Способ получения эмульсии на основе перфторорганических соединений для медико-биологических целей

 

Изобретение относится к медицине и касается способа получения эмульсии на основе перфторорганических соединений, способных переносить кислород и другие газы, и может быть использовано в медицинской промышленности для создания искусственной крови, рентгеноконтрастных средств, а также сред для сохранения органов. Сущность изобретения заключается в том, что перфторорганическую эмульсию получают, пропуская струйно смесь перфторорганических соединений (ПФОС) с раствором проксанола через гомогенизатор под давлением 700-1000 атм и охлаждении при температуре от +24 до +34^oC, затем подвергают дальнейшей циклической гомогенизации. Для получения эмульсий берут смеси из двух, или трех, или четырех ПФОС: перфтороктилбромида, перфтордекалина, перфторметилциклогексилпиперидина, перфтортрибутиламина в различных соотношениях, эмульгируемые проксанолом с добавлением в эмульсию физиологически приемлемого электролитного раствора до требуемой концентрации. Изобретение обеспечивает создание субмикронных, монодисперсных, многокомпонентных эмульсий, а также способствует упрощению способа получения эмульсии, сокращению времени эмульгации. 1 з.п., 3 табл., 2 ил.

Изобретение относится к способам получения эмульсий на основе перфторорганических соединений, способных переносить кислород и другие газы, и может быть использовано в медицинской промышленности в качестве создания искусственной крови, рентгеноконтрастных средств, а также сред для сохранения органов.

Известно, что качество эмульсий в большей степени определяется размером и распределением частиц. Так, наличие крупных частиц размером более 0,2-0,3 мкм, как показано в работах Мицуно Тока, Кокурицу Кобэ, Медицинский институт, Японии, "Практическое использование искусственной крови", Сидзен, 1981, 36(9), с. 62-69, является причиной, обуславливающей токсичность эмульсий. Важным показателем является также стабильность, которая зависит в основном от свойств используемых перфторорганических соединений и эмульгирующего агента.

Для получения перфторуглеродных эмульсий используют, как правило, одновременно два типа перфторорганических соединений. Одно из них выбирают из группы С₈-С₁₀, содержащий, например перфтордекалини (ПФД) или перфтороктилбромид (ПФОБ), второе - из группы С₁₁-С₁₂, содержащей, например перфтортрипропиламин (ПФТПА), перфторметилциклогексил-пиперидин (ПФМЦП) или перфтортрибутилимин (ПФТБА). Данные перфторуглероды растворяют около 40 об.% кислорода (при pО₂ = 760 мм рт.ст.) и 150 - 190 об.% углекислого газа (при pСО₂ = 760 мм рт. ст.), вследствие чего их начали использовать в качестве главного компонента-газоносителя, при создании искусственной крови. Однако ПФОС не растворимы в воде и в других жидкостях, поэтому их можно использовать только в виде эмульсий с определенным размером перфторуглеродных частиц, покрытых слоем эмульгатора (проксанола) и чем меньше по размеру частица эмульсии, тем лучше, так как эмульсии вводятся внутривенно и при крупных размерах могут вызывать эмболию (закупорку) сосудов. Соединения первого типа быстро (в течение месяца) выводятся из организма, но не обеспечивают достаточной стабильности их эмульсий, соединения второго типа, напротив, придают эмульсии высокую стабильность, позволяющую хранить их без замораживания, но они в течение нескольких лет не выводятся из организма.

Наиболее распространенные технологии создания эмульсий подобного рода основаны на методах, использующих ультразвук или гомогенизацию под высоким давлением. Для получения эмульсий в промышленных масштабах предпочтителен гомогенизационный способ, так как он позволяет получать эмульсии в больших количествах и с лучшими физико-химическими характеристиками, например улучшенным по размеру распределением частиц (Jean G. Riess and Maurice Le Blanc. Preparation of perfluoro-chemical emulsions for biochemical use: principles, maaterils and methods. Ellis Horwood Series in Biomedicinne, VCH, Blood Substituts, Preparation, Physiology and Medical Applications. 1991. Ch. 5, p.p. 113-115).

Известен способ получения эмульсий, содержащих, например перфтордекалин (ПФД) и перфтортрипропиламин (ПФТПА), эмульгирующие агенты, например, сополимер полиоксиэтилен-пропилена (плюроник F-68, отечественный аналог-проксанол), фосфолипиды яичного желтка или соевые фосфолипиды и воду (патент СССР N 797546, бюлл. N 2, 1981). В соответствии с этим способом исходную эмульсию готовят, перемешивая компоненты в физиологически приемлемой водной среде с помощью гомогенного смесителя или пропеллерной мешалки, затем эмульгируют исходную эмульсию инжектированием в гомогенизаторе высокого давления при давлении от 100 до 500 атм. и температуре до +55^oС. Перфторуглеродную смесь пропускают через щель гомогенизатора до 12 раз.

