Способ получения противовоспалительного средства

 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в фармакологии и медицинской практике при лечении воспалительных процессов различной этиологии. Способ состоит в обработке детской плаценты крупного рогатого скота в первой половине стельности, включающей в себя его размельчение, гомогенизацию, избирательную экстракцию, обеззараживание экстракта, аутолиз, асептическое фильтрование. Технический результат: создание способа получения противовоспалительного средства с широким диапазоном действия путем подбора совокупности целенаправленных действий и режимов обработки исходного биологического сырья, которые определяют свойства получаемого белково-пептидного средства, а именно его высокую эффективность и отсутствие побочных, в частности аллергических проявлений при его лечебном использовании. 1 з. п. ф-лы.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в фармакологии и медицинской практике при лечении воспалительных процессов различной этиологии.

Наиболее близким к заявляемому решению является способ получения противовоспалительного средства, состоящий в измельчении биологического сырья - плаценты человека, ее экстракции физиологическим раствором, отделении полученного экстракта и его консервировании [М.Д. Машковский. Лекарственные средства. М. : Медицина, Изд. II, т. П, 1988, с. 154.]. В результате указанных приемов в экстракт переходят все высокомолекулярные белки и клетчатый материал, содержащийся в плаценте.

Однако способ-прототип не обеспечивает получения высокоэффективного противовоспалительного средства, поскольку стимулирует иммунную систему больного, таким образом, только опосредованно влияет на воспалительный процесс. А его состав таков, что может вызвать аллергические реакции организма.

Особенности природы получаемого средства не позволяют использовать его эффективно в ряде воспалительных заболеваний.

Задачей настоящего изобретения является создание способа получения противовоспалительного средства с широким диапазоном действия путем подбора совокупности целенаправленных действий и режимов обработки исходного биологического сырья, которые определяют свойства получаемого белково-пептидного средства, а именно его высокую эффективность и отсутствие побочных, в частности, аллергических проявлений при его лечебном использовании.

Поставленная задача решается тем, что в способе получения противовоспалительного средства, включающем в себя предварительную обработку биологического сырья, экстракцию его в физиологическом растворе, отделение экстракта, согласно изобретению в качестве биологического сырья используют детскую плаценту крупного рогатого скота первой половины стельности, а предварительную обработку указанного сырья осуществляют путем удаления из него кровеносных сосудов и выдерживания его при температуре не выше 10^oC в течение суток, затем после гомогенизации сырья и разбавления его в физиологическом растворе в соотношении 1 : (1-7) выдерживают его до полной экстракции растворимых белков, а к отделенному экстракту добавляют консервант в количестве менее 0,05%, после чего образовавшийся продукт выдерживают при условиях, обеспечивающих полную агрегацию нерастворимых частиц, отделяют образовавшуюся взвесь и полученный раствор термостатируют в течение 7 - 12 суток при температуре 40^oC и затем после асептического фильтрования выдерживают раствор в течение 30 суток при температуре 10^oC.

В результате осуществления совокупности вышеперечисленных действий получают раствор, представляющий собой пептидно-белковый комплекс, пригодный для использования, например, для инъекций и ингаляций.

Авторами настоящего изобретения предусмотрено использовать в качестве биологического сырья детскую плаценту крупного рогатого скота первой половины стельности. В этот период стельности наблюдается интенсивный рост плода, что сопровождается активным синтезом низкомолекулярных или регуляторных белков.

Использование в качестве сырья для осуществления заявляемого способа детской плаценты крупного рогатого скота отвечает специфичности получаемого средства.

Операция удаления кровеносных сосудов из используемого сырья необходима для того, чтобы исключить в последующих операциях отрицательное влияние балластных белков.

Дальнейшие операции заявляемого способа направлены на выделение смеси пептидов, определяющей противовоспалительные свойства средства.

Подготовленное сырье промывают водой, охлаждают в течение суток до температуры не выше 10^oC. Такие условия определены тем, что при более высокой температуре охлаждения активность получаемого средства заметно снижается, а время охлаждения обусловлено достижением экстремального состояния клетки и максимальным синтезом стрессовых белков.

Следующие действия направлены на обработку сырья перед экстракцией из него белково-пептидного комплекса.

Этими действиями является измельчение сырья, разбавление его физиологическим раствором в соотношении 1 : (1- 7) и гомогенизация. Следует отметить, что выбор соотношения измельченного сырья и физиологического раствора определяется формой использования получаемого средства.

Гомогенат перемешивают в течение 36 ч при температуре не выше 10^oC, при этом происходит полная экстракция растворимых белков и пептидов. В процессе экстракции образуется нерастворимый осадок, подлежащий отделению, например, центрифугированием или фильтрованием.

К экстракту добавляют консервант, количество которого задано границей - не ниже 0,05%, что позволяет подавить действие имеющихся в экстракте бактерий.

При выдерживании экстракта при температуре 12^oC в течение 48 - 96 ч происходит аутолиз белков. При этих условиях под действием ферментов белки расщепляются до низкомолекулярных.

