Способ определения циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови

 

Способ предназначен для определения циркулирующих иммунных комплексов в биологической жидкости и может быть использован в иммунологии. Из исследуемой пробы биологической жидкости циркулирующие иммунные комплексы осаждают 2%-ным раствором полиэтиленгликоля-6000. В качестве биологической жидкости исследуют сыворотку крови, а 2%-ный раствор ПЭГ-6000 берут в объемном соотношении к исследуемой пробе сыворотки крови 17 : 1 соответственно. Способ позволяет определять циркулирующие иммунные комплексы в малых объемах сыворотки крови.

Изобретение относится к иммунологии.

Аналогами данного изобретения являются методы осаждения (преципитации) циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) из сыворотки крови полиэтиленгликолем-6000 (ПЭГ) и последующего исследования полученных преципитатов с помощью иммуноанализа (L. Hudson, F.C. Hay. Handbook of Practical Immunology, Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1nd edition, 1980).

Прототипом изобретения является авт. св. СССР N 1681261, кл. G 01 N 33/53, 1991, в котором иммунные комплексы осаждают из биологической жидкости - грудного молока - добавлением 2%-ного раствора ПЭГ-6000 при объемном соотношении 1:1.

Признаками прототипа, совпадающими с существенными признаками изобретения являются: определение ЦИК в биологической жидкости; осаждение ЦИК из исследуемой жидкости с помощью 2%-ного раствора ПЭГ-6000.

Недостатком прототипа является относительно большой объем биологической жидкости, необходимый для осаждения ЦИК. При уменьшении объема исследуемой жидкости необходимо соответственно уменьшать и объем раствора ПЭГ. Но при этом резко увеличивается погрешность метода, т.к. раствор ПЭГ обладает значительной вязкостью и отмерить несколько микрометров такого раствора с помощью микропипетки очень трудно. Это является серьезным ограничением для применения прототипа в тех случаях, когда объем исследуемой биологической жидкости заведомо мал, например при определении ЦИК в сыворотке крови у детей, когда невозможно забрать достаточное количество крови.

Изобретение направлено на решение следующей задачи - определение ЦИК в малых объемах сыворотки крови. Для этого предлагается добавлять к исследуемой биологической жидкости 2%-ный раствор ПЭГ-6000 при объемном соотношении соответственно 1:17.

Для определения ЦИК к 10 мкл сыворотки добавляют 170 мкл 2%-ного раствора ПЭГ-6000. Осадок центрифугируют, промывают и ресуспендируют в 1,8 мл фосфатного буфера. По 100 мкл ресуспендированного осадка вносят в лунки полистиролового планшета, на стенках которых предварительно адсорбированы антитела, специфичные к определяемому иммуноглобулину G или M, или A. После инкубации в течение 2 ч лунки промывают и вносят в них по 100 мкл меченных пероксидазой хрена антител к иммуноглобулину G или M, или A соответственно. После инкубации в течение 1 ч и отмывания лунок в них вносят по 100 мкл стандартного раствора хромогена (3,25 мл 0,2 М фосфатного буферного раствора, 3,05 мл 0,1 М лимонной кислоты, 4 мг ортофенилендиамина, 18 мкл 30%-ной перекиси водорода и 12,5 мл дистиллированной воды). Через 5 - 15 мин добавляют в лунки по 50 мкл 1H соляной кислоты. Просчитывают на фотометре с вертикальным лучом оптическую плотность при длине волны 492 нм, по которой с помощью калибровочной кривой (по стандартным образцам с заранее известными концентрациями иммуноглобулина G или M, или A) определяют содержание соответствующего иммуноглобулина.

