Средство для снижения содержания холестерина в крови, фармацевтическая композиция

 

Изобретение относится к медицине, конкретно к фармакологии. Предложено новое применение соединения формулы I где n = 0 или 1; R является оксигруппой, метоксигруппой, (C₁-C₇)алканоилоиксигруппой, (C₃-C₇)циклоалканоилоксигруппой, (C₁-C₆)алкокси-(C₁-C₇)алканоилоксигруппой, незамещенной или замещенной ароилоксигруппой или замещенной или незамещеной ароилкарбоксильной группой; R¹ является а томом водорода, оксигруппой, атомом галогена, метоксигруппой, (C₁-C₇)алканоилоксигруппой, (C₃-C₇)циклоалканоилоксигруппой, (C₁-C₆)алкокси-(C₁-C₇)алканоилоксигруппой, незамещенной или замещенной ароилоксигруппой или замещенной или незамещенной ароилкарбоксильной группой; R² является гетероциклическим кольцом, выбранным из группы, включающей пирролидиновую, пиперидиновую или гексаметилениминовую группу, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата для снижения уровня содержания холестерина в сыворотке крови. Предложена фармацевтическая композиция того же назначения на основе соединения общей формулы I. Изобретение расширяет арсенал гипохолестеринемических средств. 2 с. и 3 з.п.ф-лы, 7 табл.

Настоящее изобретение связано с тем открытием, что соединения ряда 2-фенил-3-ароилбензотиофенов могут быть использованы для уменьшения содержания холестерина в сыворотке крови.

Клетки всех млекопитающих используют холестерин в качестве строительного материала своих клеточных мембран и для получения нестериновых конечных продуктов. Однако само свойство, которое является ценным в клеточных мембранах, а именно нерастворимость холестерина в воде, превращает его в источник опасности. Если холестерин накапливается в ненужном месте, например на внутренних стенках артерий, то его трудно мобилизовать и присутствие холестерина приводит к развитию атеросклерозных бляшек. Было установлено, что основным фактором, способствующим развитию и прогрессированию атеросклероза, является повышение содержание холестерина в сыворотке крови, связанное с присутствием низкоплотных липопротеинов (НЛ).

Эстроген, в частности при оральном приеме, уменьшает уровень содержания в плазме НЛ и повышает содержание оказывающих благотворное воздействие высокоплотных липопротеинов (ВЛ). Однако применение экстрогенной терапии в течение длительного времени приводит к развитию ряда расстройств, в том числе повышает опасность развития рака матки и вероятно рака молочной железы, поэтому многие женщины отказываются от лечения этим препаратом. Недавно предложенные терапевтические режимы, которые направлены на уменьшение риска развития рака, например, назначение эстрогена в сочетании с прогестогеном, вызывает у пациентов сильные кровотечения. Далее, сочетание эстрогена с прогестероном приводит к подавлению воздействия эстрогена на уровень содержания холестерина в сыворотке. Значительные нежелательные эффекты, вызванные эстрогеновой терапией, диктуют необходимость разработки альтернативных методов терапии для лечения холестеринемии, при которых оказывалось бы воздействие на НЛ, но не возникали побочные эффекты.

Попытки разрешить эту проблему путем использования соединений, известных как антиэстрогены, которые взаимодействуют с рецептором эстрогена и/или присоединяются к тем местам, которые были названы местами присоединения антиэстрогенов, имели лишь частичный успех, вероятно вследствие того, что эти соединения, как правило, проявляют смешанные свойства сродства к рецептору и веществам-антагонистам и подвержены тем же вредным эффектам, что побочные эффекты, связанные с эстрогеновой терапией.

В настоящем изобретении заявляются способы уменьшения содержания НЛ в сыворотке крови, которые не связаны с вредными побочными эффектами эстрогенной терапии, и таким образом являются эффективными и приемлемыми способами лечения холестеринемии.

Соединения ряда 2-фенил-3-ароилбензотиофенов общей формулы I, которые являются активными соединениями в методах, используемых в настоящем изобретении, находились в группе соединений, впервые полученных C.D.Jones & T. Squalez в качестве противозачаточных средств (см. патент США 4133814 от 09.01.1979 г. ) позднее Jones обнаружил, что группа этих соединений, в том числе соединения общей формулы I, по настоящему изобретению могут быть использованы в антиэстрогенной и антиандрогеновой терапии, в частности при лечении опухолей молочной железы и предстательной железы (см.патент США 4418068 от 29.11.83 г.). Однако из этих соединений соединение по формуле I, в котором равно n=0, а R и R¹ являются гидроксильными группами, а R² является пиперидиновым кольцом, прошли в течение короткого времени клинические испытания при лечении рака молочной железы. Это соединение названо ралоксифеном (прежнее название кеоксифен).

