Способ предупреждения и лечения облысения, вызванного химиотерапией

 

Изобретение относится к медицине, в частности к химиотерапии, и касается предупреждения и лечения вызванного ею облысения. Для этого вводят витамин Д₃ или витамин Д₃ в сочетании с эпидермическим или фибробластным фактором роста. В изобретении могут быть использованы также дериваты, аналоги или активные метаболиты витамина Д₃. 10 з.п. ф-лы, 12 ил., 3 табл.

Изобретение относится к области медицины, в основном сводится к методу предотвращения или лечения облысения и, в частности, к методу предотвращения или лечения облысения, вызванного химиотерапевтическими препаратами.

Известен способ лечения от облысения, включающий воздействие на человека, принимающего химиотерапию или теплокровное животное препаратами, стимулирующими рост волос, в том числе хотя бы одним протеиновым фактором роста в количестве, достаточном для предотвращения или уменьшения облысения (Hussein ef al - Science, 1990, 249, pp. 1564-1566).

Недостаток этого способа заключается в том, что этот способ недостаточно эффективен при лечении пациентов, принимающих химиотерапевтические препараты.

Цель изобретения - повышение эффективности способа лечения или предотвращения облысения у пациентов, подвергающихся воздействию химиотерапевтических препаратов.

Указанная цель достигается тем, что в указанном способе предупреждения и лечения облысения, вызванного химиотерапией, включающем воздействие на теплокровное животное или человека, принимающего химиотерапию, препаратами, стимулирующими рост волос или хотя бы одним протеиновым фактором роста, в качестве вышеупомянутого препарата используют витамин D₃, или производный аналог, или структурный аналог из него; и еще тем, что вышеуказанным производным является 1,25-дигидроксинвитамин D₃, или 1,25-дигидроксин-16-ион-23-енхолекальцеферол. И тем, что витамин D₃, или производный, аналоговый или структурный аналог из него применяют местно, и еще тем, что в качестве химиотерапевтического препарата используют лекарство клеточного цикла, и тем, что в качестве препарата клеточного цикла используют цитозин арабинозид, и еще тем, что в качестве химиотерапевтического препарата используют препарат неклеточного цикла, а также тем, что в качестве препарата неклеточного цикла используют цитоксан, и тем, что в качестве химиотерапевтического препарата используют препарат клеточного цикла в комбинации с препаратом неклеточного цикла, и тем, что витамин D₃, или производный аналог, или структурный вариант из него применяют до начала вышеуказанной химиотерапии. Эффект также достигается и тем, что в качестве фактора роста используют эпидермический препарат роста, и тем, что в качестве фактора роста используют фибробласт фактор роста и что в качестве препарата, стимулирующего рост волос, используют витамин D₃, или компонент, аналоговый или производный из него, в количестве, достаточном, чтобы вызвать указанную стимуляцию, а также тем, что производят воздействие на указанных животных и людей протеиновым фактором роста, и тем, что в качестве протеинового фактора роста используют эпидермический препарат роста, и тем, что в качестве стимулятора роста волос используют комбинации витамина D₃, или компонентов, аналогов или производных из него, и протеиновых факторов роста вместе с фармацевтически применяемым веществом и еще тем, что указанный состав применяется в виде геля, крема, лосьона или помады.

Облысение - это общий и мучительный посторонний эффект от приема большого количества химиотерапевтических препаратов, от которого в настоящее время нет эффективной меры защиты.

Во время последних исследований у 35 из 46 пациентов, получавших химиотерапию, наблюдались склонность к облысению и частичное облысение.

Изобретение являет собой независимый метод предотвращения и лечения облысения, вызванного химиотерапевтическим лечением.

Этот метод включает в себя использование фактора роста, как, например, эпидермический фактор роста (ЕЖФ далее) или фибробласт фактора роста (ФЖФ далее). Необходимо заметить, что препарат "Imuvert" не стимулировал производительность УЖФ или ФЖФ и не был предназначен для этой цели.

