Антималярийные синергетические композиции, содержащие бенфлуметол

 

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается фармацевтической композиции, обладающей активностью в отношении малярии. Сущность изобретения: композиция содержит синергетически антималярийные композиции, которые содержат антималярийный агент бенфлулятор, а также антималярийный агент из хининовой группы такой, как хинин. 2 табл., 6 ил.

Изобретение относится к антималярийным синергетическим композициям, содержащим бенфлуметол.

Стойкость малярии к лекарственным препаратам является серьезной проблемой как для медицины, так и для здоровья людей. У малярийного паразита Plasmodium falciparum выработалась способность уклоняться от эффектов стандартных лекарственных препаратов таких, как хлорохин, либо в результате генетической мутации, либо негенетической адаптации. Распространение Plasmodium falciparum, стойкого к хлорохину и другим антималярийным лекарственным препаратам, является основным пунктом программ по охране здоровья в тропических и субтропических странах. Поэтому для успешной терапии необходимы новые фармацевтические композиции, которые снижали бы стойкость малярийных паразитов.

На антималярийное действие композиций, содержащих бенфлуметол, указано в Chemical Abstracts 97:28538h и 101:136941u. Другие композиции содержат комбинации известных антималярийных агентов. Например, комбинацию амодиахина и тетрациклина использовали в клинике [Suphat Noeypatimanond et al.(1983), Лечение малярии Plasmodium falciparum комбинацией амодиахина и тетрациклина в центральном Таиланде, Trans. R. Soc.Trop. Med. and Hyg. 73(3), стр.338-340]. На рынке имеется другая антималярийная комбинация (FANSIMED, мефлохин, пириметамин и сульфадоксин) (Tropical Diseases Research, Seventh Programme Report, Chap.2; Malaria, UNDP World Bank/WHO. Published by WHO, 1985).

На использование комбинаций артемизинина, его производных и других антималярийных соединений таких, как хинин, было указано в патентной заявке Германии P 37 15378. Кроме того, известен также синергетический эффект комбинации артемизинина и примахина (Wan Yaode, Cang Qizhong, Pharmacy Bulletin, vol.16, N 1, 1981).

Более близкой к изобретению является фармацевтическая композиция, обладающая активностью в отношении малярии, описанная в EP N 362810 и содержащая синергетически эффективное количество соединения, выбранного из группы, состоящей из хинина, мефлохина, галофантрина, хлорохина, примахина и пиронаридина или их производных или фармацевтически приемлемой соли, обладающих противомалярийным действием.

Задача настоящего изобретения обусловлена потребностью в терапии улучшенной антималярийной композиции с более высокой активностью и более низкой стойкостью относительно малярийных паразитов таких, как Plasmodium falciparum.

Указанная задача достигается фармацевтической композицией, обладающей активностью в отношении малярии, содержащей синергетически эффективное количество соединения, выбранного из группы, состоящей из хинина, мефлохина, галофантрина, хлорохина, примахина и пиронаридина или их производных или фармацевтически приемлемой соли, обладающих противомалярийным действием, которая согласно изобретению дополнительно содержит синергетически эффективное количество соединения формулы I Предпочтительной является фармакологическая композиция, содержащая синергетически эффективное количество по крайней мере одного соединения, выбранного из группы, состоящей из хинина, мефлохина и галофантрина, или его производного или фармацевтически приемлемой соли, обладающих противомалярийной эффективностью, и синергетически эффективное количество, соединения формулы I.

Предпочтительна также фармацевтическая композиция, содержащая синергетически эффективное количество хинина и синергетически эффективное количество соединения формулы I.

Настоящее изобретение относится к фармакологической композиции, обеспечивающей синергетическое действие активных компонент относительно малярии, содержащей синергетически эффективное количество соединения вышеуказанной формулы (I) вместе с синергетически эффективным количеством по крайней мере одного соединения, выбранного из группы (II), состоящей из хинина, мефлохина, галофантрина, хлорохина, примахина и пиронаридина или их приемлемых с фармацевтической точки зрения солей или производных, обладающих антималярийной эффективностью.

Термин "фармацевтическая композиция" определяет смесь, содержащую комбинацию соединения формулы I с по крайней мере одним соединением группы (II). Эта смесь либо состоит из сухой препарации активных ингредиентов (I) и (II) таких, как лиофилизат, или предпочтительно она содержит добавки, предназначенные для получения в дальнейшем различных форм доз, таких как таблетки, капсулы или суппозитории.

Термин "синергетическое действие" означает увеличение эффективности композиции по сравнению с уровнем эффективности по крайней мере одной отдельной активной компоненты (I) или (II) при заданной дозе. Эффективность всех активных компонент, содержащихся в фармацевтической композиции, увеличивается. Синергетический эффект позволяет использовать более низкие дозы отдельных компонент и/или увеличить активность выше уровней активности отдельных компонент.