В настоящем изобретении заявляется новый способ снижения уровня содержания холестерина в сыворотке крови, состоящий в назначении соединения общей формулы I где
n = 0, 1 или 2;
R - является оксигруппой, метоксигруппой, (C₁-C₇)алканоилоксигруппой, (C₃-C₇) циклоалканоилоксигруппой, (C₁-C₆)-алкокси-(C₁-C₇) алканоилоксигруппой, незамещенной или замещенной ароилоксигруппой, или замещенной или незамещенной ароилкарбоксильной группой;
R¹ является атомом водорода, оксигруппой, атомом галогена, метоксигруппой, (C₁-C₇) алканоилоксигруппой, (C₃-C₇) циклоалканоилоксигруппой, (C₁-C₆)алкокси(C₁-C₇) алканоилоксигруппой, незамещенной или замещенной ароилоксигруппой, или замещенной или незамещенной ароилкарбоксильный группой,
R² - является гетероциклическим кольцом, выбранным из группы, включающей пирролидиновую группу, пиперидиновую группу, или гексаметилениминовую группу,
или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата пациенту, которому необходимо снизить уровень содержания холестерина в сыворотке крови.

В настоящем изобретении заявляется также использование соединения общей формулы I или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата, в производстве медицинских препаратов для снижения уровня содержания холестерина в сыворотке.

Общие химические термины, используемые в описании соединения по формуле I, имеют свое обычное значение. Например, термин "алкильная группа" как таковая или же как часть другого заместителя, означает алкильный радикал с прямой или разветвленной цепью, который содержит указанное количество атомов углерода, такой как метильная группа, этильная группа, пропильная группа, изо-пропильная группа, или высшие гомологи или их изомеры в тех случаях, когда это указано.

Термин "алкоксигруппа" означает алкильную группу, содержащую указанное количество атомов углерода, которая присоединена к атому кислорода, такую как метоксигруппа, этоксигруппа, пропоксигруппа, бутоксигруппа, пентолоксигруппа и гексилоксигруппа, а также включает структуры с разветвленной цепью, такие как, например, изопропоксигруппа и изобутоксигруппа.

Термин "(C₁-C₇) алканоилоксигруппа" используется для обозначения группы -O-C(O)-R^a, где R^a является атомом водорода или (C₁-C₆) алкильной группой, и включает формилоксигруппу, ацетоксигруппу, пропаноилоксигруппу, бутаноилоксигруппу, пентаноилоксигруппу, гексаноилоксигруппу и т.п., а также включает изомеры с разветвленной цепью, такие как, например, 2,2-диметилпропаноилоксигруппа и 3-3-диметилбутаноилоксигруппа.

Аналогично, термин "(C₄-C₇) циклоалканоилоксигруппа" означает группу -O-C(O)-C₃-C₆) циклоалкильная группа, в которой (C₃-C₆) алкильная группа является циклопропильной группой, циклобутильный группой, циклопентильной группой и циклогесильной группой.

Термин "(C₁-C₆) алкокси -(C₁-C₇) алканоилоксигруппа" используется для обозначения группы -O-C(O)-R^b-O-(C₁-C₆) алкильная группа, где R^b является связующей (C₁-C₆) алкоксикарбонилоксигруппой или (C₁-C₆)алкандиильной группой и включает, например, метоксикарбонилоксигруппу, этоксикарбонилоксигруппу, пропоксикарбонилоксигруппу, бутоксикарбонилоксигруппу, метоксиацетоксигруппу, метоксипропаноилоксигруппу, метоксибутаноилоксигруппу, метоксипентаноилоксигруппу, метоксигексаноилоксигруппу, этоксиацетоксигруппу, этоксипропаноилоксигруппу, этоксибутаноилоксигруппу, этоксипентаноилоксигруппу, этоксигексаноилоксигруппу, пропоксиацетоксигруппу, пропоксипропаноилоксигруппу, пропоксибутаноилоксигруппу и т.д.

Термин "незамещенная или замещенная ароилоксигруппа" означает группу -O-C(O)-арильная группа, где арильная группа является фенильной группой, нафтильной группой или фурильной группой, которая (это относится к каждой группе) является незамещенной или содержит один заместитель, выбранный из оксигруппы, атом галогена, (C₁-C₃) алкильной группы или (C₁-C₃) алкоксигруппы.

Термин "назамещенная или замещенная арилоксикарбоксильная группа" означает группу -O-C(O)-O-арильная группа, где арильная группа является фенильная группой, нафтильной группой, тиенильной группой или фурильной группой, которая (это относится к каждой группе) является незамещенной или содержит один заместитель, выбранный из оксигруппы, атома галогена, (C₁-C₃) алкильной группы или (C₁-C₃) алкоксигруппы.

Термин "атом галогена" означает атом хлора, фтора, брома или иода.