Изобретение также имеет отношение к использованию витамина D₃ или его компонентов в чистом виде, или совместно с ЕЖФ для предотвращения облысения. Витамин D₃ абсорбируется после проглатывания масел, содержащихся в печени рыбы или подвергнутых облучению дрожжей. Растительные и животные источники содержат только неактивные элементы витамина D₃, 7-дегидрохолестерол или эргостерол, 7-дегидрозолестерол присутствует в коже и может быть преобразован солнечным светом в витамине D₃. Тем не менее либо принятый вовнутрь, или сформированный под влиянием солнечных лучей в коже витамин D₃ должен быть преобразован в активные компоненты обмена веществ. Витамин D₃ преобразовывается в 25-гидроксинхолекальциферол ферментами печени. Затем в почках формируются два состава: 1,25-дегидроксинхолекальциферол и 24,25-дигидроксинхолекальциферол. Активные компоненты обмена веществ витамина D₃ играют важную роль в абсорбции кальция из желудочно-кишечного тракта, костяных отложений и костяной переабсобции. 1,25-дигидроксинвитамин D₃, участвующий в обмене веществ, показал влияние на увеличение ЕЖФ рецепторов на раковых клетках молочных желез. Тем не менее, установлено, что эффект витамина D₃ или его компонентов на облысение не был ранее показан или предложен.

На фиг. 1 изображены 10 крыс, над которыми проводился эксперимент (например, эксперимент 1, табл. 1). Все крысы получали ARA-C 50 мг/кг·7 дн, 5 крыс получали промежуточный раствор S.C., 5 крыс (изображенные внизу) получали солянокислый раствор EGF 2 мг S.C. в течение 7 дн; на фиг. 2 - шесть крыс (эксперимент 3, табл. 1). Все крысы получали ARA-C 50 мг/кг в течение 7 дн, 3 крысы (изображенные наверху) получали промежуточный раствор S.C., а 3 крысы (внизу) получали rHu-EGF 2 мг. S.C. в течение 7 дн; на фиг. 3 - четыре крысы, над которыми был проведен солянокислотно-EGF эксперимент. Все крысы получали ARA-C 50 мг/кг·7 дн. Две крысы слева получали солянокислотный раствор EGF 10 мг в DMSO ежедневно в течение 7 дн, втираемый ежедневно между плечевыми лопатками на площади 1 см. Две крысы справа получали промежуточный раствор местно; на фиг. 4 - двенадцать крыс из ARA-C и FGF эксперимента (см. ниже). Все крысы получали ARA-C 50 мг/кг в течение 7 дн. Шесть крыс (верхний ряд) получали промежуточный раствор S.C., а 6 других получали aFGF 2 мг S.C. в течение 7 дн; на фиг. 5 - фотография 8 крыс, обработанных комбинацией химиотерапевтических препаратов Cytoxan и Adriamycin; крысы в верхнем ряду дополнительно обрабатывались солянокислым раствором EGF, 4 крысы, изображенные в нижнем ряду, получали промежуточный раствор; на фиг. 6 - десять крыс, обработанных UP-16. Все крысы получали 1,5 мг/кг·3 дн i.p/. VP-16. 5 крыс верхнего ряда получали промежуточный раствор в течение 4 дн перед обработкой. 5 крыс нижнего ряда получали витамин D₃ 50 мг в день в течение 4 дн за 4 дня до обработки; на фиг. 7 - шесть крыс, обработанных комбинацией химиотерапевтических препаратов Cytoxan и Adriamycin (25 мг/кг i.p. в течение 3 дн). 3 крысы, изображенные в верхнем ряду, получали промежуточный раствор в течение 4 дн до обработки. 3 крысы нижнего ряда получали витамин D₃ 50 мг в день в течение 4 дн до обработки; Для каждого эксперимента крысы в возрасте 5 дн были разделены наугад на одинаковые номера. Экспериментальная группа крыс (фиг. 8 сверху) получала 0,2 мг 1,25-дигидроксивитамина D₃ в 0,15 мл абсолютного этанола в виде инъекций ежедневно в головную и шейную части туловища в течение 5 дн. Контрольные крысы (фиг. 8, внизу) были также обработаны 0,15 мл абсолютного этанола. Через день после последней процедуры крысы, изображенные на фиг. 8,а, были обработаны Etoposid (VP-16) диетой, а крысы, изображенные на фиг. 9, обработаны CTX+Adviamicin (ADM) диетой; 20 крыс в возрасте 5 дн были наугад разделены на две группы по 10 крыс в каждой. Экспериментальная группа крыс (фиг. 10, вверху) получила 0,1 мг 1,25 (OH)20 в 0,1 мл абсолютного этанола ежедневно в голову в течение 5 дн. Контрольные крысы (фиг. 10, внизу) были аналогично обработаны 0,1 мл абсолютного этанола. Через день после последней местной обработки все крысы были посажены на диету VP-16; 13 девятидневных крыс наугад разделены на две группы. Экспериментальная группа из 7 крыс (фиг. 11, вверху) получали 1 мг RO23-7553 в 0,2 мл абсолютного этанола ежедневно местно в заднюю часть туловища 6 дн. Контрольная группа из 6 крыс была аналогично обработана 0,2 мл абсолютного этанола (фиг. 11, внизу). Через день после последней обработки все крысы были обработаны диетой VP-16;
на фиг. 12 показан эффект 1,25-дигидроксивитамина D₃ на рост волос.

