Фармацевтическая композиция

 

Композиция обладает инсулинотропной активностью и может быть использована для лечения независимого от инсулина сахарного диабета. Композиция содержит глюкагоноподобный пептид и его производные и способна стимулировать или в нем может быть создана способность синтеза или экспрессии гормона инсулина. 7 с.п. ф-лы, 10 ил., 10 табл.

Настоящая заявка является частичным продолжением находящейся на рассмотрении заявки на патент США N 08/044133, поданной 7 апреля 1993 г.

Настоящее изобретение относится к композициям и способам лечения сахарного диабета. Более конкретно, настоящее изобретение относится к композициям для пролонгирования введения глюкагонподобного пептида 1 (ГПП-1) и его производных. Такие композиции применимы для лечения независимого от инсулина сахарного диабета (НЗИСД).

Для ГПП-1 выявлена следующая аминокислотная последовательность: His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Clu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 1).

ГПП-1 описан в работах: Loper L.C. и др., P.N.A.S., США, 80, 5485 - 5489 (1983); Bell G.I. и др., Nature 302. 716 - 718, (1983); Heinrich G. и др., Endocrinol. 115, 2176 - 2181 (1984) и Chiglione M. и др., Diabetologia 27, 599 - 600 (1984).

В ходе превращения в поджелудочной железе и кишечнике из ГПП-1 образуется пептид из 31 аминокислоты, включающей аминокислоты 7 - 37 ГПП-1, далее этот пептид называется ГПП-1 (7 - 37).

Данный пептид, как показано, обладает инсулинотропной активностью, т.е. способен стимулировать (или в нем может быть создана такая способность) синтез или экспрессию гормона инсулина. Из-за его инсулинотропной активности ГПП-1 (7 - 37) иначе называют инсулинотропином.

ГПП-1 (7 - 37) отвечает следующей аминокислотной последовательности: His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phr-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Clu-Phe-Ile-Ala-Thr-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 2).

ГПП-1 (7 - 37), некоторые его производные и их применение для лечения сахарного диабета у млекопитающих раскрыто в патентах США N 5118666 (патент '666) и 5120712 (патент '712), описание которых вводится здесь в качестве ссылок. Производные ГПП-1 (7 - 37), раскрытые в патентах '666 и '712, включают полипептиды, включающие или не включающие одну или несколько аминокислот, которые могут и не содержаться в последовательностях естественного происхождения. Другие производные ГПП-1 (7 - 37), раскрытые в патентах '666 и '712, включают определенные С-концевые соли, эфиры и амиды, причем соли и эфиры определяются, как ОМ-производные, где М представляет фармацевтически приемлемый катион или разветвленный или неразветвленный низший (C₁ - C₆)-алкил, а амиды определяются, как R²R³N-производные, где R² и R³, которые одинаковы или различны, выбраны из группы, включающей водород и разветвленный или неразветвленный низший (C₁ - C₆)-алкил.

Некоторые другие полипептиды, называемые иначе усеченными ГПП-1 или усеченными инсулинотропинами, обладающие инсулинотропной активностью, а также их производные раскрыты в PCT/US 89/01121 (WO 90/11296). Такие полипептиды, обозначенные здесь, как ГПП-1 (7 - 36), ГПП-1 (7 - 35) и ГПП-1 (7 - 34), обладают соответственно следующими аминокислотными последовательностями: His-Ala-Glu-Gly-Tpr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Clu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (Последовательность N 3); His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Clu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly (Последовательность N 4) и His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Clu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys (Последовательность N 5).

Производные полипептидов, раскрытые в PCT/US 89/01121, включают полипептиды, содержащие не входящие в последовательность аминокислотные замещения или дополнительные аминокислоты, назначение которых - усиливать связь с белком-носителем или усиливать инсулинотропное действие такого производного. Другие производные инсулинотропина, раскрытые в PCT/US 89/01121, включают определенные С-концевые соли, эфиры и амиды, причем соли и эфиры определяются, как ОМ-производные, где М представляет фармацевтически приемлемый катион или разветвленный или неразветвленный низший алкил, а амиды определяются, как R²R³N-производные, где R² и R³, которые одинаковы или различны, выбраны из группы, включающей водород или разветвленный или неразветвленный низший алкил.

На фиг. 1 показано действие пролонгированного вливания (7часов) 4 нг/кг/мин инсулинотропина на уровень глюкозы в плазме у больных НЗИСД.

На фиг. 2 показано влияние кратковременного вливания 60 минут) 10 нг/кг/мин инсулинотропина на уровень глюкозы в плазме больных НИЗСД.

На фиг. 3 показано влияние пролонгированного вливания (7 часов) 2 нг/кг/мин и 4 нг/кг/мин инсулинотропина на уровень глюкозы в плазме больных НИЗСД.

На фиг.4 показаны средние (n = 3) концентрации инсулинотропина в плазме крыс после подкожного введения единственных доз (0,5 мг/0,5 мл) в различных водных суспензиях (ВС).

На фиг.5 показаны средние (n = 3) концентрации инсулинотропина в плазме крыс после подкожного введения единственных доз (0,5 мг/0,5 мл) в различных водных суспензиях (ВС).

На фиг.6 приведены средние (n = 3) концентрации инсулинотропина в плазме крыс после подкожного введения единственных доз 0,5 мг/0,5 мл в различных водных суспензиях (ВС).

На фиг.7 приведены средние (n = 3) концентрации инсулинотропина в плазме крыс после подкожного введения единственных доз 0,5 мг/0,5 мл в различных водных суспензиях (ВС).

На фиг.8 приведены средние (n = 3) концентрации инсулинотропина в плазме крыс после подкожного введения единственных доз 0,5 мг/0,13 мл в различных водных суспензиях (ВС).

На фиг.9 приведены средние (n = 3) концентрации инсулинотропина в плазме крыс после подкожного введения единственных доз 0,5 мг/0,13 мл в различных водных суспензиях (ВС).

На фиг. 10 приведены результаты фармакокинетических исследований для осажденного инсулинотропин-цинка.

Описание изобретения В одном из воплощений настоящее изобретение направлено на способ лечения независимого от инсулина сахарного диабета у нуждающихся в таком лечении млекопитающих путем неоднократного введения продолжительное время соединения с пролонгированным после каждого введения действием, причем пролонгированное действие необходимо для достижения устойчивого гликемического регулирования у таких млекопитающих, и соединение выбирают из группы, включающей: (a) пептид с аминокислотной последовательностью: His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Clu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 2).

(b) пептид с аминокислотной последовательностью: His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Clu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-X (Последовательность N 7),
где X выбирают из группы, включающей:
(A) Lys,
(B) Lys-Gly и
(C ) Lys-Gly-Arg,
(с) производное полипептида, отвечающего общей формуле:
H₂N-W-COOH,
где W представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 1),
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (Последовательность N 6),
причем такое производное в организме млекопитающего образует производное полипептида с инсулинотропной активностью,
(d) производное полипептида, отвечающее общей формуле
H₂N-R-COOH,
где R представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 2),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (Последовательность N 3),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Gln-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly (Последовательность N 4),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys (Последовательность N 5),
(e) производное указанных пептидов (a) - (d), причем такое производное выбирают из группы, включающей:
(1) фармацевтически приемлемую соль с кислотой указанных пептидов;
(2) фармацевтически приемлемую карбоксилатную соль указанных пептидов;
(3) фармацевтически приемлемую соль с щелочью указанных пептидов,
(4) фармацевтически приемлемый низший алкиловый эфир указанных пептидов;
(5) фармацевтически приемлемый амид указанных пептидов, где фармацевтически приемлемый амид выбирают из группы, включающей амид, низший алкиламид и низший диалкиламид.

Рекомендуется подкожный путь введения.

Кроме того, рекомендуется внутримышечный путь введения.

Также рекомендуется трансдермальный путь введения.

Особенно рекомендуемым способом введения является способ введения с помощью инфузионного насоса.

Рекомендуется также способ введения путем пероральной ингаляции.

Рекомендуется также способ введения путем ингаляции через нос.

Рекомендуется также желудочно-кишечный путь введения.

В другом своем воплощении изобретение направлено на композицию, содержащую:
(1) соединение, выбранное из группы, включающей:
(a) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 2),
(b) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-X (Последовательность N 7),
где X выбирают из группы, включающей:
(A) Lys,
(B) Lys-Gly,
(C ) Lys-Gly-Arg,
(с) производное полипептида, отвечающее общей формуле:
H₂N-W-COOH,
где W представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 1),
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (Последовательность N 6),
причем такое производное в организме млекопитающего превращаются в полипептидное производное с инсулинотропной активностью;
(d) производное полипептида, отвечающее общей формуле:
H₂N-R-COOH,
где R представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 2),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (Последовательность N 3),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly (Последовательность N 4),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys (Последовательность N 5);
производное указанных пептидов (a) - (d), выбранное из группы, включающей:
(1) фармацевтически приемлемую соль с кислотой указанных пептидов,
(2) фармацевтически приемлемую карбоксилатную соль указанных пептидов,
(3) фармацевтически приемлемую соль с щелочью указанных пептидов,
(4) фармацевтически приемлемый низший алкиловый эфир указанных пептидов,
(5) фармацевтически приемлемый амид указанных пептидов, причем фармацевтически приемлемый амид выбирают из группы, включающей амид, низший алкиламид и низший диалкиламид, и
(11) полимер, способный пролонгировать действие указанного соединения с достижением устойчивого гликемического регулирования.

Особенно рекомендуются композиции, в которых полимер представлен низкомолекулярным полимером.

К другой особенно рекомендуемой композиции относится композиция, в которой полимер выбран из группы, включающей полиэтиленгликоль, поливинилпирролидон, поливиниловый спирт, сополимеры полиоксиэтилен-полиоксипропилен, полисахариды, выбранные из группы, включающей целлюлозу, производные целлюлозы, хитозан, камедь акации, камедь караи, камедь рожкового дерева, ксантановую камедь, трагакант, альгининовую кислоту, каррагинан, агарозу и фурцеллараны, декстран, крахмал, производные крахмала, гиалуроновую кислоту, полиэфиры, полиамиды, полиангидриды и полиортоэфиры, из которых особенно предпочтительны полимеры, выбранные из группы, включающей полиэтиленгликоль и поливинилпирролидон.

В другом своем воплощении изобретение направлено на композицию, содержащую:
(1) соединение, выбранное из группы, включающей:
(a) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 2),
(b) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-X (Последовательность N 7),
где X выбирают из группы, включающей:
(A) Lys,
(B) Lys-Gly,
(C ) Lys-Gly-Arg,
(с) производное полипептида, отвечающее общей формуле:
H₂N-W-COOH,
где W представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 1) и
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (Последовательность N 6),
причем такое производное в организме млекопитающего образует полипептидное производное с инсулинотропной активностью,
(b) производное полипептида, отвечающее общей формуле:
H₂N-R-COOH,
где R представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 2),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (Последовательность N 3),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly (Последовательность N 4) и
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys (Последовательность N 5) и
производное указанных пептидов (a) - (d), причем такое производное выбирают из группы, включающей:
(1) фармацевтически приемлемую соль указанного пептида с кислотой,
(2) фармацевтически приемлемую карбоксилатную соль указанных пептидов,
(3) фармацевтически приемлемую соль указанных пептидов со щелочью,
(4) фармацевтически приемлемый низший алкиловый эфир указанных пептидов,
(5) фармацевтически приемлемый амид указанных пептидов, где фармацевтически приемлемый амид выбирают из группы, включающей амид, низший алкиламид и низший диалкиламид, и
(11) фармацевтически приемлемую несмешивающуюся с водой масляную суспензию, способную пролонгировать введение указанного соединения.

Особенно рекомендуются композиции, в которых масло выбирают из группы, включающей арахисовое масло, кунжутное масло, миндальное масло, касторовое масло, рыжиковое масло, хлопковое масло, оливковое масло, кукурузное масло, соевое масло, сафлоровое масло, кокосовое масло, эфиры жирных кислот и сложные эфиры жирных спиртов.

Кроме того, особо рекомендуются те композиции, которые дополнительно содержат смачивающее средство, в особенности неионное поверхностно-активное вещество.

И еще особенно предпочтительны композиции, дополнительно содержащие суспендирующее средство.

В другом своем воплощении настоящее изобретение направлено на композицию, содержащую:
(1) соединение, выбранное из группы, включающей:
(a) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Clu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 2),
(b) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Clu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-X (Последовательность N 7),
где X выбирают из группы, включающей:
(A) Lys,
(B) Lys-Gly,
(C ) Lys-Gly-Arg,
(с) производное полипептида, отвечающее общей формуле:
H₂N-W-COOH,
где W представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 1),
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (Последовательность N 6),
причем данное производное в организме млекопитающего образует полипептидное производное с инсулинотропной активностью;
(d) производное полипептида, отвечающее общей формуле:
H₂N-R-COOH,
где R представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 2),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (Последовательность N 3),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Gln-Gly-Glu-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly (Последовательность N 4),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys (Последовательность N 5) и
производное указанных пептидов (a) - (d), причем такое производное выбирают из группы, включающей:
(1) фармацевтически приемлемую соль указанных пептидов с кислотой;
(2) фармацевтически приемлемую карбоксилатную соль указанных пептидов;
(3) фармацевтически приемлемую соль указанных пептидов с щелочью,
(4) фармацевтически приемлемый низший алкиловый эфир указанных пептидов,
(5) фармацевтически приемлемый амид указанных пептидов, причем такой фармацевтически приемлемый амид выбирают из группы, включающей амид, низший алкиламид и низший диалкиламид, и
(11) цинк (11), находящийся в комплексе с пептидом.

Рекомендуется композиция, способная поддерживать гликемическое действие.

Особенно рекомендуется композиция, в котором соединение цинка аморфно.

Кроме того, особенно рекомендуется композиция, в которой соединение цинка кристаллично.

В еще одном воплощении настоящее изобретение направлено на композицию, содержащую:
(1) соединение, выбранное из группы, включающей:
(a) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 2),
(b) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-X (Последовательность N 7),
где X выбирают из группы, включающей:
(A) Lys,
(B) Kys-Gly,
(C ) Lys-Gly-Arg;
(с) производное полипептида, отвечающее общей формуле:
H₂N-W-COOH,
где W представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 1),
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (Последовательность N 6),
причем указанные производные в организме млекопитающего образуют полипептидное производное с инсулинотропной активностью;
(d) производное полипептида, отвечающее общей формуле:
H₂N-R-COOH,
где R представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 2),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (Последовательность N 3),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly (Последовательность N 4),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys (Последовательность N 5) и
производное указанных пептидов (a) - (d), причем такое производное выбирают из группы, включающей:
(1) фармацевтически приемлемую соль указанных пептидов с кислотой,
(2) фармацевтически приемлемую карбоксилатную соль указанных пептидов,
(3) фармацевтически приемлемую соль указанных пептидов с щелочью,
(4) фармацевтически приемлемый низший алкиловый эфир указанных пептидов,
(5) фармацевтически приемлемый амид указанных пептидов, причем такой фармацевтически приемлемый амид выбирают из группы, включающей амид, низший алкиламид и низший диалкиламид, и
(11) металл, выбранный из группы, включающей: Ni(11), Co(11), Mg(11), Ca(11), K(1), Mn(11), Fe(11) и Cu (11).