Синергизм предлагаемой композиции подтверждается экспериментальными результатами на моделях in vitro и in vivo. Эти результаты показывают, что активность компонент, имеющих формулу I, увеличивается по сравнению с активностью бенфлуметола (I) в форме отдельной дозы, и что активность компоненты (II) также увеличивается.

Синергетическое действие против малярии композиции, являющейся предметом настоящего изобретения, позволяет осуществить комбинированное применение различных лекарственных режимов в течение терапии при помощи применения формы одной дозы, такой как одна или две таблетки в день Применение дозированной формы, содержащей активную компоненту бенфлуметол (I), позволяет осуществить непрерывное действие против малярии. Это очевидно из испытаний, осуществляемых в различных стандартных фармакологических моделях in vitro и in vivo. Присутствие в той же дозированной форме второй активной компоненты (II) позволяет осуществить немедленное и быстрое действие против протозойных тел после вспышки заболевания.

Активная компонента (I), упомянутая выше, в которой Bu обозначает n - бутил, известна под наименованием бенфлуметол, см.C.A.R.N.82186-77-4. Фармацевтические композиции, содержащие отдельно бенфлуметол, и их активность против малярии также известны, см.рефераты С.А.97:28538h и 101:136941. Получение бенфлуметола описано в опубликованной патентной заявке Китая 88/076666.X.

Активные компоненты, выбранные из группы (II), состоящей из хинина, мефлохина, галофентрина, примахина и пиронаридина, известны в качестве активных агентов, используемых в терапии малярии.

Приемлемой с фармацевтической точки зрения солью хинина является, например, соль присоединения кислоты с одним или двумя эквивалентами моноосновной неорганической или органической кислоты, или соль присоединения кислоты с двуосновными неорганическими или органическими кислотами. Такой солью является, например, гидрогалогенидная соль, например, гидрохлоридная, гидробромидная, гидроиодидная соль, дигидрогалогенидная соль, например, дигидрохлоридная, дигидробромидная или дигидроиодидная, кислый сульфат или сульфат, кислый карбонат или карбонат, этилкарбонат, формиат, ацетат, глюконат или таннат хинина.

Приемлемым с фармацевтической точки зрения производным хинина, например, является структурно близкий хинидин, цинхонин или цинхонидин в форме его производных. Эти производные в предпочтительном варианте содержатся в композиции в виде соли присоединения кислоты, например, кислая гидрогалогенидная или дигидрогалогенидная соль, например, гидрохлоридная или дигидрохлоридная.

Хинин и вышеупомянутые соли, а также их производные являются известными антималярийными агентами. Можно сослаться на Merck Index, опубликованный фирмой Merck & Co., Inc. Tenth Ed. (1983), в частности, на материалы на стр. 1164-1166.

Мефлохин (CAS, регистрационный N 53230-10-7) в предпочтительном варианте содержится в композиции в виде гидрохлоридной соли (CAS, регистрационный N 51773-92-3). Можно сослаться на содержание N 1381-v на стр.513 книги Martindale "The Extra Pharmacopoeia", 29 Ed., The Pharm. Press London 1989.

Галофантрин (CAS, регистрационный NN 69756-53-2 и 66051-63-6) в предпочтительном варианте содержится в композиции в виде гидрохлоридной соли (CAS, регистрационный N 36167-63-2). Ссылку можно сделать на содержание N 16829-p на стр.512 книги Martindale "The Pharmacopoeia" (Loc.cit.).

Хлорохин, 7-хлор-4-[4-диэтиламино-1-метил-н-бутиламино] -хинолин, является известным антималярийным агентом из группы 4-аминохинолина и в предпочтительном варианте содержится в композиции в виде его дифосфатной или сульфатной соли. Ссылку можно сделать на содержание N 2163 на стр.334 книги Merc Index, Eleventh Ed.

Примахин, 8-(4-амино-1-метил-н-бутиламино)-6-метокси-хинолин, является известным антималярийным агентом из группы 8-аминохинолина и представляется следующей структурной формулой: Антималярийная эффективность этого соединения указана также в главе 34, Parasite Chemotherapy, E.B.Roche et al., Principles of Medicinal Chemistry, W.O.Foye (редактор), Lea & Febiger, Philadelphia/London 1989.

Пиронаридин является известным антималярийным агентом, представленным следующей структурой формулой: Синтез этого соединения описан в Acta Pharmaceutica Sinica 15: 630-632 (1980). Антималярийная эффективность этого соединения описана также в книге "Practical Chemotherapy of Malaria", Report of a WHO Scien.Group, Technical Report Series 805, Geneva 1990, см. главу 8.5, стр.122-124.