К недостаткам данного изобретения следует отнести то, что при данном способе эмульсия получается достаточно крупнодисперсной по размеру и не может храниться в размороженном виде.

Средний размер частиц другой эмульсии для медицинских целей Fluosol-DA 20% той же фирмы, приготовленной аналогичным способом на основе ПФД и ПФТПА, значительно меньше предыдущей эмульсии и составляет О,118 мкм, доля частиц размером от 0,2 до 0,5 мкм составляет 7,8%. В качестве эмульгатора используется проксанол и фосфолипиды яичного желтка.

Однако средний диаметр частиц данной эмульсии также крупный в связи с тем, что при высоких температурах в процессе эмульгирования и стерилизации происходит укрупнение частиц эмульсии. Кроме того, из-за использования смесителей типа пропеллерной мешалки не обеспечивает достаточной стерильности процесса. Все это приводит к необходимости фильтрации фракции крупных частиц и стерилизации эмульсии, что усложняет процесс (Nitsuno T. et al., "Intake and retension of perfiuorochemical substance of Fiuosol-DA in res human", Proceedings of the 5. Int. Sympos. On Oxygen-Carring Colloidal Blood Substituts, Meinz, March, 1981, p. 220). Эмульсия, полученная по данному способу, хранится только в замороженном виде, так как после 8-12 ч хранения при комнатной температуре происходит укрупнение частиц эмульсии, и в связи с этим становится невозможным ее клиническое применение.

Известен способ получения перфторуглеродных эмульсий для медицинских целей (патент РФ N 2070033, опубл. 1996, бюл. N 34), наиболее близкий к заявляемому способу, в котором 12-кратная эмульгация перфтордекалина или перфтороктилбромида и перфторметилциклогексил-пиперидина в соотношении 2:1 проходит в трех емкостях при попеременном давлении, за счет повышения давления в гомогенизаторе в 1,1-1,2 раза при прохождении эмульсии в дополнительной емкости по сравнению с давлением при прохождении эмульсии в основных контурах, что позволяет получить эмульсию со средним размером частиц 0,06 мкм.

Недостатком данного способа, состоящим из трех емкостей (циркуляционный контур), является то, что перфторуглеродная смесь подается в гомогенизатор из первой емкости, которая в дальнейшем (после прокапывания смеси ПФОС) больше не используется, и требуется отключение последней от всей системы гомогенизации, кроме этого, медленное прокапывание ПФОС, не способствует достаточно полному контакту смеси ПФОС и эмульгатора и резко замедляет процесс эмульгации, что негативно отражается на среднем размере и распределении частиц эмульсии, а также приводит к увеличению времени гомогенизации. Следующим недостатком указанного способа является попеременная смена в процессе эмульгации давления в самом гомогенизаторе. Чередование давления с 500 атм. (при первом цикле) на 550 атм. (при втором цикле), снова на 500 атм. (при третьем цикле) и наоборот, при четвертом (и все это в течение 12 циклов) технически достаточно затруднительно, кроме этого, каждая смена давления сопровождается прямой растерилизацией системы через датчик манометра, что может в конечном итоге привести к заносу в эмульсию микрофлоры. Кроме этого, в эмульсии, приготовленной по данному способу, присутствуют крупнодисперсные частицы с диаметром свыше 0,2 мкм до 0,4%, что может увеличить количество реактогенных (аллергических) реакций. Другим недостатком указанного способа, является узкий температурный диапазон, в котором готовится эмульсия (от 20-22^oС). При такой температуре достаточно трудно приготовить высококонцентрированные эмульсии 30-40%, так как при низких температурных режимах эмульгации резко повышается вязкость предэмульсии, что приводит к застойным явлениям в гомогенизационной системе.

Задачей изобретения является создание субмикронных, монодисперсных, многокомпонентных эмульсий за счет уменьшения среднего размера частиц и уменьшения крупнодисперсных фракций частиц, а также упрощение способа получения эмульсии, сокращение времени эмульгации и улучшение условий стерильности процесса получения.