При температурах, отличных от указанной, процесс может менять свое направление с образованием побочных продуктов. Выбор температуры в диапазоне 48-96^oC зависит от исходной концентрации плаценты в физрастворе.

В процессе аутолиза происходит коагуляция белковых и клеточных элементов, их отделяют, а полимерный раствор для инкубирования помещают в термостат при 40^oC на 7-12 суток. В процессе термостатирования происходит дальнейшая агрегация клеточных материалов, они осаждаются, в результате чего резко снижается количество балласта и одновременно завершается процесс аутолиза.

После асептического фильтрования и выдерживания раствора при температурах не выше 10^oC в течение 30 суток полученный продукт пригоден для применения. Его можно использовать для инъекций, ингаляций и т.д.

В случае получения лекарственной формы в виде свечей средство, обладающее противовоспалительной активностью может быть эмульгировано с общепринятой в данной области основой для свечей при определенном соотношении, мас.%: Раствор - 30-50 Основа - 50-70 Найденное авторами изобретения вышеуказанное соотношение определено тем, что при более высоких количествах активного раствора и основы возможно расслоение получаемой смеси для свечей, а меньшее количество компонентов не позволяет достигнуть необходимого лечебного эффекта.

Изобретение поясняется конкретными примерами.

Пример 1. Из ткани детской плаценты коровы в количестве 1 кг удаляли крупные кровеносные сосуды, ткань измельчали и подвергали гомогенизации при 8^oC, гомогенат разбавляли охлажденным изотоническим раствором в соотношении 1 : 3 по объему.

Полученную смесь выдерживали при постоянном перемешивании при 8^oC в течение 36 ч.

Образовавшийся осадок удаляли центрифугированием при 3000 об/мин.

К полученному экстракту при постоянном перемешивании добавляли консервант из расчета 1000 мл 1%-ного раствора хинозола в физиологическом растворе на 1 л экстракта.

Затем экстракт ткани плаценты выдерживали 48 ч при температуре 12^oC.

Образовавшиеся в процессе этой операции нерастворимые частицы удаляют фильтрованием через фильтр с размером пор 0,45 мкм.

Фильтрат термостатировали при 40^oC в течение 7 суток, после асептического фильтрования продукт выдерживали в герметически закрытом сосуде в течение 30 суток при 10^oC.

После асептического фильтрования средство ампулировали.

Полученное средство "Инфламафертин" представляет собой прозрачную соломенно-желтого цвета жидкость с pH 5,7 - 6,2, показатель преломления 1,3370 - 1,3383, содержание сухого остатка 28,90 - 29,25 мг/мл.

Пример 2. При приготовлении свечей противовоспалительного действия брали полученный по примеру 1 раствор в количестве 50 г, и в нем эмульгировали масло-какао в количестве 70 г, при температуре не выше 50^oC. После эмульгирования масса была разлита в формы.

В эксперименте препарат обладает выраженной противовоспалительной активностью при различных путях введения и в широком диапазоне доз. Не вызывает аллергических реакций организма.

Испытания препарата проводили на 240 коровах с клиническим диагнозом - атония матки, катаральный, серозный гнойно-катаральный эндометрит. Препарат вводили внутримышечно по 5 мл 1 раз в день всем больным коровам в течение 5 дней.

В контрольной группе коров с аналогичным диагнозом проводили лечение общепринятыми ветеринарными препаратами.

В опытной группе выздоровевших коров было на 85% больше, чем в контрольной группе.

Таким образом, особенности заявляемого способа определяют свойства получаемого препарата, заключающиеся в высокой эффективности лечения воспалительных процессов различной этиологии.

Формула изобретения

1. Способ получения противовоспалительного средства, включающий предварительную обработку биологического сырья, экстракцию его в физиологическом растворе, отделение экстракта, отличающийся тем, что в качестве биологического сырья используют детскую плаценту крупного рогатого скота первой половины стельности, а предварительную обработку указанного сырья осуществляют путем удаления из него кровеносных сосудов и выдерживания его при температуре не выше 10^oC в течение суток, затем после гомогенизации сырья и разбавления его физиологическим раствором в соотношении 1 : (1 - 7) выдерживают его до полной экстракции растворимых белков, а к отделенному экстракту добавляют консервант в количестве менее 0,05%, после чего образовавшийся продукт выдерживают при условиях, обеспечивающих полную агрегацию нерастворимых частиц, отделяют образовавшуюся взвесь и полученный раствор термостатируют в течение 7 - 12 суток при температуре 40^oC, и затем после асептического фильтрования выдерживают раствор в течение 30 суток при температуре 10^oC.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что дополнительно полученный раствор эмульгируют с основой для свечей при следующем их соотношении, мас.%: Раствор - 30 - 50 Основа - 50 - 70

BF4A - Аннулирование более ранней публикации

Аннулируемые сведения: Публикацию о досрочном прекращении действия патента на изобретение считать недействительной.

Номер и год публикации бюллетеня: 31-2004

Извещение опубликовано: 20.12.2004        БИ: 35/2004