Предпочтительной является фармацевтическая композиция, предназначенная для синергетического действия активных компонентов против малярии, которая содержит комбинацию синергетически эффективного количества бенфлуметола (I) с синергетически эффективным количеством по крайней мере одного соединения, выбранного из группы (II), состоящей из хинина, мефлохина и галофантрина, или его приемлемой с фармацевтической точки зрения соли или производного, имеющего антималярийную активность.

Особенно предпочтительными являются фармацевтические композиции, предназначенные для синергетического действия активных компонент против малярии, которые содержат комбинацию синергетически эффективного соединения бенфлуметола (I) с синергетически эффективным количеством приемлемой с фармацевтической точки зрения присоединенной соли кислоты хинина.

Указанные композиции могут в предпочтительном варианте содержать приемлемые с фармацевтической точки зрения добавки. Эти добавки используют при получении предпочтительно тонкокишечных или парентеральных форм доз в соответствии с известными приемами.

Для стоматического применения соответствующие добавки включают инертные разбавители или наполнители, образуя при этом твердые или жидкие формы доз, такие как таблетки, порошки, капсулы, сиропы и тому подобное. Такие фармацевтические композиции могут, если необходимо, содержать дополнительные ингредиенты, такие как вкусовые агенты, связывающие агенты, наполнители и тому подобное.

Например, таблетки могут содержать различные твердые добавки, такие как крахмал, декстрин, алгиновую кислоту и некоторые комплексные силикаты вместе со связующими агентами, такими как поливинилпирролидон, сахароза, желатин и гуммиарабик. Кроме того, при получении таблеток часто используют смазочные агенты, такие как стеарат магния, лаурилсульфат натрия и тальк. Твердые композиции аналогичного типа можно также использовать в качестве заполняющего материала при получении мягких и жестких желатиновых капсул; поэтому предпочтительными материалами являются лактоза или молочный сахар и полиэтиленгликоли с высокой молекулярной массой.

Среди других стоматических форм доз смесь соединений может быть, например, применена в желатиновой капсуле. Такая композиция может иметь в качестве основы соответствующее рафинированное пищевое масло, такое как подсолнечное масло, кукурузное масло, арахисовое масло, кокосовое масло или кунжутное масло.

Активные компоненты (I) и (II) могут быть включены в форме единичных доз, таких как таблетки или капсулы.

Активные компоненты (I) и (II) могут также быть включены в две отдельные формы доз, содержащиеся внутри одной системы для применения (препарат из отдельных частей), которые применяют одновременно или последовательно. Возможен один и тот же способ применения, например, применение двух отдельных форм доз, содержащихся внутри одного комплекса, состоящего из частей. Применяют одну таблетку или капсулу, содержащую компоненту (I), и далее вторую форму дозы, содержащую компоненту (II). Индивидуальный режим доз может быть выработан, в частности, во время клинического лечения, например, при помощи применения после первого приступа малярии таблетки или капсулы, содержащей высокую дозу активной компонента (I) или, соответственно, нескольких меньших доз в самом начале приступа малярии, и применения также таблетки или капсулы, содержащей более низкую дозу активной компоненты (II). Во время лечения применяют формы доз, содержащие более низкую дозу компоненты (I) и более высокую дозу компоненты (II). Различные формы доз, содержащиеся в одном комплекте, состоящем из отдельных частей, могут быть также применены одновременно или последовательно, например, при помощи применения таблетки, содержащей компоненту (I), и суппозиторий, содержащий компоненту (II). Дозировочная область может также изменяться в зависимости от режима доз, описанного выше.

Эффективность фармацевтических композиций, являющихся предметом настоящего изобретения, в терапии малярии очевидна из результатов in viro и in vivo экспериментов, осуществляемых в стандартных моделях испытания. Способность композиций действовать в качестве эффективного и долго действующего антималярийного агента даже против штаммов P.berghei, известных своей высочайшей стойкостью против других антималярийных агентов, отражает эффективность композиций в соответствии с настоящим изобретением.

Эти композиции применяют к пациенту после появления у него малярии в течение не менее 4 дней, предпочтительно 5 и более дней.

Возможно также профилактическое применение композиции к здоровым пациентам с тем, чтобы предотвратить возникновение заболевания в районах с высоким риском заболевания, в частности в районах между тропиками Козерога и Рака.

