liver Disease, Allen, K. Liss, New York, 1983, стр. 895-7. Hoofnagle, J.H. и др. Sem. Liver Dis., 9: 259-263 (1985). Интерфероны представляют собой белки, вырабатывающиеся в носителе в ответ на вирусные инфекции, а также другие антигенные стимулы. Они классифицируются по клеткам происхождения, а также по своей антигенности. α-Интерферон вырабатывается лимфобластоидными клетками, β-интерферон - фибробластами, и γ-интерферон - Т-клетками. Подтипы в каждой группе основаны на антигенно-структурных характеристиках. Получены рекомбинантные формы для каждой группы и они имеются в свободной продаже. В 1986 г. Hoofnagle и др. (Hoofnagle, J.Y. и др., New England Journal jf Medicine, 315:1575-8 (1986), были опубликованы эксперименты, в воздействии α-интерферона (IFA), проведенные на десяти пациентах с хорошо выраженным пост-трасфузионным NANB гепатитом. В этом эксперименте восемь из десяти пациентов улучшили свой уровень аланин трансаминазы в сыворотке (ALT) в течение месяца с начала лечения. Лечение IFA состояло из ежедневного приема 5 млн. ед. (MU) семью пациентами и 1 MU ежедневного приема тремя пациентами. У всех испытуемых доза постепенно снижалась до 1 MU ежедневно, и затем дозировка устанавливалась на прием через день или раз в три дня. У трех пациентов биопсия печени после лечения показала заметное снижение портального (ворота органа) воспаления и паренхимного некроза клеток печени. Побочные эффекты имели место при дозировке в 5 MU/день и практически отсутствовали при дозировке в 1 MU/день.

Недавно у пациентов с обоснованными данными по хроническому заражению HCV было проведено исследование скрытым методом случайной выборки с контролем плацебо на эффект рекомбинантного человеческого интерферона. Di Bisceglie, F. M. и др. New England Yournal of Medicine, 321:1506-10 (1989). 41 пациент принимал участие в исследовании, у 37 из которых впоследствии были обнаружены антитела к HCV. 21 пациент получал интерферон α подкожно три раза в неделю в течение 6 месяцев, и 20 получали плацебо. Средний уровень ALT в сыворотке и гистологические характеристики печени значительно улучшились у пациентов, которых лечили интерфероном, но не у тех, которые получали плацебо. У 10 пациентов, леченных интерфероном (48%), реакция была полной, и средний уровень ALT в сыворотке опускался до нормы во время лечения; у трех других среднее снижение ALT составило более 50%. Однако после лечения, ALT сыворотки возвращалось к уровням, которые были до лечения; через 6-12 месяцев после прерывания лечения интерфероном только у двух пациентов величины оставались нормальными (10%). Авторы сделали вывод, что лечение интерфероном α дает положительный эффект в снижении активности заболевания хроническим гепатитом С; однако положительные эффекты часто бывают временными и могут присутствовать побочные действия.

В другом, более обширном исследовании хронический гепатит С (NANB гепатит) у 166 пациентов лечили либо 3 MU, либо 1 MU рекомбинантного человеческого α-интерферона (α-IFA) три раза в неделю в течение 24 недель, или не лечили совсем. Уровень ALT в сыворотке стал совершенно нормальным у 22 из 26 пациентов (85%), которые отреагировали на лечении 3 MU интерферона, и 9 из 16 пациентов (56%) отреагировали на лечение 1 MU. Пациенты, которые получали 3 MU интерферона, имели гистологическое улучшение, благодаря регрессу воспаления в дольчатой и парапортальной частях. Однако в течение 6 месяцев после завершения лечения рецидив имел место у 51% пациентов, леченных 3 MU интерферона и у 44%, леченных 1 MU. Davis, G.L. и др. New England Journal of Medicine, 321: 1501-06 (1989). Эти авторы сделали вывод, что 24-недельный курс терапии интерфероном эффективен в контроле активности заболевания у многих пациентов с гепатитом С, хотя рецидив после прекращения лечения обычное явление.