Поставленная задача решается тем, что в предлагаемом способе получения перфторуглеродных эмульсий для медицинских целей, включающем получение предэмульсии смешиванием суммарного количества перфторорганических соединений с эмульгирующим агентом и многократную гомогенизацию смеси в замкнутом циркуляционном контуре под давлением согласно изобретению предэмульсию получают путем струйного пропускания многокомпонентной смеси из двух ПФОС: ПФД/ПФТБА, ПФД/ПФМЦП, ПФОБ/ПФТБА, ПФОБ/ПФМЦП в соотношении от 1:1 до 10:1 соответственно; или из трех ПФОС: ПФОБ/ПФД/ПФМЦП, ПФОБ/ПФД/ПФТБА в соотношении от 1:1:1 до 10:1:1 соответственно; или из четырех ПФОС: ПФОБ/ПФД/ПФМЦП/ПФТБА в соотношении от 1:1:1:1 до 10:1:1:1 соответственно, с раствором проксанола через гомогенизатор под давлением 700-1000 атм и охлаждении при температуре от 24 до 34^oС, затем полученную эмульсию подвергают дальнейшей циклической гомогенизации (8-9 циклов) под постоянным давлением 400-490 атм и при постоянном охлаждении до получения эмульсии со средним размером частиц 0,03-0,05 мкм с последующим добавлением в эмульсию физиологически приемлемого электролитного раствора до требуемой концентрации.

Соотношение ПФОС от 1:1 до 10:1 при концентрации ПФОС от 20 до 40%, выбрано с учетом экспериментальных исследований. Так, для увеличения стабильности эмульсий при хранении в качестве 1 части всегда должны находиться перфторуглероды, дающие стабильные эмульсии, но трудно выводящиеся из организма - это ПФМЦП или ПФТБА. При увеличении концентрации данных ПФОС в эмульсии произойдет нежелательная задержка этих перфторуглеродов в организме, при уменьшении концентрации этих ПФОС эмульсии будут нестабильны при хранении. Так, для увеличения концентрации ПФОС в эмульсии, связанном с увеличением газотранспортных и рентгеноконтрастных свойств, к плохо выводящимся ПФМЦП и ПФТБА добавляется от 1 до 11 частей хорошо выводящихся ПФД или ПФОБ, но соответственно, дающих нестабильные эмульсии. ПФОБ ко всем положительным свойствам перфторуглеродов, имеет дополнительно рентгеноконтрастное действие. Поэтому уменьшение его концентрации в эмульсии ниже 1 части нежелательно, вследствие резкого снижения рентгеноконтрастных свойств. Экспериментальным путем установлено, что увеличение суммарной концентрации ПФОБ и ПФД в эмульсии свыше 11 частей может привести к укрупнению перфторуглеродных частиц при хранении, к ухудшению стабильности эмульсии и, соответственно, к негативным результатам. С учетом всех вышеперечисленных факторов, подобраны соотношения ПФОС в трех- и четырехкомпонентных эмульсиях также при концентрации ПФОС от 20 до 40%. Так, соотношение быстро выводящихся ПФОС (ПФОБ и ПФД) к перфторуглеродам, дающим стабильные эмульсии, но трудно выводящимся, составляет от 2: 1 до 11:1, где 2 и 11 - части быстро выводящиеся ПФОС, 1 часть - стабильные ПФОС (ПФМЦП и ПФТБА). На основании этих исследований были сделаны различные эмульсии с различным соотношением и количеством перфторуглеродов и, соответственно, с различными положительными свойствами.

Сущность изобретения поясняется схемой (фиг. 1) процесса, предназначенного для осуществления способа производства, на которой изображена гомогенизационная система, состоящая из верхней емкости 1 для смеси ПФОС, трубопровода 2, соединяющего емкость 1 с нижней емкостью 3, трубопровода 4, соединяющего емкости 1 и 3 с гомогенизатором высокого давления 5, трубопроводов 6 и 7, служащих для перекачки эмульсии из гомогенизатора 5 в емкость 1 и 3.

Способ осуществляется следующим образом. Для получения предэмульсии (микронных размеров) смесь ПФОС подают струйно из верхней емкости 1 по трубопроводу 2 в нижнюю емкость 3 с эмульгатором и через трубопровод 4 в гомогенизатор 5 при высоком "ударном" давлении в гомогенизаторе 700-1000 атм. Предэмульсия из гомогенизатора 5 под высоким "ударным" давлением 700-1000 атм поступает через трубопровод 6 обратно в емкость 3. Первый цикл получения предэмульсии замыкается: емкость 3, трубопровод 4, гомогенизатор 5, трубопровод 6 и снова емкость 3. Получение эмульсии с более мелкими частицами ведут при новом цикле: из гомогенизатора 5 эмульсия поступает через трубопровод 7 в верхнюю емкость 1 при давлении в гомогенизаторе 400-490 атм. Затем из емкости 1 эмульсия поступает через трубопровод 2 в нижнюю емкость 3 и трубопровод 4 в гомогенизатор 5 при давлении в гомогенизаторе 400-490 атм. Второй цикл получения эмульсии замыкается: емкость 1, трубопровод 2, емкость 3, трубопровод 4, гомогенизатор 5, трубопровод 7 и снова емкость 1. При первом и втором цикле, а также в последующем обе емкости освобождаются полностью от эмульсии, тем самым ликвидируются так называемые "застойные зоны", где скапливаются наиболее крупные частицы эмульсии. После третьего цикла эмульгации, аналогичного первому циклу за исключением давления гомогенизации, которое начиная со второго цикла в дальнейшем не меняется и составляет 400-490 атм, начинается четвертый цикл эмульгации, который аналогичен третьему и т. д. до 8-9 циклов. В течение всего процесса получения эмульсии осуществляют ее охлаждение до 24-34^oС в емкостях 1 и 3 и в самом гомогенизаторе в связи с тем. что увеличение температуры эмульсии во время гомогенизации приводит к укрупнению частиц эмульсии, что недопустимо.