Доза активной компоненты бенфлуметола (I), содержащегося в фармацевтической композиции, может варьироваться в широких пределах в зависимости от состояния пациента и времени, прошедшего после вспышки заболевания. На основании in vivo данных на модельных экспериментах, которые описаны ниже в примерах, установлено, что ежедневная доза бенфлуметола изменяется в области примерно 0,2-50,0 мг/кг, в предпочтительном варианте 0,2-10,0 мг/кг, а в особенно предпочтительном варианте примерно 0,2-5,0 мг/кг. Эта ежедневная доза может быть значительно увеличена при необходимости, ввиду низкой токсичности и высокой толерантности бенфлуметола. Кроме того, оценки показали, что ежедневная доза компоненты (II) в композиции должна составлять от 0,2 до 50 мг/кг, в предпочтительном варианте 0,3-5,0 мг/кг, а в особенно предпочтительном варианте примерно 0,4-3,0 мг/кг.

Отношение в дозе компоненты (I) к компоненте (II) может также варьироваться в широких пределах. Синергизм может быть особенно эффективен, если бенфлуметол применяют в равных массовых количествах или, в предпочтительном варианте, в избыточных количествах массовых количеств компоненты (II), применяемых в данный момент. Поэтому массовое количество бенфлуметола может изменяться от 1 до 10 ч., предпочтительно от 3 до 7 ч., особенно предпочтительно от 5 до 6 ч. бенфлуметола на каждую часть компоненты (II). Приведенные дозированные количества и отношения в дозе относятся к ежедневным применениям.

Новые фармацевтические композиции содержат, например, от 10 до 80%, в предпочтительном варианте от 20 до 60%, комбинации активных компонент. Фармацевтические композиции, являющиеся предметом настоящего изобретения, пригодны для тонкокишечного применения и могут быть включены, например, в стоматические формы единичной дозы, такие как драже, таблетки, капсулы или суппозитории. Их получают при помощи приемов, хорошо известных в этой области техники, например, при помощи стандартного перемешивания, грануляции, конфекционирования, растворения или лиофилизации. Например, фармацевтические препараты для стоматического применения могут быть получены при помощи комбинации активного ингредиента с твердым носителем, необязательной грануляции, полученной в результате смешивания и обработки смеси или гранулята, если это желательно или необходимо, после добавления соответствующих присадок, чтобы образовать таблетки или ядра драже.

Активные компоненты (I) и (II) измельчают либо отдельно, либо вместе, чтобы обеспечить размеры частиц от примерно 10 мкм до примерно 400 мкм, предпочтительно от 20 до 200 мкм. По крайней мере 90% частиц активных компонент содержится в этих областях.

Частицы этого размера получают при помощи известных приемов, например, при помощи измельчения в воздушно-струйной мельнице, шаровой мельнице или вибрационной мельнице. Микронизацию возможно осуществлять при помощи известных приемов, используя ультразвуковой дезинтегратор, например, типа Branson Sonifier, описанный, например, в J. Pharm. Sci., 53 (9), стр. 1040-1045 (1965), или при помощи перемешивания суспензии в высокоскоростной мешалке, например, мешалке типа Homorex (производимой фирмой Brogli & Co., Basel). При использовании таких приемов микронизацию осуществляют при скорости от примерно 500 до 10000 об/мин (оборотов в минуту) при помощи растворения или суспендирования комбинации активных компонент в органическом растворителе, например, метаноле, этаноле или пропиленгликоле и осаждения ее в микрокристаллической форме при температуре приблизительно 0-5oC в воде или водном растворе соли, например, 2%-ном растворе хлористого натрия, который дополнительно содержит защитный коллоид, такой как желатин или целлюлозный простой эфир, например, метилцеллюлозу или оксипропилметилцеллюлозу в низкой концентрации (0,1-1%), и фильтрации, полученной в результате перемешанной суспензии. Фильтровальную лепешку сушат при низкой температуре, например, при температуре приблизительно 0-5oC под вакуумом (например, ниже 50 мбар, предпочтительно при 0,5 мбар). Последующую сушку можно осуществить при температуре приблизительно 50-90oC.

Полученные таким образом кристаллы затем включают в гранулят, возможно при помощи влажной грануляции, которую осуществляют при помощи стандартных приемов.

Фармацевтические композиции возможно получать при помощи прессовки гранулированной формы, которую получили, например, при помощи просеивания, если это необходимо, измельчения препарата, с наполнителями или без них, сжатия с другим растворителем, таким как этанол или вода, удаления растворителя или сушки, с добавлением смозочных агентов или агентов скольжения, таких как стеарат магния или TWEEN, измельчения гранул и повторного просеивания.

Гранулы можно спрессовать в ядра таблеток при помощи известных средств для изготовления таблеток, например, при помощи эксцентриковой установки ЕКО Korsch под давлением приблизительно 10 кН. Покрытие может быть осуществлено при помощи нанесения водно- этанолового раствора, в котором, например, растворен или диспергирован полиэтиленгликоль или сахароза.