Настоящее изобретение связано с открытием того, что соединение ряда 2-фенил-3-ароилбензотиофенов, соединения общей формулы I могут быть использованы для уменьшения уровня содержания холестерина в сыворотке крови. Способы лечения, заявляемые в настоящем изобретении, включают назначение соединения общей формулы I или его фармацевтически приемлемой соли присоединения или сольвата пациенту, у которого необходимо снизить уровень содержания холестерина в сыворотке крови. Настоящее изобретение включает как терапевтическое, так и профилактическое действие. Соединение, как правило, смешивается с обычными инертными наполнителями, разбавителями или носителями и прессуется в таблетки или приготавливается в виде эликсиров или растворов для обычного орального назначения или же вводится внутримышечно или внутривенно. Соединения могут поступать внутрикожно и хороши для приготовления форм препаратов для длительного воздействия и т.д.

Бензотеофены по формуле I снижают уровень содержания холестерина в сыворотке животных и должны быть особенно полезными для снижения уровня содержания холестерина у человека. Избыточное содержание холестерина является следствием различных причин и расстройств, в том числе вызванных отсутствием ендогенного эстрогена, что наблюдается у женщин при прерывании менструаций вследствие естественных, хирургических или иных процессов, и у пациентов, страдающих дисгенезией половых желез.

Бензотиофены общей формулы I являются нестероидными соединениями, которые обладают высоким сродством к обычным рецепторам эстрогена в основных изучаемых тканях половых органов. Однако их применение вызывает минимальную эстрогеновую реакцию в этих тканях, а потому они могут быть активны в качестве антагонистов природных эстрогенов, таких как эстрадиол. В отличие от других антиэстрогеновых соединений, обладающих иной структурой, бензотиофены общей формулы I способны противодействовать классической эстрогеновой ответной реакции в основных излучаемых тканях половых органов и в то же время вызывают эстрогеновую ответную реакцию по отношению к уровню содержания холестерина. Эта двойственность указывает на их селективное поведение как веществ, обладающих сродством к рецептору, и веществ-антагонистов по отношению к специфическим клеткам-мишеням, что весьма желательно при лечении холестеронемии. Таким образом, в настоящем изобретении заявляется способ снижения уровней содержания холестерина в сыворотке крови, состоящей в назначении пациенту такого количества соединения по формуле I, которое снижает уровень содержания НЛ, но не оказывает заметного влияния на основные ткани половых органов. Это сочетание свойств позволяет применять длительное лечение хронических расстройств с небольшим риском развития нежелательных эффектов, присущих традиционной терапии, которая предусматривает восполнение эстрогена.

Биологическое воздействие бензотиофенов общей формулы I является комплексным и может быть не связано с наблюдаемым присутствием в крови родственных соединений. После орального введения предпочтительного бензотиофена по настоящему изобретению, а именно ралоксифена (назначается в виде гидрохлорида), испытуемым людям в условиях клиники в крови этих пациентов не были обнаружены родственные соединения. Было установлено, что после орального применения соединение быстро связывается в глюкуронизованную форму. Хотя биологические точки окончания не были определены у человеческих реципиентов, тем не менее полагают, что соединение не является биологически доступным.

С целью прояснить вопрос относительно биологической доступности, были проведены лабораторные эксперименты на животных, у которых можно исследовать биологическую активность. Эксперименты на животных показали, что ралоксифен проявляет максимальную активность, подавляя как поглощение маткой меченного тритием эстрадиола, так и нормальную утеротрофическую реакцию по отношению к эстрадиолу даже в тех условиях, при которых ралоксифен быстро связывался в плазме крови животных. Более того, конъюгат, выделенный из мочи пациенток, которых лечили ралоксифеном, показывает значительную антиэстрогеновую/антиутеротрофическую активность при внутривенном введении крысам и подавляет взаимодействие меченного тритием эстрадиола с маточным рецептором эстрогена крыс аналогично действию родственных соединений при температурах, близких к физиологическим условиям. Поскольку эти соединения не связываются при температуре 4^oC, на основании этих исследований можно сделать вывод, что связанное соединение могло превратиться в родственное соединение в процессе воздействия, главным образом вследствие действия бета-глюкуронидазы. Это превращение может способствовать усилению активности соединения. Бета-глюкуронидаза находится везде и вполне доступна для превращения связанного соединения в родственную форму, если это необходимо для усиления активности. Таким образом, связывание бензотиофена по формуле I нельзя рассматривать как вредное с точки зрения их биологической доступности.

Таким образом, способ лечения, заявляемый в настоящем изобретении, осуществляется практически путем назначения пациенту такого количество соединения общей формулы I или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата, которое является эффективным для снижения уровня содержания холестерина в сыворотке. Особые преимущества, представляемые этим способом, заключаются в том, что он позволяет избежать потенциально вредных и неприемлемых побочных эстрогеновых эффектов. Заявляемый способ предусматривает в зависимости от необходимости как терапевтическое, так и профилактическое действие препарата.

