Способ получения латексного антигенного микобактериального диагностикума

 

Изобретение касается получения иммуносорбентов, используемых в диагностике особо опасных инфекций. Частицы латекса АКР-2 сенсибилизируют белками сониката микобактерий. Затем блокируют свободные альдегидные группы латекса глицином. Полученный диагностикум барботируют гелием. Готовый диагностикум хранят при температуре 4 - 10oC. При сохранении активности латексного антигенного микобактериального диагностикума срок годности увеличивается до 18 мес. 4 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, конкретно - к способам получения иммуносорбентов, которые могут быть использованы в диагностике особо опасных инфекций, и касается способа получения латексного антигенного микобактериального диагностикума.

Известен способ получения латексного антигенного микобактериального диагностикума, включающий сенсибилизацию частиц латекса (АКР-2) белками сониката микобактерий при pH 8,0 - 8,6 с последующим блокированием свободных альдегидных групп латекса глицином.

Цель изобретения - повышение срока годности.

Поставленная цель достигается дополнительным барбатированием гелием.

Способ осуществляется следующим образом.

Бактериальную массу микобактерий, выращенную на синтетической жидкой среде, инактивируют 2%-ным раствором фенола в течение 2 - 3 сут., отмывают от фенола дистиллированной водой до отрицательной реакции на фенол с применением центрифугирования при 10000 об/мин в течение 30 мин. Разрушение клеток проводят на аппарате УЗДН-2Т при частоте 20 кГц с водным охлаждением 10 циклами по 2 мин. Концентрация белка - 350 мкг/мл50 мкг/мл. Латекс отмывают фосфатным буфером (pH 7,6 - 7,8) с последующим центрифугированием при 5000 об/мин в течение 5 мин. 5%-ную суспензию розового латекса АКР-2 добавляют по каплям к раствору микобактериальных антигенов в 0,1 М фосфатном буфере. Конечная концентрация латекса - 0,3%. Свободные альдегидные группы блокируют глицином. Диагностикум разливают во флаконы по 2,0 мл, закрывают резиновой пробкой. Через иглу, вколотую в пробку, пропускают гелей в течение 2 мин. Расход газа - 30 - 40 см3, давление - 1,2 атм. Готовый диагностикум хранят при температуре от 4 до 10oC.

Сущность способа поясняется примерами.

Пример 1. Получение латексного антигенного микобактериального диагностикума.

Бактериальную массу М. bovis (штамм Vallee), выращенную на жидкой синтетической среде, инактивируют 2%-ным раствором фенола в течение 2 - 3 дней, отмывают от фенола дистиллированной водой до отрицательной реакции на фенол (проба с 10%-ным раствором бария), центрифугированием при 10000 об/мин в течение 30 мин. Микобактерии разрушают на дезинтеграторе УЗДН-2Т с охлаждением бактериальной массы в ледяной бане в режиме прерывистых циклов (2 мин разрушения - 2 мин пауза) при частоте 20 кГц (10 циклов). Концентрация белка в соникате - 300 - 500 мкг/мл. Латекс АКР-2 отмывают 2 раза водой (pH 7,6 - 7,8) с последующим центрифугированием при 5000 об/мин в течение 5 мин. 5%-ную суспензию латекса в 0,1М фосфатном буфере по каплям добавляют к раствору микобактериальных антигенов в 0,1М фосфатном буфере. Конечная концентрация латекса 0,3%. Полученную смесь инкубируют при комнатной температуре в течение 3 ч при постоянном помешивании на магнитной мешалке ММ-5 со скоростью 400 об/мин. Сенсибилизированный белками латекс отмывают дистиллированной водой 1 раз и инкубируют в 1%-ном растворе глицина в фосфатном буфере 0,1М (pH 7,8 - 8,0) при комнатной температуре в течение 1 ч для блокирования свободных альдегидных групп. Полученную суспензию сенсибилизированного латекса отмывают 2 раза дистиллированной водой с последующим центрифугированием при 5000 об/мин в течение 5 мин и разливают по 2,0 мл в пенициллиновые флаконы, которые закрывают резиновой пробкой. По игле, вколотой в пробку, пропускают гелий из расчета 30 - 40 см3 при давлении 1,2 атм в течение 2 мин, затем герметически укупоривают флаконы.

Пример 2. Активность латексного антигенного микобактериального диагностикума в зависимости от срока хранения определяют в реакции агглютинации с кроличьей иммунной сывороткой к М. bovis, штамм Vallee. Учет реакции проводят визуально по общепринятой четырехкрестной системе на чистых сухих серологических пластинах, на белом фоне. Результаты представлены в табл. 1. Как видно из табл. 1, хранение обработанных гелием диагностикумов в течение 18 месяцев практически не повлияло на их качество.