Ядра драже снабжают соответствующими покрытиями, которые могут быть стойкими к воздействию желудочного сока; для этого используют, среди прочего, концентрированные растворы сахара, которые могут содержать гуммиарабик, тальк, поливинилпирролидон или полиэтиленгликоль. В сиропы, таблетки или покрытия драже можно добавить окрашивающие, вкусовые агенты или пигменты, например, с целью идентификации, придания приятного вкуса или для того, чтобы указать различные дозы активного ингредиента.

Кроме того, стоматически применяемые фармацевтические композиции могут иметь вид заполненных сухим препаратом капсул, состоящих из желатина, а также мягких, плотно закрытых капсул, состоя щих из желатина и пластификатора, такого как глицерин или сорбит. Заполненные сухим препаратом капсулы могут содержать активные компоненты в форме гранулята, например, в смеси с наполнителями, такими как лактоза, связывающими материалами, такими как крахмал и/или смазочными агентами, такими как тальк или стеарат магния, и, необязательно, стабилизаторы. В мягких капсулах активный ингредиент в предпочтительном варианте растворен или суспендирован в соответствующих жидкостях, таких как жировое масло, парафиновое масло или жидкие полиэтиленгликоли, в которые можно также добавить стабилизаторы.

Для тонкокишечного применения пригодны также суппозитории, которые состоят из комбинации активных ингредиентов и основы суппозитория. В качестве основы суппозитория можно использовать, например, натуральные или синтетические триглицириды, парафины, полиэтиленгликоли или высшие алканолы. Можно также использовать желатиновые прямокишечные капсулы, которые содержат комбинацию активного ингредиента и материала основы; соответствующими материалами основы являются, например, жидкие триглицириды, полиэтиленгликоли или парафинообразные углеводороды.

Приводимые ниже примеры иллюстрируют изобретение, описанное выше; их однако, не следует рассматривать как ограничивающие объем изобретения.

Пример. Получение таблеток.

Используют следующие компоненты в указанных количествах, мг: Бенфлуметол - 120 Хлордигидрат хинина - 20
Кукурузный крахмал - 100
Декстрин - 40
- 0,6
15% Паста кукурузного крахмала - Достаточное количество
Стеарат магния - 3
Кристаллы хлордигидрата хинина пропускали через сито размером 100 меш (диаметр отверстия 0,149 мм). Кристаллы бенфлуметола пропускали через сито в 60 меш (диаметр отверстия 0,28 мм) и смешивали с твердыми частицами хинина, крахмала и декстрина. Эту смесь пропускали 3 раза через сито размером 40 меш (диаметр отверстия 0,42 мм). В пасту крахмала добавляли Tween-80 , который затем смешивали с полученной выше композицией. Эту смесь гранулировали при помощи влажной грануляции, пропускали через сито размером 40 меш, сушили при пониженном давлении и температуре 50-60oC. Добавляли стеарат магния и прессовали таблетки.

Ниже приводятся данные испытаний, подтверждающих синергизм композиций, содержащих бенфлуметол в комбинации с хинином или пиронаридином.

Изучение проводилось в продолжительных и подробных сериях экспериментов.

Полученные данные являются характерными для всех композиций, описываемых настоящим изобретением, и эффективность комбинаций бенфлуметола с другими противомалярийными соединениями, такими как мефлохин, галофантрин, хлорохин и примахин примерно такова, как и для бенфлуметола с хинином и пиронаридином.

Материалы и методы
Агенты хлорхин (A), пиронаридин (A') и бенфлуметол (B) были исследованы in vitro в стандартных опытах с 25-часовой экспозицией на свежих, природных изолятах Plasmodium falciparum путем измерения ингибирования созревания шизонта. Этот метод был первоначально разработан K. H. Rieckmann и др. (Lancet 1, 22 - 23, 1978) и в дальнейшем разработан и стандартизован Всемирной организацией здравоохранения (документ ВОЗ МАР/87.2 обзор 1, 1990) и в основных чертах заключается в следующем.

