Способ определения количества свободного гепарина в крови крупного рогатого скота

Авторы патента:

Изобретение относится к ветеринарии. Количество свободного гепарина. в крови крупного рогатого скота определяют способом, при котором в пробирки добавляют 0,1%-ный раствор толуидинового синего в увеличивающейся концентрации в разных разведениях в количестве 0,01 - 0,12 мл. Полученный раствор доводят изотоническим раствором хлорида натрия до 0,5 мл и добавляют в пробирки гепаринизированную венозную кровь. Пробирки термостатируют. Визуально определяют пробирку со свернувшейся кровью и рассчитывают количество свободного гепарина. по формуле СГ_кр = 2X 0,14 -1,85, где СГ_кр - количество свободного гепарина в крови мкг/мл; Х - количество 0,1%-ного толуидинового синего в пробирке мкг, 2; 0,14 и 1,95 - постоянные коэффициенты. 2 табл.

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к скотоводству, ветеринарии, и предназначено для определения количества свободного гепарина в крови крупного рогатого скота.

В определении гепарина известно несколько способов. Метод [1] /Sigg. c, 1952 В.П.Балуда, З.С.Баркаган и другие. Лабораторные методы исследования системы гемостаза. - Томск, 1960, с. 129-131/ основан на исследовании влияние определенных количеств гепарина на время рекальцификации цитратной или оксалатной плазмы. Тест отражает состояние общей коагуляционной активности крови - содержание в последней плазменного кофактора гепарина (актитромбин 111), выявляется наиболее значительный сдвиг в сторону гиперкоагуляции.

Данная методика не дает возможности определить количество свободного гепарина в крови.

Известен метод Сирмаи Э. /1958/ [2] / Коблов Л.Ф. Методы и приборы для исследования гемостаза - М.: Медицина, 1975, с. 35-36/. Он позволяет определить количество свободного гепарина в крови человека (таб. N1) и является ближайшим аналогом.

Данная методика не позволяет определить свободный гепарин в крови крупного рогатого скота и его изменения.

Целью настоящего изобретения является разработка способа определения количества свободного гепарина в крови крупного рогатого скота. Указанная цель достигается путем добавления в пробирки 0,1%-ного раствора толуидинового синего в увеличивающейся концентрации, изотонического раствора хлорида натрия и гепаринизированной венозной крови, термостатирования пробирок, визуального определения пробирки со свернувшейся кровью и определение количества свободного гепарина по формуле, отличающейся тем, что добавляют 0,1%-ный раствор толуидинового синего в разных разведениях в количестве от 0,01 мл до 0,12 мл, который доводят изотоническим раствором хлорида натрия до 0,5 мл, а определение ведут во формуле СГ_кр = 2

0,14 - 1,95 где CГ_кр - количество свободного гепарина в крови, мкг/мл; X - количество 0,1%-ного толуидинового синего в пробирке, мкг; 2; 0,14 и 1,95 - постоянные коэффициенты.

Пример выполнения способа.

Уменьшение количества раствора толуидинового синего, в среднем 1,9 раза, в разных разведениях связан с тем, что в пробирках с большим его содержанием проба крови свертывалась. Это говорит о меньшем содержании свободного гепарина в крови крупного рогатого скота по сравнению с кровью человека и невозможности использовать ряд разведений по Сирмаи Э. В результате наших экспериментальных исследований установлено, что оптимальным является ряд разведений, представленный в табл. N2. Дальнейшее уменьшение количества 0,1%-ного раствора толуидинового синего нецелесообразно, так как такое малое содержание не встречалось при исследованиях.

Увеличение количества 0,1%-ного раствора толуидинового синего более 0,12 мл также нецелесообразно, так как с таким содержанием не было ни одного животного. Во всех исследованиях 340 пробах крови содержание свободного гепарина находилось в пределах середины нашего ряда разведений.

Предлагаемая Сирмаи Э. доведение общего объема раствора до 0,8 мл не давала возможности определять количество свободного гепарина в крови крупного рогатого скота. Поэтому нами экспериментально установлено, что оптимальным является доведение общего объема до 1,0 мл и с этим связано увеличение количества изотонического раствора натрия хлорида в пробирках.

При определении количества свободного гепарина в крови крупного рогатого скота применяли ряд разведений 0,1%-ного раствора толуидинового синего в возрастающей концентрации: 0,01 - 0,03 - 0,05 - 0,06 - 0,07 - 0,09 - 0,10 - 0,12 мл и изотонического раствора натрия хлорида до 0,5.

В каждую пробирку дополнительно вносили по 0,5 мл венозной гепаринизированной крови обследуемого животного, содержащей 0,25 МЕ или 1,25 мкг гепарина в 1 мл. Содержимое пробирок перемешивали и ставили на 60 минут в термостат при 37^oC. После чего визуально определяли пробирку со свернувшейся кровью.

Количество гепарина в 1 мл крови в мкг определяли по формуле СГ_кр = 2

0,14 - 1,95 где СГ_кр - содержание свободного гепарина в крови, мкг/мл; X - количество толуидинового синего в пробирке, мкг; 2; 0,14 и 1,95 - постоянные коэффициенты.