Изобретение в основном сводится к методу предотвращения или уменьшения облысения, особенно у пациентов, подвергающихся химиотерапии.

Исследования показали, что фактор роста, такой как, например, EGF (эпидермический фактор роста) и витамин D₃ помогают луковице волоса сопротивляться токсичному воздействию химиотерапевтических препаратов, что предотвращает потерю волос.

В одном примере воплощения настоящего метода фактор роста прописывается для оказания помощи пациентам, применявшим химиотерапию в количестве, достаточном для предотвращения или уменьшения потери волос, которой обычно сопровождается такое лечение.

Факторы роста, пригодные для использования в настоящем методе, включают EGF, FGF, преобразующийся в фактор роста (TGF) и PDGF.

Факторы роста могут быть взяты из натуральных источников (например, человеческая ткань или ткань грызуна), тем не менее комбинированный продукт предпочитается как большое количество и может быть произведено по относительно низкой цене. Синтезированные химическим путем факторы также могут быть использованы. Использование порций или частей факторов роста, таких как EGF и FGF, также предполагается так скоро, как только эти порции или части смогут вызывать такой же результат, рассмотренный с фактором как с таковым.

В другом примере использования изобретения витамин D₃ или его компонент, аналогичный, частичный или структурный вариант из него (например, 1,25-дигидроксин-16-ене-23-ион-холенациферол; 1 а-гидроксивитамин D₃; 1 а-24-дигидроксинвитамин D₃, MC 903 и т.д.) прописывается теплокровным млекопитающим, например человеку, в количестве, достаточном для предотвращения или уменьшения потери волос или стимуляции роста волос. Облысение, обрабатываемое или предотвращаемое использованием витамина D₃, может быть обусловлено химиотерапией или другой причиной, включая (но неограничиваясь) мужскую плешивость. Примеры компонентов витамина D₃, пригодных для использования в настоящем методе, включают, но не ограничиваются 1,25-дигидроксивитамином D₃, и 1,25-дигидроксин-16-ион-23-ен холекальциферолом.

Составы, пригодные для использования в настоящем методе, включают факторы роста, такие как активное вещество, витамин D₃ (или его компонент, или аналог) либо комбинирование обоих. Подобные составы могут быть приготовлены путем смешения с фармацевтически приемлемыми связующими веществами (бацилллоносители) в количестве, достаточном, чтобы вызвать эффект предотвращения, когда помощь оказывается согласно с соответствующе оформленным режимом лечения. Состав может находиться в дозированной форме.

Не ограничивая данный метод на определенном способе действия, было предложено, что витамин D₃ защищает от облысения путем увеличения рецепторов для EGF на уровне луковиц волос. Согласно этому изготовление комбинации фактора роста с витамином D₃ дает основание для более мощной защиты.

Растворы, пригодные для использования в методе, к которому относится изобретение, могут находиться в форме, пригодной для местного воздействия. Так, например, раствор может принимать форму жидкости, мази, крема, геля или помады. Когда лекарство применяется путем впрыскивания, оно принимает форму жидкости. Используемое связующее вещество независимо от формы может быть нейтральным либо может само обладать физиологически или формацевтически полезным действием.

Различные дополнители могут быть включены в состав средства. В этом отношении включение в состав средства веществ, стимулирующих производительность собственного коэффициента роста, рассматривается.

Добавление в состав средства, используемого для оказания помощи, усиливающих проникновение веществ, таких как OMSO или этанол, предпочтительно.

Стимуляторы, которые расширяют воздействие других препаратов, могут быть включены в средство независимо от состояния, в котором оно производится.

Квалифицированный специалист оценил бы, что различные концентрации фактора роста и/или витамина D₃ могут быть использованы в вышеописанном средстве. Оптимальные концентрации могут быть без труда определены квалифицированным специалистом.

Как замечено, метод, к которому сводится изобретение, может включать в себя как наружное применение активного вещества (коэффициент роста либо витамин D₃, или его компоненты), так и применение путем инъекции. Количество активного вещества и частота применения могут изменяться в зависимости от желания человека и могут без труда быть оптимизированы квалифицированным специалистом.