Заявляемый способ предусматривает также назначение соединения по формуле I и эстрогена как независимо, так и в сочетании друг с другом. Термин эстроген, применяемый в данном описании, относится к любому соединению, свойства которого напоминают спектр активности природной молекулы, которая, как считается, является 17-бета-эстрадиолом. Примеры таких соединений включают эстриол, эстрон, этинилэстрадиол, премарин (выпускаемый препарат на основе связанных эстрогенов, выделяемый из природного источника -Ayerst) и т.п. и вновь вследствие селективных свойств соединения по формуле I как вещества, обладающего сродством к рецептору, и вещества-антагониста, при таком сочетании сохраняется благотворное воздействие, оказываемое эстрогеновой терапией, но не наблюдаются вредные эффекты, которые присущи только эстрогеновой терапии.

Предпочтительный способ осуществления настоящего изобретения предусматривает использование соединения общей формулы I, где n = 0, а R и R¹ независимо являются оксигруппой, (C₁-C₇) алканоилоксигруппой, (C₁-C₆) алкокси-(C₁-C₇) алканоилоксигруппой, незамещенной или замещенной бензоилоксигруппой, или замещенной или незамещенной феноксикарбоксигруппой. Предпочтительные способы осуществления настоящего изобретения предусматривают также использование соединения общей формулы I, в котором радикалы R и R¹ совпадают. Определенные группы R² также демонстрируют предпочтительные свойства при использовании в способе по настоящему изобретению. Так, предпочтительные способы осуществления настоящего изобретения предусматривают использование соединения общей формулы I, в котором радикал R² является пиперидиногруппой или пирролидиногруппой. Особенно предпочтительными из указанных соединений являются такие, в которых радикал R² является пиперидиногруппой или пирролидиногруппой, а радикалы R или R¹ являются оксигруппами. Наиболее предпочтительным соединением по формуле I является ралоксифен.

Соединения общей формулы I и их фармацевтически приемлемые соли могут быть получены в соответствии с известными методиками, подробно описанными, например, в патентах США 4133814 и 4418068.

Соединения по формуле I образуют соли присоединения кислот и оснований и включают физиологические приемлемые соли, которые часто используются в фармацевтической химии. Такие соли также входят в настоящее изобретение. Типичными неорганическими кислотами, используемыми для получения указанных солей, являются соляная кислота, бромистоводородная кислота, иодистоводородная кислота, азотная кислота, серная кислота, фосфорная кислота, гипофосфорная кислота и т.п. Могут быть использованы также соли, полученные из органических кислот, таких как алифатические моно- и дикарбоновые кислоты, фенилзамещенные алкановые кислоты, оксиалкановые и оксиалкандикарбоновые кислоты, ароматические кислоты, алифатические и ароматические сульфокислоты. Типичными солями являются ацетаты, фенилацетаты, трифторацетаты, акрилаты, соли аскорбиновой кислоты, бензоаты, хлорбензоаты, динитробензоаты, оксибензоаты, метоксибензоаты, метилбензоаты, о-ацетоксибензоаты, соли нафталин-2-бензойной кислоты, бромиды, изобутираты, фенилбутираты, бета-оксибутираты, соли бутин-1,4-дионовой кислоты, соли гексин-1,4-дионовой кислоты, соли каприновой кислоты, соли каприловой кислоты, хлориды, соли коричной кислоты, цитраты, формиаты, фумараты, соли гликолевой кислоты, соли гептановой кислоты, соли гиппуровой кислоты, соли молочной кислоты, соли яблочной кислоты, соли малеиновой кислоты, соли оксималеиновой кислоты, соли малоновой кислоты, соли миндальной кислоты, соли мезитиловой кислоты, соли никотиновой кислоты, соли изоникотиновой кислоты, нитраты, оксалаты, фталаты, терефталаты, фосфаты, моногидрофосфаты, дигидрофосфаты, метафосфаты, пирофосфаты, соли пропиоловой кислоты, соли пропионовой кислоты, соли фенилпропионовой кислоты, соли салициловой кислоты, соли себациновой кислоты, соли янтарной кислоты, соли пробковой кислоты, сульфаты, бисульфаты, пиросульфаты, сульфиты, бисульфиты, сульфонаты, бензолсульфонаты, п-бромфенилсульфонаты, хлорбензолсульфонаты, этансульфонаты, 2-оксиэтансульфонаты, метансульфонаты, нафталин-1-сульфонаты, нафталин-2-сульфонаты, п-толуолсульфонаты, ксилолсульфонаты, соли винной кислоты и т.п.

Далее, некоторые соединения общей формулы I могут образовывать сольваты с водой или органическим растворителем, таким как этанол. Эти сольваты также рассматриваются при использовании в способе по настоящему изобретению.

Основаниями, которые обычно используются как образованная солей, являются гидроокись аммония и гидроксиды, карбонаты и бикарбонаты щелочных и щелочноземельных металлов, а также алифатические и ароматические амины, алифатические диамины и гидроксиламины. Основания, особенно полезные для получения солей присоединения, включают гидроокись аммония, карбонат калия, бикарбонат натрия, гидроокись кальция, метиламин, диэтиламин, этилендиамин, циклогексиламин и этаноламин.

Фармацевтически приемлемые соли обычно имеют большую растворимость по сравнению с соединением, из которого они были образованы, т.е. при их использовании легче могут быть приготовлены составы, представляющие собой растворы или эмульсии.