Опубликованы данные контрольного исследования методом случайной выборки, которое проводилось в нескольких центрах по лечению рекомбинантным человеческим α-IFN пациентов с хроническим гепатитом NANB. Marcellin, P. и др. Hepatology, 13: 393-97 (1991). Пациенты не подвергались лечению или лечились 1-3 MU α-интерферона, который назначался 3 раза в неделю в течение 24 недель. 45 пациентов (75%) были положительны на антитело к НСV. В течение 24-х недельного периода лечения средние уровни ALT в сыворотке снижались в обеих группах лечения, но снижение было статистически значительным только в группе 3 MU. Однако после 24 недель пропорция пациентов с нормальными уровнями ALT в группе лечения 3 MU (39%) была близка пропорции в группе 1 MU (45%) и уровни в обеих группах были значительно выше, чем в контрольной (0%). Повторная биопсия ткани печени показала значительное гистологическое улучшение в группе с более высокой дозой, но не в группе с низкой дозой или контрольной. Однако после лечения средние уровни ALT поднимались в обеих группах, прошедших лечение. Пропорция пациентов с нормальными уровнями ALT на 48 неделе составляла 38% в группе 3 MU и 20% в группе 1. Авторы делают вывод, что дозировка в 3 MU в сравнении с 1 MU α-интерферона, назначенная трижды в неделю в течение 24 недель, дает более стабильное улучшение содержания ALT в сыворотке и улучшенную гистологию печени. Однако приблизительно у половины пациентов при остановке лечения интерфероном возникал рецидив болезни. Ответная реакция на α-интерферон не связана с источником инфекции или с наличием или отсутствием титров анти-HCV антител в сыворотке пациентов.

Поэтому ясно, что хотя α-интерферон положительно влияет на заражение HCV, этот эффект часто бывает только временным. Поэтому необходимо новые методы, которые бы полностью избавили пациентов от последствия заражения вирусом гепатита С.

Известно, что другой класс иммунных модификаторов полипептида, полученных из вилочковой железы, - тимозины, ускоряют созревание лимфоцитов, повышают функцию Т-клетки и способствуют перестройке иммунных возможностей. Low, T. L. K. и др. "Thymosins:Structure, Function and Therapeutic Application", Thymus, 6:27-42 (1984).

Фракция 5 тимозина (TF-5), первоначально описанная Goldstein и др. (Proc. Nat't. Acad. Sci. 69: 1800-03 (1972), представляет собой частично очищенный экстракт бычьего тимуса, содержащий по меньшей мере 40 компонентов пептида, 20 из которых были очищены до гомогенности или почти гемогенности; он содержит около 0,6% тимозина α-1 (TYN α₁), Low, 1984, выше.

THN α₁, первоначально изолированный из TF-5, был определен на последовательность и химически синтезирован. Wetzel, R/ и др. Biochemistry, 19: 6096-6104 (1980). Его последовательность высоко гомологична у мышей, телят и людей. THN α₁ представляет собой 28 амино кислотный полипептид с мол. м. в 3100, активность которого качественно подобна TF-5 модуляции иммунной системы. Low, T. L. K. и др., J.Biol. Chem., 254: 981-6 (1979). THN α₁ обладает сильнодействующей иммунологической активностью, включая стимулирование выработки α и γ-интерферона, повышение выработки фактора торможения миграции макрофагов, индуцируя экспрессию маркеров T-клеток, включающих IL 2- рецепторы, и улучшая активность клетки-помощника Т-клетки. Schulof, R.S. и др., в The Lumphocyte, Allen, Liss. Ins., 1881, стр. 191-215; Low в " Thymosins : Structure, Function and Therapeutic Application", Thymus, 6:27-43 (1984); Koutab, N. и др. Innunopharm. 16:97-105 (1988). Исследования на мышах продемонстрировали синергический эффект ТНN α₁ и интерферона на активность природной клетки-убийцы у мышей с подавленным иммунным ответом. Favilli, C. и др. Cancer Immunol. Immun., 20:189-92 (1985). TF-5 и TNN α₁ могут влиять на иммуннорегуляторную функцию Т-клетки, повышать выработку интерферона-α , интерферона-γ и интерлейкина-2 человеческими лимфоцитами и повышать экспрессию рецептора интерлейкина-2. Marshall, G. и др. J.Immunol., 126:741-4 (1981); Mutchnick и др. Clin. Immunol/ Immunpathol/ 23: 626-33 (1982); Sxtein, M.B. и др. Proc. Natl. Acad. (США), 83:6107-6111 (1986); Serrate, S.A. и др., J. Immunol. 1939: 2338-43 (1987); Baxevanis, C. N. и др. Immunol. 12:244-7 (1982).