К примеру, раствор из 2-100 мг/мл 1,25-дигидроксинвитамина D₃ в абсолютном этаноле может быть приготовлен и 3-5 мл этого состава употреблено (введено) непосредственно в кожу головы в различные точки шприцем в течение 3-5 мин, чтобы обеспечить распространение. Когда задействована химиотерапия, эта обработка производится преимущественно раз или два в день ежедневно, начиная за 5-8 дн до начала химиотерапии и продолжая в течение всего ее курса. Тем не менее предполагается также, что активное вещество может быть применено по существу одновременно с применением химиотерапевтического препарата или вслед за ним. Метод, к которому сводится изобретение, показан на примерах, которые эффективны, когда специальное лекарство клеточного цикла ARA-C и есть используемый химиотерапевтический препарат и когда комбинация препаратов Adriamycin (специфический клеточный цикл) и Cytoxan (специфический неклеточный цикл) также используется. Предполагается тем не менее, что, используя настоящий метод, потеря волос, вызванная другими химиотерапевтическими препаратами, может также быть предотвращена.

Дополнительно ожидается, что фактор роста и/или витамин D₃ может быть применен для предотвращения или задержки потери волос при мужской плешивости, если препарат использовать на регулярной основе и лучше, если после первых признаков плешивости, к примеру раз или два в день или через день в нужный участок кожи головы.

Эффект предотвращения облысения, рассмотренный экспериментаторами, был полностью неожиданным. Факторы роста, такие как TGF, оказались предполагаемыми стимуляторами роста клеток кожи. Следовательно, ожидается, что эти вещества заставят волосяную луковицу (фолликул) войти в клеточный цикл, тем самым делая луковиц (фолликул) более восприимчивым к химиотерапевтическим препаратам, определенным препаратам специфического клеточного цикла, таких как ARA-C. Так, воздействие факторов роста на пациентов, получающих химиотерапию, как ожидалось, усугубит потерю волос. Но обратный эффект тем не менее был достигнут. Нужно заметить что наблюдения, записанные здесь с EGF и FGF, новы и не были представлены или описаны в литературе.

Нижеследующие примеры описывают некоторые аспекты изобретения в подробных деталях.

Дальнейшие детали экспериментов относятся к примерам 1 - 4, описанным ниже.

Крысы породы Spraque Dawley были приобретены в Чарлес Ривер Лаборатории Виллингтон, МА. Препарат Cytosar - U (ARA-C) получили от компании Апджон, Каламазо, М. Ай.

Все крысы из каждого эксперимента были обработаны ARA-C 50 мг/кг внутрибрюшинно (далее и везде - i.p.) ежедневно, в течение 7 дн. Для подкожных инъекций (далее и везде S.C.). EGF и FGF были приготовлены в PBS 1,0%-ного BSA. Облысение обнаруживалось всегда на 12-й день эксперимента и выглядело таким, как оно описывалось ранее. Для местной обработки солянокислый раствор EGF был приготовлен следующим образом; один пузырек EGF (100 мг) был растворен в 0,2 мл PBS 1%-ного BSA и 0,12 мл этого раствора было добавлено в 0,48 DMSO. За 3 ч до впрыскивания ARA-C, 0,1 мл EGF-DMSO состава был введен каждой крысе на площади в 1 см между плечами, используя резиновый втиратель. Затем в течение последующих 3 ч все крысы были изолированы друг от друга, после этого место введения состава осторожно промыто водой с мылом и высушено. Обработка продолжалась 7 дн. Контрольные животные были также обработаны, используя DMSO без EGF.

Пример 1. Защитный эффект EGF. Два отдельных эксперимента были проведены, чтобы проверить возможность солянокислого раствора EGF защищать от ARA-C - вызванного облысения. В первом эксперименте 22 крысы в возрасте 7 дн были наугад разделены на две группы по 11 крыс в каждой. Дополнительно к ARA-C группа 1 получила 2 мг мышинного EGF S.C в заднюю часть за 3 ч до введения ARA-C ежедневно в течение 7 дн. Вторая группа также получала промежуточный раствор и использовалась как контрольная. 10 из 11 крыс во второй группе полностью облысели и одна крыса облысела более чем на 50%. Напротив, в первой группе у пяти крыс признаков выпадения волос не обнаружилось, а у шести крыс обнаружилась частичная потеря волос (менее 50%) (табл. 1, эксперимент 1, фиг. 1). Во втором эксперименте 12 крыс в возрасте 7 дн были наугад разделены на группы по шести крыс в каждой. Дополнительно к ARA-C группа 1 получила мышинный EGF 1 мг S.C ежедневно в течение 7 дн. Вторая группа получала промежуточный раствор S.C. Все шесть крыс во второй группе показали признаки от среднего до полного облысения, тогда как в первой группе одна крыса признаков облысения не показала вообще, а пять крыс показали только минимальную потерю волос (табл. 1, эксперимент 2).