В соответствии с другой целью настоящего изобретения заявляется способ получения фармацевтической композиции, которая состоит в смешении соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата, полученных известным способом, с подходящими инертными носителями и приготовлении окончательной фармацевтической композиции, пригодной для использования для снижения уровня содержания холестерина в сыворотке крови.

Настоящее изобретение охватывает также фармацевтические составы, предназначенные для снижения уровня содержания холестерина, состоящие из активного ингредиента, представляющего собой соединение по формуле I или его фармацевтические приемлемую соль или сольват.

Фармацевтические композиции могут быть приготовлены известными способами. Например, соединение в чистом виде или в смеси с эстрогеном, можно смешать с обычными наполнителями, разбавителями, носителями и сформировать в виде таблеток, капсул, суспензий, порошков и т.д.

Примерами инертных наполнителей, разбавителей и носителей, пригодных для приготовления таких составов, являются следующие наполнители, такие как крахмал, сахара, маннит и производные кремневой кислоты, связующие, такие как карбоксиметилцеллюлоза и другие производные целлюлозы, альгинаты, желатин и поливинилпирролидон, увлажняющие средства, такие как глицерин, разрыхлители, такие как агар-агар, карбонат кальция и бикарбонат натрия, средства, замедляющие растворение, такие как парафин, вещества, способствующие быстрому всасыванию, такие как четвертичные аммониевые соединения; поверхностно-активные вещества, такие как цетиловый спирт и моностеарат глицерина; адсорбционные носители, такие как каолин и бентонит, смазывающие средства, применяемые при приготовлении таблеток, такие как тальк, стеараты кальция и магния и полиэтиленгликоли.

Соединения в числом виде или в сочетании с эстрогеном можно также составлять в виде эликсиров или растворов для орального назначения или растворов для парентерального назначения, например, внутримышечного, подкожного или внутривенного. Далее, соединения в чистом виде или в сочетании с эстрогенном можно приготовить в виде препарата длительного пользования и т.п. Подобные составы могут быть приготовлены таким образом, что они высвобождают активные ингредиент в определенном месте желудочно-кишечного тракта или через определенный промежуток времени. Покрытия, оболочки и защитные матрицы для них могут быть изготовлены, например, из полимеров или восков.

Конкурентная доза соединения формулы I, необходимая для снижения уровня содержания холестерина в сыворотке по настоящему изобретению, будет зависеть от степени тяжести состояния, пути назначения и других связанных с этим фактором. В общем случае допустимая и эффективная дневная доза составляет приблизительно от 0,1 до приблизительно 1000 мг, более типично приблизительно от 50 до приблизительно 200 мг. Эти дозы могут быть назначены пациенту, которому необходимо лечение, от одного до трех раз ежедневно или более часто для более эффективного снижения уровня холестерина в сыворотке крови. В общем случае допустимая и эффективная дневная доза эстрогена составляет приблизительно от 0,01 до приблизительно 4 мг, более типично приблизительно от 0,1 до приблизительно 2,0 мг. Эти дозы могут быть назначены пациенту, которому необходимо лечение, от одного до трех раз ежедневно или более часто,
Способ, предлагаемый в настоящем изобретении, полезен не только женщинам, но мужчинам. Практическое отсутствие ответной реакции на эстроген оказывает полезное действие мужчинам без проявления таких вторичных женских половых признаков, вызванных реакцией на эстроген или антагонист эстрогена, как гинекомастия. Способ особенно полезен женщинам, страдающим, в частности, от недостатка эстрогена. Эстрогеновая недостаточность может развиться естественным путем, в частности как постклимактерический фактор, или после хирургического вмешательства. Пациенты, проходящие или проходившие длительный курс лечения кортикостероидами, и лица, страдающие дисгенезией половых желез, также могут воспользоваться способом по настоящему изобретению.

Предпочтительнее принимать соединение формулы I в виде соли присоединения с кислотой, что является обычным при приеме фармацевтических средств, содержащих группу, обладающую свойствами основания, например пиперидиновое кольцо. Пожилым людям (в частности, женщинам после наступления климакса) удобно принимать такие соединения орально.

Далее представлены примеры оральных дозировок, пригодных для использования по настоящему изобретению. "Активный ингредиент" означает соединение по формуле I.

Капсулы из твердого желатина приготавливают, используя составы 1-5:
Композиция 1.

Ингредиент - Кол-во (мг/капсула)
Активный ингредиент - 0,1-1000,0
Крахмал (чистота соответствует добавлениям к американской фармакопее) - 0-650,0
Текучий порошок крахмала - 0-650,0
Кремнийорганическая жидкость с вязкостью 350 сСт - 0-15,0
Ингредиенты смешивают, просеивают через сито 45 меш и заполняют в оболочке из твердого желатина.

Композиция 2.