В еще одном своем воплощении настоящее изобретение направлено на композицию, содержащую:
(1) соединение, выбранное из группы, включающей:
(a) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 2),
(b) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-X (Последовательность N 7),
где X выбирают из группы, включающей:
(A) Lys,
(B) Lys-Gly,
(C ) Lys-Gly-Arg;
(с) производное полипептида, отвечающее общей формуле:
H₂N-W-COOH,
где W представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 1) и
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (Последовательность N 6),
причем такое производное в организме млекопитающего превращается в полипептидное производное с инсулинотропной активностью;
(d) производное полипептида, отвечающее общей формуле:
H₂N-R-COOH,
где R представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 2),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (Последовательность N 3),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly (Последовательность N 4),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys (Последовательность N 5),
производное указанных пептидов (a) - (d), причем такое производное выбрано из группы, включающей:
(1) фармацевтически приемлемую соль указанных пептидов с кислотой,
(2) фармацевтически приемлемую карбоксилатную соль указанных пептидов,
(3) фармацевтически приемлемую соль указанных пептидов со щелочью,
(4) фармацевтически приемлемый низший алкиловый эфир указанных пептидов,
(5) фармацевтически приемлемый амид указанных пептидов, причем такой фармацевтически приемлемый амид выбирают из группы, включающей амид, низший алкиламид и низший диалкиламид, и (11) полипептид основного характера, при этом такая композиция представляет собой водную суспензию, способную поддержать гликемическое регулирование.

Особенно рекомендуются композиции, в которых полипептид основного характера представлен протамином.

И в еще одном своем воплощении настоящее изобретение направлено на композицию, содержащую:
(1) соединение, выбранное из группы, включающей:
(a) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Clu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 2),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Clu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-X (Последовательность N 7),
где X выбирают из группы, включающей:
(A) Lys,
(B) Lys-Gly,
(C ) Lys-Gly-Arg;
(с) производное полипептида, отвечающее общей формуле:
H₂N-W-COOH,
где W представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 1) и
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (Последовательность N 6),
причем такое производное в организме млекопитающего превращается в полипептидное производное с инсулинотропной активностью;
(d) производное полипептида, отвечающее общей формуле:
H₂N-R-COOH,
где R представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 2),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (Последовательность N 3),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly (Последовательность N 4),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys (Последовательность N 5) и
производное указанных пептидов (a) - (d), причем такое производное выбирают из группы, включающей:
(1) фармацевтически приемлемую соль указанных пептидов с кислотой;
(2) фармацевтически приемлемую карбоксилатную соль указанных пептидов;
(3) фармацевтически приемлемую соль указанных пептидов со щелочью,
(4) фармацевтически приемлемый низший алкиловый эфир указанных пептидов,
(5) фармацевтически приемлемый амид указанных пептидов, причем такой фармацевтически приемлемый амид выбирают из группы, включающей амид, низший алкиламид и низший диалкиламид, и
(11) фенольное соединение, при этом препарат представляет собой водную суспензию, способную поддерживать гликемическое регулирование.

Особенно рекомендуется препарат, в котором фенольное соединение выбрано из группы, включающей: фенол, крезол, резоцин и метил/арабен.

И еще в одном своем воплощении настоящее изобретение направлено на композицию, содержащую:
(1) соединение, выбранное из группы, включающей:
(a) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 2),
(b) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-X (Последовательность N 7),
где X выбирают из группы, включающей:
(A) Lys,
(B) Lys-Gly,
(C ) Lys-Gly-Arg;
(с) производное полипептида, отвечающее общей формуле:
H₂N-W-COOH,
где W представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 1),
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (Последовательность N 6),
причем такое производное в организме млекопитающего превращается в полипептидное производное с инсулинотропной активностью;
(d) производное полипептида, отвечающее общей формуле:
H₂N-R-COOH,
где R представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 2),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (Последовательность N 3),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Lle-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly (Последовательность N 4),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys (Последовательность N 5) и
производное указанных пептидов (a) - (d), причем такое производное выбирают из группы, включающей:
(1) фармацевтически приемлемую соль указанных пептидов с кислотой,
(2) фармацевтически приемлемую карбоксилатную соль указанных пептидов,
(3) фармацевтически приемлемую соль указанных пептидов со щелочью,
(4) фармацевтически приемлемый низший алкиловый эфир указанных пептидов,
(5) фармацевтически приемлемый амид указанных пептидов, причем такой фармацевтически приемлемый амид выбирают из группы, включающей: амид, низший алкиламид и низший диалкиламид, и
(11) полипептид основного характера и фенольное соединение, при этом препарат представляет собой водную суспензию, способную поддерживать гликемическое регулирование.

В другом воплощении настоящее изобретение направлено на препарат, содержащий:
(1) соединение, выбранное из группы, включающей:
(a) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 2),
(b) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-X (Последовательность N 7),
где X выбирают из группы, включающей:
(A) Lys,
(B) Lys-Gly,
(C ) Lys-Gly-Arg;
(с) производное полипептида, отвечающее общей формуле:
H₂N-W-COOH,
где W представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 1) и
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (Последовательность N 6),
причем такое производное в организме млекопитающего превращается в полипептидное производное с инсулинотропной активностью;
(d) производное полипептида, отвечающее общей формуле:
H₂N-R-COOH,
где R представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 2),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (Последовательность N 3),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly (Последовательность N 4),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys (Последовательность N 5) и
производное указанных пептидов (a) - (d), причем такое производное выбрано из группы, включающей:
(1) фармацевтически приемлемую соль указанных пептидов с кислотой,
(2) фармацевтически приемлемую карбоксилатную соль указанных пептидов,
(3) фармацевтически приемлемую соль указанных пептидов со щелочью,
(4) фармацевтически приемлемый низший алкиловый эфир указанных пептидов,
(5) фармацевтически приемлемый амид указанных пептидов, причем такой фармацевтически приемлемый амид выбирают из группы, включающей амид, низший алкиламид и низший диалкиламид, и
(11) полипептид основного характера, фенольное соединение и ион металла, при этом композиция представляет собой водную суспензию, способную поддерживать гликемическое регулирование.

Рекомендуется композиция, в которой полипептид основного характера представлен протамином.

Кроме того, рекомендуется композиция, в которой ион металла представлен ионом цинка.

В другом своем воплощении настоящее изобретение направлено на композицию, содержащую:
(1) соединение, выбранное из группы, включающей:
(a) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 2),
(b) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-X (Последовательность N 7),
где X выбирают из группы, включающей:
(A) Lys,
(B) Lys-Gly,
(C ) Lys-Gly-Arg;
(с) производное полипептида, отвечающее общей формуле:
H₂N-W-COOH,
где W представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 1) и
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (Последовательность N 6),
причем такое производное в организме млекопитающего превращается в полипептидное производное с инсулинотропной активностью;
(d) производное полипептида, отвечающее общей формуле:
H₂N-R-COOH,
где R представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 2),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (Последовательность N 3),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly (Последовательность N 4),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys (Последовательность N 5) и
производное указанных пептидов (a) - (d), причем такое производное выбирают из группы, включающей:
(1) фармацевтически приемлемую соль указанных пептидов с кислотой,
(2) фармацевтически приемлемую карбоксилатную соль указанных пептидов,
(3) фармацевтически приемлемую соль указанных пептидов со щелочью,
(4) фармацевтически приемлемый низший алкиловый эфир указанных пептидов,
(5) фармацевтически приемлемый амид указанных пептидов, причем такой фармацевтически приемлемый амид выбирают из группы, включающей амид, низший алкиламид и низший диалкиламид, и
(11) продукт обработки указанных пептидов и их производных в условиях, приводящих к получению аморфно-кристаллического образования.

Рекомендуются те композиции, для которых указанные условия включают высокую степень сдвига, действие солей или сочетание того и другого.

Особенно рекомендуются композиции, для которых соль выбирают из группы, включающей сульфат аммония, сульфат натрия, сульфат лития, хлорид лития, цитрат натрия, цитрат аммония, фосфат натрия, фосфат калия, хлорид натрия, хлорид калия, хлорид аммония, ацетат натрия, ацетат аммония, сульфат магния, хлорид кальция, нитрат аммония и формат натрия, а также их сочетания.

И еще в одном своем воплощении настоящее изобретение направлено на композицию, содержащую:
(1) соединение, выбранное из группы, включающей:
(a) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Clu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 2),
(b) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Clu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-X (Последовательность N 7),
где X выбирают из группы, включающей:
(A) Lys,
(B) Lys-Gly,
(C ) Lys-Gly-Arg;
(с) производное полипептида, отвечающее общей формуле:
H₂N-W-COOH,
где W представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 1) и
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (Последовательность N 6),
причем такое производное в организме млекопитающего превращается в полипептидное производное с инсулинотропной активностью;
(d) производное полипептида, отвечающее общей формуле:
H₂N-R-COOH,
где R представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (Последовательность N 2),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (Последовательность N 3),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly (Последовательность N 4),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys (Последовательность N 5) и
производное указанных пептидов (a) - (d), причем такое производное выбирают из группы, включающей:
(1) фармацевтически приемлемую соль указанных пептидов с кислотой;
(2) фармацевтически приемлемую карбоксилатную соль указанных пептидов;
(3) фармацевтически приемлемую соль указанных пептидов со щелочью,
(4) фармацевтически приемлемый низший алкиловый эфир указанных пептидов,
(5) фармацевтически приемлемый амид указанных пептидов, причем такой фармацевтически приемлемый амид выбирают из группы, включающей амид, низший алкиламид и низший диалкиламид, и
(11) липосомную систему подачи.

Особенно рекомендуется композиция, в которой липосомы имеют фосфолипидную основу.

Кроме того, рекомендуется композиция, в которой липосомы имеют нефосфолипидную основу.

Настоящее изобретение направлено также на лечение независимого от инсулина сахарного диабета у млекопитающих, нуждающихся в таком лечении, путем пролонгированного введения препаратов настоящего изобретения.

Если нет особых указаний, применяемый в данном описании и прилагаемой формуле изобретения термин "производное" включает, но без ограничения только ими, полипептиды приведенных общих формул, в которых у С-окончания добавлены одна или несколько L-аминокислот, в которых С-концевой карбоксил образует эфирную группу с нормальным или разветвленным (C₁ - C₆)-алкилом, в которых С-концевой карбоксил образует карбоксамид или замещенный карбоксамид, в кислотные аминокислотные остатки (Asp и/или Glu) образуют эфир или карбоксамид, или сочетания вышеприведенного.

В объем изобретения включены полипептиды, отличающиеся гомологичностью с вышеприведенными пептидами, причем гомологичность подобных полипептидов достаточна для придания им инсулинотропной активности. Кроме того, в объем изобретения включены варианты вышеприведенных пептидов, причем такие варианты содержат несеквенированные аминокислотные замещения и обладают инсулинотропной активностью.

Глюкогонподобный пептид-1 (7 - 37), его выделение, характеристики и применение для лечения сахарного диабета раскрыты в патентах США N 5118666 и 5120712, и описания данных патентов в их полном объеме вводятся здесь в качестве ссылок.

При создании настоящего изобретения обнаружено, что пролонгированное повышенное содержание ГПП-1 и родственных ему полипептидов в плазме больных независимых от инсулина сахарным диабетом необходимо для достижения устойчивого гликемического регулирования в ходе и после питания больных. Неожиданно обнаружено, что повышение содержания ГПП-1 и родственных ему пептидов только во время питания, даже в течение часа не способно адекватно регулировать содержание глюкозы. Таким образом, введение ГПП-1 и родственных ему пептидов требует системы пролонгированной поставки. Такая система прологнированной поставки приводит к усилению действия инсулина.

Выражение "усиление действия инсулина" в применяемом в данном описании и прилагаемой формуле изобретения включает, но без ограничения только этим один или несколько факторов, повышающих синтез инсулина, повышающих секрецию инсулина, повышающих потребление глюкозы мышцами и жирами и понижающих образование глюкозы в печени.

Полипептиды настоящего изобретения получают хорошо известными специалисту способами. К примеру, полипептиды могут быть синтезированы с помощью автоматического синтезатора пептидов, такого как твердофазный синтезатор пептидов фирмы Эплайд Биосистемс (ЭБИ) модели 430А. Или же полипептиды настоящего изобретения могут быть получены методами биотехнологии, в которых кодирующую полипептид ДНК последовательность методами генной инженерии связывают с эпресионным вектором и используют для трансформирования приемлемой клетки-хозяина. Трансформированную клетку-хозяин затем культивируют в условиях, в которых возможна экспрессия полипептида. После этого полипептид выделяют из культуры. Кроме того, для получения амидопроизводных и сложноэфирных производных настоящего изобретения и/или для получения фрагментов целевого полипептида, которые затем могут быть соединены известными методами, можно использовать сочетания синтеза с методами биотехнологии.

Производные полипептидов настоящего изобретения получают хорошо известными специалистам способами. К примеру, С-концевые алкиловые эфиры в качестве производных полипептидов настоящего изобретения получают реакцией целевого (C₁ - C₅)-алканола с целевым полипептидом в присутствии катализирующей кислоты, например, HCl. Приемлемые условия образования подобного алкилового эфира включают температуру реакции около 50^oC и время реакции от 1 часа до 3 часов. Аналогичным образом могут быть получены (C₁ -C₅)алкиловые эфиры остатков Asp и/или Glu, входящих в состав полипептида.

Карбоксамидопроизводные полипептидов настоящего изобретения также могут быть получены твердофазным методом синтеза пептидов, хорошо известным специалистам. См., например, Твердофазный синтез пептидов, Stewart J.M. и др., Пирс Кем. Ко. Пресс, 1984.

Или же (или в сочетании с вышеприведенными методами) производные полипептидов настоящего изобретения могут быть получены модифицированием ДНК-последовательности, кодирующей данный полипептид, таким образом, что при этом аминокислотный остаток основного характера заменяется другим аминокислотным остатком основного характера или кислотным или нейтральным аминокислотным остатком, или кислотный аминокислотный остаток заменяют другим кислотным аминокислотным остатком, или основным или нейтральным аминокислотным остатком, или нейтральным аминокислотный остаток заменяется другим нейтральным аминокислотным остатком, или кислотным или основным аминокислотным остатком. Подобные изменения в первоначальной последовательности полипептида могут быть также осуществлены прямым синтезом производного. Такие методы хорошо известны специалистам. Разумеется, подобные производные находят применение в практике настоящего изобретения, только если оказывают инсулинотропное действие.

Инсулинотропную активность полипептидного производного настоящего изобретения определяют следующим образом.