Для следующего эксперимента был использован rHu-EGF. 12 крыс в возрасте 7 дн были наугад разделены на две группы по шести крыс в каждой. Дополнительно к ARA-C группа 1 получила rHU-EGF 2 мг S.C. в боковую часть туловища в течение 7 дн. Вторая группа получала промежуточный раствор S.C. У всех шести крыс во второй группе обнаружилось полное облысение тела, тогда как в первой группе ни у одной крысы не обнаружилось полного облысения, одна крыса не обнаружила различимой потери волос, четыре крысы имели небольшое облысение и у одной - наблюдалось среднее облысение (табл. 1, эксперимент 3, фиг. 2).

Крысы семидневного возраста были использованы для всех экспериментов. Все крысы получили ARA-C 50 мг/кг в течение 7 дн i.p. в 0,1 мл. Солянокислый раствор EGF и rHu-EGF в PBS 1%-ного BSA был дан за 3 ч до ARA-C один раз в день ежедневно в 0,1 мл S.A. в течение 7 дн. Информация записывалась на 12-й день: облысение не обнаружено (0); небольшое облысение, определяемое как потеря менее 50% волос (1+); усиленное облысение с потерей волос более 50% (2+); полная потеря волос 90% и более (3+).

В следующем эксперименте 12 крыс в возрасте 7 дн были наугад разделены на две группы по 6 крыс в каждой. Группа 1 в дополнение к ARA-C получала солянокислый раствор EGF 10 мг в OMSO ежедневно путем наружного втирания шелковым втирателем между плечевыми лопатками на площади в 1 см. Группа 2 получала контрольный раствор наружно. Во второй группе все 6 крыс полностью облысели. В первой группе все крысы полностью облысели, кроме тех мест, куда EGF был применен наружно (фиг. 3).

Пример 2. Защитный эффект aFGF. 14 крыс в возрасте 7 дн были наугад отобраны в две группы. Все крысы получали ARA-C 50 мг/кг в день в течение 7 дн. Дополнительно группа 1 получила aFGF 2 мг S.C. в затылок в течение 7 дн. Группа 2 получала промежуточный раствор и была контрольной. Облысение зарегистрировано на 12-й день эксперимента. Все крысы во второй группе показали полное облысение туловища. Напротив все крысы в 1-й группе были в местах инъекций не облысели (фиг. 4).

Пример 3. Защита от облысения, вызванного препаратами Cytoxan/Adriamicin. Восемь крыс породы Shraque Dawley в возрасте 4 дн были наугад разделены на две группы по четыре в каждой. Группа 1 получала EGF 2 мг S. C. в головную часть ежедневно в течение 7 дн. Вторая группа получала инъекции промежуточного раствора и была контрольной. Через день после прекращения вливаний EGF или промежуточного раствора все крысы получили Cytoxan 25 мг/кг i. p. в течение 1 дня и Adriamycin 25 мг/кг i.p. в течение 3 дн. Во второй группе все крысы имели облысение 3+ в головной и шейной частях. Напротив, в первой группе у одной крысы обнаружено небольшое облысение, у одной минимальное, а двух крыс не обнаружено никакого облысения вообще ни на голове, ни на шее. (фиг. 5). Препарат Imuvert, используемый в таких же условиях, не защитила от облысения, вызванного комбинацией препаратов Cytoxan/Adriamycin.

Пример 4. Защитный эффект витамина D₃. Двенадцать крыс в возрасте 7 дн была разделены на две группы. Группа 1 обрабатывалась ежедневно промежуточным раствором 0,1 мл S.C. в течение 4 дн. Вторая группа ежедневно обрабатывалась витамином D₃ 50 мг. S.C., обработке подвергалась головная часть туловища крыс в течение 4 дн. После прекращения обработки промежуточным раствором или витамином D₃ все крысы получили 1,5 мг/кг i.p. VP-16 (Etoposide) ежедневно в течение 3 дн. Все крысы в группе 1 обнаружили полное облысение туловища, когда крысы из второй группы были покрыты волосяным покровом (на фиг. 6 показаны четыре крысы из каждой группы).

В других экспериментах крысы, предварительно обработанные витамином D₃, продемонстрировали блестящую защиту против облысения, вызванного Etoposide, Cytoxan, Cytarabine - препаратами и комбинацией из препаратов Cytoxan и Adriamycin (фиг. 7). Результаты продемонстрированы в табл. 2.

