Способ прогнозирования течения туберкулезного процесса в легких

 

Способ осуществляется путем микробиологического выделения L-форм микобактерий туберкулеза из мокроты больных и определения у выделенных L-форм возбудителя антилизоцимной активности. При уровне выраженности данного признака равном или большем 4 мкг/мл прогнозируют обострение туберкулеза. Способ позволяет повысить точность прогноза в 2-3 раза, а также расширить круг лиц, подвергаемых прогнозированию при лечении, за счет больных с разными формами, распространенностью и стадией туберкулезного поражения легких. 3 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской микробиологии, и может быть использовано при лечении туберкулеза для прогнозирования течения туберкулезного процесса.

Известен способ прогнозирования течения туберкулезного процесса по определению массивности бацилловыделения [1]. Сущность способа заключается в ежемесячном количественном учете микобактерий туберкулеза, который проводится путем микроскопического исследования мазка гомогенизированной мокроты больных и подсчета колоний, выросших на питательной среде Левенштейна-Йенсена. Недостатками указанного способа являются трудоемкость и длительность требуется длительное - до 4 месяцев, динамическое наблюдение, а также необходимость расчета показателей массивности бацилловыделения и их сопоставления.

Кроме того, прогностические возможности способа не распространяются на группу больных, выделяющих с мокротой L-формы микобактерий.

Наиболее близким к заявляемому способу по назначению и совокупности существенных признаков является способ прогнозирования течения туберкулезного процесса в легких путем микробиологического выделения L-форм микобактерий туберкулеза из мокроты больных [2].

Однако, известный способ недостаточно информативен: подтверждение прогноза обострений при выявлении L-форм имело место только в 46,6%. Кроме того, данный способ может быть использован для прогнозирования обострений туберкулеза только у ограниченной группы больных - с большими остаточными туберкулезными изменениями в легких.

Заявляемый способ решает задачу повышения точности прогноза течения туберкулезного процесса в легких.

Для решения указанной задачи в заявляемом способе прогнозирования течения туберкулезного процесса в легких путем микробиологического выделения L-форм микобактерий туберкулеза из мокроты больных, дополнительно у выделенных L-форм возбудителя определяют антилизоцимную активность и при уровне выраженности данного признака, равном или больше 4 мкг/мл прогнозируют обострение туберкулеза.

Новым в заявляемом способе является то, что у выделенных L-форм возбудителя определяют антилизоцимную активность и при уровне выраженности данного признака равном или больше 4 мкг/мл прогнозируют обострение туберкулеза.

Достигаемый при осуществлении изобретения технический результат состоит в том, что новый способ позволяет повысить точность прогноза в 2-3 раза. Также способ позволяет расширить круг лиц, подвергаемых прогнозированию при лечении, за счет больных с разными формами, распространенностью и стадией туберкулезного поражения легких.

Известен способ определения антилизоцимной активности микроорганизмов (АЛА) [3] и применение методики определения АЛА в способе прогнозирования реконвалесцентного бактерионосительства [4].

Однако, в источниках патентной и научно-технической информации отсутствуют данные об использовании известных методик определения АЛА применительно к L-формам микроорганизмов.

Вместе с тем, оценка факторов персистенции именно у L-форм бактерий с целью прогнозирования течения болезни является первостепенной, так как бесстеночные формы микроорганизмов длительно паразитируют внутри клеток хозяина и вызывают тяжелые, хронические формы инфекции (5).

Ультраструктура L-форм микобактерий туберкулеза существенно отличается от ультраструктуры L-форм других видов бактерий: у L-форм микобактерий туберкулеза сохраняется внутренний слой клеточной стенки, представляющий пептидогликан (6, 7). Поэтому для защиты "обнаженного" пептидогликана от тканевого лизоцима целесообразно проявление L-формами микобактерий туберкулеза антилизоцимной активности.

Особенности культивирования L-форм бактерий в специальных полужидких питательных средах исключают возможность применения известных методик определения АЛА бактерии, основанных на культивировании в плотных питательных средах. Необходимо было найти новое техническое решение для определения АЛА у L-форм туберкулезных бактерий.

Отличительные признаки заявляемого способа и известной методики определения антилизоцимной активности микроорганизмов приведены в табл. 1.

Авторами экспериментально установлено, что определение АЛА у выделенных из мокроты больных L-форм микобактерий туберкулеза позволяет прогнозировать дальнейшее течение процесса в сторону обострения или ремиссии.

Проведение исследования позволили определить уровень выраженности АЛА у выделенных из мокроты больных L-форм возбудителя для прогнозирования течения туберкулезного процесса в легких.

Результаты исследования представлены в таблице 2.

Как видно из таблицы 2, при выраженности у L-форм M.tuberculosis АЛА (≥ 4 мкг/мл) можно достоверно судить о вероятности рецидива туберкулезного процесса.

Для оценки эффективности прогнозирования заявляемого способа по сравнению с прототипом было обследовано 15 больных с инфильтративной формой туберкулеза легких, 6 больных с диссеминированным туберкулезом, 9 больных с очаговым, фиброзно-кавернозным туберкулезом.

Результаты исследования представлены в таблице 3.

Как видно из таблицы 3, применение способа-прототипа позволило эффективно прогнозировать неблагоприятное течение процесса только в 37,9% случаев. Применение заявляемого способа, основанного на определении АЛА у выделенных L-форм возбудителя, позволило повысить эффективность прогноза до 81,8%: у 9 больных, от которых были выделены L-формы с АЛА 4 мкг/мл и больше при последующем наблюдении в течение года имели место рецидивы.