Панкреатические островки выделяют из панкреатической ткани здоровых крыс по видоизмененной методике Lacy P.E. и др., Dibetes, 16, 35 - 39 (1967), согласно которой продукт гидролиза коллагеназой панкреатической ткани разделяют на градиенте Фиколла (27%, 23%, 20,5% и 11% в сбалансированном растворе Хэнка, pH 7,4). Островки отбирают на поверхности раздела 20,5%/11%, промывают и под стереомикроскопом очищают от экзокрина и других тканей. Островки примерно сутки инкубируют при 37^oC и 95% воздуха/5% CO₂ в RPM1 1640 среде с добавкой 10% плодной телячьей сыворотки и 11 мМ глюкозы. Затем островки переносят в PPM1 1640 среду, содержащую 10% плодной телячьей сыворотки и 5,6 мМ глюкозы, и инкубируют 60 минут при 37^oC и 95% воздуха/5% CO₂. Исследуемое полипептидное производное готовят в концентрациях 1 нМ и 10 нМ в RPM1 среде, содержащей 10% плодной телячьей сыворотки и 16,7 мМ глюкозы Затем 8 - 10 выделенных островков пипеткой переносят до полного объема в 250 мкл в содержащую полипептидное производное среду, находящуюся в планшете с 96 лунками. Островки инкубируют 90 минут при 37^oC и 95% воздуха/5% CO₂ в присутствии полипептидного производного. Затем отбирают аликвоты не содержащей островков среды и 100 мкл среды анализируют на количество присутствующего инсулина радиоиммунным анализом с помощью РИА набора Экват для инсулина (Бинэкс, Инк., Портлэнд, шт.ME).

Дозировки, эффективные для лечения начальной стадии диабета у взрослого, находятся в интервале от 1 пг/кг до 1000 мкг/кг в день при введении полипептидного производного настоящего изобретения, например: внутривенно, внутримышечно или подкожно. Рекомендуемый интервал дозировок для внутривенного вливания в ходе или между принятием пищи составляет 4 - 10 нг/кг/мин или 0,6 - 1,4 мкг/день для больного весом в 100 кг. Однако необходимо указать, что возможны дозировки и вне указанного интервала, которые также охватываются объемом настоящего изобретения. Приемлемые дозировки могут и будут определяться лечащим врачом на основании тяжести состояния больного, а также реакции на введение производного и возраста, веса, пола и истории болезни больного.

Пролонгированное введение может быть осуществлено подкожными, внутримышечными или чрескожными средствами, пероральной ингаляцией, ингаляцией через нос, желудочно-кишечным способом или с помощью насоса для вливаний.

Пролонгированное введение ГПП-1 и родственных пептидов может быть также осуществлено приготовлением состава в виде раствора в разнообразных водорастворимых полимерах. Подобные полимеры, как правило, являются низкомолекулярными (< 15 кДа) полимерами. Неограничивающие примеры таких низкомолекулярных полимеров включают: полиэтиленгликоль, поливинилпирролидон, поливиниловый спирт и сополимеры полиоксиэтилен-полиоксипропилен. Могут быть использованы и более высокомолекулярные полимеры. Неограничивающие примеры более высокомолекулярных полимеров включают полисахариды, такие как целлюлоза и ее производные, хитозан, камедь акации, камедь караи, камедь рожкового дерева, ксантановая камедь, трагакант, альгиновая кислота, карагинан, агароза, фурцеллеран. В последнем случае рекомендуются полимеры, которые разрушаются in vivo либо ферментативно, либо путем гидролиза, например: декстран, крахмал, гиалуроновая кислота, полиэфиры, полиамиды, полиангидриды и полиортоэфиры. Накопление в тканях связано с высокой молекулярной массой, и небиодеградируемых полимеров избегают применением низкомолекулярных полимеров или биодеградируемых полимеров. Составы обычно содержат ГПП-1 или родственные ему пептиды в количестве 1 мг/мл, и концентрация зависит от полимера, но обычно концентрация такова, что вязкость состава достигает 50 сантипуаз, возможно в присутствии приемлемого буфера, тонизирующего средства и консерванта. Данные in vivo на крысах и человеке показывают, что составы способны поддерживать поддающийся уровень инсулинотропина, например, вплоть до 24 часов. Напротив, инсулинотропин в составе, например, фосфатного солевого раствора дает быстрый (~ 15 минут) пик содержания в плазме, и уровень инсулинотропина в плазме падает ниже поддающегося обнаружению уровня уже в течение 4 часов. График зависимости концентрации в плазме от времени наводит на мысль, что скорость абсорбции инсулинотропина, например, от места инъекции значительно снижается в присутствии полимеров.

ГПП-1 и родственные ему пептиды могут быть также приготовлены в виде составов, представляющих собой суспензии частиц в фармацевтически приемлемом масле. Рекомендуемые масла представлены триглицеридами. Неограничивающие примеры подобных масел включают: арахисовое масло, кунжутное масло, миндальное масло, касторовое масло, рыжиковое масло, хлопковое масло, оливковое масло, кукурузное масло, соевое масло, сафлоровое масло и кокосовое масло. Приемлемы масла и других классов, например, эфиры жирных кислот и сложные эфиры жирных спиртов при условии, что масла не смешиваются с водой и плохо растворяют пептид. Процент по массе инсулинотропина в составе может меняться, например, в пределах 0,01 - 10%. Состав может, кроме того, содержать приемлемые консерванты, смачивающие средства и суспендирующие средства. Данные испытаний in vivo на крысах показывают, что подобные составы способны поддерживать в крови поддающийся обнаружению уровень инсулинотропина, например, вплоть до 24 часов. Напротив, инсулинотропин, введенный, например, в состав буферного солевого раствора дает быстрый (~15 минут) пик содержания инсулинотропина в плазме, но уже через 4 часа этот уровень падает ниже поддающегося обнаружению предела. График зависимости концентрации в плазме от времени предполагает, что скорость абсорбции инсулинотропина от места абсорбции значительно снижена в масляных суспензиях.

ГПП-1 и родственные ему пептиды могут быть также введены в состав в виде малорастворимой формы для последующего введения в организм в сочетании с ионом металла, предпочтительно в виде соли. Рекомендуемым ионом является цинк (11). Подобная комбинация может дать композицию, которая будет аморфной или кристаллической. Могут быть использованы ионы и других металлов, в том числе: Ni(11), Co(11), Mg(11), Ca(11), K(1), Mn(11), Fe(11) и Cu(11).

Другие формы для пролонгированного введения включают липосомы как многослойные, так и однослойные, получение которых хорошо известно специалистам. Многослойные и однослойные липосомы могут иметь фосфолипидную и нефосфолипидную основу.

Другой тип состава для пролонгированного введения имеет вид водной суспензии осадка или агрегатов инсулинотропина, образованных применением осадителей, например: фенольных соединений или полипептидов основного характера, или ионов металлов, или солей и/или использованием высокой степени сдвига.

Кристаллы инсулинотропина могут быть получены из водных растворов лекарственного средства применением для понижения растворимости градиента pH (от более высокого значения к более низкому или от более низкого к более высокому) и/или температурного градиента, и/или солей. Применяемые соли включают: цитрат аммония, фосфат натрия или калия, хлорид натрия, калия или аммония, ацетат натрия или аммония, сульфат магния, хлорид кальция, нитрат аммония, формат натрия и любые другие соли, способные понизить растворимость лекарственного средства. Если применяемая для кристаллизации соль не относится к фармацевтически приемлемой, маточный раствор по окончании кристаллизации может быть заменен фармацевтически приемлемой средой. Если необходимо достигнуть дальнейшего снижения растворимости лекарственного средства с получением необходимого фармакокинетического профиля, кристаллы могут быть обработаны ионами металлов, например: цинка или кальция и/или фенольными соединениями. Такая обработка может быть проведена простым введением указанных добавок в суспензию кристаллов.

Растворимость осадка или агрегатов инсулинотропина в физиологических условиях может колебаться в пределах от менее 1 мкг/мл до 500 мкг/мл. Данные испытаний in vivo на крысах показывают, что составы способны сохранять поддающийся обнаружению уровень инсулинотропина в крови, например, по меньшей мере 30 часов.

Водная среда, применяемая в вышеуказанных составах, может быть представлена буферной системой любого типа, обычно используемой для инъекций, или даже чистой водой. Значение pH конечного состава может быть любым при условии возможности инъектировать состав. Протамин может быть добавлен в виде любой соли (например, сульфата, хлорида и т.д.) или в виде основания протамина. Примеры интервалов концентраций компонентов, которые могут быть использованы для приготовления составов, включают: фенол (0,5 - 5 мг/мл), м-крезол (0,5 - 5,5 мг/мл), протамин (0,02 - 1 мг/мл), цинк (молярное отношение цинк/инсулинотропин 0,1 - 6), хлорид натрия (вплоть до 100 мг/мл) и фосфатный буфер (5 - 500 мМ).

Могут быть также использованы и другие фенольные и нефенольные соединения. Неограничивающие примеры подобных соединений включают: резорцин, метилпарабен, пропилпарабен, бензиловый спирт, хлоркрезол, крезол, бензальдегид, катехин, пирагаллол, гидрохинон, н-пропигаллат, бутилированный гидроксианизол, бутилированный гидрокситолуол. Неограничивающие примеры полипептидов основного характера включают: полилизин, полиаргинин и т.д.

После того как изобретение раскрыто в целом, далее приводятся характерные примеры. Необходимо подчеркнуть, что данные примеры не предназначены для ограничения настоящего изобретения, объем которого определяется прилагаемой формулой изобретений.

Пример 1
Суспензия инсулинотропина (1 мг/мл)
Получение раствора А1
В мерную колбу на 5 мл отвешивают 10 мг инсулинотропина. Для диспергирования и растворения лекарственного средства в колбу добавляют 4 мл фосфатного буферного солевого раствора (ФБС).

Для заполнения колбы добавляют достаточно ФБС (количество до метки). В мерную колбу на 10 мл вносят 20 мг инсулинотропина. Для диспергирования и растворения лекарственного средства в колбу вносят примерно 8 мл ФБС.

Затем в колбу добавляют в необходимом количестве ФБС. Содержимое обеих колб смешивают путем их фильтрования стеклянным шприцем через фильтр на 0,22 мкм (низкое связывание белка) в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор А1 содержит 2 мг/мл инсулинотропина в ФБС.

Получение раствора В1
В мерную колбу на 10 мл отвешивают 8 мг сульфата протамина и 44 мг фенола. Для растворения сульфата протамина и фенола добавляют необходимое количество ФБС. Полученный раствор фильтруют через фильтр на 0,22 мкм (низкое связывание белка) в сосудик на 10 мл. Раствор В1 содержит 0,6 мг/мл основания протамина и 4,4 мг/мл фенола в ФБС.

Водная суспензия 1
В стеклянный сосудик типа 1 на 3,5 мл пипеткой переносят 1,5 мл раствора А1. Содержимое сосудика перемешивают магнитной мешалкой с одновременным внесением в сосудик пипеткой 1,5 мл раствора В1. Сосудик закрывают пробкой и заключают в алюминиевую оболочку.

Содержимое сосудика осторожно перемешивают 16 часов с образованием суспензии. Водная суспензия 1 содержит 1 мг/мл инсулинотропина, 0,3 мг/мл основания протамина и 2,2 мг/мл фенола в ФБС. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 2
Суспензия инсулинотропина (1 мг/мл)
Получение раствора А2
В мерную колбу на 5 мл отвешивают 10 мг инсулинотропина. Для диспергирования и растворения лекарственного средства в колбу добавляют примерно 4 мл ФБС. Затем в колбу добавляют до метки ФБС. В мерную колбу на 10 мл отвешивают 20 мг инсулинотропина. Для диспергирования и растворения лекарственного средства в колбу добавляют примерно 8 мл ФБС. Затем в колбу добавляют ФБС в количестве, необходимом для доведения объема до метки.

Содержимое обеих колб соединяют фильтрованием с помощью стеклянного шприца через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор А2 содержит 2 мг/мл инсулинотропина в ФБС.

Получение раствора В2
В мерную колбу на 10 мл отвешивают 2 мг сульфата протамина и 44 мг фенола. Для растворения сульфата протамина и фенола в колбу добавляют до метки необходимое количество ФБС. Полученный раствор фильтруют через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор В2 содержит 0,15 мг/мл основания протамина и 4,4 мг/мл фенола.

Водная суспензия 2
В стеклянный сосудик на 3,5 мл типа 1 пипеткой переносят 1,5 мл раствора А2. Содержимое сосудика перемешивают магнитной мешалкой с одновременным внесением пипеткой 1,5 мл раствора В2. Сосудик закрывают пробкой и заключают в алюминиевую оболочку.

Содержимое сосудика перемешивают 16 часов с образованием суспензии. Водная суспензия 2 содержит 1 мг/мл инсулинотропина, 0,075 мг/мл основания протамина и 2,2 мг/мл фенола в ФБС. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследованиях in vivo на крысах.

Пример 3
Суспензия инсулинотропина (1 мг/мл)
Получение раствора А3
В мерную колбу на 10 мл отвешивают 20 мг инсулинотропина. Для диспергирования и растворения лекарственного средства в колбу добавляют примерно 8 мл ФБС. После этого в колбу добавляют до метки необходимое количество ФБС. Раствор А3 фильтруют с помощью шприца через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор А3 содержит 2 мг/мл инсулинотропина в ФБС.

Получение раствора В3
В мерную колбу на 10 мл отвешивают 8 мг сульфата протамина, 44 мг фенола и 323 мг глицерина. Для растворения сульфата протамина, фенола и глицерина в колбу до метки добавляют необходимое количество ФБС.

Полученный раствор фильтруют шприцем через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор В3 содержит 0,6 мг/мл основания протамина, 4,4 мг/мл фенола и 32 мг/мл глицерина в ФБС.

Водная суспензия 3
В стеклянный сосудик на 1,5 мл типа 1 пипеткой переносят 1,5 мл раствора А3. Содержимое сосудика перемешивают магнитной мешалкой с одновременным добавлением в сосудик пипеткой 1,5 мл раствора В3. Сосудик закрывают пробкой и заключают в алюминиевую оболочку.

Содержимое сосудика перемешивают 16 часов с образованием суспензии. Водная суспензия 3 содержит 1 мг/мл инсулинотропина, 0,3 мг/мл основания протамина, 2,2 мг/мл фенола и 16 мг/мл глицерина в ФБС. Полученную суспензию используют для in vivo фармакокинетических исследований на крысах.

Пример 4
Суспензия инсулинотропина 1 мг/мл)
Получение раствора А4
В мерную колбу на 10 мл отвешивают 20 мг инсулинотропина. Для диспергирования и растворения лекарственного средства в колбу добавляют примерно 8 мл ФБС. Затем добавляют необходимое количество ФБС. Раствор А4 фильтруют шприцем через фильтр на 0,22 мкм (Миллипор-Миллекс-GV) в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор А4 содержит 2 мг/мл инсулинотропина в ФБС.

Получение раствора В4
В мерную колбу на 10 мл отвешивают 8 мг сульфата протамина и 52 мг м-крезола. Для растворения сульфата протамина и м-крезола в колбу добавляют необходимое количество ФБС.

Раствор фильтруют через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор В4 содержит 0,6 мг/мл основания протамина и 5 мг/мл м-крезола.

Водная суспензия 4
В стеклянный сосудик типа 1 на 3,5 мл пипеткой вносят 1,5 мл раствора А4. Содержимое сосудика перемешивают магнитной мешалкой с одновременным добавлением в сосудик пипеткой 1,5 мл раствора В4.