Таким образом, предлагаемый способ создания эмульсии позволяет при первом цикле гомогенизации при давлении 700-1000 атм достаточно быстро "раздробить" предэмульсию до субмикронных размеров, а затем "доводить" эмульсию в последующих циклах при постоянном давлении в 400-490 атм, чередуя прохождение эмульсии через нижнюю и верхнюю емкость, что обеспечивает получить субмикронный, стабильный, многокомпонентный, монодисперсный по размеру частиц состав, что повышает безопасность применения эмульсии, за счет снижения реактогенных свойств эмульсии.

Выбранный экспериментальным путем пороговый режим давления эмульгации, а именно, при первом цикле 700-1000 атм, а в последующих циклах 400-490 атм, был основан на большом экспериментальном материале (фиг. 2), Так, при высоком "ударном" давлении эмульгации в 700-1000 атм происходит быстрое измельчение эмульсии с последующим, также быстрым, вторичным укрупнением частиц эмульсии. Однако при давлении в 400-490 атм эмульсия получается субмикронная, монодисперсная, но в течение длительного срока. Поэтому чтобы ускорить создание субмикронной, монодисперсной, многокомпонентной, стабильной эмульсии, был выбран комбинированный режим эмульгации (давления). Для предотвращения вторичного укрупнения частиц эмульсии при высоком давлении гомогенизации в 700-1000 атм экспериментальным путем был открыт уникальный эффект, при котором эмульгацию необходимо прерывать до того момента, когда начнется процесс вторичного укрупнения частиц эмульсии, и продолжать гомогенизацию эмульсии уже на "среднем" давлении в 400-490 атм, где не происходит вторичного крупнодисперсного образования, а наоборот осуществляется мягкая "доводка" эмульсии до среднего размера частиц 0,03- 0,05 мкм, при этом доля частиц с минимальным диаметром (до 0,10 мкм) достигает 87%, доля частиц с максимальным диаметром (свыше 0,20 мкм) составляет 0,3%.

Выбранный экспериментальным путем температурный режим эмульгации 24-34^oС основан на следующем. В процессе эмульгации (без охлаждения) температура эмульсии может подниматься свыше 50^oС за счет высокого давления гомогенизации, при этом было обнаружено, что уже после достижения 35^oС происходит медленное укрупнение частиц эмульсии, связанное именно с повышением температуры, поэтому субмикронные эмульсии не рекомендуют стерилизовать тепловым методом, а с помощью фильтрации. Снижение температуры ниже 23^oС, как было обнаружено, приводит к замедлению процесса получения субмикронных эмульсий за счет повышения вязкости, особенно это проявляется при создании высококонцентрированных эмульсий.

В предлагаемом способе создания эмульсий возможно получение эмульсий из многокомпонентных смесей ПФОС, состоящих из 3-х и 4-х перфторуглеродов.

Кроме того, в предлагаемом способе упрощена схема гомогенизационной системы, что сокращает время самого производства эмульсии, а в условиях строгой стерильности процесса производства является важнейшим фактором.

В предлагаемом способе получения эмульсии за счет струйного пропускания смеси перфторорганических соединений вдвое сокращается время первого цикла эмульгации.

Регуляция и отслеживание режима давления в гомогенизаторе в предлагаемом способе удобны, так как в процессе всей эмульгации давление меняется всего лишь один раз с 700-1000 атм до 400-490 атм, что обеспечивает стерильность всей гомогенизационной системы в течение всего производственного процесса.

Уменьшение среднего размера частиц эмульсии до 0,03-0,04 мкм (диаметр частиц уменьшен на 33-50%) по сравнению со способом-аналогом позволяет хранить эмульсию при комнатной температуре (20^oС) в течение одного месяца, так как укрупнение при хранении происходит всего лишь до среднего размера 0,11-0,12 мкм. Кроме этого известно, что чем меньше средний размер эмульсии при внутривенном введении эмульсии, тем лучше реологические свойства натуральной крови и больше площадь газообмена. Так, например, в 400 мл перфторуглеродной эмульсии со средним размером частиц 0,07 мкм частицы имеют общую площадь газообмена в 45000 кв.м, при этом общая площадь газообмена у всех эритроцитов в крови с их средним размером 7 мкм на порядок меньше и составляет 3500 кв. м. Все это приводит к увеличению процесса переноса кислорода между частицами эмульсии и организмом за счет большей поверхности газообмена, что является важнейшим фактором в обеспечении организма кислородом, поскольку субмикронные частицы со средним размером 0,03-0,04 мкм легко проникают туда, куда не может проникнуть эритроцит, размеры которого в 200 раз больше.