Способ осуществляется следующим образом: 1. Производят микробиологическое выделение L-форм микобактерий туберкулеза из мокроты больных.

2. Определяют АЛА выделенных L-форм микобактерий туберкулеза по Методике, разработанной авторами.

Согласно разработанной Методике, в лунки поливинилового планшета вносят последовательно следующие компоненты: а) 0,2 мл. раствора препарата яичного лизоцима в концентрации от 1 мкг/мл до 5 мкг/мл; б) 0,15 мл среды Школьниковой с L-формами микобактерий туберкулеза, выделенными от обследуемых больных после 4-х недельной инкубации при t = 37^oC; в) 0,15 мл 0,5 млрд. взвеси суточной агаровой тест-культуры M.lysodeikticus в 0,06% мясопептонном агаре. Планшет инкубируют 24 часа при 37^oC, после чего учитывают результат.

В лунках с антилизоцимактивными L-формами возбудителя наблюдаются зоны роста тест-культуры M.lysodeikticus. Количественную оценку АЛА проводят по максимальной концентрации лизоцима в лунке планшета, которая инактивировалась данной L-формой.

3. Прогнозируют течение туберкулезного процесса в легких.

При уровне выраженности АЛА больше или равном 4 мкг/мл прогнозируют обострение туберкулеза.

Пример 1.

У больного Н. , 44 лет, с диагнозом: "Цирротический туберкулез верхней доли правого легкого в периоде стабилизации, БК-. Легочно-сердечная недостаточность II степени" был проведен посев мокроты в полужидкую среду Школьниковой. Через 1 месяц культивирования отмечен рост L-форм /подтвержден микроскопически и визуально/.

У выделенных L-форм возбудителя АЛА определяли согласно методике, описанной выше. АЛА составляла 5 мкг/мл, что позволило прогнозировать прогрессирующее течение заболевания. Наблюдение за больным в течение 1 года подтвердило прогноз: "Цирротический туберкулез легких, фаза инфильтрации и распада, БК+".

Пример 2.

У больного Д., 42 лет, выявлен "Инфильтративный туберкулез верхней доли правого легкого, БК+". Через 2 месяца противотуберкулезного лечения прекратилось типичное бактериовыделение, но были выявлены L-формы микобактерий с уровнем выраженности АЛА 2 мкг/мл, что позволило прогнозировать благоприятный исход болезни с минимальными остаточными изменениями. Динамическое наблюдение в процессе лечения за больным в течение 1 года подтвердило прогноз: произошло рассасывание инфильтрата с минимальными остаточными изменениями. Повторное клинико-лабораторное обследование через 3 и 5 лет не выявило активности туберкулезного процесса в легких.

Пример 3.

Больной Б., 48 лет. Диагноз: "Диссеминированный туберкулез легких, фаза инфильтрации и распада, БК+". Через 3 месяца после прекращения выделения палочек микобактерий обнаружены L-формы с АЛА = 4 мкг/мл, что позволило прогнозировать неблагоприятный исход. Наблюдение за больным в течение года подтвердило прогноз: имело место волнообразное течение процесса с преобладанием рецидивов и выделением палочковидных микобактерий.

Использование предлагаемого способа прогнозирования течения туберкулезного процесса в легких позволит в 2-3 раза увеличить точность прогноза. Кроме того, этот способ позволяет делать прогноз уже на ранней стадии и в соответствии с ним осуществлять индивидуальный подход к лечению больных с целью сокращения сроков лечения. Своевременный прогноз имеет важное эпидемиологическое значение - уменьшение опасности распространения туберкулеза среди людей.

Источники информации 1. Сагалович В.Я. Каневская С.С. Федорова Г.С Клиническое значение массивности бацилловыделения при хроническом деструктивном туберкулезе легких //Пробл. туб. - 1976. - N 10. - С.26-30.

2. И. Р. Дорожкова, М.А. Карачунский, Э.Т. Абдуллаева и др. Выявление L-форм микобактерий туберкулеза как прогностический критерий рецидивов и обострений туберкулеза у больных с большими остаточными туберкулезными изменениями в легких //Пробл. туб. - 1989. - N 3. С. 14-17 /прототип/.

3. О. В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов, А.П. Малышкин, Н.В. Немцева Метод определения антилизоцимной активности микроорганизмов //ЖМЭИ. - 1984. - N 2. - С. 27-28.

4. О.В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов, Е.И. Лосин, А.П. Малышкин, С.П. Михайлов и Ю.Д. Каган Способ прогнозирования реконвалесцентного сальмонеллезного бактерионосительства // А.С. N 1303163, МКИ 4 A 61 K 37/48, 1987 г.

5. Прозоровский С.В., Кац Л.Н., Каган Г.Я. L-формы бактерий /механизмы образования, структура, роль в патологии. - М., 1981.

6. Л.Н. Кац, А.В. Волк и Н.Д. Константинова. Ультраструктура L-форм. Сообщение I. Микобактерии туберкулеза //Ж. микробиол. - 1974. - N 4. - С. 73-77.

7. А.Л. Лазовская, Л.М. Пинчук. Факторы патогенности микобактерий туберкулеза //Проблемы туберкулеза. - 1988. - N 8. - С. 72-76.

Формула изобретения

Способ прогнозирования течения туберкулезного процесса в легких путем микробиологического выделения L-форм микобактерий туберкулеза из мокроты больных, отличающийся тем, что у выделенных L-форм возбудителя определяют антилизоцимную активность и при уровне выраженности данного признака равном или большем 4 мкг/мл прогнозируют обострение туберкулеза.

РИСУНКИ

Рисунок 1