Сосудик закрывают пробкой и заключают в алюминиевую оболочку. Содержимое сосудика перемешивают 16 часов с образованием кристаллов.

Водная суспензия 4 содержит 1 мг/мл инсулинотропина, 0,3 мг/мл основания инсулинотропина и 2,5 мг/мл м-крезола в ФБС. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 5
Суспензия инсулинотропина (1 мг/мл)
Получение раствора А5
В мерную колбу на 25 мл отвешивают 50 мг инсулинотропина. Для диспергирования и растворения лекарственного средства в колбу добавляют примерно 23 мл ФБС. Затем в колбу добавляют необходимое количество ФБС. Раствор А5 фильтруют шприцем через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосудик на 50 мл. Раствор А5 содержит 2 мг/мл инсулинотропина в ФБС.

Получение общего раствора фенола
В мерную колбу на 100 мл отвешивают 0,44 г фенола. Для растворения фенола в колбу добавляют примерно 95 мл ФБС. Затем для растворения фенола добавляют необходимое количество ФБС. Полученный раствор (4,4 мг/мл фенола) используют для приготовления раствора В5.

Получение раствора В5
Раствор В5 получают фильтрованием 25 мл общего фенольного раствора через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосуд на 50 мл. Раствор В5 содержит 4,4 мг/мл фенола в ФБС.

Водная суспензия 5
В стеклянный сосудик типа 1 на 3,5 мл пипеткой вносят 1,5 мл раствора А5. Содержимое сосудика перемешивают магнитной мешалкой с одновременным добавлением в сосудик пипеткой 1,5 мл раствора В5. Сосудик закрывают пробкой и заключают в алюминиевую оболочку. Содержимое сосудика перемешивают 16 часов с образованием суспензии. Водная суспензия 5 содержит 1 мг/мл инсулинотропина и 2,2 мг/мл фенола в ФБС. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 6
Суспензия инсулинотропина (1 мг/мл)
Получение раствора А6
В мерную колбу на 25 мл отвешивают 50 мг инсулинотропина. Для диспергирования и растворения лекарственного средства в колбу добавляют примерно 23 мл ФБС. Затем в колбу добавляют до мерки необходимое количество ФБС. Раствор А6 фильтруют шприцем через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосуд на 50 мл. Раствор А6 содержит 2 мг/мл инсулинотропина в ФБС.

Получение общего раствора фенола
В мерную колбу на 100 мл отвешивают 0,44 г фенола. Для растворения фенола добавляют примерно 95 мл ФБС. Затем для растворения фенола добавляют необходимое количество ФБС. Полученный раствор (4,4 мг/мл фенола) используют для приготовления раствора В6.

Получение раствора В6
Раствор В6 получают взвешиванием в мерной колбе на 25 мл 1,25 мг сульфата протамина. Для растворения сульфата протамина в колбу добавляют примерно 20 мл общего раствора фенола.

Затем в колбу добавляют до метки необходимое количество общего фенольного раствора. Раствор В6 фильтруют через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосуд на 50 мл. Раствор В6 содержит 4,4 мг/мл фенола и 0,038 мг/мл основания протамина.

Водная суспензия 6
В стеклянный сосудик типа 1 на 3,5 мл пипеткой вносят 1,5 мл раствора А6. Содержимое сосудика перемешивают магнитной мешалкой с одновременным добавлением в сосудик пипеткой 1,25 мл раствора В6. Сосудик закрывают пробкой и заключают в алюминиевую оболочку.

Содержимое сосудика перемешивают 16 часов с образованием суспензии. Водная суспензия 6 содержит 1 мг/мл инсулинотропина, 2,2 мг/мл фенола и 0,019 мг/мл основания протамина. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 7
Суспензия инсулинотропина (1 мг/мл)
Получение раствора А7
В мерную колбу на 25 мл отвешивают 50 мг инсулинотропина. Для диспергирования и растворения лекарственного средства в колбу добавляют примерно 23 мл ФБС.

Затем в колбу добавляют до метки необходимое количество ФБС. Раствор А7 фильтруют шприцем через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосуд на 50 мл. Раствор А7 содержит 2 мг/мл инсулинотропина в ФБС.

Получение общего раствора фенола
В мерную колбу на 100 мл отвешивают 0,44 г фенола. Для растворения фенола в колбу добавляют примерно 95 мл фенола. Для растворения фенола добавляют до метки необходимое количество ФБС. Полученный раствор (4,4 мг/мл фенола) используют для приготовления раствора В7.

Получение раствора В7
Раствор В7 получают отвешиванием в мерную колбу на 25 мл сульфата протамина (2,5 мг). В колбу с сульфатом протамина добавляют примерно 20 мл общего фенольного раствора.

Затем в колбу добавляют до метки необходимое количество общего фенольного раствора. Раствор В7 фильтруют через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосуд объемом 50 мл. Раствор В7 содержит 4,4 мг/мл фенола и 0,075 мг/мл основания протамина.

Водная суспензия 7
В стеклянный сосудик типа 1 на 3,5 мл пипеткой вносят 1,25 мл раствора А7. Содержимое сосудика перемешивают магнитной мешалкой с одновременным добавлением в сосудик пипеткой 1,25 мл раствора В7. Сосудик закрывают пробкой и заключают в алюминиевую оболочку.

Содержимое сосудика перемешивают 16 часов с образованием суспензии. Водная суспензия 7 содержит 1 мг/мл инсулинотропина, 2,2 мг/мл фенола и 0,038 мг/мл основания протамина в ФБС. Суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 8
Суспензия инсулинотропина (1 мг/мл)
Получение раствора А12
В мерную колбу на 10 мл отвешивают 20 мг инсулинотропина. Для диспергирования и растворения лекарственного средства в колбу добавляют примерно 8 мл ФБС.

Затем до метки добавляют необходимое количество ФБС. Раствор А12 фильтруют шприцем через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор А12 содержит 2 мг/мл инсулинотропина в ФБС.

Раствор В12
Раствор В12 получают отвешиванием 20 мг фенола в мерную колбу на 10 мл. Для растворения фенола в колбу добавляют примерно 8 мл ФБС.

Затем в колбу добавляют до метки необходимое количество ФБС. Раствор В12 фильтруют через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор В12 содержит 2 мг/мл фенола в ФБС.

Водная суспензия А2
В стеклянный сосудик на 10 мл типа 1 пипеткой вносят 4 мл раствора А12. Содержимое сосудика перемешивают с одновременным добавлением в сосудик пипеткой 4 мл раствора В12. Сосудик закрывают пробкой и заключают в алюминиевую оболочку.

Содержимое сосудика перемешивают 16 часов с образованием суспензии. Водная суспензия 12 содержит 1 мг/мл инсулинотропина и 1 мг/мл фенола в ФБС. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 9
Суспензия инсулинотропина (1 мг/мл)
Получение раствора А15
В мерную колбу на 10 мл отвешивают 20 мг инсулинотропина. Для растворения лекарственного средства в колбу добавляют примерно 8 мл фосфатного буфера (ФБС).

Затем в колбу добавляют до метки необходимое количество ФБ. Раствор А15 фильтруют шприцем через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор А15 содержит 2 мг/мл инсулинотропина в ФБС.

Получение раствора В15
Раствор В15 получают отвешиванием 8 мг сульфата протамина в мерную колбу на 10 мл. Для растворения сульфата протамина в колбу добавляют примерно 8 мл ФБС.

Затем в колбу добавляют до метки необходимое количество ФБ. Раствор В15 фильтруют через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор В15 содержит 0,6 мг основания протамина.

Водная суспензия 15
В стеклянный сосудик на 10 мл типа 1 пипеткой вносят 3 мл раствора А15. Содержимое сосудика перемешивают с одновременным добавлением пипеткой 3 мл раствора В15. Сосудик закрывают пробкой и заключают в алюминиевую оболочку.

Содержимое сосудика перемешивают 16 часов с образованием суспензии. Водная суспензия 15 содержит 1 мг/мл инсулинотропина и 0,3 мг/мл основания протамина в ФБ. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 10
Суспензия инсулинотропина (1 мг/мл)
Получение раствора А16
В мерную колбу на 10 мл отвешивают 20 мг инсулинотропина. Для растворения лекарственного средства в колбу добавляют примерно 8 мл ФБ.

Затем в колбу добавляют до метки необходимое количество ФБ. Раствор А16 фильтруют шприцем через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосудик на 50 мл. Раствор А16 содержит 2 мг/мл инсулинотропина в ФБ.

Получение раствора В16
Раствор В16 получают отвешиванием 44 мг фенола в мерную колбу на 10 мл. Для растворения фенола в колбу добавляют примерно 8 мл ФБ. Затем в колбу добавляют до метки необходимое количество ФБ. Раствор В16 фильтруют через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор В16 содержит 4,4 мг/мл фенола в ФБ.

Водная суспензия 16
В стеклянный сосудик типа 1 на 10 мл пипеткой вносят 3 мл раствора А16. Содержимое сосудика перемешивают магнитной мешалкой с одновременным добавлением в сосудик пипеткой 3 мл раствора В16. Сосудик закрывают пробкой и заключают в алюминиевую оболочку.

Содержимое сосудика перемешивают 16 часов с образованием суспензии. Водная суспензия 16 содержит 1 мг/мл инсулинотропина и 2,2 мг/мл фенола в ФБ. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 11
Суспензия инсулинотропина (1 мг/мл)
Водная суспензия 17
В мерную колбу на 10 мл отвешивают 10 мг инсулинотропина. Для растворения лекарственного средства в колбу добавляют примерно 8 мл ФБ. Затем добавляют до метки необходимое количество ФБ.

Содержимое колбы фильтруют шприцем через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосудик типа 1 на 10 мл. Сосудик закрывают пробкой и заключают в алюминиевую оболочку. Содержимое сосудика перемешивают 16 часов для образования суспензии. Водная суспензия 17 содержит 1 мг/мл инсулинотропина в ФБ. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 12
Суспензия инсулинотропина (1 мг/мл)
Водная суспензия 18
В мерную колбу на 10 мл отвешивают 10 мг инсулинотропина. Для растворения лекарственного средства в колбу добавляют примерно 8 мл ФБС. Затем в колбу добавляют до метки необходимое количество ФБС.

Содержимое колбы фильтруют шприцем через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосудик типа 1 на 10 мл. Сосудик закрывают пробкой и заключают в алюминиевую оболочку. Содержимое сосудика осторожно перемешивают (с предотвращением образования пены или пузырьков) 16 часов с образованием суспензии. Водная суспензия 18 содержит 1 мг/мл инсулинотропина. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 13
Суспензия инсулинотропина (0,2 мг/мл)
Получение раствора А22
Раствор А22 получают отвешиванием 2 мг инсулинотропина в мерную колбу на 5 мл. Для растворения лекарственного средства в колбу добавляют примерно 3 мл ФБС.

Затем в колбу добавляют до метки необходимое количество ФБС. Раствор А22 фильтруют шприцем через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор А22 содержит 0,4 мг/мл инсулинотропина в ФБС.

Получение раствора В22
Раствор В22 получают отвешиванием 44 мг фенола в мерную колбу на 10 мл. Для растворения фенола в колбу добавляют примерно 8 мл ФБС.

Затем в колбу добавляют до метки необходимое количество ФБС. Раствор В22 фильтруют через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор В22 содержит 4,4 мг/мл фенола в ФБС.

Водная суспензия 22
В стеклянный сосудик на 3,5 мл типа 1 пипеткой вносят 1,5 мл раствора А22. Содержимое сосудика перемешивают магнитной мешалкой с одновременным добавлением в сосудик 1,5 мл раствора В22. Сосудик закрывают пробкой и заключают в алюминиевую оболочку.

Содержимое сосудика перемешивают 16 часов с образованием суспензии. Водная суспензия 22 содержит 0,2 мг/мл инсулинотропина и 2,2 мг/мл фенола. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 14
Суспензия инсулинотропина (0,2 мг/мл)
Получение раствора А23
Раствор А23 получают отвешиванием 2 мг инсулинотропина в мерную колбу на 5 мл. Для растворения лекарственного средства в колбу добавляют примерно 3 мл ФБС.

Затем в колбу добавляют до метки необходимое количество ФБС. Раствор А23 фильтруют шприцем через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор А23 содержит 0,4 мг/мл инсулинотропина в ФБС.

Получение раствора В23
Раствор В23 получают отвешиванием 8,8 мг фенола в мерную колбу на 10 мл. Для растворения фенола в колбу добавляют примерно 8 мл ФБС.

Затем в колбу добавляют до метки необходимое количество ФБС. Раствор В23 фильтруют через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор В23 содержит 0,88 мг/мл фенола в ФБС.

Водная суспензия 23
В стеклянный сосудик типа 1 на 3,5 мл вносят пипеткой 1,5 мл раствора А23. Содержимое сосудика перемешивают магнитной мешалкой с одновременным добавлением в сосудик 1,5 мл раствора В23. Сосудик закрывают пробкой и заключают в алюминиевую оболочку.

Содержимое сосудика перемешивают 16 часов с образованием суспензии. Водная суспензия 23 содержит 0,2 мг/мл инсулинотропина и 0,44 мг/мл фенола в ФБС. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 15
Суспензия инсулинотропина (1 мг/мл)
Получение раствора А24
Раствор А24 получают отвешиванием в мерную колбу на 5 мл 10 мг инсулинотропина. Для растворения лекарственного средства в колбу добавляют примерно 3 мл ФБС.

Затем в колбу добавляют до метки необходимое количество ФБС. Раствор А24 фильтруют шприцем через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор А24 содержит 2 мг/мл инсулинотропина в ФБС.

Получение раствора В24
Раствор В24 получают отвешиванием 8 мг фенола в мерную колбу на 10 мл. Для растворения сульфата протамина в колбу добавляют примерно 8 мл ФБС.

Затем в колбу добавляют до метки необходимое количество ФБС. Раствор В24 фильтруют через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор В24 содержит 0,6 мг/мл основания протамина в ФБС.

Водная суспензия 24
В стеклянный сосудик типа 1 на 3,5 мл вносят пипеткой 1,5 мл раствора А24. Содержимое сосудика перемешивают магнитной мешалкой с одновременным добавлением пипеткой 1,5 мл раствора В24. Сосудик закрывают пробкой и заключают в алюминиевую оболочку.

Содержимое сосудика перемешивают 16 часов с образованием суспензии. Водная суспензия 24 содержит 1 мг/мл инсулинотропина и 0,3 мг/мл основания протамина в ФБС. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 16
Суспензия инсулинотропина (1 мг/мл)
Получение раствора А25
Раствор А25 получают отвешиванием 10 мг инсулинотропина в мерную колбу на 5 мл. Для растворения лекарственного средства в колбу добавляют примерно 3 мл ФБС.

Затем в колбу добавляют до метки необходимое количество ФБС. Раствор А25 фильтруют шприцем через фильтр на 0,22 мкм/мл в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор А25 содержит 2 мг/мл инсулинотропина в ФБС.

Получение раствора В25
Раствор В25 получают отвешиванием 53 мг м-крезола в мерную колбу на 10 мл. Для растворения м-крезола в колбу добавляют примерно 8 мл ФБС.