Пример 3. Активность латексного диагностикума трех серий (11, 12, 13) в зависимости от срока хранения определяют, как в примере 2, с кроличьей иммунной сывороткой к M. avium. Результаты представлены в табл. 2.

Как видно из табл. 2, ни одна из трех испытанных серий не дала с гипериммунной кроличьей сывороткой к M.avium агглютинационного титра выше 1:20, что указывает на видовую специфичность диагностикума независимо от срока хранения.

Пример 4. Сравнительное изучение латексных антигенных микобактериальных диагностикумов, полученных известным и предлагаемым способами, проводят как в примере 2, на сыворотках крупного рогатого скота из неблагополучных по туберкулезу хозяйств Нижегородской области. За диагностический принят титр 1: 40. Результаты представлены в табл. 3.

Как видно из табл. 3, практически отсутствуют различия в активности латексных антигенных микобактериальных диагностикумов, полученных известным и предлагаемым способами.

Пример 5. Изучение специфической активности латексных антигенных микобактериальных диагностикумов, полученных известным и предлагаемым способами, проводят, как в примере 2, с сыворотками крупного рогатого скота из благополучных по туберкулезу хозяйств Нижегородской области. За диагностический принят титр 1:40. Результаты представлены в табл. 4.

Как видно из табл. 4, практически отсутствуют различия в специфической активности латексных антигенных микобактериальных диагностикумов, полученных известным и предлагаемым способами. Ни одно из здоровых животных не дало с диагностикумами реакции в титре 1:40 и выше.

Таким образом, в предлагаемом техническом решении удалось подобрать такие условия, при которых срок годности увеличивается до 18 месяцев при сохранении активности латексного антигенного микобактериального диагностикума, что расширяет возможности его применения.

Формула изобретения

Способ получения латексного антигенного микобактериального диагностикума, включающий сенсибилизацию частиц латекса белками сониката микобактерий с последующим блокированием свободных альдегидных групп латекса глицином, отличающийся тем, что дополнительно осуществляют барботирование гелием.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области вирусологии и предназначено для лабораторной диагностики ЛДР

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и предназначено для определения индивидуальной величины неспецифической защиты организма к микробам, для контроля и прогнозирования эффективности лечения средствами, повышающими уровень устойчивости организма к микробам

Изобретение относится к ветеринарной иммунологии и диагностике и касается обнаружения противосыпных антител в сыворотке крови инфицированных животных

Изобретение относится к области иммунологии и может быть использовано для экспрессной индикации бактериальных средств при возникновении очага бактериального заражения

Изобретение относится к медицине, а именно инфекционным болезням и дерматологии, и может найти применение как в стационарных, так и поликлинических условиях
Изобретение относится к области микробиологии, а именно к получению препарата, необходимого для проведения иммунологического анализа с целью индикации возбудителя коклюша

Изобретение относится к иммунологии и иммунохимии, касается способа получения диагностикума из антигенов микробактерий и может быть использовано в медицине для определения антител к антигенам микробактерий и сыворотке крови человека

Изобретение относится к области иммунологии и может быть использовано для экспрессной индикации бактериальных средств при возникновении очага бактериального заражения

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии

Изобретение относится к области диагностики, ветеринарной вирусологии и биотехнологии, в частности к получению наборов для определения антител к вирусу энцефаломиелита птиц (ЭП) в иммуноферментном анализе (ИФА), и может быть использовано при диагностике ЭП в научно-исследовательских учреждениях, региональных и областных ветеринарных лабораториях и при изготовлении указанных наборов на предприятиях биологической промышленности
Изобретение относится к области биотехнологии и ветеринарной вирусологии, а именно к получению набора эритроцитарных диагностикумов для выявления антител к вирусу чумы плодоядных в реакции непрямой гемагглютинации

Изобретение относится к области вирусологии и биотехнологии, к штаммам вируса иммунодефицита человека, принадлежащим к субтипу В, которые обнаруживаются у 90% инфицированных мужчин и у более 50% женщин

Изобретение относится к области вирусологии, в частности к способу и набору для обнаружения вируса лихорадки долины Рифт (ЛДР) и может быть использовано в научно-исследовательских учреждениях и предприятиях биологической промышленности для наработки наборов

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии в частности к тестированию вирусных антигенов, и может быть использовано при разработке и применении средств специфической профилактики африканской чумы свиней
Наверх