Клинические испытания TF-5 и ТНN α₁ в качестве основной или вспомогательной терапии пациентов с иммуннодефицитом или раком показывают, что эти агенты усиливают иммунную реакцию и повышают специфические функции лимфоцитов. Клинические испытания TF-5 и очищенного THN α₁ проводились в течение ряда лет. Решение испытания у больных с раком или состоянием иммуннодефицита были обнадеживающими, хотя не слишком характерными. Goldstein, A.L. и др., Transp. Prac., 9:1141 (1977); Barrett, D.J. и др. J.Pediatr., 97: 61(1980); и Cohen и др. J.Amer. Med. Ass., 241:1813-5 (1979). Использование ТНN α₁ было описано в клиническом испытании слепым методом пациентов с клеточным раком легких. Пациентам назначался ТНN α₁ с дозировкой 900 μ г/м² подкожно дважды в неделю или ежедневно в течение двух недель и затем дважды в неделю после завершения курса радиотерапии. Единственным побочным ТНN α₁ было небольшое жжение в месте инъекции у трех пациентов. Это могло быть по причине выбранного наполнителя. Общее выздоровление без рецидивов было выше в обеих группах, которые лечили ТНN α₁, чем в группе плацебо; было отмечено также некоторое восстановление иммунной функции, подавленной радиацией. Увеличение количества Т-клеток, связанное с этим, не наблюдалось. Schulof, R.S. и др. J.Biol. Response Modifiers, 4:147-58 (1985).

Проведены клинические испытания двойным слепым методом на пожилых мужчинах с целью повысить реакцию на вакцину гриппа. Gravenstein и др. JAGS, 37: 1-8 (1989). Пациенты получали синтетический ТНN α₁ подкожно дважды в неделю, начиная со времени получения вакцины гриппа. На шестой неделе после вакцинации пациенты, получавшие лекарства, имели более высокие уровни антител к гриппу, чем контрольные. Эта разница особенно усиливалась у очень пожилых (77-99 лет). У реципиентов не наблюдалось клинической биохимической токсичности.

Имеются предварительные данные о том, что тимозины могут быть эффективны против инфекции, вызванных другими вирусами гепатита, кроме НCV. В животной модели вирусного гепатита, лесном сурке, зараженной вирусом гепатита, ТНN α₁ подавлял вирусную репликацию ДНК, но не давал улучшения клинических параметров. Korba, B. E. и др. Hepatology, 12:Абс. 880 (1990). В экспериментальном клиническом исследовании пациентов с хроническим активным гепатитом В, вызванным вирусом гепатита В (HBV), больные, леченные в течение года THN α₁ (5 пациентов) или TF-5 (2 пациента), показали значительное снижение ALT в сыворотке; 6 из 7 пациентов такие показали сниженные уровни ДНК HBV в сыворотке и 5 из 6 пациентов первоначально положительных на поверхностный антиген гепатита В в сыворотке (HBsAg), в последующем устранили этот антиген. Mutchnick и др. Hepatology, 10:Abs, 575 (1989). В этих рефератах не было высказано предположения, что тимозины будут эффективны против каких-либо других вирусов гепатита.