Затем в колбу добавляют до метки необходимое количество ФБС. Раствор В25 фильтруют через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор В25 содержит 5,3 мг/мл м-крезола в ФБС.

Водная суспензия 25
В стеклянный сосудик типа 1 на 3,5 мл вносят пипеткой 1,5 мл раствора А25. Содержимое сосудика перемешивают магнитной мешалкой с одновременным добавлением в сосудик 1,5 мл раствора В25. Сосудик закрывают пробкой и заключают в алюминиевую оболочку.

Содержимое сосудика перемешивают 16 часов с образованием суспензии. Водная суспензия 25 содержит 1 мг/мл инсулинотропина и 2,5 мг/мл м-крезола в ФБС. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 17
Суспензия инсулинотропина (0,5 мг/мл)
Получение раствора А29
Раствор А29 получают отвешиванием 25 мг инсулинотропина в мерную колбу на 25 мл. Для растворения лекарственного средства в колбу добавляют примерно 20 мл ФБС.

Затем в колбу добавляют до метки необходимое количество ФБС. Раствор А29 фильтруют шприцем через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосуд на 50 мл. Раствор А29 содержит 1 мг/мл инсулинотропина в ФБС.

Получение раствора В29
Раствор В29 получают отвешиванием 50 мг фенола в мерную колбу на 50 мл. Для растворения фенола в колбу добавляют примерно 40 мл ФБС.

Затем в колбу добавляют до метки необходимое количество ФБС. Раствор В29 фильтруют через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосудик на 50 мл. Раствор В29 содержит 1 мг/мл фенола в ФБС.

Водная суспензия 29
В стеклянный сосудик типа 1 на 3,5 мл пипеткой вносят 1,5 мл раствора А29. Содержимое сосудика перемешивают магнитной мешалкой с одновременным добавлением в сосудик 1,5 мл раствора В29. Сосудик закрывают пробкой и заключают в алюминиевую оболочку.

Содержимое сосудика перемешивают 16 часов с образованием суспензии. Водная суспензия 29 содержит 0,5 мг/мл инсулинотропина и 0,5 мг/мл фенола в ФБС. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 18
Суспензия инсулинотропина (1 мг/мл)
Получение раствора А31
В мерную колбу на 5 мл отвешивают 10 мг инсулинотропина. Для диспергирования и растворения лекарственного средства в колбу добавляют примерно 4 мл ФБС.

Затем в колбу добавляют до метки необходимое количество ФБС. Раствор А31 фильтруют шприцем через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор А31 содержит 2 мг/мл инсулинотропина в ФБС.

Получение раствора В31
Раствор В31 получают отвешиванием 50 мг фенола в мерную колбу на 50 мл. Для растворения фенола в колбу добавляют примерно 40 мл ФБС.

Затем в колбу добавляют до метки необходимое количество ФБС. Раствор В31 фильтруют через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосуд на 50 мл. Раствор В31 содержит 1 мг/мл фенола в ФБС.

Водная суспензия 31
В стеклянный сосудик типа 1 на 3,5 мл вносят пипеткой 1,5 мл раствора А31. Содержимое сосудика перемешивают магнитной мешалкой с одновременным добавлением в сосудик 1,5 мл раствора В31. Сосудик закрывают пробкой и заключают в алюминиевую оболочку.

Содержимое сосудика перемешивают 16 часов с образованием суспензии. Водная суспензия содержит 1 мг/мл инсулинотропина и 0,5 мг/мл фенола в ФБС. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 19
Суспензия инсулинотропина (4 мг/мл)
Получение раствора А51
В стеклянный сосудик на 10 мл отвешивают 22,2 мг инсулинотропина. Для растворения лекарственного средства в сосудик добавляют 5 мл ФБС.

Полученный раствор фильтруют через фильтр на 0,22 мкм (низкое связывание белка) в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор А51 содержит 4,44 мг инсулинотропина в ФБС.

Получение раствора В51
В мерную колбу на 5 мл отвешивают 110 мг фенола и 30 мг сульфата протамина. Для растворения фенола и сульфата протамина в колбу добавляют примерно 4 мл ФБС.

В колбу до отметки добавляют ФБС. Раствор фильтруют через фильтр на 0,22 мкм (низкое связывание белка) в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор В51 содержит 22 мг/мл фенола и 4,5 мг/мл основания протамина в ФБС.

Водная суспензия 51
В стеклянный сосудик типа 1 на 3,5 мл пипеткой вносят 3 мл раствора А51и 0,33 мл раствора В51. Содержимое сосудика осторожно встряхивают с получением однородной смеси.

Сосудик оставляют на 16 часов при комнатной температуре. Водная суспензия 51 содержит 4 мг/мл инсулинотропина, 0,44 мг/мл основания протамина и 2,2 мг/мл фенола в ФБС. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 20
Суспензия инсулинотропина (4 мг/мл)
Получение раствора А52
В стеклянный сосудик на 10 мл отвешивают 22,2 мг инсулинотропина. Для растворения лекарственного средства в сосудик пипеткой вносят 5 мл ФБС.

Полученный раствор фильтруют через фильтр на 0,22 мкм (низкое связывание белка) в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор А52 содержит 4,44 мг/мл инсулинотропина в ФБС.

Получение раствора В52
В мерную колбу на 5 мл отвешивают 110 мг фенола и 15,6 мг дигидрата ацетата цинка. Для растворения фенола и дигидрата ацетата цинка в колбу добавляют примерно 4 мл воды для инъекций.

Затем колбу заполняют до метки водой для инъекций. Раствор фильтруют через фильтр на 0,22 мкм (низкое связывание белка) в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор А52 содержит 22 мг/мл фенола и 7,8 мг дигидрата ацетата цинка в воде для инъекций.

Водная суспензия 52
В стеклянный сосудик типа 1 на 3,5 мл пипеткой вносят 3 мл раствора А52 и 0,33 мл раствора В52. Содержимое сосудика осторожно встряхивают с получением однородной смеси.

Сосудик оставляют на 16 часов при комнатной температуре. Водная суспензия 52 содержит 4 мг/мл инсулинотропина и 0,78 мг/мл дигидрата ацетата цинка и 2,2 мг/мл фенола в ФБС. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 21
Суспензия инсулинотропина (4 мг/мл)
Получение раствора фенола
В мерную колбу на 100 мл отвешивают 244 мг фенола. Для растворения фенола в колбу добавляют примерно 90 мл воды для инъекций.

Затем колбу заполняют водой для инъекций до метки. Добавлением 5%-го раствора NaOH устанавливают pH в полученном растворе 9. Раствор фенола содержит 2,44 мг/мл фенола в воде для инъекций (pH 9).

Получение раствора А71
В стеклянный сосудик на 10 мл отвешивают 22,2 мг инсулинотропина. Для растворения лекарственного средства в сосудик пипеткой вносят 5 мл раствора фенола. Полученный раствор фильтруют через фильтр на 0,22 мкм (низкое связывание белка) в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор А71 содержит 4,44 мг/мл инсулинотропина и 2,44 мг/мл фенола в воде для инъекций.

Получение раствора В71
В мерную колбу на 10 мл отвешивают 116 мг сульфата протамина. Для растворения сульфата протамина в колбу добавляют примерно 8 мл воды для инъекций.

Затем колбу заполняют до метки водой для инъекций. Раствор фильтруют через фильтр на 0,22 мкм (низкое связывание белка) в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор В71 содержит 8,7 мг/мл основания протамина в воде для инъекций.

Получение раствора С71
В мерную колбу на 10 мл отвешивают 156 мг дигидрата ацетата цинка и 1,632 г NaCl. Для растворения дигидрата ацетата цинка и NaCl в колбу добавляют примерно 8 мл воды для инъекций.

Затем колбу заполняют водой для инъекций до метки. Раствор фильтруют через фильтр на 0,22 мкм (низкое связывание белка) в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор С71 содержит 15,6 мг/мл дигидрата ацетата цинка и 163,2 мг/мл NaCl в воде для инъекций.

Водная суспензия 71
В стеклянный сосудик типа 1 на 3,5 мл пипеткой вносят 3 мл раствора А71, 0,165 мл раствора В71 и 0,165 мл раствора С71. Содержимое сосудика осторожно встряхивают с получением однородной смеси. Сосудик оставляют на 16 часов при комнатной температуре.

Водная суспензия 71 содержит 4 мг/мл инсулинотропина, 0,435 мг/мл основания протамина, 0,78 мг/мл дигидрата ацетата цинка, 8,16 мг/мл NaCl и 2,2 мг/мл фенола в воде для инъекций. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 22
Суспензия инсулинотропина (4 мг/мл)
Получение раствора м-крезола
В мерную колбу на 100 мл отвешивают 244 мг м-крезола. Для растворения м-крезола в колбу добавляют примерно 90 мл воды для инъекций.

Затем колбу заполняют до метки водой для инъекций. Добавлением 5%-го раствора NaOH значение pH в полученном растворе устанавливают, равным 9. Раствор м-крезола содержит 2,44 мг/мл м-крезола в воде для инъекций (pH 9).

Получение раствора А100
В стеклянный сосудик на 10 мл отвешивают 22,2 мг инсулинотропина. Для растворения лекарственного средства в сосудик пипеткой вносят 5 мл раствора м-крезола. Полученный раствор фильтруют через фильтр на 0,22 мкм (низкое связывание белка) в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор А100 содержит 4,44 мг/мл инсулинотропина и 2,44 мг/мл м-крезола в воде для инъекций.

Получение раствора В100
В мерную колбу на 10 мл отвешивают 116 мг сульфата протамина. Для растворения сульфата протамина в колбу добавляют примерно 8 мл воды для инъекций.

Затем колбу заполняют до метки водой для инъекций. Полученный раствор фильтруют через фильтр на 0,22 мкм (низкое связывание белка) в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор В100 содержит 8,7 мг/мл основания протамина в воде для инъекций.

Получение раствора С100
В мерную колбу на 10 мл отвешивают 156 мг дигидрата ацетата цинка и 1,632 г NaCl. Для растворения дигидрата ацетата цинка и NaCl в колбу добавляют примерно 8 мл воды для инъекций.

Затем колбу заполняют водой для инъекций до метки. Раствор фильтруют через фильтр на 0,22 мкм (низкое связывание белка) в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор С100 содержит 15,6 мг/мл дигидрата ацетата цинка и 163,2 мг/мл NaCl в воде для инъекций.

Водная суспензия 100
В стеклянный сосудик типа 1 на 3,5 мл пипеткой переносят 3 мл раствора А100, 0,165 мл раствора В100 и 0,165 мл раствора С100. Содержимое сосудика осторожно встряхивают с получением однородной смеси. Сосудик оставляют на 16 часов при комнатной температуре.

Водная суспензия 100 содержит 4 мг/мл инсулинотропина, 0,435 мг/мл основания протамина, 0,78 мг/мл дигидрата ацетата цинка, 8,16 мг/мл NaCl и 2,2 мг/мл м-крезола в воде для инъекций. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 23
Суспензия инсулинотропина (4 мг/мл)
Получение раствора А68
В стеклянный сосудик на 10 мл отвешивают 22,2 мг инсулинотропина. Для растворения лекарственного средства в сосудик пипеткой вносят 5 мл ФБС. Раствор фильтруют через фильтр на 0,22 мкм (низкое связывание белка) в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор А68 содержит 4,44 мг/мл инсулинотропина в ФБС.

Получение раствора В68
В мерную колбу на 10 мл отвешивают 116 мг сульфата протамина. Для растворения сульфата протамина в колбу добавляют примерно 8 мл воды для инъекций.

Затем колбу заполняют до метки водой для инъекций. Раствор фильтруют через фильтр на 0,22 мкм (низкое связывание белка) в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор В68 содержит 8,7 мг/мл основания протамина в воде для инъекций.

Получение раствора С68
В мерную колбу на 10 мл отвешивают 156 мг дигидрата ацетата цинка и 440 мг фенола. Для растворения дигидрата ацетата цинка и фенола в колбу добавляют примерно 8 мл воды для инъекций.

Затем колбу заполняют водой для инъекций до метки. Раствор фильтруют через фильтр на 0,22 мкм (низкое связывание белка) в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор С68 содержит 15,6 мг/мл дигидрата ацетата цинка и 44 мг/мл фенола в воде для инъекций.

Водная суспензия 68
В стеклянный сосудик типа 1 на 3,5 мл пипеткой переносят 3 мл раствора А68, 0,165 мл раствора В68 и 0,165 мл раствора С68. Содержимое сосудика осторожно встряхивают с получением однородной смеси. Сосудик оставляют на 16 часов при комнатной температуре.

Водная суспензия 68 содержит 4 мг/мл инсулинотропина, 0,435 мг/мл основания протамина, 0,78 мг/мл дигидрата ацетата цинка и 2,2 мг/мл фенола в ФБС. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 24
Суспензия инсулинотропина (4 мг/мл)
Получение раствора А67
В стеклянный сосудик на 10 мл отвешивают 22,2 мг инсулинотропина. Для растворения лекарственного средства в сосудик пипеткой вносят 5 мл ФБС. Раствор фильтруют через фильтр на 0,22 мкм (низкое связывание белка) в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор А67 содержит 4,44 мг/мл инсулинотропина в ФБС.

Получение раствора В67
В мерную колбу на 10 мл отвешивают 116 мг сульфата протамина. Для растворения сульфата протамина в колбу добавляют примерно 8 мл воды для инъекций.

Затем колбу заполняют до метки водой для инъекций. Раствор фильтруют через фильтр на 0,22 мкм (низкое связывание белка) в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор В67 содержит 8,7 мг/мл основания протамина в воде для инъекций.

Получение раствора С67
В мерную колбу на 10 мл отвешивают 156 мг дигидрата ацетата цинка и 440 мг м-крезола. Для растворения дигидрата ацетата цинка и м-крезола в колбу добавляют примерно 8 мл воды для инъекций.

Затем колбу заполняют водой для инъекций до метки. Раствор фильтруют через фильтр на 0,22 мкм (низкое связывание белка) в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор С67 содержит 15,6 мг/мл дигидрата ацетата цинка и 44 мг/мл м-крезола в воде для инъекций.

Водная суспензия 67
В стеклянный сосудик типа 1 на 3,5 мл пипеткой вносят 3 мл раствора А67, 0,165 мл раствора В67 и 0,165 мл раствора С67. Содержимое сосудика осторожно встряхивают с получением однородной смеси. Сосудик затем оставляют на 16 часов при комнатной температуре.

Водная суспензия 67 содержит 4 мг/мл инсулинотропина, 0,435 мг/мл основания протамина, 0,78 мг/мл дигидрата ацетата цинка, и 2,2 мг/мл м-крезола в ФБС. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 25
Получение раствора А39
В стеклянный сосуд отвешивают 67,6 мг инсулинотропина. Для растворения инсулинотропина в сосуд добавляют примерно 22 мл воды для инъекций.

Для установления значения pH 9,6 добавляют NaOH с получением прозрачного раствора. В сосуд добавляют воду для инъекций с получением конечной концентрации лекарственного средства 2,5 мг/мл.