Формула изобретения

Способ определения циркулирующих иммунных комплексов в биологической жидкости, включающий осаждение их 2%-ным раствором полиэтиленгликоля-6000 (ПЭГ-6000), отличающийся тем, что в качестве биологической жидкости исследуют сыворотку крови, а 2%-ный раствор ПЭГ-6000 берут в объемном соотношении к исследуемой пробе сыворотки крови 17 : 1 соответственно.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к клинической биохимии и может быть использовано для экспресс-определения атерогенности плазмы крови человека
Настоящее изобретение относится к клинической биохимии и описывает способ определения модифицированных липопротеинов низкой плотности (мЛПНП) в сыворотке (плазме) крови человека путем обработки буфером, содержащим поливинилпирролидон (ПВП) с последующей турбидиметрической регистрацией смеси, где обработку сыворотки или плазмы крови человека ведут 10% раствором ПВП-35000±5000 в 0,01 М Трис-HCl-буфере, рН 7,4, содержащем 0,15 М NaCl, при объемном соотношении сыворотка(плазма) : ПВП от (1:2) до (1:10), инкубируют 10 мин при комнатной температуре, измеряют светопоглощение в опытной и контрольной пробах, вычисляют разность между ними и при величине разности более 15 Е констатируют повышенный уровень атерогенных мЛПНП в крови и наличие атеросклеротического процесса у обследуемого человека. Использование простого, доступного и быстрого в осуществлении способа определения мЛПНП в крови человека позволяет проводить скрининговые обследования с целью выявления наличия атеросклеротического процесса на доклинической стадии и диспансеризацию населения. 5 пр., 5 табл.
Изобретение относится к клинической биохимии, и может быть использовано в лабораторной диагностике для определения атерогенности крови по уровню содержания минимально модифицированных липопротеинов низкой плотности (ММ-ЛПНП) в сыворотке или плазме крови человека. ММ-ЛПНП агрегируют из сыворотки или плазмы крови путем обработки буфером, содержащим поливинилпирролидон (ПВП) с мол.массой 12600±2700, при конечной концентрации ПВП от 11,3% до 14,2% в пробе. После инкубации в течение 10 мин измеряют светопоглощение в опытной и контрольной пробах, вычисляют разность и при величине разности более 10 ЕД констатируют атерогенность крови у обследуемого человека за счет повышенного уровня ММ-ЛПНП. Использование простого, доступного и быстрого в осуществлении способа определения ММ-ЛПНП в крови человека позволяет проводить скрининговые обследования с целью выявления наличия атеросклеротического процесса на доклинической стадии и диспансеризации населения. 3 табл., 3 пр.
Изобретение относится к клинической иммунологии и может быть использовано для экспресс-определения атерогенности иммунных комплексов (ИК) сыворотки крови человека. Сущность изобретения состоит в том, что в предлагаемом способе преципитат ИК из сыворотки крови человека готовят путем обработки буфером, содержащим 10% раствор полиэтиленгликоля с молекулярной массой 3350 (ПЭГ-3350), в соотношении 1:3,5, инкубируют в течение 10 мин при комнатной температуре. Агрегаты ИК осаждают центрифугированием, растворяют в буфере без ПЭГ-3350, определяют содержание холестерина в иммунных комплексах (ХИК) и степень связывания комплемента (ССК) морской свинки преципитированными иммунными комплексами. Рассчитывают атерогенность ИК как отношение ССК к ХИК и при величине менее 4 ЕД констатируют повышенную атерогенность крови. ! табл.
Изобретение относится к клинической иммунологии и может быть использовано для определения атерогенности иммунных комплексов, содержащих множественно модифицированные липопротеины низкой плотности (ИК-ммЛПНП). Для этого преципитат ИК-ммЛПНП из сыворотки крови человека готовят путем обработки буфером, содержащим 10%-ный раствор полиэтиленгликоля с молекулярной массой 3350 (ПЭГ-3350), в соотношении 1:2,5, инкубируют в течение 10 мин при комнатной температуре. Агрегаты ИК-ммЛПНП осаждают центрифугированием, растворяют в буфере без ПЭГ-3350, определяют содержание холестерина в иммунных комплексах (ХИК) и степень связывания комплемента (ССК) морской свинки преципитированными иммунными комплексами. Рассчитывают атерогенность ИК-ммЛПНП как отношение ССК к ХИК. При величине менее 24 ЕД констатируют повышенную атерогенность крови из-за сниженной комплементактивирующей функции IgG в ИК-ммЛПНП. Использование данного способа позволяет проводить оценку атерогенности ИК-ммЛПНП, диагностировать атеросклероз на доклинической стадии, а также прогнозировать как течение атеросклеротического процесса у индивидуумов, так и эффективность проводимой терапии. 1 табл.

Изобретение относится к медицине и предназначено для выделения и исследования иммунных комплексов, содержащих множественно модифицированные липопротеины низкой плотности (ИК-ммЛНП), из сыворотки крови человека. Агрегируют из сыворотки крови человека множественно модифицированные ЛНП в условиях 9,1% ПВП-35000 при комнатной температуре, осаждают центрифугированием, тщательно декантируют. Полученный супернатант инкубируют при 4°С в течение 30 мин. Образовавшиеся агрегаты ИК-ммЛНП осаждают повторным центрифугированием, декантируют, растворяют преципитат в буфере без ПВП и определяют содержание холестерина, триацилглицеринов. Определяют содержание IgG в составе преципитата. Исследуют комплемент-связывающую способность иммунных комплексов, содержащих ммЛНП. Способ может применяться для ранней диагностики субклинического атеросклероза. 1 ил., 5 табл., 3 пр.
Наверх