Предложенный способ позволяет создавать перфторуглеродные эмульсии с низкой степенью реактогенности по сравнению со способом - аналогом, так как наличие крупнодисперсных частиц (от 0,2 до 0,3 мкм), способных вызывать реактогенность эмульсии, в предлагаемом способе снижено на 25% (табл. 1).

В табл. 2 и 3 приведены сравнительные характеристики эмульсий, полученных по способу-аналогу и 20%-ные и 40%-ные перфторуглеродные эмульсии, приготовленные с помощью заявляемого способа.

Таким образом, предлагаемый способ получения эмульсий на основе перфторорганических соединений для медико-биологических целей предпочтительнее по сравнению со способом-аналогом и способом получения препарата Флюозол-ДА 20%.

Пример 1. Получение 20%-ой эмульсии. Перфторуглеродную смесь ПФД/ПФТБА, в соотношении 1:1, в количестве 200 мл, содержащей 200 г ПФД удельной плотности 1,938 и 200 г ПФТБА удельной плотности 1,899, пропускали струйно из емкости 1 через трубопровод 2 в емкость 3, где находился 10-12%-ный раствор проксанола в количестве 800 мл. После этого полученную смесь ПФОС и ПАВ пропускали через трубопровод 4 в гомогенизатор 5, в котором высокое "ударное" давление составляло 700-1000 атм. Полученную предэмульсию из гомогенизатора 5 под высоким "ударным" давлением 700-1000 атм подавали через трубопровод 6 вновь в емкость 3. Из емкости 3 предэмульсию подавали через трубопровод 4 в гомогенизатор 5, давление в котором составляло 400-490 атм, и в дальнейшем оно не менялось в течение всей наработки. Полученную эмульсию через трубопровод 7 подавали в емкость 1, через трубопровод 2 в емкость 3 и через трубопровод 4 в гомогенизатор 5, давление в котором составляло 400-490 атм. Из гомогенизатора 5 эмульсию подавали через трубопровод 7 в емкость 1. Для получения субмикронной эмульсии требовалось 8-9 циклов прохождения смеси ПФОС и проксанола через гомогенизатор 5 и емкости 1 и 3. Температура охлаждения эмульсии в емкостях 1 и 3 и гомогенизаторе 5, в течение всего процесса получения составляла 24-34^oС. Так получали концентрированную эмульсию, которую затем разбавляли 1000 мл концентрированным электролитным раствором, поддерживающим осмотическое давление. Средний размер частиц эмульсии составлял 0,031 мкм.

Конечная рецептура перфторуглеродной эмульсии имела следующий состав: ПФД/ПФТБА (соотношение 1:1) 20% (или 10 об%), проксанол 4-4,8%, натрия хлорид 0,60-0,90 г; калия хлорид 0,039-0,041 г; магния хлорид (в пересчете на сухое вещество) 0,019-0,021 г; натрия гидрокарбонат 0,065-0,068 г; натрия фосфат однозамещенный (в пересчете на сухое вещество) 0,02-0,023 г; глюкоза 0,20-0,22 г в 100 мл воды апирогенной. Полученную эмульсию после добавки хлористого кальция (0,004-0,028 г) можно использовать в качестве перфузионной среды и при наружном применении.

Пример 2. Готовили эмульсию, как описано в примере 1. Соотношение ПФД/ПФМЦП составляло 2:1, навески ПФД/ПФМЦП составляли 266 г и 133 г. Удельная плотность ПФМЦП 1,920. Средний размер частиц эмульсии составлял 0,03 мкм.

Конечная рецептура перфторуглеродной эмульсии имела следующий состав: ПФД/ПФМЦП (соотношение 2:1 20% (или 10 об%), проксанол 4-4,8% натрия хлорид 0,60-0,90 г; калия хлорид 0,039-0,041 г; магния хлорид (в пересчете на сухое вещество) 0,019-0,021 г; натрия гидрокарбонат 0,065-0,068 г; натрия фосфат однозамещенный (в пересчете на сухое вещество) 0,02-0,023 г; глюкоза 0,20-0,22 г в 100 мл воды апирогенной. Полученную эмульсию использовали в качестве кровезамещающего средства при внутривенном введении и при внутреннем применении у крыс.