Получение раствора В39
В мерную колбу на 100 мл отвешивают 386,8 мг дигидрата ацетата цинка. Для растворения дигидрата ацетата цинка в колбу добавляют примерно 80 мл воды для инъекций.

Затем колбу заполняют до метки водой для инъекций. Раствор В39 содержит 3,9 мг/мл дигидрата ацетата цинка в воде для инъекций.

Получение раствора С39
В мерную колбу на 50 мл отвешивают 1,095 г фенола. Для растворения фенола в колбу добавляют примерно 40 мл воды для инъекций. Затем колбу заполняют до метки водой для инъекций. Раствор С39 содержит 21,9 мг/мл фенола в воде для инъекций.

Получение раствора D39
В мерную колбу на 25 мл отвешивают 2,25 г NaCl. Для растворения NaCl в колбу добавляют примерно 20 мл раствора С39. Затем колбу заполняют до метки раствором С39. Раствор D39 содержит 9% (масс./об.) NaCl и 21,9 мг/мл фенола в воде для инъекций.

Водная суспензия 39
Все растворы фильтруют через фильтр на 0,22 мкм (низкое связывание белка). В сосудик для образцов на 10 мл переносят 9 мл раствора А39. При осторожном перемешивании в сосудик добавляют 1 мл раствора В39. Сразу же образуется осадок.

Значение pH раствора согласно определениям равно 7. Сосудик оставляют на 18 часов при комнатной температуре. В отдельный сосудик на 10 переносят 4 мл образца, после чего добавляют в сосудик 0,44 мл раствора D39. Образец осторожно перемешивают 5 минут и затем оставляют примерно на сутки при комнатной температуре.

Водная суспензия 39 содержит 2 мг/мл инсулинотропина, 2,2 мг/мл фенола, 0,9% фенола и 0,39 мг/мл ацетата цинка. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 26
Получение раствора А53
В стеклянный сосудик на 10 мл отвешивают 32,5 мг инсулинотропина. В сосудик добавляют 6 мл воды для инъекций.

Для установления в содержимом сосудика значения pH 9,6 добавляют 1% (масс. /об. ) NaOH с получением прозрачного раствора. Для доведения концентрации лекарственного средства до 5 мг/мл добавляют необходимое количество воды для инъекций.

Получение раствора В53
В мерную колбу на 50 мл отвешивают 390 мг дигидрата ацетата цинка. Для растворения дигидрата ацетата цинка в колбу добавляют примерно 40 мл воды для инъекций. Затем колбу заполняют до метки водой для инъекций. Раствор В53 содержит 7,8 мг/мл дигидрата ацетата цинка в воде для инъекций.

Водная суспензия 53
Все растворы фильтруют через фильтр на 0,22 мкм (низкое связывание белка). В сосудик на 3,5 мл переносят 2,4 мл раствора А53. При осторожном перемешивании в сосудик добавляют 300 мкл раствора В53.

После добавления сразу же образуется двоякопреломляющий осадок. Определенное значение pH равно 6,8. После выдерживания сосудика 20 часов при комнатной температуре непосредственно в надосадочную жидкость отстоявшейся суспензии добавляют 75 мк м-крезола.

Затем для растворения м-крезола суспензию осторожно перемешивают. После этого к суспензии при перемешивании добавляют 300 мкл 9%-го раствора NaCl.

Водная суспензия 53 содержит 4 мг/мл инсулинотропина, 0,9% NaCl, 0,78 мг/мл ацетата цинка и 2,5 мг/мл м-крезола в воде для инъекций. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 27
Получение раствора А54
В стеклянный сосудик на 10 мл отвешивают 32,5 мг инсулинотропина. В сосудик добавляют 6 мл воды для инъекций.

Для установления значения pH 9,6 добавляют 1% (мас./об.) NaOH с получением прозрачного раствора. Для доведения концентрации лекарственного средства до 5 мг/мл добавляют необходимое количество воды для инъекций.

Получение раствора В54
В мерную колбу на 50 мл отвешивают 390 мг дигидрата ацетата цинка. Для растворения дигидрата ацетата цинка в колбу добавляют примерно 40 мл воды для инъекций. Затем колбу заполняют до метки водой для инъекций. Раствор В54 содержит 7,8 мг/мл дигидрата ацетата цинка в воде для инъекций.

Получение раствора С54
В мерную колбу на 50 мл отвешивают 1,1 г фенола и 4,5 г NaCl. Добавляют примерно 40 мл воды для инъекций, и колбу заполняют до метки водой для инъекций. Раствор С54 содержит 22 мг/мл фенола и 90 мг/мл NaCl.

Водная суспензия 54
Все растворы фильтруют через фильтр на 0,22 мкм (низкое связывание белка). В сосудик на 3,5 мл переносят 2,4 мл раствора А54. При перемешивании в сосудик вносят 300 мкл раствора В54.

После добавления сразу же образуется двоякопреломляющий осадок. Определенное значение pH равно 6,8. Образец оставляют на 20 часов при комнатной температуре. При осторожном перемешивании добавляют 300 мкл раствора С54.

Водная суспензия 54 содержит 4 мг/мл инсулинотропина, 0,78 мг/мл дигидрата ацетата цинка, 2,2 мг/мл фенола и 9 мг/мл NaCl в воде для инъекций. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 28
Получение раствора А57
В стеклянный сосудик на 10 мл отвешивают 15 мг инсулинотропина. В сосудик добавляют 3 мл воды для инъекций. Значение pH в содержимом сосудика устанавливают равным 9,9 добавлением 5% NaOH с полным растворением лекарственного средства. Раствор А57 содержит 5 мг/мл инсулинотропина в воде для инъекций.

Получение раствора В57
В мерную колбу на 100 мл отвешивают 780 мг дигидрата ацетата цинка. Для растворения дигидрата ацетата цинка в колбу добавляют примерно 80 мл воды для инъекций. Затем в колбу добавляют до метки воду для инъекций. Раствор В57 содержит 7,8 мг/мл дигидрата ацетата цинка в воде для инъекций.

Получение раствора С57
В мерную колбу на 100 мл отвешивают 2,2 г фенола и 9 г NaCl. Для растворения фенола и NaCl в колбу добавляют примерно 80 мл воды для инъекций. Затем колбу заполняют до метки водой для инъекций. Раствор С57 содержит 22 мг/мл фенола и 90 мг/мл NaCl в воде для инъекций.

Водная суспензия 57
В сосудик на 3,5 мл переносят 2,4 мл раствора А57. Раствор осторожно перемешивают в ходе добавления 300 мкл раствора В57.

Определяют значение pH, которое оказывается равным 7,1. Остаток оставляют на 24 часа при комнатной температуре. При осторожном перемешивании добавляют 300 мкл раствора С57.

Водная суспензия 57 содержит 4 мг/мл инсулинотропина, 0,78 мг/мл дигидрата ацетата цинка, 2,2 мг/мл фенола и 9 мг/мл NaCl в воде для инъекций. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 29
Получение раствора А64
В стеклянный сосуд на 30 мл отвешивают 53,3 мг инсулинотропина. После добавления 11 мл воды для инъекций добавлением 5% NaOH (масс./об.) в содержимом сосуда устанавливают pH 8,3 с растворением инсулинотропина. Добавлением разбавленной HCl устанавливают pH 6 с сохранением при этом прозрачности раствора.

Для доведения концентрации лекарственного средства до 4,4 мг/мл добавляют необходимое количество воды для инъекций. Раствор А64 фильтруют через фильтр на 0,22 мкм (низкое связывание белка) в сосудик для образцов на 3,5 мл.

Отфильтрованный образец (1,8 мл) переносят в отдельный стерильный сосудик на 3,5 мл и оставляют на 3 дня при комнатной температуре для кристаллизации.

Получение раствора В64
В мерную колбу на 50 мл отвешивают 780 мг дигидрата ацетата цинка. Для растворения дигидрата ацетата цинка в колбу добавляют примерно 40 мл воды для инъекций. Затем колбу заполняют до метки водой для инъекций. Раствор В54 содержит 15,6 мг/мл дигидрата ацетата цинка в воде для инъекций.

Получение раствора С64
В мерную колбу на 100 мл отвешивают 18 г NaCl. Для растворения NaCl в колбу добавляют примерно 80 мл воды для инъекций. Затем колбу заполняют до метки водой для инъекций. Раствор С64 содержит 180 мг/мл NaCl в воде для инъекций.

Водная суспензия 64
По окончании кристаллизации в растворе А64 при медленном перемешивании в 1,8 мл суспензии кристаллов добавляют 100 мкл раствора В64.

После этого образец оставляют на 3 дня при комнатной температуре. При осторожном перемешивании к суспензии кристаллов добавляют 100 мкл раствора С64.

Добавлением разбавленного раствора NaOH в суспензии устанавливают pH, равное 7,3. В суспензию кристаллов непосредственно добавляют 5 мкл м-крезола.

Водная суспензия 64 содержит 4 мг/мл инсулинотропина, 0,78 мг/мл дигидрата ацетата цинка, 9 мг/мл NaCl и 2,5 мг/мл м-крезола.

Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 30
Получение раствора А69
В мерную колбу на 100 мл отвешивают 1 г NaCl. Для растворения NaCl в колбу добавляют примерно 80 мл воды для инъекций. Затем колбу заполняют до метки водой для инъекций. Раствор А69 содержит 1% (масс./об.) NaCl в воде для инъекций.

Получение раствора В69
В мерную колбу на 100 мл отвешивают 390 мг дигидрата ацетата цинка. Для растворения дигидрата ацетата цинка в колбу добавляют примерно 80 мл воды для инъекций.

Затем в колбу добавляют до метки воды для инъекций. Раствор В69 содержит 3,9 мг/мл дигидрата ацетата цинка в воде для инъекций.

Получение эмульсии С69
В мерную колбу на 100 мл переносят 2,5 мл стерильного профильтрованного (0,22 мкм, низкое связывание белка) м-крезола. Колбу заполняют до метки водой для инъекций и обрабатывают ультразвуком с образованием однородной эмульсии. Эмульсия С69 содержит 25 мг/мл м-крезола в воде для инъекций.

Водная суспензия 69
В стеклянный сосудик на 10 мл отвешивают 35,74 мг инсулинотропина. Добавляют 7 мл раствора А69. Для растворения лекарственного средства в содержимом сосудика устанавливают pH 9,2. Использованием разбавленной HCl в растворе устанавливают pH 6,5.

Для получения концентрации лекарственного средства, равной 4,4 мг/мл, добавляют необходимое количество воды для инъекций. Раствор фильтруют через фильтр на 0,22 мкм (низкое связыванием белка).

В отдельный сосудик переносят 1,5 мл кристаллической суспензии. При осторожном перемешивании добавляют 167 мкл раствора В69.

Образец оставляют на 1 день при комнатной температуре. К недостаточной жидкости отстоявшейся суспензии добавляют 167 мкл эмульсии С69. Образец перемешивают для растворения м-крезола.

Водная суспензия 69 содержит 3,6 мг/мл инсулинотропина, 0,36 мг/мл ацетат цинка, 8,17 мг/мл NaCl и 2,28 мг/мл м-крезола в воде для инъекций. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 31
Получение раствора А101
В мерную колбу на 100 мл отвешивают 10 г ацетата натрия. Для растворения ацетата натрия в колбу добавляют примерно 80 мл воды для инъекций.

Затем колбу заполняют до метки водой для инъекций. Раствор А101 содержит 100 мг/мл ацетата натрия в воде для инъекций.

Водная суспензия 101
В стеклянный сосудик на 10 мл отвешивают 44,4 мг инсулинотропина. В сосудик добавляют 8 мл воды для инъекций. В содержимом сосудика устанавливают pH 9,3 с получением прозрачного раствора. К раствору инсулинотропина добавляют 1 мл раствора А101.

Раствор фильтруют через фильтр на 0,22 мк (низкое связывание белка). Отфильтрованный раствор оставляют при комнатной температуре на 3 дня для кристаллизации.

Врдная суспензия 101 содержит 4,9 мг/мл инсулинотропина и 11,1 мг/мл ацетата натрия в воде для инъекций. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 32
Получение раствора А82
В мерную колбу на 100 мл отвешивают 9 г NaCl. Для растворения NaCl в колбу добавляют примерно 80 мл воды для инъекций. Затем колбу заполняют до метки водой для инъекций. Раствор А82 содержит 9% (масс./об.) NaCl в воде для инъекций.

Получение раствора В82
В мерную колбу на 100 мл отвешивают 789 мг дигидрата ацетата цинка. Для растворения дигидрата ацетата цинка добавляют в колбу примерно 80 мл воды для инъекций. Затем колбу заполняют до метки водой для инъекций. Раствор В82 содержит 7,89 мг/мл дигидрата ацетата цинка в воде для инъекций.

Получение эмульсии С82
В мерную колбу на 100 мл переносят 2,5 мл стерильного профильтрованного (0,22 мкм, низкое связывание белка) м-крезола. Колбу заполняют до метки водой для инъекций и обрабатывают ультразвуком с получением однородной эмульсии. Эмульсия С82 содержит 25 мг/мл м-крезола в воде для инъекций.

Водная суспензия 82
Все растворы фильтруют через фильтр на 0,22 мкм (низкое связывание белка). В сосудик на 10 мл, содержащий 8 мл воды, добавляют 45,34 мг инсулинотропина. Использованием 5% NaOH в растворе устанавливают pH 9,3.

После добавления 1 мл раствора А82 в колбе использованием разбавленной HCl устанавливают pH 6,55. Раствор (5 мг/мл инсулинотропина) фильтруют через фильтр на 0,22 мкм (низкое связывание белка).

К стерильному профильтрованному раствору инсулинотропина добавляют 81 мкл водной суспензии 101 (см. пример 31) и диспергируют встряхиванием образца.

Затем образец оставляют на 72 часа при комнатной температуре с образованием суспензии кристаллов. В сосудик на 3,5 мл переносят 2,4 мл суспензии. При осторожном перемешивании добавляют в сосудик 300 мкл раствора В82.

Использованием разбавленного раствора NaOH в содержимом сосудика устанавливают pH 7,3. К надосадочной жидкости отстоявшейся суспензии добавляют 300 мкл эмульсии С82.

Водная суспензия 82 содержит 4 мг/мл инсулинотропина, 0,79 мг/мл дигидрата ацетата цинка, 2,5 мг/мл м-крезола и 0,9% NaCl в воде для инъекций. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 33
Суспензия амида ГПП-1 (7 - 36) (1 мг/мл)
Получение раствора А26
Раствор А26 получают отвешиванием 10 мг ГПП-1 (7 - 36) в мерную колбу на 5 мл. Для лекарственного средства в колбу добавляют примерно 3 мл ФБС.

Затем в колбу добавляют до метки необходимое количество ФБС. Раствор А26 фильтруют через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор А26 содержит 2 мг/мл ГПП-1 (7 - 36) в ФБС.

Получение раствора В26
Раствор В26 получают отвешиванием 44 мг фенола в мерную колбу на 10 мл. Для растворения фенола в колбу добавляют примерно 8 мл ФБС. Затем в колбу добавляют до метки необходимое количество ФБС.

