Способ получения антисоматотропной сыворотки

 

Животному вводят соматотропин человека. Получают бесклеточный субстрат с антителами к соматотропину человека. Полученный субстрат инкубируют с альбумином человека при эквивалентном соотношении антител к альбумину человека в субстрате к альбумину человека по числу детерминированных групп в течение времени 3-4j реакции связывания. Полученный осадок отделяют и отбрасывают. Используют нерастворимую иммуноактивную форму альбумина человека. После отделения осадка полученный субстрат повторно инкубируют с альбумином человека. Способ позволяет снизить в конечном продукте содержание антител к альбумину человека, что позволяет уменьшить риск анафилактической реакции. 2 з.п.ф-лы, 1 табл.

Настоящее изобретение относится к области медицины и касается способов получения лекарственных средств из крови иммунизированных животных, в частности к способу получения антисоматотропной сыворотки, основанному на введении животному соматотропина человека с последующим получением бесклеточного материала из крови животного, содержащего антитела к соматотропину человека, и его физико-химической переработкой.

Известен способ получения антисыворотки к соматотропину человека, в котором животному вводят соматотропин человека, чем индуцируют выработку антител специализированными клетками, получают бесклеточный материал - субстрат, содержащий антитела к соматотропину человека (1,2). Полученный продукт находит коммерческие применение при комплектации диагностических наборов для анализа концентрации СТГ в пробах крови больного эндокринными заболеваниями. В указанном способе конечный продукт содержит балластные компоненты, затрудняющие его терапевтическое применение.

Среди известных способов получения антисоматотропной сыворотки наиболее близким к заявленному изобретению является способ А.Ф. Лазарева (3), в котором животным вводят соматотропин человека, чем индуцируют выработку антител к соматотропину, получают бесклеточный субстрат с антителами к соматотропину человека, подвергают его физико-химической переработке для удаления балластных веществ и увеличения в конечном продукте концентрации компонента, обладающего сродством к соматотропину человека.

Согласно прототипу субстрат последовательно подвергают высаливанию, ферментативному гидролизу, диализу и обработке диализата хлороформом.

Главный недостаток прототипа заключается в отсутствии специальных приемов исключения из продукта антител к альбумину человека. По нашим данным присутствие антител к человеческому альбумину характерно для продукта, полученного по прототипу (таблица). Эта особенность объяснима присутствием в препарате соматотропина для иммунизации следов гораздо более полноценного антигена: - следов альбумина человека. При первичном введении больным препарата, полученного по прототипу, в отдельных случаях наблюдают нежелательную клиническую реакцию на введение, обусловленную наличием антител к альбумину реципиента (4).

Целью настоящего изобретения является уменьшение указанного недостатка.

С целью уменьшения в конечном продукте содержания антител к альбумину человека субстрат при наличии антител к альбумину инкубируют с альбумином человека в эквивалентном соотношении по числу детерминантных групп в течение 2-6 часов, осадок отбрасывают и при необходимости операцию повторяют.

С целью упрощения способа используют нерастворимую форму альбумина человека при соотношении антител против альбумина к альбумину 1:1-1:20, причем после отбрасывания осадка нерастворимую форму альбумина регенерируют смыванием антител к альбумину известным методом.

Предлагаемый способ поясняют следующие примеры: Пример 1 - освобождение целевого продукта от антител к альбумину путем инкубации с альбумином человека.

Антисыворотки к соматотропину человека четырех серий N 2, 3, 4, 5 получены по прототипу в производственных условиях (предприятие ЦНИИВС им. Мечникова). Их исследовали следующими методами: - методом электрофореза в агаровом геле, методом иммуноэлектрофореза против соматотропина человека и против кроличьей антисыворотки к белкам сыворотки крови лошади, преципитацией в агаровом геле против соматотропина человека и человеческого альбумина, методом инициальной флокуляции с гормоном роста человека и с альбумином, причем за одну флокуляционную единицу принимали минимальное количество антител, которое в этой реакции связывает 1 микрограмм соответствующего антигена (см. таблицу).

Путем постановки реакции флокуляции определяли необходимое количество альбумина. Далее вносили в субстрат по каплям 20%-ный раствор альбумина и перемешивали в течение 10 минут. Инкубацию выполняли в течение 2-6 часов при 37^oC. Вносили аммиачный гель гидроокиси алюминия до концентрации 0,18-1,25% pH 5,5-6,5. Образовавшийся осадок отделяли центрифугированием. Полноту удаления проверяли в реакции кольцепреципитации. Результат приведен в таблице.

Пример 2 - освобождение целевого субстрата от антител путем инкубации с нерастворимым альбумином человека.

Антисыворотку промышленной серии инкубировали при 37^oC в течение 4 часов при интенсивном покачивании с альбумином человека, сорбированным с помощью гидроокиси алюминия. Осадок удаляли центрифугированием. Полноту удаления антител к альбумину человека проверяли в реакции кольцепреципитации. Результаты приведены в таблице.

Таким образом из примеров видно (см. таблицу), что удаление антител к альбумину из антисоматотропной сыворотки достигается предлагаемым способом, осуществимым в условиях промышленного производства.

Источники информации 1. Schalch D. Radioimmunoassay for determination of HGH in human serum. Nature (Lond). 1964, v. 203 h. 1141.

2. CIS International Cathalog 1992 Monoclonal Antiserum to HGH 3. Лазарев А. Ф., Никитин В.Д., Трубицина В.И., Иньков А.Д. Способ получения антисоматотропной сыворотки. Авт. свидетельство на изобретение 460647 (прототип).

4. Сазонов А. М. Предварительные результаты клинического испытания антисоматотропной сыворотки в терапии сахарного диабета. Научный отчет Московского областного клинического НИИ им. М.Ф. Владимирского за 1971 год.

5. Lazarev A.F. et al. Experience of preparation of horse antiHGH serum. in Fractionation and immunochemistry of plasma Proteins. 1972, Varna p. 36.

Формула изобретения

1. Способ получения антисоматотропной сыворотки, включающий введение животным соматотропина человека, получение бесклеточного субстрата с антителами к соматотропину человека и его физико-химическую переработку, отличающийся тем, что полученный субстрат инкубируют с альбумином человека при эквивалентном соотношении антител к альбумину человека в субстрате к альбумину человека по числу детерминантных групп в течение времени 3 - 4j реакции связывания, полученный осадок отделяют и отбрасывают.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют нерастворимую иммуноактивную форму альбумина человека.

3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что после отделения осадка полученный субстрат повторно инкубируют с альбумином человека.

РИСУНКИ

Рисунок 1