Ингредиент - Кол-во (мг/капсула)
Ралоксифен гидрохлорид - 1
Крахмал (чистота соответствует добавлениям к американской фармакопее) - 112
Текучий порошок крахмала - 225,3
Кремнийорганическая жидкость с вязкостью 350 сСт - 1,7
Композиция 3.

Ингредиент - Кол-во (мг/капсула)
Ралоксифен гидрохлорид - 5,0
Крахмал (чистота соответствует добавлениям к американской фармакопее) - 108,0
Текучий порошок крахмала - 225,3
Кремнийорганическая жидкость с вязкостью 350 сСт - 1,7
Композиция 4.

Ингредиент - Кол-во (мг/капсула)
Ралоксифен гидрохлорид - 10,0
Крахмал (чистота соответствует добавлениям к американской фармакопее) - 103,0
Текучий порошок крахмала - 225,3
Кремнийорганическая жидкость с вязкостью 350 сСт - 1,7
Композиция 5.

Ингредиент - Кол-во (мкг/капсула)
Ралоксифен гидрохлорид - 50,0
Крахмал (чистота соответствует добавлениям к американской фармакопее) - 150,0
Текучий порошок крахмала - 397,0
Кремнийорганическая жидкость с вязкостью 350 сСт - 3,0
Таблетки приготавливают, используя состав 6 или 7:
Композиция 6.

Ингредиент - Кол-во (мг/таблетка)
Активный ингредиент - 0,1-1000,0
Микрокристаллическая целлюлоза - 0-650,0
Плавленый диоксид кремния - 0-650,0
Стеариновая кислота - 0-15,0
Компоненты смешивают и спрессовывают для образования таблетки. По другому способу таблетки, содержащие от 0,1 до 1000 мг активного ингредиента, готовят следующим образом:
Композиция 7.

Ингредиент - Кол-во (мг/таблетка)
Ралоксифен гидрохлорид - 0,1-1000,0
Крахмал - 45,0
Микрокристаллическая целлюлоза - 35,0
Поливинилпирролидон (в виде 10%-ного раствора в воде) - 4,0
Натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы - 4,5
Стеарат магния - 0,5
Тальк - 1,0
Активный ингредиент, крахмал, тальк и целлюлозу просеивают через сито 45 меш и тщательно перемешивают. К полученной смеси порошков прибавляют поливинилпирролидон и вновь просеивают через сито 14 меш. Полученные гранулы высушивают при 50-60^oC и просеивают через сито 18 меш. К полученным гранулам прибавляют натриевую соль карбоксиметилцеллюлозы, стеарат магния и тальк, предварительно просеянные через сито 60 меш, и после смешения прессуют на специальной машине, получая таблетки.

Суспензии, содержащие 0,1-1000,0 мг лекарства в 5 мл дозе, готовят следующим образом:
Композиция 8.

Ингредиент - Кол-во (содержание в 5 мл)
Активный ингредиент, мг - 0,1-1000
Натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы, мг - 50
Патока, мг - 1,25
Раствор бензойной кислоты, мл - 0,10
Отдушка - q.v.

Краситель - q.v.

Очищенная вода - В количестве, необходимом для доведения объема до 5 мл
Лекарство просеивают через сито 45 меш и смешивают с натриевой солью карбоксиметилцеллюлозы и патокой до образования однородной пасты. Прибавляют при перемешивании раствор бензойной кислоты, отдушку и краситель, разбавленные небольшим количеством воды. Затем добавляют достаточное количество воды для получения нужного объема.

Примерные соединения по формуле I, используемые в настоящем соединении, представлены в табл.1.

Следующие примеры поясняют методы испытаний по настоящему изобретению.

Методики испытаний.

В примерах, поясняющих методы испытаний, использована постклимактерическая модель, по которой определяли воздействие лечения на циркулирующие липиды.

Женские особи крыс Spraque Dawley (вес от 200 до 225 г) в возрасте 75 дней получают из Charles River Laboratories (Портадж, штат Миссисипи). Животных либо подвергают операции двухсторонней резекции яичников, либо операции Шэма в Charles River Laboratories, а затем через неделю доставляют для проведения испытаний. После доставки крыс помещают в металлические подвесные клетки, по 3 или четыре особи в одной клетке, и в течение недели обеспечивают достаточным количеством пищи (содержание кальция приблизительно 0,5%) и воды. Комнатная температура поддерживается на уровне (22,2±1,7^oC) при минимальной относительной влажности 40%. Световой режим в комнате составляет 12 ч светлого времени и 12 ч темного времени.

Схема приема лекарств/получение образцов тканей
Через неделю периода адаптации (т.е. после двух недель после проведения операции) начинают дозировки испытываемых соединений. Все соединения вводят орально в количестве, если специально не оговорено, 1 мл на кг веса тела. 17-бета-экстрадиол вводят подкожно в составе связующего, содержащего 20% полиэтиленгликоля, 17-альфа-этинилэстрадиол и испытываемое соединение вводят, если специально не оговорено, орально в виде суспензии, содержащей 1% карбоксиметилцеллюлозы или 20% циклодекстрина. Дозировки осуществляют ежедневно в течение 4 дней. После завершения приема лекарств крыс взвешивают, анестезируют смесью кетамина: ксилазина (2:1 об/об) и берут пробы на анализ крови путем кардиальной пункции. Затем каждую крысу удушают углекислым газом, матки извлекают путем рассечения по средней линии и определяют убойный вес.