Химиотерапевтические препараты были даны в следующем порядке. VP-16 1,5 мг/кг I.P. ежедневно в течение 3 дн; Cytoxan 32,5 мг/кг как отдельное впрыскивание; ARA-C 50 мг/кг I. P. ежедневно в течение 7 дн. Для комбинации (Adriamycin 2,5 мг/кг I.P. ежедневно в течение 3 дн плюс Cytoxan 25 мг/кг как одно впрыскивание). Витамин D₃ вводился в 50 мг/кг ежедневных дозах I.P. или S.C. в течение 4 дн до химиотерапии.

В других экспериментах 1,25-дигидроксинвитамин D₃, употреблявшийся местно (0,5 мг ежедневно) в 50%-ном этаноле или OMSO, также защитил крыс от VP-16, вызывающего облысение.

Пример 5. Защитный эффект предварительной обработки витамином D₃. Местное применение 1,25-дигидроксивитамина D₃: 1,25-дигидровитамина D₃ был растворен в абсолютном этаноле и применен местно. Контрольные животные были также обработаны таким же количеством этанола. Затем животные помещались отдельно на 3 ч, в течение которых обработанная поверхность была промыта мылом с водой и просушена. Обработке животных подвергались ежедневно, начиная на 5-й день от рождения и заканчивая на 10-й.

Химиотерапия. Вся химиотерапия проводилась I.P. и начиналась на 11-й день после рождения. CTX 35 мг/кг применялся только один день. VP-16 1,5 мг/кг применялся в течение 3 дн. Для комбинации из CTX и ADM CTX 25 мг/кг применялся в течение одного дня и ADM 25 мг/кг - в течение 3 дн. В таких дозах ни CTX, ни ADM не вызывает облысения. Облысение было зарегистрировано на 10-й день после начала химиотерапии.

Всего было проделано четыре эксперимента. В первом эксперименте проверялась защита от облысения. Экспериментальная группа была предварительно обработана 0,2 мг 1,25-диогидроксинвитамином D₃ в 0,15 мл абсолютного этанола, примененного местно в головную и шейную части туловища, а контрольная группа получила 0,15 мл алкоголя. Все 10 крыс в контрольной группе полностью облысели. Напротив, все животные из экспериментальной группы остались защищены (фиг. 8,а).

Второй эксперимент был проведен при тех же условиях для проверки защиты от облысения, вызываемого VP-16. Все 10 крыс из контрольной группы полностью облысели. Напротив, все крысы из экспериментальной группы были защищены (фиг. 8,в).

Третий эксперимент был проведен для проверки защиты от облысения, вызванного комбинацией Cytoxan-Adriamycin. В каждой группе было по 11 крыс. У шести крыс из контрольной группы облысели головы и шеи, а пять крыс облысели полностью. Напротив, все крысы в экспериментальной группе были защищены (фиг. 8,с). В четвертом эксперименте также проверялась защита от облысения, вызванного VP-16, за исключением того, что доза 1,25-дигидроксинвитамина D₃ была уменьшена до 0,1 мг в 0,1 мл абсолютного этанола, примененного местно только в головную часть туловища. 10 крыс в контрольной группе полностью облысели. Напротив, все крысы из экспериментальной группы оказались защищены прежде всего в местах применения 1,25-дигидроксивитамина D₃ (фиг. 9).

Заслуживает внимания, что защита, полученная от 0,2 мг 1,25-дигидроксинвитамина D₃, не ограничивала применения и действовала на все туловище, демонстрируя влияющую на весь организм абсорбцию.

Когда же доза была уменьшена до 0,1 мг и применена только в головную часть, защита от облысения, вызванного VP-16, была менее стойкой и более ограничивалась местом применения.

Пример 6. Защита от VP-16 - вызванного облысения путем местного воздействия веществом RO23-7553. RO 23-7553 (1,25-дигидроксин-16-ион-23-ен-холекальциферол) был растворен в абсолютном этаноле и применен местно. Контрольные крысы были обработаны также и таким же количеством этанола. Затем животные содержались отдельно 3 ч, в течение которых обработанная поверхность была промыта мылом с водой и высушена. Обработка велась ежедневно, начиная на 9-й день после появления на свет и заканчивалась на 14-й день.

На 15-й день все животные получили VP-16, 1,5 мг/кг I.P. в течение 3 дн. Облысение было зарегистрировано на 25-й день.