Следовательно, существует насущная необходимость в этой области техники получить новое средство для лечения инфекций НCV у млекопитающих; такое средство раскрыто ниже.

Разработан способ лечения инфекции HCV, включающий назначение млекопитающим доз одного из нескольких тимозинов или в комбинации с интерфероном, усиливающих иммунную систему.

Цель изобретения - раскрыть композиции и способы лечения острых или хронических инфекций НCV у млекопитающих одним или несколькими членами из семейства тимозинов - биологических модификаторов реакции.

Другая цель этого описания - раскрыть композиции и способы лечения острых или хронических инфекций HCV у млекопитающих, включающие комбинационную терапию одним или несколькими тимозинами и одним или несколькими интерферонами.

Эти и другие задачи станут очевидными со ссылкой на описание и прилагаемую формулу изобретения.

Разработан новый способ лечения инфекции НСV у млекопитающих, включающий назначение таким млекопитающим одного или нескольких тимозинов в дозировке, которая усиливает иммунные реакции, или в комбинации с антивирусными дозами одного или нескольких интерферонов.

Под термином "тимозины" понимается любой или все полипептиды, усиливающие иммунную систему, присутствующие в вилочковой железе, или получение химическими или рекомбинантным путем, или фрагменты, полученные от любого из этих полипептидов. Под термином "млекопитающий" подразумевается любой млекопитающий субъект, включающий человека и животное, требующий лечения гепатита С. "Млекопитающее" и "субъект" - термины, заменяющие друг друга.

Препараты тимозина, пригодные для лечения инфекции HCV, включают TF-5, THN α₁ и их фрагменты, например, С-концевые 4-28 и 15-28, и N -концевые, 1-8, 1-14, 1-20 фрагменты. Их можно получить от Alpha-1, Biochemicals Inc., Foster City.

Субъекты, например люди, могут получать тимозин подкожно в виде инъекции или вливаний через определенные интервалы в течение определенного периода времени. Тимозин назначают млекопитающим, зараженным вирусом гепатита С в количествах, которые облегчают или способствуют ин виво инактивации вируса гепатита С. Фармацевтической унифицированной дозой количества тимозина, усиливающей иммунную систему, тимозина, такого, как TF-5, может быть количество от 900 до 1200 мг/м²площади поверхности тела в фармацевтически приемлемом носителе. Фармацевтической дозирующей единицей количества тимозина, такого, как THN α₁ или его фрагментов, усиливающих иммунную систему, может быть от 900 до 1200 г/м² площади поверхности тела в фармацевтически приемлемом носителе. Лиофилизированный препараты тимозинов или фрагментов, которые содержат маннитол и фосфатный буфер, растворяют в разбавителе до назначения. Тимозины в разбавителе должны оставаться стабильными по крайней мере в течение шести месяцев при хранении в холодильнике. Удобно дозировать растворы тимозина в ампулы с дозировкой 1 мл. Некоторым пациентам может потребоваться около 8 ампул в месяц.

Для обычного человека представляется удобным назначение в режиме дважды в неделю (например в понедельник и четверг) подкожной инъекции от 1500 до 1700 г ТНN α₁ или его фрагментов. Дозировки в сроки лечения могут быть различными и определяются кинетической реакцией субъекта на тимозины.

Течение заболевания и реакция на лекарственное лечение сопровождаются клиническим исследованием и лабораторными анализами. Поскольку в неконтролируемом гепатите С, как известно, наблюдается повышенный уровень аланин аминотрансферазы (ALT) и аспартат аминотрансферазы (AST), и полная реакция на лечение обычно определяется как нормализация этих ферментов в сыворотке, особенно ALT (Davis, G. L. и др. New England J. of Medicine, 321:1501-6 (1989), прогресс лечения тимозинами сопровождается известным тестом, т.е. на последовательном множественном анализаторе.