Для опыта 1800 мкл стерильной среды (RPMI 1640 LPLF, полной) пипетируют в стерильную пластиковую пробирку. После тщательного обеззараживания места укола берут две порции крови пациента по 100 мкл каждая в стерильные гепаринизированные капиллярные пробирки. Кровь переносят в 1800 мкл среды и суспендируют в последней путем осторожного, но тщательного встряхивания. Во время дальнейшей обработки в течение 2 ч смесь кровь - среда (ВММ) выдерживают при температуре приблизительно 37oC. Непосредственно перед обработкой ее еще раз осторожно встряхивают так, чтобы вновь гомогенизировать ВММ, которую затем добавляют в 50 мкл аликвотных количествах в лунки стерильных, 96-луночных (8 12) плоскодонных планшетов для микротитрования (FALCON 3070) , в которые предварительно внесены дозы соответствующих соединений. Затем планшеты покрывают стерильной крышкой (FALCON 3071) , осторожно встряхивают для того, чтобы вновь солюбилизировать внесенные лекарства, и помещают в специальную склянку. После повышения парциального давления CO2 и снижения содержания O2 в атмосфере эту склянку далее помещают в инкубатор, установленный на 37,5oC. Через 25 ч склянку вынимают из инкубатора и открывают. Планшеты вынимают и готовят толстые мазки крови из осадка гемоцитов каждой лунки, размещая 8 толстых мазков в каждой серии опытов на одно соответствующим образом помеченное предметное стекло в одинаковой стандартной последовательности. После тщательного высушивания мазки крови окрашивают раствором Giemsa при pH 7,2. Затем подсчитывают количество шизонтов по отношению к общему количеству 200 бесполых паразитов Plasmodium falciparum. Паразитемия в контрольных лунках является базовым параметром для определения оптимального роста и по отношению к нему рассчитывают относительное ингибирование в лунках с лекарством.

За исключением планшетов для микротитрования с заранее нанесенными дозами, все материалы, используемые для опыта, были взяты из стандартного набора для опытов ВОЗ. Планшеты для микротитрования с заранее нанесенными дозами были приготовлены в Институте специфической профилактики и тропической медицины Венского университета, Австрия.

Вызванное лекарством ингибирование созревания шизонта является постепенным, зависящим от концентрации лекарства, обычно от логарифма концентрации, следуя нормальному распределению Гаусса. Поэтому оно пригодно для исследования зависимости log-концентрация/реакция с помощью пробит-анализа в соответствии с J. T. Litchfield и F., Wilcoxon (Journal of Pharmacology and Experimental Therapy, 96: 99 - 113, 1949).

Все показания считывались дважды различными исследователями.

Агент A исследовали в отношении 19 изолятов Plasmodium falciparum в диапазоне концентраций от 20 до 1280 нмол/л. Агент A' исследовали в отношении 21-го изолята Plasmodium falciparum в диапазоне концентраций от 100 до 3200 нмол/л. Параллельно со всеми опытами с агентами A и A' исследовали агент B в диапазоне концентраций от 3 до 3000 нмол/л. Из 19 изолятов, на которых исследовали действие хлорхина, 11 проявили высокую степень устойчивости к этому лекарству, еще 3 проявили среднюю устойчивость, остальные проявили лишь тенденцию к развитию устойчивости.

Комбинации агентов A и B, а также A' и B, испытывали совместно в молярных соотношениях 6,4 : 15 и 6,4 : 3, соответственно, в качестве приближения к предлагаемым соотношениям, наблюдаемым для терапевтических доз различных соединений. В эти опыты был включен диапазон концентраций от 0,64 нмол A + 1,5 нмол B на литр до 640 нмол A + 1500 нмол B на литр, и от 3,2 нмол A' + 1,5 нмол B на литр до 3200 нмол A' + 1500 нмол B на литр. Все опыты по изучению комбинаций выполняли параллельно с опытами с каждым агентом по отдельности.

Фиг. 1 - 6 и табл. 1 - 2 иллюстрируют следующее.

Фиг. 1. Ингибирование созревания шизонта (SMI) Plasmodium falciparum одним хлорхином (C) и одним бенфлуметолом (B), и ожидаемое ингибирование смесью хлорхина и бенфлуметола в соотношении 6,4 : 15 (мол/мол) (ECB) 19-ти природных изолятов из Танзании.

Фиг. 2. Ингибирование созревания шизонта (SMI) Plasmodium falciparum одним пиронаридином (P) и одним бенфлуметолом (B), и ожидаемое ингибирование смесью пиронаридина и бенфлуметола в соотношении 6,4 : 3 (мол/мол) (EPB) 21-ого природного изолята из Танзании.

Фиг. 3. Ингибирование созревания шизонта (SMI) Plasmodium falciparum смесью хлорхина и бенфлуметола (6,4: 1,5 мол/мол) 19-ти природных изолятов из Танзании. OCB - экспериментальные данные: ECB - ожидаемая линия регрессии, вычисленная на основе результатов, полученных с одним хлорхином и одним бенфлуметолом. Для EC50 и EC90 определены диапазоны 1 SE.

Фиг. 4. Изоболограмма реакции 19-ти изолятов Plasmodium falciparum из Танзании на хлорхин и бенфлуметол (6,4 : 15 мол/мол) на уровне EC50. Изображенные на фигуре данные представляют величину EC50 в виде процента от экспериментальной величины для соответствующего отдельного соединения. Линия обозначает предел аддитивной активности. Точки, лежащие ниже линии, свидетельствуют о наличии синергизма. Символ обозначает среднюю величину для серии.