Раствор В26 фильтруют через фильтр на 0,22 мкм в стеклянный сосудик на 10 мл. Раствор в26 содержит 4,4 мг/мл фенола в ФБС.

Водная суспензия 26
В стеклянный сосудик типа 1 на 3,5 мл пипеткой вносят 1,5 мл раствора А26. Содержимое сосудика перемешивают магнитной мешалкой с одновременным внесением в сосудик пипеткой 1,5 мл раствора В36. Сосудик закрывают пробкой и заключают в алюминиевую оболочку.

Содержимое сосудика осторожно перемешивают (избегая образования пены и пузырьков) в течение 18 часов с образованием суспензии.

Водная суспензия 26 содержит 1 мг/мл амида ГПП-1 (7 - 36) и 2,2 мг/мл фенола в ФБС. Полученную суспензию используют для фармакокинетических исследований in vivo на крысах.

Пример 34
В одном из вариантов изобретения малорастворимую форму ГПП-1 (7 - 37) получают смешиванием ГПП-1 (7 - 37) в концентрации 2 - 15 мг/мл в буфере с pH 7 - 8,5 с раствором соли иона металла и образованием растворов с концентрацией ГПП-1 (7 - 37) 1 - 8 мг/мл при молярном отношении цинка к ГПП-1 (7 - 37) 1 : 1 - 270 : 1.

Образуется тяжелый осадок, который оставляют примерно на сутки при комнатной температуре. Растворимость ГПП-1 (7 - 37) в растворе иона металла меняется в зависимости от применяемого металла.

Последующие определения растворимости осадка ГПП-1 (7 - 37) в не содержащем металла растворителе, например, ФБС или воде показывают, что ионы цинка, кобальта и никеля образуют малорастворимые формы ГПП-1 (7 - 37). Способность различных ионных солей металлов создавать понижение растворимости ГПП-1 (7-37) приведена в таблице 1.

Примечание. В каждом случае 100 мкл раствора иона металла в концентрации 5 мМ добавляют к 100 мкл ГПП-1 (7 - 37) в концентрации 5 мг/мл, смешивают и оставляют примерно на сутки.

Нерастворимый осадок отделяют центрифугированием. Определяют концентрацию ГПП-1 (7 - 37), оставшегося в растворе иона металла.

Осадок вновь суспендируют в фосфатном буферном солевом растворе (ФБС), обрабатывают ультразвуком и оставляют примерно на сутки. Вновь центрифугируют нерастворимый осадок и определяют концентрацию ГПП-1 (7 - 37).

Пример 35
Микрокристаллические формы ГПП-1 (7 - 37) могут быть получены смешиванием растворов ГПП-1 (7 - 37) с определенными комбинациями солей и низкомолекулярного полиэтиленгликоля (ПЭГ).

В таблице 2 приведено шесть характерных сочетаний условий образования микристаллических форм ГПП-1 (7 - 37) в буферном растворе с pH 7 - 8,5.

Примечание. Общий образец ГПП-1 (7 - 37) в концентрации 5 мг/ мл в 50 мМ Трис (pH 8,1) смешивают в отношении 1 : 1 с реагентом. Капли рассматривают и подсчитывают на отсутствие или присутствие нерастворимого ГПП-1 (7 - 37) в кристаллической или аморфной форме.

В целом низкомолекулярный ПЭГ, видимо, благоприятствует образованию кристаллической формы. Трис - трис(гидроксиметил)аминометан и ГЭПЭС - N-2-(гидроксил)пиперазин-N-2-этансульфоновая кислота.

Пример 36
Для получения с высокими выходами микрокристаллических форма ГПП-1 (7 - 37) требуются определенные сочетания ПЭГ-1 (7 - 37) и ПЭГ в различных концентрациях.

В таблице 3 приведены характерные комбинации концентраций ПЭГ 600 и ГПП-1 (7 - 37), при которых образуются микрокристаллические, а не аморфные формы лекарственного средства. Приведены также выхода нерастворимой формы ГПП-1 (7 - 37).

Примечание. Микрокристаллы ГПП-1 (7 - 37) получают смешиванием растворов ГПП-1 (7 - 37) а концентрации 20 мг/мл в указанном буфере (pH 8) с 60%-ым раствором полиэтиленгликоля 600 (ПЭГ 600) в H₂O и указанном буфере (pH 8) с получением конечных концентраций 15 - 30% ПЭГ и 3 - 10 мг/мл ГПП-1. После выдерживания примерно сутки в растворе с выходами 50 - 85% образуются микрокристаллы ГПП-1 (7 - 37).

Пример 37
Данным примером в виде примера дается иной вариант изобретения, в котором осуществляют обработку микрокристаллов ГПП-1 (7 - 37) различными ионами металлов с образованием малорастворимых микрокристаллических форм ГПП-1.

Микрокристаллы ГПП-1 (7 - 37), полученные при концентрации 8 мг/мл ГПП-1 (7 - 37) и 22,5% ПЭГ по методике примера 22, обладают растворимостью, эквивалентной растворимости чистого лиофилизованного ГПП-1 (7 - 37).

Для придания целевого свойства низкой растворимости при длительной подаче лекарственного средства полученные микрокристаллы могут быть обработаны растворами солей металлов в отношениях металла к ГПП-1 (7 - 37) от 1 : 1 до 260 : 1 и выдерживанием примерно сутки при комнатной температуре.

Избыток соли металла удаляют в процессе центрифугирования/промывания. В таблице 4 приведены результаты такой обработки несколькими солями двухвалентных катионов металлов.

Пример 38
По вышеприведенным методикам использованием ацетата цинка получают как аморфные, так и микрокристаллические малорастворимые составы. На крысах проводят подкожные инъекции (три зверька на состав) и в течение 24 часов радиоиммунным анализом определяют содержание ГПП-1 (7 - 37) в плазме.

Фиг. 8 показывает более длительное нахождение лекарственного средства по сравнению с контрольной подкожной инъекцией растворимого ГПП-1 (7 - 37).

Пример 39
45% (мас./об.) полиэтиленгликоля 3350 (ПЭГ)
1 мг/мл инсулинотропина
20 мМ фосфатного буфера
необх. кол-во стерильной воды для инъекций (СВДИ)
Использованием СВДИ получают 50% (мас./мас.) раствор ПЭГ. Отдельно получают 200 мм фосфатный буфер использованием безводного двухосновного фосфата натрия (26,85 мг/мл) и моногидрата одноосновного фосфата натрия (1,41 мг/мл).

При необходимости pH буферного раствора доводят до pH 8 добавлением либо гидроксида натрия, либо соляной кислоты. Растворением соответствующего количества инсулинотропина в достаточном количестве буферного раствора получают раствор инсулинотропина с концентрацией 10 мг/мл.

К раствору инсулинотропина добавляют требуемое количество ПЭГ и добавлением достаточного количества СВДИ раствор доводят до целевого объема. Конечный раствор стерильно фильтруют через фильтр на 0,2 мкм и в асептических условиях заполняют в сосудики. Раствор (0,5 мл) инъектируют подкожно крысам с последующим анализом методом РИА содержания инсулинотропина в плазме.

Пример 40
1,32% (мас./об.) гидроксиэтилцеллюлозы (ГЭЦ)
1 мг/мл инсулинотропина
20 мМ фосфатный буфера
100 мМ хлорид натрия
необ. кол-во стерильной воды для инъекций (СВДИ)
Использованием СВДИ получают 2% (мас./мас.) раствор гидроксиэтилцеллюлозы. Отдельно получают 200 мм фосфатный буфер использованием безводного двухосновного фосфата натрия (26,85 мг/мл) и моногидрата одноосновного фосфата натрия (1,41 мг/мл).

При необходимости добавлением либо гидроксида натрия, либо соляной кислоты в буферном растворе устанавливают pH 8. Раствор инсулинотропина с концентрацией 10 мг/мл получают растворением соответствующего количества инсулинотропина и хлорида натрия в достаточном количестве буферного раствора.

К раствору инсулинотропина добавляют необходимое количество ГЭЦ и для доведения раствора до целевого объема добавляют достаточное количество СВДИ.

Конечный раствор стерильно фильтруют через фильтр на 0,2 мкм и в аспетических условиях заливают в сосудики. Раствор (0,5 мл) инъектируют подкожно крысам с последующим анализом методом РИА содержания инсулинотропина в плазме.

Пример 41
18% (мас./об.) плуронового FI27
1 мг/мл инсулинотропина
20 мМ фосфатный буфер
необход. кол-во стерильной воды для инъекций (СВДИ)
Использованием СВДИ получают 20% (мас./мас.) раствор плуронового FI27. Для растворения полимера применяют Политрон (гомогенизатор проб) в бане со льдом.

Отдельно получают 200 мМ фосфатный буфер использованием безводного двухосновного фосфата натрия (25,85 мг/мл) и моногидрата одноосновного фосфата натрия (1,41 мг/мл).

При необходимости добавлением либо гидроксида натрия, либо соляной кислоты в буферном растворе устанавливают pH 8.

Для приготовления раствора инсулинотропина концентрацией 10 мг/мл соответствующее количество инсулинотропина растворяют в достаточном количестве буферного раствора.

К раствору инсулинотропина добавляют необходимое количество раствора плуронового FI27 и для доведения раствора до необходимого объема добавляют достаточное количество СВДИ.

Конечный раствор стерильно фильтруют через фильтр на 0,2 мкм и в аспетических условиях заливают в сосудики. Раствор (0,5 мл) инъектируют подкожно крысам с последующим анализом методом РИА содержания инсулинотропина в плазме.

Пример 42
Суспензия арахисового масла (шаровая мельница)
1 мг/мл инсулинотропина
1% Твин 80
Твин 80 добавляют до концентрации 1% к арахисовому маслу. Полученный раствор стерильно фильтруют через фильтр на 0,2 мкм.

Затем в масле суспендируют твердый инсулинотропин. Размер частиц уменьшают помолом в шаровой мельнице Чезвари (рубашка с холодной водой), работающей 18 часов при 40 об./мин.

Полученной суспензией затем заливают сосудики. Суспензию (0,5 мл) инъектируют подкожно крысам с последующим анализом методом РИА содержания инсулинотропина в плазме.

Пример 43
22,6% (мас./об.) декстрана
1 мг/мл инсулинотропина
20 мМ фосфатный буфер
необход. кол-во стерильной воды для инъекций (СВДИ)
Использованием СВДИ получают 50% (мас./мас.) раствор декстрана. Отдельно получают 200 мМ фосфатный буфер использованием безводного двухосновного фосфата натрия (26,85 мг/мл) и моногидрата одноосновного фосфата натрия (1,41 мг/мл).

При необходимости добавлением либо гидроксида натрия, либо соляной кислоты в буферном растворе устанавливают pH 8. Раствор инсулинотропина концентрацией 5 мг/мл получают растворением соответствующего количества инсулинотропина в достаточном количестве буферного раствора.

К раствору инсулинотропина добавляют требуемое количество раствора декстрана и для получения требуемого объема добавляют достаточное количество СВДИ.

Конечный раствор затем стерильно фильтруют через фильтр на 0,2 мкм и в асептических условиях заливают в сосудики. Раствор (0,5 мл) инъектируют подкожно крысам с последующим анализом методом РИА содержания инсулинотропина в плазме.

Пример 44
Инсулинотропин кристаллизуют из смеси фосфатного буферного солевого раствора (ФБС), этанол и м-крезола. В стеклянном сосуде получают однородную взвесь инсулинотропина в ФБС (10 мг/мл) и в сосуд добавляют большое количество этанола (в 9 раз превышающее количество взвеси) с одновременным перемешиванием содержимого сосуда магнитной мешалкой.

Образуются очень мелкие частицы аморфного инсулинотропина. В сосуд добавляют м-крезол в таком количестве, что его конечная концентрация м-крезола 1% (об./об.).

Для предотвращения испарения растворителя сосуд закрывают пробкой. Кристаллизующуюся смесь хранят два дня при комнатной температуре.

Из аморфных частиц растут кристаллические пластины игольчатой формы. Длина кристаллов 50 - 200 мкм и ширина 2 - 4 мкм.

Пример 45
Инсулинотропин (1 - 4 мг/мл) растворяют в 1% растворе сульфата натрия (или ацетата натрия, или хлорида натрия, или сульфата аммония) при значениях pH выше 8 с последующим снижением pH до 6 - 7,5 добавлением HCl.

Прозрачный раствор оставляют при комнатной температуре. Через два дня в зависимости от условий кристаллизации получают кристаллы игольчатой или пластинчатой формы.

Пример 46
ГПП-1 (7 - 37) растворяют в 50 мМ глициновом буфере, содержащем (0,1 - 0,2 М NaCl (pH 8,5 - 9,5), до концентрации 1 - 5 мг/мл.

Добавляют раствор соли цинка (ацетат или хлорид) с получением молярного отношения цинка к ГПП-1 (7 - 37) от 0,5 : 1 до 1,5 : 1. Кристаллы ГПП-1 (7 - 37) растут примерно сутки при комнатной температуре с выходами 70 - 97%.

Пример 47
Кристаллы ГПП-1 (7 - 37) могут быть выращены диффузией паров использованием пептида, растворенного в 100 мМ Трис (pH 8 - 9,5) в концентрации 10 - 20 мг/мл.

Раствор пептида смешивают с отношением 1 : 1 с тем же буфером, содержащим 0,5 - 2,5 М NaCl, с последующим уравновешиванием в замкнутой системе относительно буфера полной силы (напр.: Трис с 0,5 - 2,5 М NaCl).