Анализ на содержание холестерина.

Взятым образцам крови дают свернуться при комнатной температуре в течение 2 ч, сыворотку отделяют и центрифугируют со скоростью 3000 об/мин в течение 10 мин. Содержание холестерина определяют, применяя диагностическую пробу Берингера-Мангейма. Суть метода состоит в следующем. Холестерин окисляют в холест-4-ен-3-он и перекись водорода. Образовавшаяся перекись водорода взаимодействует далее с фенолом и 4-аминофеназоном в присутствии пероксидазы с образованием п-хинониминового красителя, содержание которого определяют спектрофотометрически на длине волны 5000 нм. Концентрацию холестерина вычисляют, используя стандартную кривую. Весь анализ проводится автоматически на автоматизированном приборе фирмы.

Тест на маточную эозинофильную пероксидазу (ЭП).

Матки хранят при 4^oC до момента проведения ферментативного анализа. Для этого матки гомогенизуют в 50 объемах 50 мМ буфера Tris(pH 8,0), содержащего 0,005% тритона X-100. После прибавления 0,01%-ной перекиси водорода и 10 мМ раствора э-фенилендиамина (окончательная концентрация ) в Tris буфере наблюдают в течение одной минуты усиление поглощения на длине волны 450 нм. Присутствие эозинофильных лейкозитов в матках указывает на эстрогеновую активность соединения. Через 15 мин после начального линейного участка на кривой наблюдается максимум скорости превращения.

Источники соединений.

17-бета-эстрадиол, 17-альфа-этинилэстраадиод и тамоксифен были получены от компании Sigma Chemical Co., Сент-Люис, штат Миссури.

Экспериментальные группы.

В каждой экспериментальной группе находится от пяти до шести животных.

Влияние релоксифена на сывороточный холестерин
Результаты контрольных измерений представлены в табл.1. Если коротко, то резекция вызывает у крыс повышение содержания холестерина по сравнению с контрольной группой крыс, не подвергавшихся операции, которым вводят чистый носитель. Эстроген, который вводят орально в активной форме в виде этинилэстрадиола (EE₂), вызывает в зависимости от дозы уменьшение уровня содержания холестерина в сыворотке, однако он также оказывает стимулирующее воздействие на матку, что приводит к тому, что при дозе 100 мкг/кг в день вес матки приближается к весу матки крыс, не подвергнутых операции. Приведенные результаты являются средними для 5-6 крыс ± средняя стандартная ошибка.

В этих же исследованиях ралоксифен, который вводят орально в виде хлористоводородной соли, также вызывает в зависимости от дозы уменьшения содержания холестерина, однако при этом наблюдается минимальное увеличение веса матки по сравнению с контрольной группой животных, подвергнутых операции. Результаты, показывающие влияние ралоксифена, приведены в табл.2. Таким образом, каждое значение отражает данные, полученные для 5-6 крыс и соответствует кривой, отображающей ответную реакцию на действие ралоксифена в принятой модели. Представленные результаты являются средними ± средняя стандартная ошибка.

Ралоксифен вводят в виде хлористоводородной соли в чистом виде или в сочетании с 17-бета-эстрадиолом. У крыс, которым давали только ралоксифен, вес матки лишь незначительно превышает вес матки крыс контрольной группы, подвергнутых операции, и значительно меньше чем у крыс, которым давали 17-бета-эстрадиол, у которых вес матки приближается к весу матки у крыс контрольной группы, не подвергнутых операции. И наоборот, под действием ралоксифена значительно снижается содержание холестерина в сыворотке крыс, подвергнутых операции. Когда его вводят в месте с 17-бета-эстрадиолом, 17-бета-эстрадиол лишь незначительно снижает действие ралоксифена на сывороточный холестерин. Результаты представлены в табл.3.

Способность ралоксифена снижать уровень содержания холестерина в сыворотке сравнивают с действием тамоксифена (Sigma, Сент-Люис, штат Миссури). Было показано, что тамоксифен, который является хорошо известным антиэстрогеном и применяется при лечении ряда раковых заболеваний, снимает уровень содержания холестерина в сыворотке (см., например, R.Love et al.,J Nat. Can Inst. v. 82, 1990, 1327-1332). Аналогичным описанным ранее экспериментам крысам, подвергнутым резекции матки, вводят орально ряд доз ралоксифена и тамоксифена. Несмотря на то, что оба указанных средства проявляют способность понижать содержание холестерина в сыворотке, вызывая при этом относительно небольшую утеротрафическую активность, что определяют по привесу матки, сравнение нескольких гистологических параметров выявляет значительные отличия у крыс, которым давали эти средства. Соответствующие данные приведены ниже в таб.4 и 5.