Фиг. 5. Изоболограмма реакции 19-ти изолятов Plasmodium falciparum из Танзании на хлорхин и бенфлуметол (6,4 : 15 мол/мол) на уровне EC90. Изображенные на фигуре данные представляют величину EC90 в виде процента от экспериментальной величины для соответствующего отдельного соединения. Линия обозначает предел аддитивной активности. Точки, лежащие ниже линии, свидетельствуют о наличии синергизма. Символ обозначает среднюю величину для серии.

Фиг. 6. ингибирование созревания шизонта (SMI) Plasmodium falciparum смесью пиронаридина и бенфлуметола (6,4 : 3 мол/мол) 21-ого природного изолята из Танзании. ОРВ - экспериментальные данные; EPB - ожидаемая линия регрессии, вычисленная на основе результатов, полученных с одним пиронаридином и одним бенфлуметолом. Для EC50 и EC90 определены диапазоны 1 SE.

Таблица 1. Параметры ингибирования, определенные на основе пробит-анализа зависимости log-концентрации/реакции для одного хлорхина, одного бенфлуметола и комбинации хлорхин + бенфлуметол (6,4 : 15 мол/мол) 19-ти свежих, природных изолятов Plasmodium falciparum из Танзании.

Таблица 2. Параметры ингибирования, определенные на основе пробит-анализа зависимости log-концентрации/реакции для одного пиронаридина, одного бенфлуметола и комбинации пиронаридин + бенфлуметол (6,4 : 3 мол/мол) 21-ого свежего, природного изолята Plasmodium falciparum из Танзании.

Результаты.

Стандартные линии регрессии log-концентрации/реакции, полученные в соответствии с B.Grab и W. H. Wernsdorfer (документов ВОЗ WHO/MAL/83/990, 1983) показаны отдельно для агентов A, A' и B на фиг.1 и 2. В этой системе на оси абсцисс помещают концентрации в логарифмическом масштабе, а на оси ординат - % ингибирования в виде пробитов, как это было первоначально введено J. T. Litchfield и F.Wilcoxon (loc. cit.) и в последующем принятом в мировой практике при анализе в экспериментах зависимости реакции от дозы, включая опыты по чувствительности к лекарствам.

Линии регрессии на фиг. 1 и 2 показывают хорошую сходимость с полученными экспериментальными точками, при этом
2 = 2,4124 для агента A (максимально допустимое значение 11,1);
2 = 0,7180 для агента B при испытании параллельно с A (максимально допустимое значение 9,49);
2 = 0,0030 для агента A' (максимально допустимое значение 7,82);
2 = 0,4813 для агента B при испытании параллельно с A' (максимально допустимое значение 9,49);
Выявлено выраженное усиленное противомалярийное взаимодействие при объединении агентов A и B в исследованном диапазоне концентраций (см. фиг.3). Величина EC50, то есть концентрация, требующаяся для 50%-ного ингибирования созревания шизонтов, составляет только 1/3 от таковой, рассчитанной на основе ингибирующей способности отдельных веществ (см. табл. 1). Так как экспериментальная и ожидаемая линии регрессии достаточно отделены в точках, соответствующих и EC50 1 SE (стандартная ошибка), и EC90 1 SE, то две линии могут рассматриваться как обладающие достоверным различием. Это также очевидно из сравнения экспериментальной средней геометрической величины EC50, для агентов A + B в комбинации, рассчитанной по реакции индивидуальных изолятов, и средней геометрической величины EC50, вычисленной по реакции каждого индивидуального изолята на каждый отдельный агент A и агент B. Это сравнение дает t = 10,7373, что свидетельствует о высокой статистической достоверности. Более того, была показана достоверная положительная корреляция между ожидаемым и полученным в опытах ингибированием индивидуальных изолятов (r = 0,4663 при n = 19; p < 0,05).

Активность комбинации агентов A и B показывает хорошую сходимость экспериментальных данных с математически рассчитанной линией регрессии 2 = 0,07391, максимально допустимое значение 5,99).

Синергизм между агентами A и B выявили на всех изученных изолятах, как на уровне EC50, так и на уровне EC90 (см. изоболограммы на фиг.4 и 5).

Выявлено усиленное противомалярийное взаимодействие также и между агентами A' и B в исследованном диапазоне концентраций. Величина EC50 составляет менее половины таковой, рассчитанной на основе ингибирующей способности отдельных веществ (см. табл. 2). Это еще более выражено на уровне EC90. Так как экспериментальная и ожидаемая линии регрессии достаточно отдалены в диапазонах, соответствующих как EC50 1 SE, так и EC90 1 SE, то различие между экспериментальными и ожидаемыми величинами может рассматриваться как достоверное.