Другим методом оценки субъектов, имеющих антитела к НСV (не все субъекты с гепатитом С имеют обнаруживаемые антитела к HCV - Weiner, A.J. и др., Lancet, 336: 1-3 (1990)), являются периодические анализы сыворотки на титр этих антител. Анти-HCV антитела можно определить произведением анализа С 100-3 (КИО, G. и др., Science, 244 362-4 (1989), тестом ELISA (ферментный иммуносорбентный тест (Orrho Diagnosfic Sysfems) или рекомбинантным анализом (R IBA-1 и R IBA-2, Chiron Corporation, СА). Можно использовать любой подходящий тест.

Чтобы проследить ход репликации HCV в субъектах в ответ на лекарственное лечение, РНК HCV можно определять в сыворотке гнездовым анализом цепной реакции полимеразы, который использует два ряда праймеров, полученных от NS3 и NS 4 участков неструктурного гена геном HCV. Farci, P. и др. New England Journal of Medicene, 325:98-104 (1991); Ulrich, P. и др. J.Clin. Inv., 86: 169-14 (1990).

Другие подходящие лабораторные тесты, чтобы проследить за курсом лечения, изложены в примере 1 ниже.

Лечение тимозином можно также использовать в комбинации с лечением интерфероном, соединяя таким образом эффект усиления иммунной системы тимозинов с антивирусным действием интерферонов. Ускорение реакции на используемые дозы интерферона дает положительный эффект, в частности в свете ограничивающих дозу побочных воздействий при более высоких дозах белков. Это дает преимущество в достижении сравнительной эффективности с интерфероном плюс тимозин с более низкой дозировкой, чем это требовалось бы только с одним интерфероном.

В этом комбинационном лечебном режиме один или несколько интерферонов (например, рекомбинантный интерферон α-2в, Интрон-А, Schering - Plough, Kenilworth, N.Jersey) назначаются субъектами, например людям, подкожно в дозировке от 1 до 3 МU вместе или последовательно с одним или несколькими тимозинами, предпочтительно включающими ТНN α₁ с дозировкой от 900 до 1200 μ г/м² площади поверхности тела.

Хотя в указанном примере упоминается рекомбинантный интерферон α-2в, в этом изобретении могут с пользой применяться другие анти -НС - эффективные интерфероны, такие, как α-,β- и γ-интерфероны, рекомбинантные или природные.

Такой режим комбинационной дозировки достаточно гибок и зависит от клинического состояния субъекта. Если субъекты не восприимчивые к предложенным дозировкам, их можно увеличить в пределах, с учетом нежелательных побочных действий. Обычно инъекции делаются 5 раз в неделю и продолжаются до тех пор, пока не будет замечена адекватная реакция пациента на лечение.

Тесты на определение эффективности комбинационного лечения могут быть теми же, что и описанные выше при лечении одним тимозином. Кроме того, в качестве второго основного критерия оценки можно использовать гистологическое исследование образцов биопсии печени. Knodell, R.G. и др. Hepatology, 1: 431-5 (1981), Индекс Гистологической Активности которого (портальное воспаление, некроз участков, дольчатое нарушение и фиброз) предусматривает оценочный метод активности заболевания.

Предлагаются следующие примеры с целью иллюстрации изобретения, которые никоим образом не следует рассматривать как ограничивающие объем изобретения, изложенный в описании и формуле.

Пример 1. Получение препарата для инъекции.

Фармацевтическая дозировка едицицы в 1 мл каждая были получены из ингредиентов, показанных в таблице.

Пример 2. Лечение инфекций гепатита С у людей тимозинами и интерферонами.

Взрослые пациенты с хроническим активным гепатитом С (САНС) произвольно подбирались в четыре экспериментальные группы, в которые входило около 40 пациентов на группу. Критерии отбора включали: 1) взрослые пациенты (не моложе 18 лет); 2) уровень сывороточной ALT повышен по меньшей мере в течение 6 мес до лечения на одну величину удвоенного верхнего предела нормы по лабораторным данным; 3) у пациентов положительная реакция на HCV антитело дважды подряд и в подтверждающем анализе; 4) биопсия печени в течение трех месяцев лечения демонстрирует патологию, совместимую с признаками хронического активного гепатита.