13 крыс были наугад разделены на две группы: на экспериментальную из семи крыс и контрольную из шести. Экспериментальная была предварительно обработана 1 мг RО 23-7553 в 0,2 мл абсолютного этанола, введенным местно в район шеи и задней части туловища, а контрольная группа получила 0,2 мл абсолютного этанола. Все шесть крыс контрольной группы полностью облысели в районе шейной и задней частей туловища. Напротив, все животные из экспериментальной группы остались защищены (фиг. 10). Должно быть замечено, что, когда химиотерапия началась в возрасте 14 дн, район головы облысению не подвергался.

Пример 7. Стимуляция роста волос витамином D₃. В течение всего курса вышеописанных исследований по защите от химиотерапевтически вызванного облысения витамином D₃ и его активным аналогом 1,25-дигидроксинвитамином D₃ было установлено, что крысы, обработанные 1,25-дигидроксинвитамином D₃ не только оказались защищены от облысения, но еще и получили улучшенный волосяной покров и более длинные волосы в обработанных местах. Эти наблюдения дали подсказку для следующих экспериментов по стимуляции роста волос 1,25-дигидроксинвитамином D₃. Задняя часть туловища 19 крыс породы Spraque Dawley в возрасте 25 дн была обрита и крыс разделили на две группы.

Группа 1 (10 контрольных крыс) получала по 0,1 мл этанола, введенного местно один раз в день в обритую часть в течение 14 дн.

Группа 2 (9 крыс) получала 50 мг 1,25-дигидроксинвитамина D₃ в 0,1 мл этанола, примененного местно раз в день в обритую часть в течение 14 дн. На 15-й день стимуляция чрезмерного роста волос была определена путем повторного обривания района площадью 6·6 см². Волосы были собраны и взвешены. Разница между двумя группами была статистически очень значительной (табл. 3). Значение P 0.003 (см. 6 пример 3, фиг. 11).

Базируясь на этой информации, показывающей стимуляцию роста волос 1,23-дигидроксинвитамином D₃, примененного на крысе, ожидается, что 1,25-дигидроксинвитамин может использоваться как стимулятор роста волос в случаях облысения по любой причине. Дополнительные данные показывают, что витамин D₃ и его компоненты необходимы для оптимального роста волос и поэтому могут быть использованы для предотвращения облысения по любой причине, включая мужскую плешивость.

Пример 8. Формулировки.

Далее следуют четыре рецепта, которые включают 1,25-дигидроксинвитамина D₃ как активный ингредиент и методы их получения.

1. Местный раствор.

Ингредиенты, % (W W)
1,25-дигидроксинвитамин D₃ - 0,0002-0,10
Пропиленгликоль - 10,00
Дикарприлайт/Дикапрайт^* - 30,00
Бутиловый гидрокситолюин (ВНТ) - 0,05
Бутиловый гидроксинанисоль (ВНА) - 0,05
Этилалкоголь, абсолют г.с. - 100,00
^*Может быть уменьшен следующими компонентами: (1) триглицерид среднего звена; (2) диметил изосорбид; (3) полиэтиленгликоль; (4) эфоксидигликоль.

Способ получения:
1. Взвесить достаточное количество пропиленгликоля, этилалкоголя, пропиленгликоля в стальном нержавеющем контейнере.

2. Растворитель BHT и BHA в растворе, приготовленном на этапе N1.

3. Добавить 1,25-дигидроксинвитамина D₃ раствор из этапа 2 и взболтать до полного растворения.

2. Промежуточный местный раствор
Ингредиенты, %(W W)
1,25-дигидроксинвитамин D₃ - 0,0002-0,10
Пропиленглюколь - 50,00
Гидроксинпропил целлюлозы (Клюкель MF) - 0,50
Метилпарабин - 0,20
Бутиловый гидроксинтолюин (BHT) - 0,05
Бутиловый гидроксинанисоль (BHA) - 0,05
Фосфат соды одноосновный - 0,43
Фосфат соды двуосновный - 0,70
Гидроксид соды (g.s. r PH = 7) - 0,04
Этилалкоголь, 95% - 30,00
Вода g.s. к - 100,00
Способ получения:
1. Растворить фосфат соды одноосновный, фосфат соды двуосновный и гидроксид соды в воде в стальном нержавеющем контейнере. Замерить pH раствором, который должен быть равен 7,0, если нет, то увеличить pH.

2. Добавить пропиленгликоль и этилалкоголь в раствор, полученный на этапе 1.

3. Растворить 1,25-дигидроксинвитамин D₃, метилпарабин, BHT и BHA в растворе, полученном на этапе 2.

4. Растворить клюкель MF в растворе, полученном на предыдущем этапе.