Это же видно при сравнении экспериментальной средней геометрической величины EC50 для агентов A' и B в комбинации, рассчитанной по реакции 21-го индивидуального изолята, и ожидаемой средней геометрической величины EC50, вычисленной по реакции индивидуальных изолятов на каждый отдельный агент A' и агент B. Это сравнение дает t = 2,4257, что свидетельствует о статистической достоверности. Аналогично этому достоверное различие также обнаружено на уровне EC90 (t = 6,2803).

Заключение
Выявлено усиленное взаимодействие in vitro в отношении Plasmodium falciparum в смеси между агентами A и B, а также между агентами A' и B, при молекулярных соотношениях A: B = 6,4 : 15 и A': B = 6,4 : 3. Концентрации EC50, EC90 и EC99 оказались существенно ниже, чем ожидаемые для случая, если взаимодействие было бы только аддитивным. Это явно свидетельствует об истинном синергизме. Клинические фармакологические исследования позволяют предположить, что при оральном введении смесей в рекомендованных дозах в крови создаются молекулярные соотношения A:B и A': B, соответствующие в диапазоне данного соотношения 50%. Каждый из трех изученных компонентов сам по себе является потенциальным противомалярийным агентом, поэтому установленное in vitro взаимодействие может послужить основой для терапевтического использования.


Формула изобретения

\ \\1 1. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью в отношении малярии, содержащая синергетически эффективное количество соединения, выбранного из группы, состоящей из хинина, мефлохина, галофантрина, хлорохина, примахина и пиронаридина или их производных или фармацевтически приемлемой соли, обладающих противомалярийным действием, отличающаяся тем, что композиция дополнительно содержит синергетически эффективное количество соединения формулы I \\\6 \\\2 2. Композиция по п.1, содержащая синергетически эффективное количество по крайней мере одного соединения, выбранного из группы, состоящей их хинина, мефлохина и галофантрина, или его производного или фармацевтически приемлемой соли, обладающих противомалярийной эффективностью, отличающаяся тем, что композиция содержит синергетически эффективное количество соединения формулы I. \\\2 3. Композиция по п.1, содержащая синергетически эффективное количество хинина, отличающаяся тем, что она содержит синергетически эффективное количество соединения формулы I. \\\9 Приоритет по пунктам: \\\4 07.02.92 - по п.1; \\\4 21.02.92 - по п.1; \\\4 07.02.92 - по пп.2 и 3.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины и касается средства для исследования при проведении эндоскопических и других исследований, связанных с введением фиброволоконной оптики в полости и органы тела
Изобретение относится к пластической хирургии и предназначено для регулярного воздействия в течение раневого процесса

Изобретение относится к новым производным -(третичного аминометил)бензолметанола, которые обладают фармакологическими свойствами, а также к способам их получения

Изобретение относится к составам местного применения
Изобретение относится к медицине, а именно оториноларингологии
Изобретение относится к медицине и может быть использовано при лечении диффузной экстрагензависимой мастопатии

Изобретение относится к новым 8-карбониларилзамещенным 2-аминотетралинам, их энантиомерам и солям, способам их получения, лекарственным препаратам на их основе и использованию указанных соединений в терапии

Изобретение относится к лекарственным средствам, а именно к противоопухолевым препаратам и может быть использовано в химиотерапевтической практике для лечения злокачественных новообразований

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии, и может быть применено области эндокринологии и дерматологии в качестве средства лечения гирсутизма

Изобретение относится к медицине, в частности к двухфазным фармацевтическим композиция для лечения нейродегенеративных заболеваний

Изобретение относится к новым 4-аминопиридинам общей формулы I в которой R1 обозначает группу R6-SO2-NR7-; R6-NR7-SO2-; R6-SO2-O-; R6-O-SO2-; R2 обозначает атом водорода или галогена, циано-, алкильную, алкоксильную или галогеналкильную группу; Х обозначает атом кислорода, атом серы или NH- группу; R3 и R4 являются одинаковыми или разными и обозначают атомы водорода или алкильные группы; R5 обозначает атом водорода, алкильную группу или аралкильную группу; R6 обозначает алкильную, циклоалкильную, арильную, гетероарильную, аралкильную или гетероарилалкильную группы, при этом арильная или гетероарильная группы одно- или
Изобретение относится к области медицинской промышленности, к производству лекарственных средств, применяемых при лечении головной боли, невралгии и простудных заболеваний
Изобретение относится к медицине и предназначено для лечения мастопатии
Наверх