Пример 3. Готовили эмульсию, как описано в примере 1. Соотношение ПФОБ/ПФТБА составляло 3:1, навески ПФОБ/ПФТБА составляли 300 и 100 г. Удельная плотность ПФОБ 1,920. Средний размер частиц эмульсии составлял 0,031 мкм.

Конечная рецептура перфторуглеродной эмульсии имела следующий состав: ПФОБ/ПФТБА (соотношение 3: 1 20% (или 10 об%), проксанол 4-4,8%, натрия хлорид 0,60-0,90 г; калия хлорид 0,039-0,041 г; магния хлорид (в пересчете на сухое вещество) 0,019-0,021 г; натрия гидрокарбонат 0,065-0,068 г; натрия фосфат однозамещенный (в пересчете на сухое вещество) 0,02-0,023 г; глюкоза 0,20-0,22 г в 100 мл воды апирогенной. Полученную эмульсию после добавки кальция хлористого (0,004-0,028 г), использовали в качестве перфузионной среды и при наружном применении у крыс.

Пример 4. Готовили эмульсию, как описано в примере 1. Соотношение ПФОБ/ПФМЦП составляло 7:1, навески ПФОБ/ПФМЦП составляли 350 и 50 г. Средний размер частиц эмульсии составлял 0,03 мкм.

Конечная рецептура перфторуглеродной эмульсии имела следующий состав: ПФОБ/ПФМЦП (соотношение 7: 1) 20% (или 10 об%), проксанол 4-4,8%, натрия хлорид 0,60-0,90 г; калия хлорид 0,039-0,041 г; магния хлорид (в пересчете на сухое вещество) 0,019-0,021 г; натрия гидрокарбонат 0,065-0,068 г; натрия фосфат однозамещенный (в пересчете на сухое вещество) 0,02-0,023 г; глюкоза 0,20-0,22 г; в 100 мл воды апирогенной. Полученную эмульсию использовали в качестве кровезамещающего и рентгеноконтрастного средств при внутривенном введении и при внутреннем применении у крыс.

Пример 5. Готовили эмульсию, как описано в примере 1. Соотношение ПФОБ/ПФМЦП составляло 10:1, навески ПФОБ/ПФМЦП составляли 363 и 37 г. Средний размер частиц эмульсии составлял 0,032 мкм.

Конечная рецептура перфторуглеродной эмульсии имела следующий состав: ПФОБ/ПФМЦП (соотношение 10: 1 20% (или 10 об%), проксанол 4-4,8%, натрия хлорид 0,60-0,90 г, в 100 мл воды апирогенной. Полученную эмульсию использовали в качестве кровезамещающего и рентгеноконтрастного средства при внутривенном введении и при внутреннем применении у крыс.

Пример 6. Готовили эмульсию, как описано в примере 1. Соотношение ПФОБ/ПФД/ПФМЦП составляло 1:1:1, навески ПФОБ/ПФД/ПФМЦП составляли, соответственно, 133:133:133 г. Средний размер частиц эмульсии составлял 0,031 мкм.

Конечная рецептура перфторуглеродной эмульсии состояла из следующего: ПФОБ/ПФД/ПФМЦП (соотношение 1:1:1 20% (или 10 об%), проксанол 4-4,8%, натрия хлорид 0,60-0,90 г; калия хлорид 0,039-0,041 г; магния хлорид (в пересчете на сухое вещество) 0,019-0,021 г; натрия гидрокарбонат 0,065-0,068 г; натрия фосфат однозамещенный (в пересчете на сухое вещество) 0,02-0,023 г; глюкоза 0,20-0,22 г; в 100 мл воды апирогенной. Полученную эмульсию можно использовать в качестве кровезамещающего средства при внутривенном введении и при внутреннем применении.

Пример 7. Готовили эмульсию, как описано в примере 1. Соотношение ПФОБ/ПФД/ПФТБА составляло 10:1:1, навески ПФОБ/ПФД/ПФБТА составляли, соответственно, 333:33:33 г. Средний размер частиц эмульсии составлял 0,041 мкм.

Конечная рецептура перфторуглеродной эмульсии имела следующий состав: ПФОБ/ПФД/ПФТБА (соотношение 10:1:1 20% (или 10 об%) проксанол 4-4,8%, натрия хлорид 0,60-0,90 г; калия хлорид 0,039-0,041 г; магния хлорид (в пересчете на сухое вещество) 0,019-0,021 г; натрия гидрокарбонат 0,065-0,068 г; натрия фосфат однозамещенный (в пересчете на сухое вещество) 0,02-0,023 г; глюкоза 0,20-0,22 г; в 100 мл воды апирогенной. Полученную эмульсию можно использовать в качестве рентгеноконтрастного средства при внутреннем применении.

