Способ изготовления гистологических препаратов

 

Изобретение относится к медицине, точнее к технике изготовления гистологических образцов различных тканей, и может быть использовано при дифференциальной диагностике патологических состояний организма. Изобретение позволяет сократить время изготовления гистологического препарата с 10-12 дней до 1 ч 20 мин при высоком качестве изготавливаемых препаратов. Сущность изобретения состоит в том, что фиксацию, обезвоживание, просветление и парафинизацию проводят в бытовой микроволновой (МВ) печи мощностью 450 Вт. Фиксацию осуществляют в течение 20 с при режиме мощности 90%, после слива фиксирующей жидкости и заливки кусочка 96%-ным спиртом его помещают в МВ-печь на 10 мин при мощности 20-30% с дополнительной водной нагрузкой общим объемом 1000 мл с четырех сторон емкости с кусочком ткани; обезвоживание проводят при аналогичном режиме МВ-печи три раза; затем кусочек ткани заливают смесью спирта с хлороформом в соотношении 1:1, помещают в МВ-печь на 5 мин при мощности 30% и общей водной нагрузке 1250 мл, расположенной по окружности емкости с кусочком с оптимальным радиусом 3 см в пяти емкостях; после заливки чистым хлороформом емкость с кусочком ткани снова помещается в МВ-печь на 10 мин при мощности 70%; парафинизацию осуществляют путем заливки кусочка ткани смесью хлороформа и парафина по традиционной методике, помещают его в МВ-печь на 5 мин при мощности 50% с предшествующей водной нагрузкой, затем заливают жидким парафином по традиционной методике и снова помещают в МВ-печь на 15 мин при мощности 40% и водной нагрузке предшествующего этапа.

Изобретение относится к медицине, точнее, к технике изготовления гистологических препаратов образцов тканей, и может быть использовано при дифференциальной и уточняющей диагностике различных патологических состояний организма.

Известны способы приготовления образцов ткани для микроскопического анализа, включающие их фиксацию, обезвоживание, парафинизацию, после чего из образцов ткани приготавливают на предметных стеклах гистологический препарат для микроскопического исследования (Меркулов Г.А. Курс патологогистологической техники, Медгиз, 1956). Перечисленные этапы приготовления гистологических образцов выполняются вручную путем перемещения их в различные растворы.

Изготовление гистологических образцов по известному способу, предложенному Г.А.Меркуловым, позволяет получить образцы высокого качества при соблюдении всех технологических приемов, а именно, многократное перемещение в различные растворы на длительное время, иногда до 48 ч, промывание в проточной воде в течение нескольких часов. Все это приводит к тому, что общее время изготовления гистологических образцов увеличивается и достигает 7-8 суток. Только по истечении этого времени возможны приготовление гистологических срезов тканей, их интерпретация, окончательная дифференциальная диагностика.

Таким образом, специальное лечение больному может быть назначено через 10-12 дней после обнаружения какой-либо патологии. Такая задержка в специальном лечении отягощает состояние больного, а при наличии злокачественного заболевания чревата значительным прогрессированием процесса и осложнениями в его дальнейшем лечении.

Известен ускоренный способ изготовления гистологических препаратов при так называемой cito-диагностике, когда взятый для гистологического исследования кусочек ткани замораживают жидким азотом на криостате. Затем готовят гистологический препарат, проводят исследование последнего и через 10-50 мин после взятия кусочка ткани определяют характер заболевания больного (Меркулов Г.А. Курс патолого-гистологической техники.- Л.: Медицина, 1969).

Однако такой ускоренный способ изготовления гистологических образцов не может быть использован для исследования всех тканей живого организма. Быстрое замораживание слизистых, т.е. тканей, имеющих рыхлую структуру, приводит к их изменению, и не только внешнего вида, но и структуры клеток, что особенно важно для установления правильного диагноза. Что же касается жировых и дряблых тканей, то они вообще не поддаются быстрому замораживанию. Кроме того, способ ускоренного приготовления гистологических препаратов не может быть применен для исследования костной ткани. Эти негативные свойства вынуждают в дальнейшем возвращаться к повторному исследованию гистологических препаратов тех же тканей, но изготовленных по известному длительному способу.

Целью изобретения является сокращение времени изготовления гистологических препаратов различных тканей при высоком их качестве.