Увеличение высоты эпителия является признаком эстрогенности терапевтического средства и это можно связать с повышенной заболеваемостью раком матки. При назначении ралоксифена, как это указано выше, статистические измерения не обнаруживают увеличение высоты эпителия по сравнению с крысами контрольной группы, подвергшихся операции. Этот результат контрастирует с результатами, полученными для тамоксифена и эстрогена. При всех выбранных дозах введение тамоксифена приводит к увеличению высоты эпителия до величины, соответствующей высоте эпителия не подвергавшихся операции крыс. При введении эстрадиола высота эпителия превосходит аналогичное значение у крыс, не подвергавшихся операции.

Эстрогенность определяли также путем оценки ответной реакции, проявляющейся в виде эозинофильного инфильтрата в матку. Ралоксифен не приводит к какому-либо возрастанию количества эозинофильных лейкоцитов, наблюдаемых в слое стромы подвергшихся операции мышей, в то время как тамоксифен вызывает значительную реакцию. Эстрациол, как и ожидалось, вызывает образование значительного количества эозинофильного инфильтрата.

Незначительные отличия или практически никаких отличий не было обнаружено между воздействием ралоксифена и тамоксифена на толщину стромы и миометрия. Оба указанных средства показывают некоторое увеличение толщины при этих измерениях, что, тем не менее, значительно слабее воздействия, которое оказывает эстроген.

Общая оценка эстрогенности, которая является суммой всех параметров, показывает, что ралоксифен является значительно менее эстрогенным средством, чем тамоксифен.

Остальные соединения по формуле I вводили орально в процессе испытаний, описанных выше. В табл.6 приведены данные, характеризующие эффект от применения дозы 1 мг/кг для нескольких соединений, выраженный в процентах и относящийся к снижению содержания холестерина в сыворотке, увеличению веса матки и ЭП активности.

a) Уменьшение содержания холестерина, выраженное в процентах, равно следующему отношению: (содержание холестерина в сыворотке подвергшихся операции животных минус содержание холестерина в сыворотке неподвергшихся операции животных), деленному на (содержание холестерина в сыворотке подвергшихся операции животных) и умноженному на 100%.

b) Увеличение веса матки, выраженное в процентах, равно следующему отношению: (вес матки подвергшихся операции животных минус вес матки неподвергшихся операции животных), деленному на (вес матки подвергшихся операции животных) и умноженному на 100%.

c) Y_max для активности эозинофильной пероксидазы.

В табл. 7 показано влияние изменения дозы соединений 32 и 33 в этих испытаниях.

a) Уменьшение содержания холестерина, выраженное в процентах, равно следующему соотношению: (содержание холестерина в сыворотке подвергшихся операции животных минус содержание холестерина в сыворотке неподвергшихся операции животных), деленному на (содержание холестерина в сыворотке подвигшихся операции животных) и умноженному на 100%.

b) Увеличение веса матки, выраженное в процентах, равно следующему отношению: (вес матки подвергшихся операции животных минус вес матки неподвергшихся операции животных), деленному на (вес матки подвергшихся операции животных) и умноженному на 100%.

c) Y_max для активности эозинофильной пероксидазы.

Формула изобретения

1. Применение соединения формулы I

где n = 0 или 1;
R является оксигруппой, метоксигруппой, (C₁-C₇)алканоилоксигруппой, (C₃-C₇)циклоалканоилоксигруппой, (C₁-C₆)алкокси-(C₁-C₇)алканоилоксигруппой,
незамещенной или замещенной ароилоксигруппой или замещенной или незамещенной арилоксикарбонилоксигруппой;
R¹ является атомом водорода, оксигруппой, атомом галогена, метоксигруппой, (C₁-C₇)алканоилоксигруппой, (C₃-C₇)циклоалканоилоксигруппой, (C₁-C₆)алкокси-(C₁-C₇)алканоилоксигруппой, незамещенной или замещенной ароилоксигруппой или замещенной или незамещенной арилоксикарбонилоксигруппой;
R² - является гетероциклическим кольцом, выбранным из группы, включающей пирролидиновую, пиперидиновую или гексаметилениминовую группу,
или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата для снижения уровня холестерина в сыворотке крови.

2. Применение по п.1, отличающееся тем, что указанным соединением является ралоксифен или его фармацевтически приемлемая соль.

3. Применение по п.1, отличающееся тем, что указанным соединением является гидрохлорид ралоксифена.

4. Фармацевтическая композиция для снижения уровня холестерина в сыворотке крови человека, включающая активный агент и фармацевтически приемлемый наполнитель, разбавитель, носитель, отличающаяся тем, что в качестве активного агента композиция содержит соединение общей формулы I по пп.1 - 3 в количестве 0,1 - 1000,0 мг.

5. Композиция по п.4, отличающаяся тем, что содержит соединение формулы I по пп.1 - 3 в количестве 50 - 200 мг.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3