Пример 8. Готовили эмульсию, как описано в примере 1. Соотношение ПФОБ/ПФД/ПФМЦП/ПФТБА составляло 1:1:1:1, навески ПФОБ/ПФД/ПФМЦП/ПФТБА составляли, соответственно, 100:100:100:100 г. Средний размер частиц эмульсии составлял 0,042 мкм.

Конечная рецептура перфторуглеродной эмульсии имела следующий состав: ПФОБ/ПФД/ПФМЦП/ПФТБА (соотношение 1: 1:1:1 20% (или 10 об%), проксанол 4-4,8%, натрия хлорид 0,60-0,90 г; калия хлорид 0,039-0,041 г; магния хлорид (в пересчете на сухое вещество) 0,019-0,021 г; натрия гидрокарбонат 0,065-0,068 г; натрия фосфат однозамещенный (в пересчете на сухое вещество) 0,02-0,023 г; глюкоза 0,20-0,22 г; в 100 мл воды апирогенной. Полученную эмульсию после добавки кальция хлористого (0,004-0,028 г) можно использовать в качестве перфузионной среды и при наружном применении.

Пример 9. Готовили эмульсию, как описано в примере 1. Соотношение ПФОБ/ПФД/ПФМЦП/ПФТБА составляло 1О: 1: 1: 1, навески ПФОБ/ПФД/ПФМЦП/ПФТБА составляли, соответственно, 307:31:31:31 г. Средний размер частиц эмульсии составлял 0,040 мкм.

Конечная рецептура перфторуглеродной эмульсии имела следующий состав: ПФОБ/ПФД/ПФМЦП/ПФТБА (соотношение 1О:1:1:1 20% или (10 об%), проксанол 4-4,8% натрия хлорид 0,60-0,90 г; калия хлорид 0,039-0,041 г; магния хлорид (в пересчете на сухое вещество) 0,019-0,021 г; натрия гидрокарбонат 0,065-0,068 г; натрия фосфат однозамещенный (в пересчете на сухое вещество) 0,02-0,023 г; глюкоза 0,20-0,22 г; в 100 мл воды апирогенной. Полученную эмульсию можно использовать в качестве кровезамещающего и рентгеноконтрастного средства при внутривенном введении и при внутреннем применении.

Пример 10. Получение 40%-ной эмульсии. Перфторуглеродную смесь ПФД/ПФТБА, в соотношении 1: 1, в количестве 400 мл, содержащей 400 г ПФД удельной плотности 1,938 и 400 г ПФТБА удельной плотности 1,899, пропускали струйно из емкости 1 через трубопровод 2 в емкость 3, где находился 10-14%-ный раствор проксанола в объеме 800 мл. После этого полученную смесь ПФОС и ПАВ пропускали через трубопровод 4 в гомогенизатор 5, высокое "ударное" давление в котором составляло 700-1000 атм. Полученную предэмульсию из гомогенизатора 5 под высоким "ударным" давлением 700-1000 атм подавали через трубопровод 6 вновь в емкость 3. Из емкости 3 эмульсию подавали через трубопровод 4 в гомогенизатор 5, давление в котором составляло 400-490 атм и в дальнейшем в течение всей наработки оно не менялось. Полученную эмульсию через трубопровод 7 подавали в емкость 1 через трубопровод 2 в емкость 3 и через трубопровод 4 в гомогенизатор 5, давление в котором составляло 400-490 атм. Из гомогенизатора 5 эмульсию подавали через трубопровод 7 в емкость 1. Для получения субмикронной эмульсии требовалось 8-9 циклов прохождения смеси ПФОС и проксанола через гомогенизатор 5 и емкости 1 и 3. Температура охлаждения эмульсии в емкостях 1 и 3 и гомогенизаторе 5, в течение всего процесса получения составляла 24-34^oC. Так получали концентрированную эмульсию, которую затем разбавляли 800 мл концентрированным электролитным раствором, поддерживающим осмотическое давление. Средний размер частиц эмульсии составлял 0,031 мкм.

Конечная рецептура перфторуглеродной эмульсии имела следующий состав: ПФД/ПФТБА (соотношение 1:1 40% (или 20 об%), проксанол 4-5,6%, натрия хлорид 0,60-0,90 г; в 100 мл апирогенной воды, полученную эмульсию можно использовать при внутреннем и при наружном применении: ожогах, раневых поверхностях и т.п.

Пример 11. Готовили эмульсию, как описано в примере 10. Соотношение ПФД/ПФМЦ составляло 10:1, навески ПФД/ПФМЦП составляли 725 и 75 г. Средний размер частиц эмульсии составлял 0,03 мкм.