Приводим все возможные варианты расчетов с использованием нашей формулы: а) При свертывании крови во всех восьми пробирках
СГ_кр = 2

0,14 - 1,95 = 20

0,14 - 1,95 = 0,85 мкг/мл,
б) При свертывании крови в семи пробирках, кроме первой,
СГ_кр = 2

0,14 - 1,95 = 0,45 мкг/мл,
в) При свертывании крови в шести пробирках, кроме первой и второй,
СГ_кр = 2

0,14 - 1,95 = 12,05 мкг/мл,
г) При свертывании крови в пяти пробирках, кроме первых трех,
СГ_кр = 2

0,14 - 1,95 = 14,55 мкг/мл,
д) При свертывании крови в четырех пробирках, кроме первых четырех,
СГ_кр = 2

0,14 - 1,95 = 17,65 мкг/мл,
е) При свертывании крови в трех пробирках, кроме первых пяти,
СГ_кр = 2

0,14 - 1,95 = 23,25 мкг/мл,
ж) При свертывании крови в двух пробирках, кроме первых шести,
СГ_кр = 2

100

0,14 - 1,95 = 20,05 мкг/мл,
з) При свертывании крови только в последней (восьмой) пробирке
СГ_кр = 2

120

0,14 - 1,95 = 31,05 мкг/мл.

Формула изобретения

Способ определения количества свободного гепарина в крови крупного рогатого скота путем добавления в пробирки 0,1%-ного раствора толуидинового синего в увеличивающейся концентрации, изотонического раствора хлорида натрия и гепаринизированной венозной крови, термостатирования пробирок, визуального определения пробирки со свернувшейся кровью и определения количества свободного гепарина по формуле, отличающийся тем, что добавляют 0,1%-ный раствор толуидинового синего в разных разведениях в количестве 0,01 - 0,12 мл, который доводят изотоническим раствором хлорида натрия до 0,5 мл, а определение ведут по формуле
СГ_кр = 2

0,14 - 1,95,
где СГ_кр - количество свободного гепарина в крови, мкг/мл;
Х - количество 0,1%-ного толуидинового синего в пробирке, мкг;
2; 0,14 и 1,95 - постоянные коэффициенты.

РИСУНКИ

Рисунок 1

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной хирургии, и может быть использовано для выявления активности, первичного скрининга гемостатических материалов и сравнительной оценки кровоостанавливающих матричных препаратов местного действия

Способ определения индивидуальной дозовой нагрузки при надсосудистом лазерном облучении крови // 2126969

Изобретение относится к медицине, а именно к лазерной терапии

Способ оценки состояния больного склеродермией // 2126966

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для оценки состояния больного склеродермией, в том числе ограниченной

Способ определения чувствительности к ингибиторам ангиотензинпревращающего фермента у больных инфарктом миокарда // 2125447

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в кардиологии и экспериментальной медицине и касается прогнозирования эффективности назначения ингибиторов ангиотензинпревращающего фермента у больных острым инфарктом миокарда, осложненным хронической сердечной недостаточностью

Способ определения вязкости крови // 2125265

Способ дифференциальной диагностики асептического некроза головки бедренной кости и деформирующего артроза тазобедренного сустава (коксартроза) // 2124206

Изобретение относится к медицине, а конкретно - к технике дифференциальной диагностики асептического некроза головки бедренной кости и деформирующего артроза тазобедренного сустава (коксартроза), и может быть использовано в практической медицине специалистами хирургами-ортопедами, а также врачами-лаборантами клинико-диагностических и биохимических лабораторий

Способ диагностики злокачественных новообразований // 2124205

Способ определения прогноза нестабильной стенокардии // 2123700

Устройство для автоматической классификации форменных элементов крови // 2122733

Изобретение относится к автоматическим гематологическим анализаторам

Способ оценки эффективности лечения ишемической болезни сердца // 2122732

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в кардиологии и терапии

Способ определения супероксидной активности выдыхаемого воздуха у больных и здоровых людей // 2128338

Способ определения гипопротеинемии // 2129716

Изобретение относится к области медицины, а именно - к лабораторным исследованиям

Способ дифференциальной диагностики асептического некроза головки бедренной кости и деформирующего артроза тазобедренного сустава // 2130184

Изобретение относится к медицине, а конкретно к технике дифференциальной диагностики асептического некроза головки бедренной кости и деформирующего артроза тазобедренного сустава (коксартроза) и может быть использовано в практической медицине специалистами хирургами-ортопедами, а также врачами-лаборантами клинико-диагностических и биохимических лабораторий

Способ оценки фотоморфометрической неоднородности популяции клеток цитологического препарата // 2132060

Изобретение относится к медицинской технике, а именно к способам оценки неоднородности популяции клеток по фотоморфометрическим характеристикам выборки клеток цитологического препарата

Способ диагностики онкологических заболеваний и устройство для его осуществления // 2132635

Изобретение относится к медицине, онкологии

Способ прогнозирования развития лейкоза у зараженного вирусом лейкоза крупного рогатого скота // 2133035

Изобретение относится к ветеринарии, в частности ветеринарной гематологии и может быть использовано для прогнозирования развития лейкоза у зараженного вирусом лейкоза крупного рогатого скота

Устройство для разделения пробы жидкости, способ разделения пробы жидкости, способ разделения жидкости на два или большее число компонентов, кольцевой узел, способ отделения компонента крови от пробы жидкости, способ получения фибрин- мономера из крови // 2133468

Изобретение относится к новым способам, устройствам и аппаратам для центробежного разделения жидкости на ее компоненты с различными удельными весами и, конкретнее, касается устройства для разделения крови, используемого, например, для получения компонентов для фибринового герметика

Способ уменьшения хронической гипоксии тканей // 2133629

Изобретение относится к медицине

Способ диагностики активного туберкулеза при пневмокониозе // 2133961

Способ прогнозирования возможности генерализации инфекции при ожоговой болезни // 2134419

Изобретение относится к медицине, а точнее лабораторной технике прогнозирования возможности генерализации инфекции у пострадавших от термической травмы, и может быть использовано в клинике термических поражений для своевременной диагностики и адекватной терапии наиболее грозного осложнения ожоговой болезни - генерализации инфекции (сепсиса)