Критерии исключения включают: 1) недавнее использование других антивирусных или иммунноподавляющих препаратов; 2) гемофелию, беременность или заражение ВИЧ, или другие серьезные заболевания, которые могут воспрепятствовать завершению курса лечения, 3) другие формы заболевания печени, включающие гепатит А или В, недостаток α -1 антитрипсина, заболевание Вильсона, и отсутствие гемохроматоза; 4) аутоиммунные маркеры должны отсутствовать (ANA, ASMA, AMA, анти-LKMI), или при их наличие титры должны быть <1:4; 5) сниженную норму лейкоцитов (<3000); 6) низкое абсолютное содержание нейтрофилов (<1000); 7) низкое содержание тромбоцитов (<75000); 8) низкий гемоглобин (<11 г/дл); 9) высокий билирубин (>4 мг/дл); и 10) низкий альбумин в сыворотке (3 г/дл).

Первая из четырех произвольно составленных групп получала интерферон, предпочтительно интерферон α- 2в с дозировкой 3 мл. ед. (MU) подкожно (SQ) по понедельникам, средам и пятницам, и по вторникам и субботам - плацебо. Вторая группа получала в том же режиме и дозировке интерферон, плюс тимозин, предпочтительно ТНN α₁, с дозировкой 900 μ г/м² подкожно по вторникам и субботам. Третья группа получала в том же режиме и дозах только один тимозин. Четвертая группа получала вначале плацебо и затем разделялась на три группы лечения, упомянутые выше. Интерфероны и тимозины могут быть рекомбинантными.

Пациентов начинали лечить через неделю после госпитализации, в течение которой прослеживались побочные действия.

Контроль амбулаторных пациентов проводился через неделю в течение двух недель, затем через две недели в течение двух месяцев и затем ежемесячно в остальную часть периода лечения. При каждом посещении проводились анализы: клинический анализ крови (СВС, на тромбоциты, РОЭ (ESR), ALT, GGT, щелочную фосфатазу, билирубин/альбумин и НСV антитело. Ежемесячно анализировались сывороточные γ-глобулин, тиреостимулирующий гормон тиреотропин (TSH) и ASMA.

Токсичность лекарства контролировалась с использованием как клинических, так и лабораторных параметров.

В течение месяца после завершения первоначального шестимесячного курса лечения пациентам делалась биопсия печени на патологическое исследование по Кноделлу и др. Эта система предусматривает цифровую оценочную систему гистологической активности у пациентов с асимптоматическим САН.

В это время пациенты в контрольной группе произвольно делятся на три группы для получения одного из трех лечений, с предположение того, что у них есть САН в анализах биопсии печени, и что одна сторона исследования недостаточно значительно дает положительные или отрицательные результаты анализов через шесть месяцев.

Пациенты в группах лечения прослеживаются на оценку рецидива заболевания при демонстрации повышения уровня ALT. Больные, которые реагировали на лечение в первые шесть месяцев, но имели после рецидив, получают дополнительное лечение.

По возможности делаются дополнительные анализы сыворотки или тканей: определение антител к интерферонам и тимозинам, усиление цепной реакции полимеразы сегментов генома гепатита С в образцах биопсии печени, и количественные анализы сыворотночных титров антигепатита С.

Пример 3. Протокол лечения тот же, что и в примере 2, за исключением того, что интерферон используется в количестве 2 MU, и тимозин - 1050 μ г/м².

Пример 4. Протокол лечения тот же, что и в примере 3, за исключением того, что используют 1 MU интерферона и 1200μ г/м² тимозина.