Конечная рецептура перфторуглеродной эмульсии имели следующий состав: ПФД/ПФМЦП (соотношение 10: 1 40% (или 20 об%), проксанол 4-5,6%, натрия хлорид 0,60-0,90 г; калия хлорид 0,039-0,041 г; магния хлорид (в пересчете на сухое вещество) 0,019-0,021 г; натрия гидрокарбонат 0,065-0,068 г; натрия фосфат однозамещенный (в пересчете на сухое вещество) 0,02-0,023 г; глюкоза 0,20-0,22 г; в 100 мл воды апирогенной. Полученную эмульсию можно использовать при внутривенном введении, при внутреннем и наружном применении.

Пример 12. Готовили эмульсию, как описано в примере 10. Соотношение ПФОБ/ПФД/ПФМЦП составляло 10:1:1, навески ПФОБ/ПФД/ПФМЦП составляли, соответственно, 666:67:67 г. Средний размер частиц эмульсии составлял 0,042 мкм.

Конечная рецептура перфторуглеродной эмульсии имела следующий состав: ПФОБ/ПФД/ПФМЦП (соотношение 1О:1:1 40% (или 20 об%), проксанол 4-5,6%, натрия хлорид 0,60-0,90 г; калия хлорид 0,039-0,041 г; магния хлорид (в пересчете на сухое вещество) 0,019-0,021 г; натрия гидрокарбонат 0,065-0,068 г; натрия фосфат однозамещенный (в пересчете на сухое вещество) 0,02-0,023 г; глюкоза 0,20-0,22 г; в 100 мл воды апирогенной. Полученную эмульсию использовали при внутривенном введении, при внутреннем и наружном применении у крыс.

Пример 13. Готовили эмульсию, как описано в примере 10. Соотношение ПФОБ/ПФД/ПФМЦП/ПФТБА составляло 10: 1: 1:1, навески ПФОБ/ПФД/ПФМЦП/ПФТБА составляли, соответственно, 614:62:62:62 г. Средний размер частиц эмульсии составлял 0,051 мкм.

Конечная рецептура перфторуглеродной эмульсии имела следующий состав: ПФОБ/ПФД/ПФМЦП/ПФТБА (соотношение 1О:1:1:1 40% (или 20 об%), проксанол 4-5,6%, натрия хлорид 0,600,90 г; калия хлорид 0,039-0,041 г; магния хлорид (в пересчете на сухое вещество) 0,019-0,021 г; натрия гидрокарбонат 0,065-0,068 г; натрия фосфат однозамещенный (в пересчете на сухое вещество) 0,02-0,23 г; глюкоза 0,20-0,22 г; в 100 мл воды апирогенной. Полученную эмульсию можно использовать при внутривенном введении, при внутреннем и наружном применении.

Формула изобретения

1. Способ получения эмульсии на основе перфторорганических соединений (ПФОС) для медико-биологических целей, включающий получение предэмульсии смешением суммарного количества перфторорганических соединений с эмульгирующим агентом и многократную гомогенизацию смеси в замкнутом циркуляционном контуре под давлением, отличающийся тем, что предэмульсию получают путем струйного пропускания многокомпонентной смеси из двух ПФОС: перфтордекалина (ПФД)/перфтортрибутиламина (ПФТБА), ПФД/(перфторметилциклогексилпиперидина (ПФМЦП), перфтороктилбромида (ПФОБ)/ПФТБА, ПФОБ/ПФМЦП в соотношении от 1:1 до 10:1 соответственно, или из трех ПФОС : ПФОБ/ПФД/ПФМЦП, ПФОБ/ПФД/ПФТБА в соотношении от 1: 1: 1 до 10: 1: 1 соответственно, или из четырех ПФОС: ПФОБ/ПФД/ПФМЦП/ПФТБА в соотношении от 1:1:1:1 до 10:1:1:1 соответственно с раствором проксанола через гомогенизатор под давлением 700 - 1000 атм и охлаждении при температуре +24 до +34^oC, затем полученную эмульсию подвергают дальнейшей циклической гомогенизации (8 - 9 циклов) под постоянным давлением 400 - 490 атм и при постоянном охлаждении до получения эмульсии со средним размером частиц 0,03 - 0,05 мкм.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в полученную эмульсию добавляют физиологически приемлемый электролитный раствор до требуемой концентрации.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5

PC4A - Регистрация договора об уступке патента Российской Федерации на изобретение

Номер и год публикации бюллетеня: 27-2000

(73) Патентообладатель:ЗАО "Научно-исследовательская лаборатория биологического и физико-химического изучения ПФОС" (RU)

Договор № 10664 зарегистрирован 21.06.2000

Извещение опубликовано: 27.09.2000        

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 17.12.2004

Извещение опубликовано: 20.11.2005        БИ: 32/2005

---