Перечень последовательностей
(2) Информация для послед. N 1:
(1) Характеристики последовательности:
(А) Длина: 37 аминокислот
(В) Тип: аминокислота
(С) Число нитей: одна
(D) Топология: линейная
(II) Молекулярный тип: пептид
(III) Гипотетический тип: отсутствие
(IY) Антисенсибилизирующий тип: отсутствие
(Y) Тип фрагмента: N-концевой
(YI) Первоначальный источник:
(А) Организм: N/A
(В) Штамм: N/A
(С) Индивидуальный изолят: N/A
(Е) Гаплотип: N/A
(H) Клеточный тип: N/A
(YII) Непосредственный источник:
(А) Библиотека: N/A
(В) Клон: N/A
(YIII) Положение в геноме:
(А) Хромосома/сегмент: N/A
(В) MAP положение: N/A
(С) Звенья: N/A
(XI) Описание последовательности: Послед. N 1:

(2) Информация для последовательности N 2
(1) Характеристики последовательности:
(А) Длина: 31 аминокислота
(В) Тип: аминокислота
(С) Число нитей: одна
(D) Топология: линейная
(II) Молекулярный тип: пептид
(III) Гипотетический тип: отсутствие
(IY) Антисенсибилизирующий тип: отсутствие
(Y) Тип фрагмента: N-концевой
(YI) Первоначальный источник:
(А) Организм: N/A
(В) Штамм: N/A
(С) Индивидуальный изолят: N/A
(Е) Гаплотип: N/A
(H) Клеточная линия: N/A
(YII) Непосредственный источник:
(А) Библиотека: N/A
(В) Клон: N/A
(YIII) Положение в геноме:
(А) Хромосома/сегмент: N/A
(В) MAP положение: N/A
(С) Звенья: N/A
(XI) Описание последовательности: Послед. N 2

(2) Информация для последовательности N 3:
(1) Характеристики последовательности:
(А) Длина: 30 аминокислот
(В) Тип: аминокислота
(С) Число нитей: одна
(D) Топология: линейная
(II) Молекулярный тип: пептид
(III) Гипотетический тип: отсутствие
(IY) Антисенсибилизирующий тип: отсутствие
(Y) Тип фрагмента: N-концевой
(YI) Первоначальный источник:
(А) Организм: N/A
(В) Штамм: N/A
(С) Индивидуальный изолят: N/A
(Е) Гаплотип: N/A
(H) Клеточная линия: N/A
(YII) Непосредственный источник:
(А) Библиотека: N/A
(В) Клон: N/A
(YIII) Положение в геноме:
(А) Хромосома/сегмент: N/A
(В) MAP положение: N/A
(С) Звенья: N/A
(XI) Описание последовательности: Послед. N 3

(2) Информация для последовательности N 4:
(1) Характеристики последовательности:
(А) Длина: 29 аминокислот
(В) Тип: аминокислота
(С) Число нитей: одна
(D) Топология: линейная
(II) Молекулярный тип: пептид
(III) Гипотетический тип: отсутствие
(IY) Антисенсибилизирующий тип: отсутствие
(Y) Тип фрагмента: N-концевой
(YI) Первоначальный источник:
(А) Организм: N/A
(В) Штамм: N/A
(С) Индивидуальный изолят: N/A
(Е) Гаплотип: N/A
(H) Клеточная линия: N/A
(YII) Непосредственный источник:
(А) Библиотека: N/A
(В) Клон: N/A
(YIII) Положение в геноме:
(А) Хромосома/сегмент: N/A
(В) MAP положение: N/A
(XI) Описание последовательности: Послед. N 4:

(2) Информация для последовательности N 5:
(1) Характеристики последовательности:
(А) Длина: 28 аминокислот
(В) Тип: аминокислота
(С) Число нитей: одна
(D) Топология: линейная
(II) Молекулярный тип: пептид
(III) Гипотетический тип: отсутствие
(IY) Антисенсибилизирующий тип: отсутствие
(Y) Тип фрагмента: N-концевой
(YI) Первоначальный источник:
(А) Организм: N/A
(В) Штамм: N/A
(С) Индивидуальный изолят: N/A
(Е) Гаплотип: N/A
(H) Клеточная линия: N/A
(YII) Непосредственный источник:
(А) Библиотека: N/A
(В) Клон: N/A
(YIII) Положение в геноме:
(А) Хромосома/сегмент: N/A
(В) MAP положение: N/A
(XI) Описание последовательности: Послед. N 5:

Информация для последовательности N 6:
(1) Характеристики последовательности:
(А) Длина: 36 аминокислот
(В) Тип: аминокислота
(С) Число нитей: одна
(D) Топология: линейная
(II) Молекулярный тип: пептид
(III) Гипотетический тип: отсутствие
(IY) Антисенсибилизирующий тип: отсутствие
(Y) Тип фрагмента: N-концевой
(YI) Первоначальный источник:
(А) Организм: N/A
(В) Штамм: N/A
(С) Индивидуальный изолят: N/A
(Е) Гаплотип: N/A
(H) Клеточная линия: N/A
(YII) Непосредственный источник:
(А) Библиотека: N/A
(В) Клон: N/A
(YIII) Положение в геноме:
(А) Хромосома/сегмент: N/A
(В) MAP положение: N/A
(XI) Описание последовательности: Послед. N 6:

(2) Информация для последовательности N 7:
(1) Характеристики последовательности:
(А) Длина: 27 аминокислот
(В) Тип: аминокислота
(С) Число нитей: одна
(D) Топология: линейная
(II) Молекулярный тип: пептид
(III) Гипотетический тип: отсутствие
(IY) Антисенсибилизирующий тип: отсутствие
(Y) Тип фрагмента: N-концевой
(YI) Первоначальный источник:
(А) Организм: N/A
(В) Штамм: N/A
(С) Индивидуальный изолят: N/A
(Е) Гаплотип: N/A
(H) Клеточная линия: N/A
(YII) Непосредственный источник:
(А) Библиотека: N/A
(В) Клон: N/A
(YIII) Положение в геноме:
(А) Хромосома/сегмент: N/A
(В) MAP положение: N/A
(XI) Описание последовательности: послед. N 7:
у

Формула изобретения

1. Композиция, обладающая инсульлинотропной активностью, отличающаяся тем, что она включает (i) соединение, выбранное из группы, включающей: (а) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lxs-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (последовательность N 2),
(b) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Tnr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gls-Ala-Aia-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-X (последовательность N 7), где X выбран из группы, включающей: (А) Lys, (B) Lys-Gly, (С)Lys-Gly-Arg;
(с) производное полипептида, включающее первичную структуру H₂N-W-COOH, где W представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Ley-Glu-Gly-Gin-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (последовательность N 1) и
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (последовательность N 6) и
(d) производное полипептида, включающее первичную структуру
H₂N-R-COOH,
где R представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (последовательность N 2),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (последовательность N 3),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Sre-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly (последовательность N 4),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys (последовательность N 5)и производного указанных пептидов (а) - (d), выбранного из группы, включающей:
(1) фармацевтически приемлемую кислотно-аддитивную соль указанных пептидов,
(2) фармацевтически приемлемую карбоксилатную соль указанных пептидов,
(3) фармацевтически приемлемую щелочно-аддитивную соль указанных пептидов,
(4) фармацевтически приемлемый низший алкиловый эфир указанных пептидов,
(5) фармацевтически приемлемый амид указанных пептидов, выбранный из группы, включающей: амид, низший алкиламид и низший диалкиламид, и (ii) цинк (П), связанный в комплекс с пептидом в водной среде, содержащая цинк и пептид из (а) - (d) в молярном соотношении от 0,10 до 6.

2. Композиция, обладающая инсулинотропной активностью, отличающаяся тем, что она включает (i) соединение, выбранное из группы, включающей: (а) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (последовательность N 1),
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (последовательность N 6) и
(d) производное полипептида, включающее первичную структуру
H₂N-R-COOH,
где R представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (последовательность N 2),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (последовательность N 3),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Sre-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly (последовательность N 4),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser- (последовательность N 2),
(b) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-X (последовательность N 7), где Х выбран из группы, включающей: (A) Lys, (B) Lys-Gly6, (C)Lys-Gly-Arg, (c) производное полипептида, включающее первичную структуру
H₂N-W-COOH,
где W представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gin-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (последовательность N 1) и
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (последовательность N 6),
(d) производное полипептида, включающее первичную структуру
H₂N-R-COOH,
где R представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (последовательность N 2),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (последовательность N 3),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly (последовательность N 4),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys (последовательность N 5), и производного указанных пептидов (а) - (d), выбранного из группы, включающей:
(1) фармацевтически приемлемую кислотно-аддитивную соль указанных пептидов,
(2) фармацевтически приемлемую карбоксилатную соль указанных пептидов,
(3) фармацевтически приемлемую щелочно-аддитивную соль указанных пептидов,
(4) фармацевтически приемлемый низший алкиловый эфир указанных пептидов,
(5) фармацевтически приемлемый амид указанных пептидов, выбранный из группы, включающей: амид, низший алкиламид и низший диалкиламид, и
(ii) металл, выбранный из группы, включающей Ni (П), Со (П), Mg (П), Са (П), К (1), Mn (П), Fe (П) и Cu (П), причем композиция содержит металл и пептид (а) - (d) в молярном соотношении, 0,10 - 6.

3. Композиция, обладающая инсулинотропной активностью, отличающаяся тем, что она включает (i)соединение, выбранное из группы, включающей: (а) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (последовательность N 2),
(b) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Х (последовательность N 7),
где Х выбран из группы, включающей: (А) Lys, (B) Lys-Gly и (С) Lys-Gly-Arg;
(с) производное полипептида, включающее первичную структуру
Н₂N-W-COOH,
где W представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-lle-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (последовательность N 1) и
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (последовательность N 6),
(d) производное полипептида, включающее первичную структуру
H₂N-R-COOH,
где R представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (последовательность N 2),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Glu-Arg (последовательность N 3),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly (последовательность N 4),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys (последовательность N 5), и производного указанных пептидов, (а) - (d), выбранного из группы, включающей:
(1) фармацевтически приемлемую кислотно-аддитивную соль указанных пептидов,
(2) фармацевтически приемлемую карбоксилатную соль указанных пептидов,
(3) фармацевтически приемлемую щелочно-аддитивную соль указанных пептидов,
(4) фармацевтически приемлемый низший алкиловый эфир указанных пептидов,
(5) фармацевтически приемлемый амид указанных пептидов, выбранный из группы, включающей: амид, низший алкиламид и низший диалкиламид, и
(ii ) основной полипептид, причем композиция представляет водную суспензию, содержащую примерно от 1 до 4 мг/мл пептида (а) - (d) и примерно 0,5 - 6 мг/мл основного полипептида.

4. Композиция, обладающая инсулинотропной активностью, отличающаяся тем, что она включает (i) соединение, выбранное из группы, включающей: (а) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (последовательность N 2),
(b) Zis-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-X (последовательность N 7),
где Х выбирают из группы, включающей: (A) Lys, (B) Iys-Gly, (C) Lys-Gly-Arg; (с) производное полипептида, включающее первичную структуру
H₂N-W-COOH,
где W представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-Zis-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-lle-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (последовательность N 1) и
Zis-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-Zis-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-lle-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (последовательность N 6),
(d) производное полипептида, включающее первичную структуру
H₂N-R-COOH,
где R представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (последовательность N 2),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (последовательность N 3),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly (последовательность N 4),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys (последовательность N 5), и производного указанных пептидов (а) - (d), выбранного из группы, включающей:
(1) фармацевтически приемлемую кислотно-аддитивную соль указанных пептидов,
(2) фармацевтически приемлемую карбоксилатную соль указанных пептидов,
(3) фармацевтически приемлемую щелочно-аддитивную соль указанных пептидов,
(4) фармацевтически приемлемый низший алкиловый эфир указанных пептидов,
(5) фармацевтически приемлемый амид указанных пептидов, выбранный из группы, включающей: амид, низший алкиламид и низший диалкиламид; и
(ii) фенольное соединение, выбранное из группы, включающей: фенол, крезол, резорцин и метилпарабен, причем композиция представляет водную суспензию, содержащую примерно 1-4 мг/мл пептида (а) - (d) и примерно 0,5 - 6 мг/мл фенольного соединения.

5. Композиция, обладающая инсулинотропной активностью, отличающаяся тем, что содержит: (i) соединение, выбранное из группы, включающей: (а) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (последовательность N 2),
(b) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-X (последовательность N 7),
где Х выбран из группы, включающей: (A) Lys, (B) Lys-Gly, (C) Lys-Gly-Arg; (с) производное полипептида, включающее первичную структуру
H₂N-W-COOH,
где W представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (последовательность N 1) и
His-Asp-Glu-Phe-Gln-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (последовательность N 6),
(d) производное полипептида, включающее перичную структуру
H₂N-R-COOH,
где R представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (последовательность N 2),
Zis-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (последовательность N 3),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly (последовательность N 4), и
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys (последовательность N 5) и производного указанных пептидов (а) - (d), выбранного из группы, включающей:
(1) фармацевтически приемлемую кислотно-аддитивную соль указанных пептидов,
(2) фармацевтически приемлемую карбоксилатную соль указанных пептидов,
(3) фармацевтически приемлемую щелочно-аддитивную соль указанных пептидов,
(4) фармацевтически приемлемый низший алкиловый эфир указанных пептидов,
(5) фармацевтически приемлемый амид указанных пептидов, выбранный из группы, включающей: амид, низший алкиламид и низший диалкиламид, и
(ii) полипептид основного характера и фенольное соединение, причем композиция представляет водную суспензию, содержащую примерно 1-4 мг/мл пептида (а) - (d), примерно 0,02 -1,0 мг/мл основного полипептида и примерно 0,5 - 6 мг/мл фенольного соединения.

6. Композиция, обладающая инсулинотропной активностью, отличающаяся тем, что она включает: (i) соединение, выбранное из группы, включающей: (а) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (последовательность N 2),
(b) пептид с аминокислотной последовательностью:
Zis-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-X (последовательность N 7),
где Х выбран из группы, включающей: (A) Lys, (B) Lys-Gly, (C) Lys-Gly-Arg, (с) производное полипептида, включающее первичную структуру
H₂N-W-COOH,
где W представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Asp-Glu-Pze-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (последовательность N 1) и
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (последовательность N 6),
(d) производное полипептида, включающее первичную структуру
H₂N-R-COOH,
где R представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (последовательность N 2),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (последовательность N 3),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly (последовательность N 4),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys (последовательность N 5) и производное указанные пептидов (а) - (d), выбранные из группы, включающей:
(1) фармацевтически приемлемую кислотно-аддитивную соль указанных пептидов,
(2) фармацевтически приемлемую карбоксилатную соль указанных пептидов,
(3) фармацевтически приемлемую щелочно-аддитивную соль указанных пептидов,
(4) фармацевтически приемлемый низший алкиловый эфир указанных пептидов,
(5) фармацевтически приемлемый амид указанных пептидов, выбранный из группы, включающей: амид, низший алкиламид и низший диалкиламид, и
(ii) основной полипептид, фенольное соединение и ион металла, причем композиция представляет собой водную суспензию, содержащую примерно 1-4 мг/мл пептида (а) - (d) при молярном соотношении металла и пептида (а) - (d) 0,10 - 6, примерно 0,02 - 1 мг/мл основного полипептида и 0,5 - 6 мг/мл фенольного соединения.

7. Композиция вещества, обладающая инсулинотропной активностью, представляющая соединение, выбранное из группы, включающей:
(а) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (последовательность N 2),
(b) пептид с аминокислотной последовательностью:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Х (последовательность N 7),
где Х выбирают из группы, включающей: (A) Lys, (B) Lys-Gly, (C) Lys-Gly-Arg; (с) производное полипептида, включающее первичную структуру
H₂N-W-COOH,
где W представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (последовательность N 1) и
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (последовательность N 6),
(d) производное полипептида, включающее первичную структуру
H₂N-R-COOH,
где R представляет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Arg-Gly-Arg-Gly (последовательность N 2),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (последовательность N 3),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly (последовательность N 4),
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys (последовательность N 5) и производное указанных пептидов (а) - (d), выбранное из группы, включающей:
(1) фармацевтически приемлемую кислотно-аддитивную соль указанных пептидов,
(2) фармацевтически приемлемую карбоксилатную соль указанных пептидов,
(3) фармацевтически приемлемую щелочно-аддитивную соль указанных пептидов,
(4) фармацевтически приемлемый низший алкиловый эфир указанных пептидов,
(5) фармацевтически приемлемый амид указанных пептидов, выбранный из группы, включающей: амид, низший алкиламид и низший диалкиламид, в аморфной или кристаллической форме, являющейся результатом воздействия на указанное соединение условий высокого усилия сдвига и/или действия солей.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14