Пример 5 (анализ данных). Существуют два основных критерия реакции на лечение - нормализация уровней ALT к концу периода лечения (частичную реакцию можно определить как снижение по меньшей мере на 50% первоначального содержания ALT), и гистологическое улучшение, как определено Индексом Гистологической Активности (НАI) Кноделя и других. Этот анализ предусматривает предварительную оценку от 1 до 22 на образец. Парные данные можно анализировать с использованием теста парного образца Вилкоксона. Кроме того, образцы можно классифицировать на мягкие, умеренные или восстановленные САН, и улучшение оценивается с применением статистического анализа Chi.

На протяжении жизненного цикла используется анализ оценки статуса ремиссии и редицивов с точки зрения нормализации уровней ALT. Другие продолжительные переменные анализируются с использованием теста Студента. Дихотомные данные подвергаются тестами CHi или Фишера в соответствии с необходимостью.

Проведен анализ на определение числа пациентов в каждой тестуемой группе для показа предполагаемых различий. Силовой анализ, примененный к ANOVA с использованием силы 0,80 с α = 0,05, вместе с предшествующими исследованиями средних уровней ALT и их вариантов, определил необходимость для 21-53 пациентов в каждой тестуемой группе показать среднюю вариацию ALT в 15 IU/L. Поскольку 3-5% пациентов выпадают из эксперимента, показатель в лечении в контрольной группе после 6 месяцев составило 40 пациентов на группу.

Пример 6. Эффективность тимозина α-1 в лечении гепатита С была продемонстрирована на двух пациентах с гепатитом С, которые ранее не реагировали на α-интерферон. Эти два пациента лечились тимозином α-1 подкожный инъекцией 1 мг дважды в неделю на протяжении курса лечения α-INF, трижды в неделю с дозой 2 мл. ед. После 6 месяцев лечения тимозином α-1 оба пациента показали 50% снижение аланин трансаминазы в сыворотке (ALT), демонстрируя таким образом эффективность тимозина α-1. Шесть других пациентов с гепатитом С, леченные, как указано выше, показали "полную ответную реакцию" на лечение после 6 месяцев со снижением уровней ALT в сыворотке до нормы. У трех дополнительных пациентов с гепатитом С, леченных, как указано выше, содержание ALT в сыворотке снизилось на 50% после 6 месяцев. Шесть дополнительных пациентов с гепатитом С, леченные так же, не реагировали достаточным образом, чтобы превысить порог 50% снижения ALT в сыворотке после 6 месяцев.

Формула изобретения

1. Способ лечения млекопитающего, зараженного вирусом гепатита С, отличающийся тем, что включает назначение млекопитающему дозы по меньшей мере одного тимозина, усиливающего иммунную систему, или фрагмента тимозина аналогичного действия.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что тимозин выбирают из группы, состоящей из фракции 5 тимозина, тимозина α-1 и их фрагментов.

3. Способ по п.2, отличающийся тем, что указанным млекопитающим является человек и указанную фракцию 5 тимозина назначают в дозировке 900 1200 мг/м² площади поверхности тела.

4. Способ по п.3, отличающийся тем, что указанным млекопитающим является человек и указанный тимозин α-1 или его фрагмент назначают в дозировке 900 - 1200 мкг/м² площади поверхности тела.

5. Способ по п.1, отличающийся тем, что далее включает назначение указанному млекопитающему антивирусного эффективного количества по меньшей мере одного интерферона параллельно или последовательно с назначением указанного тимозина или фрагмента тимозина.

6. Способ по п.5, отличающийся тем, что указанный интерферон выбирают из группы, состоящей из α-, β- и γ- интерферонов.

7. Способ по п.6, отличающийся тем, что указанным α-интерфероном является интерферон α-2b. 8. Способ по п.5, отличающийся тем, что назначение указанного интерферона включает назначение интерферона, полученного рекомбинантной ДНК технологией.

9. Способ по п.5, отличающийся тем, что указанным млекопитающим является человек, причем указанным интерфероном является α-интерферон, в количестве (1 3) · 10⁶ единиц указанного интерферона на прием.

10. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанным млекопитающим является человек, указанным тимозином тимозин α-1 и указанная дозировка составляет 1500 1700 мкг тимозина α-1. 11. Композиция, усиливающая ин виво инактивацию вируса гепатита С при назначении ее млекопитающим, включающая стандартную дозу фармацевтически приемлемого носителя и содержащая усиливающее действие иммунной системы количество по меньшей мере одного члена, выбранного из группы, состоящей из тимозина и фрагментов тимозина аналогичного действия.

12. Композиция по п.11, отличающаяся тем, что указанный тимозин выбирают из группы, состоящей из фракции 5 тимозина и тимозина α-1. 13. Композиция по п.11, отличающаяся тем, что включает антивирусное эффективное количество по меньшей мере одного интерферона.

14. Композиция по п.13, отличающаяся тем, что указанный интерферон выбирают из группы, состоящей из α-, β- и γ-интерферонов.

15. Композиция по п.14, отличающаяся тем, что указанным α-интерфероном является интерферон α-2b. 16. Композиция по п.15, отличающаяся тем, что указанным интерфероном является рекомбинантный интерферон.

17. Композиция по п.11, отличающаяся тем, что указанный тимозин представляет собой фракцию 5 тимозина, и указанное количество, усиливающее действие иммунной системы, представляет собой количество, усиливающее действие иммунной системы человека, и указанная фармацевтическая стандартная доза составляет 900 1200 мг/м² площади поверхности тела указанного человека.

18. Композиция по п. 13, отличающаяся тем, что указанный интерферон представляет собой α-интерферон и указанное количество составляет (1 3) · 10⁶ единиц указанного интерферона.

19. Композиция по п.11, отличающаяся тем, что указанным тимозином является тимозин α-1, указанным количеством, усиливающим действие иммунной системы количество, усиливающее действие иммунной системы человека, и указанная фармацевтическая стандартная единица составляет 900 1200 мкг/м² площади поверхности тела человека.

20. Композиция по п.11, отличающаяся тем, что указанным тимозином является тимозин α-1 и указанная фармацевтическая стандартная доза содержит 1500 1700 мкг тимозина α-1. 21. Препарат против гепатита С, отличающийся тем, что включает усиливающее действие иммунной системы количество по меньшей мере одного тимозина или фрагмента тимозина в фармацевтически приемлемом носителе.

22. Препарат по п.21, отличающийся тем, что указанный тимозин выбирают из группы, состоящей из фракции 5 тимозина и тимозина α-1. 23. Препарат по п.21, отличающийся тем, что далее включает антивирусное эффективное количество по меньшей мере одного интерферона.

24. Препарат по п.23, отличающийся тем, что указанный интерферон выбирают из группы, состоящей из α-, β- и γ- интерферонов.

25. Препарат по п.24, отличающийся тем, что указанным α-интерфероном является α-2b. 26. Препарат по п.25, отличающийся тем, что указанный интерферон представляет собой рекомбинантный интерферон.

27. Препарат по п.21, отличающийся тем, что указанным тимозином является фракция 5 тимозина, указанным количеством, усиливающим действие иммунной системы, является количество, усиливающее действие иммунной системы человека, и это количество составляет 900 1200 мкг/м² площади поверхности тела указанного человека.

28. Препарат по п.23, отличающийся тем, что указанный интерферон представляет собой α-интерферон и указанное антивирусное эффективное количество составляет (1 3) · 10⁶ единиц указанного интерферона.

29. Препарат по п.21, отличающийся тем, что указанным тимозином является тимозин α-1, указанным количеством, усиливающим действие иммунной системы, - количество, усиливающее действие иммунной системы человека, и это количество составляет 900 1200 мкг/м² площади поверхности тела человека.

30. Препарат по п.21, отличающийся тем, что указанный тимозин представляет собой тимозин α-1 и в котором указанное количество составляет 1500 1700 мкг тимозина α-1.

РИСУНКИ

Рисунок 1