Цель достигается тем, что кусочек ткани, взятый для изготовления гистологического препарата, погружается в емкости с 10%-ным раствором формалина и помещается в бытовую микроволновую (МВ) печь общей мощностью 450 Вт на 20 с при режиме мощности 90%. Обязательно использование водной нагрузки - 250 мл воды в баночке. Далее емкость вынимается из печи, фиксирующая жидкость сливается, после чего кусочек заливается 96%-ным спиртом и помещается в МВ-печь на 10 мин при мощности 20-30% с дополнительной водной нагрузкой в общем объеме 1000 мл с четырех сторон емкости с кусочком. Заливка спиртом (обезвоживание) при том же режиме мощности МВ-печи три раза. Перед парафинизацией кусочек ткани заливается смесью 96%-ного спирта с хлороформом в соотношении 1:1, снова помещается в МВ-печь на 5 мин при мощности 30% и общей водной нагрузке 1250 мл, расположенной по окружности вокруг емкости с кусочком ткани с оптимальным радиусом 3 см в пяти емкостях. Затем емкость с кусочком заливают чистым хлороформом и снова помещают в МВ-печь на 10 мин при мощности 70%. Водная нагрузка та же, что и на предыдущем этапе. На последнем этапе (парафинизации) кусочек ткани заливают смесью хлороформа и парафина по традиционной методике и помещают в МВ-печь на 5 мин при мощности 50% с предшествующей водной нагрузкой. После этого кусочек заливают чистым жидким парафином по традиционной методике и помещают в МВ-печь на 15 мин при мощности 40% с водной нагрузкой предшествующего этапа.

Сопоставительный анализ разработанного способа изготовления гистологических препаратов с известным показывает, что он имеет изобретательский уровень и является новым, так как для специалиста не следует явным образом из уровня современного развития этой отрасли медицины.

Уровень развития технологии изготовления гистологических препаратов в доступной научной и медицинской литературе не располагает информацией об использовании бытовых микроволновых печей для изготовления образцов различных тканей. Данное обстоятельство позволяет считать предлагаемый способ существенно отличающимся от известных в настоящее время.

Разработанный способ является промышленно применимым, так как может быть использован в широкой медицинской практике патоморфологических лабораторий лечебных учреждений.

Предложенный способ был использован для приготовления гистологических образцов различных опухолевых тканей - молочной железы, лимфоузлов, матки, яичников, легкого, мягких тканей. В процессе разработки способа было изготовлено более 400 гистологических препаратов различных типов тканей. Во всех случаях качество препаратов было высоким, что позволяло достаточно легко проводить их интерпретацю и осуществлять дифференциальную диагностику опухолевых образований различной локализации.

Техническим результатом использования разработанного способа состоит в возможности значительно сократить время изготовления гистопрепаратов, получить их высокое качество, увеличить количество изготавливаемых препаратов, не требует дополнительных химреактивов, затраты на приобретение бытовой микроволновой печи окупаются через 1,5-2 месяца.

Формула изобретения

Способ изготовления гистологических препаратов, включающий фиксацию ткани, обезвоживание, просветление и парафинизацию, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени изготовления гистологических препаратов различных тканей, фиксацию, обезвоживание, просветление, парафинизацию проводят в бытовой микроволновой (МВ) печи, при этом фиксацию осуществляют в течение 20 с при мощности 90% (от 450 Вт), после слива фиксирующей жидкости и заливки кусочка 96% спиртом его помещают в МВ-печь на 10 мин при мощности 20 30% с дополнительной водной нагрузкой общим объемом 1000 мл с четырех сторон емкости с кусочком ткани, обезвоживание проводят при аналогичном режиме МВ-печи три раза, затем кусочек ткани заливают смесью 96%-ного спирта с хлороформом в соотношении 1 1, помещают в МВ-печь на 5 мин при мощности 30% и общей водной нагрузке 1250 мл, расположенной по окружности емкости с кусочком с оптимальным радиусом 3 см в пяти емкостях, после заливки чистым хлороформом емкость с кусочком ткани снова помещают в МВ-печь на 10 мин при мощности 70% а парафинизацию осуществляют путем заливки кусочка ткани смесью хлороформа и парафина по традиционной методике, помещают его в МВ-печь на 5 мин при мощности 50% с предшествующей водной нагрузкой, затем заливают жидким парафином по традиционной методике и снова помещают в МВ-печь на 15 мин при мощности 40% и водной нагрузке предшествующего этапа.