Водно-масляный смягчающий лосьон наружного применения.

Ингредиенты, % (W W)
1,25-дигидроксинвитамин D₃ - 0,0002-0,10
Цетилалкоголь - 0,25
Стеарил алкоголь - 0,50
Сорбит одноосновный - 2,00
Глицерил одноосновный и поликсиэтилен стеариновая смесь - 4,00
Полисорбат 60 - 1,00
Минеральное масло - 4,00
Пропиленгликоль - 5,00
Бутиловый гидроксинанисоль - 0,05
Пропилпарабен - 0,05
Дополнители до нужного pH - 7,00
Раствор сорбитола - 2,00
Едитат дисодиум - 0,10
Метилпарабин - 0,18
Вода g.s. - 100,00
Способ приготовления:
1. Приготовить промежуточный раствор (pH 7,00) в нержавеющем стальном контейнере.

2. В стальном нержавеющем сосуде при 70^oC растворить цетилалкоголь, стирилакоголь, сорбит одноосновный арлакель 165, полисорбат 60, минеральное масло, бутиловый гидроксианисоль, пропилпарабин и 50%-ный пропиленгликоль (все вместе).

3. Добавить раствор из этапа 1 и разогреть до 70^oC.

4. Добавить в раствор из этапа 3 эитат дисодиум и метилпарабен.

5. Растворить 1,25-дигидроксинвитамин D₃ в приблизительно 405 пропиленгликоле в пробирке и добавить в раствор, полученный на этапе 2, до получения однородной смеси. Промыть контейнер от 10%-ного пропиленгликоля и добавить это в смесь из этапа 2.

6. Добавить полученное на этапе 5 в полученное на этапе 4, когда оба раствора нагреты до 70^oC и сделать раствор однородным. Охладить эмульсию до температуры 20^oС.

3. Гель для наружного применения.

Ингредиенты, % (W W)
1,25-дигидроксинвитамин D₃ - 0,0002-0,10
Бутиловый гидроксинтолюин (BTH) - 0,005
Бутиловый гидроксианисоль (BHA) - 0,005
Гидроксинпропил целлюлозы - 3,00
95%-ный этиалкоголь - 50,00
Вода g.s. - 100,00
Способ получения:
1. Поместить этилалкоголь и воду в нержавеющий стальной контейнер.

2. Растворить 1,25-дигидроксивитамин D₃, BHT и BHA в растворе из этапа 1.

3. Растворить гидроксинпропил целлюлозы в растворе из этапа 2.

Полное содержание всех статей, приведенных выше, объединено далее справочником.

Хотя изобретение было описано в некоторых деталях в целях разъяснения и понимания, квалифицированный специалист оценит, что различные изменения формы и деталей могут быть сделаны без отступления от сути изобретения.

Формула изобретения

1. Способ предупреждения и лечения облысения, вызванного химиотерапией, включающей воздействие препаратами, стимулирующими рост волос и/или по крайней мере одним протеиновым фактором роста, отличающийся тем, что в качестве препарата стимулирующего рост волос используют витамин D₃, или производные аналог, или структурный аналог из него, а в качестве протеинового фактора роста используют эпидермический фактор роста или фибробластный фактор роста.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве производного аналога используется 1,25-дигидроксинвитамин D₃ или 1,25-дигидроксин-16-ион-23-ен-холекальцеферол.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве химиотерапевтического препарата используют лекарство клеточного цикла.

4. Способ по п.3, отличающийся тем, что в качестве лекарства клеточного цикла используют цитозин арабинозид.

5. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве химиотерапевтического препарата используют препарат неклеточного цикла.

6. Способ по п.5, отличающийся тем, что в качестве препарата неклеточного цикла используют цитоксан.

7. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве химиотерапевтического препарата используют препарат клеточного цикла в комбинации с препаратом неклеточного цикла.

8. Способ по п.1, отличающийся тем, что витамин D₃, или его производный, или структурный аналог используют до начала химиотерапии.

9. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве препарата, стимулирующего рост волос, используют витамин D₃, или его производный, или структурный аналог в эффективном количестве, достаточном для указанной стимуляции.

10. Способ по п.9, отличающийся тем, что в качестве стимулятора роста волос используют комбинации витамина D₃, или его производного, или структурного аналога и протеиновых факторов роста вместе с фармацевтически приемлемым веществом в эффективном соотношении всех компонентов и применяют местно.

11. Способ по п.10, отличающийся тем, что состав, используемый для реализации способа, применяют в виде геля, крема, лосьона или помады.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14